Ly trích chất chiết khô trong nguyên liệu bằng dung môi khác nhau .... Kết quả ly trích chất chiết khô trong nguyên liệu bằng dung môi khác nhau .... a Khối lượng nguyên liệu cho dung mô
Giới thiệu chung
Giới thiệu chung về cây cỏ lào
Cây cỏ lào (Eupatorium odoratum L.; Chromolaena odorata) thuộc họ Cúc
Cỏ lào, hay còn gọi là cây cộng sản, yên bạch, và có tên tiếng Anh là fragrant thoroughwort, là một loài cây mọc hoang, phân bố rộng rãi trên thế giới, đặc biệt phổ biến ở Việt Nam từ đồng bằng đến miền trung du và vùng đồi núi thấp Cây cỏ lào được biết đến trong y học dân gian với nhiều công dụng như cầm máu, chữa lành vết thương và bỏng, cũng như điều trị các bệnh nhiễm khuẩn đường ruột, ung nhọt, ghẻ lở, viêm đại tràng, đau nhức xương và cảm cúm.
Cây cỏ lào đã được nghiên cứu rộng rãi về thành phần hóa học cả trong và ngoài nước Một nghiên cứu từ Viện Y học Cổ truyền Trung ương chỉ ra rằng dịch chiết từ lá cỏ lào có khả năng kích thích sự tăng trưởng của tế bào gốc dây cuống rốn, mở ra cơ hội nghiên cứu các chế phẩm điều trị bệnh nan y Cỏ lào chứa nhiều chất dinh dưỡng như đạm, phosphor và kalium, cùng với các hợp chất có lợi như tinh dầu, alcaloid, tanin, flavonoid và coumarin Tuy nhiên, thành phần và hàm lượng các chất này có thể khác nhau tùy thuộc vào nguồn gốc của cây cỏ lào.
Thời gian và địa điểm
Thời gian: Vào lúc 13h00, chiều thứ sáu, ngày 08/11/2024
2 Địa điểm: Tại phòng thí nghiệm 304, tòa nhà A2, Viện Công nghệ sinh học và môi trường, trường Đại học Nông Lâm TP.HCM.
Vật liệu thí nghiệm và hóa chất
Để tiến hành thí nghiệm, cần chuẩn bị các thiết bị và dụng cụ như ống đong, erlen, phễu thủy tinh, giấy lọc, máy đánh sóng siêu âm, ống nghiệm, pipet, chén độ ẩm, bình hút ẩm, cân và tủ sấy.
Vật liệu thí nghiệm: bột cỏ lào và kích thước mẫu ɸ = 1 mm
Hóa chất thí nghiệm: Hexane và acetone.
Phương pháp thực hiện
Ly trích chất chiết khô trong nguyên liệu bằng dung môi khác nhau
Thí nghiệm ly trích chất chiết thô từ nguyên liệu được thực hiện bằng hai loại dung môi khác nhau, với sự hỗ trợ của sóng siêu âm để nâng cao hiệu quả chiết xuất Các bước tiến hành thí nghiệm được thực hiện một cách hệ thống và khoa học.
Bước 1: Cân 1 g bột nguyên liệu vào erlen và thêm 15 ml dung môi đã được chọn cho thấm ướt
Hình 1.2 Khối lượng nguyên liệu (a) Khối lượng nguyên liệu cho dung môi Hexane; (b) Khối lượng nguyên liệu cho dung môi
Hình 1.3 Khối lượng giấy lọc (a) Giấy lọc cho dung môi Hexane;
(b) Giấy lọc cho dung môi Acetone a a b b
Bước 2: Mang hỗn hợp dung môi và nguyên liệu được đánh sóng siêu âm 15 phút, lọc dịch chiết qua giấy lọc (cân để biết khối lượng)
Hình 1.4 Hai bình mẫu được đánh sóng siêu âm lần 1
Lưu ý: Đối với dung môi hexane cần phải thao tác nhanh tránh hexane bay hơi nhanh bã dính vào bình
Bước 3: Thêm 15 ml dung môi vào bã và lặp lại bước 2
Bước 4: Lọc hết bã trong bình qua giấy lọc, sau đó đem bã và cả giấy lọc sấy ở nhiệt độ 105 o C trong 4 – 6 giờ
Hình 1.5 Mẫu sau khi lọc (a) Mẫu lọc sử dụng dung môi
Hexane; (b) Mẫu lọc sử dụng dung môi Acetone a b
Bước 5: Cân để biết khối lượng bã còn lại nhằm tính hàm lượng chất chiết thô.
Xác định độ ẩm trong nguyên liệu
Thí nghiệm xác định độ ẩm được thực hiện hai lần lặp lại với cùng mẫu, cùng nhiệt độ và thời gian sấy Các bước thực hiện bao gồm:
Bước 1: Cân lần lượt hai chén độ ẩm
Bước 2: Cân 2g mẫu trên chén
Bước 3: Cho mẫu vào tủ sấy và sấy trong vòng 4 – 6 giờ ở nhiệt độ 105℃
Hình 1.6 Khối lượng của chén độ ẩm (a) Chén cho lần lặp lại thứ 1; (b) Chén cho lần lặp lại thứ 2
Hình 1.7 Khối lượng của mẫu trong chén (a) Khối lượng mẫu cho lần lặp lại thứ 1; (b) Khối lượng mẫu cho lần lặp lại thứ 2 a a b b
Bước 4: Sau khi sấy xong lấy chén ra khỏi tủ sấy và cân lại cả chén lẫn mẫu
Giới thiệu chung
Giới thiệu chung về cỏ ngũ sắc
Cỏ ngũ sắc, hay còn gọi là cỏ hôi, hoa ngũ sắc, và hoa ngũ vị, có tên khoa học là Ageratum conyzoides L Đây là loại cây thân thảo, mềm mại, thường mọc thành từng bụi và có chiều cao từ
Cây có chiều cao từ 25 đến 50 cm, với lá mọc đối hình trứng hoặc 3 cạnh, dài từ 2 đến 6 cm và rộng từ 1 đến 3 cm Mép lá có răng cưa hình tròn, cả hai mặt lá đều có lông, trong đó mặt dưới nhạt hơn Hoa nhỏ, có màu tím xanh, và quả nhỏ màu đen với 5 sống dọc.
Hình 2.1 Hình ảnh cỏ ngũ sắc (vimphar.vn)
Cây có nguồn gốc từ Châu Mỹ và đã lan rộng ra khắp các vùng nhiệt đới và á nhiệt đới trên thế giới Tại Châu Á, cây mọc phổ biến ở Nam Trung Quốc, Campuchia, Thái Lan và Ấn Độ Ở Việt Nam, đây là loại cỏ dại quen thuộc, phân bố ở những vùng núi cao từ 1500m trở lên đến các tỉnh trung du và đồng bằng Cây thường mọc gần như thuần loài ở bãi sông, nương ngô, ven đường và trong vườn Tất cả các bộ phận của cây đều có thể sử dụng, nhưng phần được ưa chuộng nhất là thân cây đã cắt bỏ rễ.
Cỏ ngũ sắc chứa 0,16% tinh dầu đặc (tính theo dược liệu khô kiệt), với màu sắc từ vàng nhạt đến vàng nghệ và có thể chứa coumarin Tinh dầu chủ yếu bao gồm 6-demetoxygeratocromen, ageratochromen và caryophyllen, ba thành phần này chiếm tới 77% hàm lượng tinh dầu Ngoài ra, hoa của cỏ ngũ sắc cũng chứa 0,2% tinh dầu.
Cây ngũ sắc chứa 4,7% saponin thô trong thân và lá, được sử dụng rộng rãi trong Đông y với nhiều công dụng quan trọng Lá cây có vị đắng và tính mát, trong khi hoa có vị ngọt và rễ có vị dịu Ngũ sắc có khả năng điều trị nhiều bệnh như hạ sốt, giải nhiệt, và trừ thấp, đồng thời hỗ trợ điều trị đau xương, phong thấp, quai bị, sốt cao kéo dài, và chấn thương Lá cây còn có tác dụng thanh nhiệt, cầm máu, giúp điều trị vết thương chảy máu và các bệnh về da như ngứa, viêm da, ghẻ lở, chàm, và thấp khớp.
Giới thiệu về các sắc tố thực vật
Sắc tố thực vật là các hợp chất tự nhiên do thực vật sản xuất, có khả năng hấp thụ ánh sáng ở nhiều bước sóng khác nhau và đóng vai trò quan trọng trong các quá trình sinh học, đặc biệt là quang hợp Những sắc tố này không chỉ tạo ra màu sắc đặc trưng cho thực vật, mà còn bao gồm các màu sắc đa dạng từ xanh lá đến đỏ, vàng, cam của hoa và quả.
Sắc tố thực vật được chia thành bốn nhóm chính Nhóm đầu tiên là Porphyrins, với hợp chất chính là Chlorophyll, tạo nên màu xanh lá cây, bao gồm các loại Chlorophyll a, b, c, d và f Nhóm thứ hai là Betalains, trong đó Betacyanins tạo ra màu đỏ và tím, còn Betaxanthins tạo nên màu vàng và cam Nhóm thứ ba là Carotenoids, với các hợp chất chính là Carotenes và Xanthophylls, thường mang lại màu vàng, cam và đỏ cho thực vật Cuối cùng, nhóm Flavonoids, với hợp chất chính là Anthocyanins, tạo ra màu đỏ, xanh và tím, cùng với Anthoxanthins, có khả năng bay hơi và tạo nên mùi thơm đặc trưng của hoa quả và thực vật.
Carotenoids là một trong những nhóm sắc tố thực vật được nghiên cứu nhiều nhất, cả trong lĩnh vực cơ bản và ứng dụng Chúng tồn tại trong lục lạp và quá trình sinh tổng hợp cùng phân hủy Carotenoids được điều khiển bởi nhiều gen, bao gồm gen cấu trúc và gen điều hòa Nghiên cứu về sinh tổng hợp Carotenoids đã dẫn đến việc phát triển giống lúa Golden Rice, chứa hàm lượng Beta-carotene cao, cung cấp tiền tố Vitamin A để phòng ngừa bệnh mù mắt do thiếu Vitamin A ở trẻ em.
Sắc tố thực vật đóng vai trò quan trọng trong quang hợp, giúp thu nhận năng lượng ánh sáng để tạo ra đường và oxy Ngoài ra, chúng còn có khả năng chống oxy hóa và bảo vệ thực vật khỏi sự phá hủy do ánh sáng mạnh hoặc các chất oxy hóa.
Màu sắc sặc sỡ của hoa và quả không chỉ tạo nên vẻ đẹp tự nhiên mà còn đóng vai trò quan trọng trong việc thu hút côn trùng và động vật Những màu sắc này giúp thu hút các loài thụ phấn, từ đó tăng cường quá trình thụ phấn và phát tán hạt, góp phần duy trì sự đa dạng sinh học trong môi trường.
Kỹ thuật sắc ký cột
Kỹ thuật sắc ký cột (Column Chromatography) là phương pháp phân tách hỗn hợp dựa trên sự khác biệt trong khả năng tương tác của các chất với hai pha: pha tĩnh (thường là silica gel hoặc alumina trong cột) và pha động (thường là dung môi chảy qua cột) Các chất trong hỗn hợp di chuyển qua pha tĩnh với tốc độ khác nhau do sự khác biệt về khả năng hấp phụ, phân cực và kích thước phân tử, đồng thời bị ảnh hưởng bởi tính chất của pha động Mục đích chính của sắc ký cột là để phân tách, phân tích và tinh chế các thành phần trong hỗn hợp.
Sắc ký cột là một kỹ thuật tinh chế hiệu quả, trong đó pha tĩnh là một chất hấp phụ rắn được đặt trong cột thủy tinh thẳng đứng Pha động, thường là một chất lỏng, được thêm vào từ phía trên và chảy xuống qua cột nhờ trọng lực hoặc áp suất bên ngoài Kỹ thuật này giúp cô lập các hợp chất mong muốn từ hỗn hợp một cách chính xác.
Hỗn hợp được phân tích thông qua sắc ký cột, trong đó dung môi lỏng được dẫn qua cột bằng trọng lực hoặc áp suất không khí Quá trình này thiết lập trạng thái cân bằng giữa chất tan và chất hấp phụ Do các thành phần trong hỗn hợp có tương tác khác nhau với pha tĩnh và pha động, chúng sẽ được tách biệt khi di chuyển qua cột Các thành phần riêng lẻ, hay chất rửa giải, được thu thập khi dung môi nhỏ giọt từ đáy cột.
Sắc ký cột được chia thành hai loại chính: sắc ký cột trọng lực và sắc ký flash Sắc ký cột trọng lực cho phép dung môi chảy xuống cột nhờ trọng lực hoặc thẩm thấu, trong khi sắc ký flash sử dụng áp suất không khí dương để ép dung môi xuống cột Phương pháp sắc ký flash, được đặt tên bởi Giáo sư W Clark Still, nổi bật nhờ khả năng thực hiện nhanh chóng, hiện đang được áp dụng rộng rãi trong các phòng thí nghiệm nghiên cứu hóa học hữu cơ.
Silica gel (SiO2) và alumina (Al2O3) là hai chất hấp phụ phổ biến trong kỹ thuật sắc ký cột Sắc ký cột được ứng dụng rộng rãi trong nhiều lĩnh vực, chủ yếu để tinh chế các hợp chất hóa học, tách biệt các thành phần và tinh chế sản phẩm tổng hợp Trong ngành dược phẩm, phương pháp này được sử dụng để chiết tách dược chất một cách hiệu quả.
Trong ngành sinh học và hóa sinh, việc chế thuốc và phân tích kiểm tra chất lượng đóng vai trò quan trọng trong việc tách các hợp chất sinh học, xác định chất chuyển hóa và phân tích hoạt chất tự nhiên Các phương pháp này không chỉ giúp nâng cao hiệu quả của thuốc mà còn đảm bảo an toàn cho người sử dụng.
Vật liệu nghiên cứu
Hóa chất: Hexan, Acetone, Silicagel,…
Nguyên liệu: cỏ ngũ sắc
Vật liệu: giấy lọc, erlen, cân, pipet Pasteur, ống nghiệm,…
Phương pháp thực hiện
Chuẩn bị dịch chiết sắc tố
Cân 1g lá cỏ ngũ sắc khô vào bình Erlen, sau đó thêm 10ml dung môi Hexan: Acetone với tỷ lệ 8:2 Tiến hành siêu âm trong 5 phút và sử dụng giấy lọc để thu được dịch chiết thực vật.
Hình 2.2 Cân 1g bột cỏ Ngũ Sắc.
Chuẩn bị cột sắc ký
Sử dụng Pipet Pasteur làm cột, nhét 1 lớp bông thủy tinh nơi đáy pipet, tránh cho pha tĩnh trôi ra ngoài
Cân 0,5g silica gel có kích thước hạt từ 0,015 – 0,04 mm vào cốc thủy tinh sạch và khô, sau đó ngâm trong 5ml n-hexan khoảng 10 phút Tiến hành nạp hỗn hợp silica gel đã được nở vào cột sắc ký, nhẹ nhàng gõ cột sau mỗi lần nạp để tránh giữ lại không khí và đảm bảo bề mặt cột luôn phẳng, không bị xáo trộn.
Hình 2.3 Silica gel được ngâm trong 5ml n-Hexan.
Đưa mẫu vào cột
Sau khi nhồi cột sắc ký thành công, cho 1ml dịch chiết thực vật vào cột, đảm bảo khoảng cách 2mm từ bề mặt pha tĩnh để tránh xáo trộn Tiếp tục cho n-Hexan chảy qua cột mà không để cột khô, đồng thời quan sát quá trình phân tách của hệ sắc tố.
Hình 2.4 Quá trình phân tách sắc tố thực vật
Rửa giải
Nhóm Carotenoid có màu vàng cam được tách ra bằng dung môi n-Hexan kém phân cực Để tách nhóm Chlorophyll, cần sử dụng dung môi phân cực hơn, cụ thể là hỗn hợp n-Hexan và Acetone với tỷ lệ 7:3.
Kết quả
Trong quá trình phân tách sắc tố thực vật bằng phương pháp sắc ký cột, sắc tố màu vàng cam được tách ra đầu tiên bằng dung môi n-Hexan, cho thấy đây là Carotenoid, một hợp chất ít phân cực Để tách sắc tố Chlorophyll màu xanh lá, cần tăng độ phân cực của dung môi bằng cách thêm Acetone, một dung môi phân cực hơn.
Từ đó, có thể kết luận rằng độ phân cực của các sắc tố theo thứ tự là:
Hình 2.5 Các hệ sắc tố thu được sau quá trình phân tách (ống trái: Chlorophyll; ống phải:
Thí nghiệm 3 PHÂN TÁCH SẮC TỐ THỰC VẬT BẰNG
KỸ THUẬT SẮC KÝ BẢN MỎNG (TLC)
Giới thiệu chung
Giới thiệu chung về kỹ thuật sắc ký bản mỏng (TLC)
Sắc ký bản mỏng (TLC) là một kỹ thuật phân tách hiệu quả, nhanh chóng và đơn giản, được áp dụng để phân tích, xác định và định tính các hợp chất trong hỗn hợp Kỹ thuật này hoạt động dựa trên sự khác biệt về tốc độ di chuyển của các chất qua pha tĩnh (lớp mỏng chất hấp phụ) khi chịu tác động của pha động (dung môi hoặc hỗn hợp dung môi).
Pha tĩnh là một lớp chất hấp phụ, thường là silica gel hoặc alumina, được trải đều trên bề mặt phẳng của một bản mỏng như kính, nhựa hoặc nhôm Trong khi đó, pha động là dung môi hoặc hỗn hợp dung môi có khả năng di chuyển qua lớp pha tĩnh, kéo theo các chất phân tích.
Sắc ký bản mỏng hoạt động dựa trên nguyên tắc tách các chất trong hỗn hợp bằng cách cho pha động di chuyển qua pha tĩnh Quá trình bắt đầu khi giọt dung dịch được nhỏ lên bề mặt bản, và rìa bản được nhúng vào dung môi thích hợp Dung môi sẽ di chuyển dọc theo lớp hấp phụ, vận chuyển các cấu tử với tốc độ khác nhau nhờ lực mao quản, dẫn đến việc tách biệt các thành phần Quá trình này diễn ra theo cả chiều dọc và ngang do sự khuếch tán của các cấu tử trong lớp hấp phụ Sắc ký bản mỏng thường được ứng dụng trong phân tích và kiểm nghiệm thuốc, thử độ tinh khiết và bán định lượng.
Giá trị Rf
Nếu bạn chỉ quan tâm đến số lượng loại thuốc nhuộm tạo nên hỗn hợp, bạn có thể dừng lại ở đó Tuy nhiên, các phép đo thường được thực hiện từ tấm để xác định các hợp chất có trong đó Các phép đo này bao gồm khoảng cách di chuyển của dung môi và khoảng cách di chuyển của từng điểm Khi mặt trước của dung môi gần đến đỉnh của tấm, tấm sẽ được lấy ra khỏi cốc và vị trí của dung môi sẽ được đánh dấu bằng một đường khác trước khi nó kịp bay hơi.
Giá trị Rf cho mỗi loại thuốc nhuộm sau đó được tính toán bằng công thức:
Rf = Quãng đường di chuyển của chất tanQuãng đường di chuyển của dung môi
Thời gian và địa điểm nghiên cứu
Thời gian diễn ra sự kiện là từ 13 giờ ngày 8/11/2024 đến 22/11/2024, tại Viện Nghiên cứu Công nghệ Sinh học và Môi trường, Khu phố 6, Phường Linh Trung, TP Thủ Đức, TP Hồ Chí Minh.
Vật liệu và hóa chất
Essential tools for the experiment include a tip, beaker, solvent flask, pencil, glass graduated cylinder, Petri dish, ruler, and thin layer silica gel F254 (1055540001, Merck Life Science KGAA, Germany) Additionally, a UV lamp is required for the procedure.
Phương pháp nghiên cứu
Bước đầu tiên trong quy trình pha tĩnh là sử dụng bảng mỏng silica gel F254, nơi bạn cần đánh dấu vạch xuất phát cách mép bảng TLC khoảng 5 mm bằng bút chì Sau đó, sử dụng đầu típ để đưa dịch chiết cỏ ngũ sắc lên bảng mỏng, thực hiện thao tác này từ 3 đến 5 lần Lưu ý rằng giữa các lần cho dịch chiết, cần để dịch chiết trước đó khô hoàn toàn để tránh hiện tượng loan mẫu, điều này sẽ giúp bảo vệ các mẫu khác và ngăn chặn việc tạo vòng lớn.
Bước 2: Pha 10mL dung môi ly giải (pha động) bằng cách kết hợp acetone và n-hexan theo tỉ lệ 3:7 và 4:6 Để pha dung môi ly giải 3:7, bạn cần đong 3 mL acetone và 7 mL n-hexan, sau đó trộn đều hai dung dịch Đối với dung môi ly giải 4:6, đong 4 mL acetone với 6 mL n-hexan và trộn chúng lại với nhau.
Bước 3: Đưa bảng mỏng vào bình ly giải
Bước 4: Sử dụng bút chì để đánh dấu vạch kết thúc, sau đó dùng thước kẻ đo khoảng cách từ vạch xuất phát đến các sắc tố màu (carotene và chlorophyll a, b) cùng với khoảng cách từ vạch xuất phát đến vạch kết thúc (chiều cao của pha động) Quan sát khả năng phân tách của các sắc tố trong hai dung môi ly giải khác nhau và đưa ra kết luận Tính hệ số Rf để đánh giá độ phân cực của các sắc tố.
Rf = Quãng đường di chuyển của chất tan Quãng đường di chuyển của dung môi
Bước 5: Soi đèn UV lên bảng TCL và kết luận.
Kết quả
Sau khi thực hiện phân tách bằng kỹ thuật sắc ký bảng mỏng, chúng tôi đã đo khoảng cách giữa vạch xuất phát và chất tan, cũng như giữa vạch xuất phát và dung môi bằng thước kẻ Kết quả thu được cho thấy sự phân tách rõ ràng giữa các thành phần trong mẫu.
Bảng 3.1 Giá trị của hệ số Rf của các sắc tố
Sắc tố Hệ số R f trong từng tỉ lệ dung môi ly giải
Hình 3.1 Kết quả sau khi chạy TLC
Hình 3.2 Kết quả sau khi chiếu đèn UV lên miếng TLC
Dựa vào kết quả của thí nghiệm trên có thể kết luận sau:
Dung môi ly giải tỷ lệ 6:4 phân cực hơn tỷ lệ 7:3 dựa vào giá trị hệ số Rf
Tính chất chiếm ưu thế của cả hai dung môi là tính kỵ nước Trong dung môi ly giải với tỷ lệ 6:4, chlorophyll a và b di chuyển cao hơn so với hệ dung môi ly giải 7:3.
Sắc tố phân cực nhất là Chlorophyll b sau đó đến Chlorophyll a và sắc tố không phân cực là Carotene
Quan sát dưới đèn UV xuất hiện nhiều vạch khác, chứng tỏ trong dịch ly trích còn nhiều chất khác ngoài ba sắc tố trên.
Thảo luận
Kết quả từ bảng mỏng cho thấy sắc tố carotene di chuyển xa vạch xuất phát nhất, tiếp theo là Chlorophyll a và thấp nhất là Chlorophyll b Hai pha động n-hexan (chất không phân cực) và acetone (chất phân cực) có tỷ lệ khác nhau, với pha động 7:3 có ái lực tốt hơn với các chất không phân cực so với pha động 6:4 Mặc dù cả hai pha động đều có ái lực tốt với các chất không phân cực, nhưng chúng có thể được xem là pha động kỵ nước, khiến các chất kỵ nước di chuyển lên cao hơn Do đó, sắc tố carotene di chuyển xa nhất, và thứ tự độ phân cực của ba sắc tố được sắp xếp như sau: carotene, Chlorophyll a, và Chlorophyll b.
Sắp xếp độ phân cực tăng dần: Carotene < Chlorophyll a < Chlorophyll b
Giá trị Rf của Chlorophyll a và b trong pha động 6:4 cao hơn so với pha động 7:3, do pha động 6:4 có tính phân cực lớn hơn nhờ vào thành phần acetone nhiều hơn Acetone, với nhóm carbonyl (C=O) mạnh mẽ, làm tăng tính phân cực, khiến electron di chuyển về phía nhóm carbonyl, tạo ra điện tích âm (δ-) ở oxy và điện tích dương (δ+) ở carbon Điều này cũng làm cho nguyên tử hydro ở carbon α linh động hơn Ngược lại, n-hexan là một mạch hydrocarbon không phân cực, do electron phân bố đều Sự khác biệt về tỷ lệ giữa chất phân cực và không phân cực trong hai pha động dẫn đến việc chlorophyll a và b di chuyển cao hơn trong hệ 6:4 so với hệ 7:3 khi thực hiện sắc ký TLC Ngoài ra, sắc tố carotene di chuyển cao nhất, mặc dù cả hai pha động đều có tính kỵ nước với một số khác biệt nhỏ về tính phân cực.
Tỷ lệ dung môi trong thí nghiệm ảnh hưởng đến giá trị Rf của carotene, trong đó dung môi tỉ lệ 7:3 cho giá trị Rf cao hơn so với tỉ lệ 6:4 do tính không phân cực cao hơn Kết quả thực nghiệm cho thấy giá trị Rf của hệ 7:3 lớn hơn, mặc dù sự khác biệt không đáng kể Việc chiếu đèn UV lên miếng TLC F254 giúp phát hiện các chất không màu nhờ vào khả năng phát huỳnh quang khi tiếp xúc với tia UV có bước sóng 254 nm Điều này cho phép quan sát các hợp chất trong dịch ly trích, trong đó chỉ có các chất sắc tố mới có thể nhìn thấy bằng mắt thường, còn các hợp chất khác cần được quan sát dưới ánh sáng phù hợp.
Xác định nồng độ một số hợp chất có trong chiết xuất quả cafe đã phân tích bằng kỹ thuật sắc ký lỏng pha đảo - cột C18
Dựa vào 4 đồ thị chuẩn hỗn hợp ta thấy thông số diện tích peak là thay đổi khi nồng độ thay đổi
Bảng 4.1 Số liệu chất chuẩn của Protocatechuic acid
Nồng độ (mg/L) Diện tích
Hình 4.1 Đồ thị chuẩn của Procatechuic acid
Dựa vào đồ thị chuẩn ta có: y = 14.372x - 2.2918
Bảng 4.2 Số liệu chất chuẩn của Clorogenic acid
Nồng độ (mg/L) Diện tích
Hình 4.2 Đồ thị chuẩn của Clorogenic acid
Dựa vào đồ thị chuẩn ta có: y = 40.015x - 9.7092
Bảng 4.3 Số liệu chất chuẩn của Caffeic acid
Nồng độ (mg/L) Diện tích
Hình 4.3 Đồ thị chuẩn của Caffeic acid
Dựa vào đồ thị chuẩn ta có: y = 21.456x - 4.1538
Dựa vào các thông số diện tích của mẫu 4 và đồ thị hàm số chuẩn của các chất như axit Protocatechuic, axit Clorogenic và axit Caffeic, chúng ta có thể tính toán nồng độ của các chất này có trong mẫu Cụ thể, đồ thị chuẩn của axit Protocatechuic được biểu diễn bằng phương trình y = 14.372x - 2.2918.
Nồng độ của Protocatechuic aicd: x=68.7499+2.2918
14.372 = 4.943 Đồ thị chuẩn của chất Clorogenic acid: y = 40.015x-9.7092
Nồng độ của Clorogenic aicd: x = 578.0308+9.7092
40.015 = 14.688 Đồ thị chuẩn của chất Caffeic acid: y = 21.456x - 4.1538
Nồng độ của Caffeic aicd: x = 53.8372+4.1538
