Khóa luận tốt nghiệp Bảo vệ thực vật: Khảo sát hiệu lực phòng trừ của các vật liệu nano trên mẫu nấm đạo ôn (Pyricularia oryzae Cav.) gây bệnh trên lúa (Oryza sativa L.) có tính kháng thuốc BVTV

gây bệnh đạo ôn trên lúa đối với một số hoạt chất thuốc hóa học đối với nắm trong phòng thí nghiệm.. Cơ chế kháng nam của AgNPs Khả năng ức chế của dung dịch nano bạc đối với sự phát tri

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NONG LAM THÀNH PHO HO CHÍ MINH

KHOA NÔNG HỌC

ak 2 3k ok 2k ok 2k

KHOA LUAN TOT NGHIEP

KHAO SAT HIEU LUC PHONG TRU CUA CAC VAT LIEU

NANO TREN MAU NAM DAO ON (Pyricularia oryzae Cav.)

GAY BENH TREN LUA (Oryza sativa L.) CO

TINH KHANG THUOC BVTV

SINH VIÊN THUC HIEN — : BÙI QUANG BAO

NGANH : BAO VE THUC VAT

KHOA : 2019 - 2023

Tp Hé Chí Minh, tháng 02 năm 2024

KHẢO SÁT HIỆU LỰC PHÒNG TRỪ CỦA CÁC VẬT LIỆU

NANO TREN MAU NAM ĐẠO ÔN (Pyricularia oryzae Cav.)

GAY BENH TREN LUA (Oryza sativa L.) CO

TINH KHANG THUOC BVTV

Tac gia

BUI QUANG BAO

Khóa luận được đệ trình dé đáp ứng yêu cầucấp bằng kỹ sư ngành Bảo Vệ Thực Vật

Hướng dẫn khoa học

TS VÕ THỊ NGỌC HÀThS PHAM KIM HUYEN

Thanh phố Hồ Chi Minh,Thang 02 nam 2023

LỜI CẢM ƠN

Đâu tiên con xin cảm ơn sâu sắc đên Cha, Mẹ đã trang trải và tạo mọi điêu kiệntốt nhất dé con hoàn thành bậc dai học

Em xin gửi lời cảm ơn đến Ban Giám hiệu Trường Đại học Nông Lâm thành phó

Hồ Chí Minh, quý thầy cô khoa Nông học đã tạo điều kiện cho em hoàn thành khóa luậntốt nghiệp

Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến TS Võ Thị Ngọc Hà và ThS Phạm KimHuyền đã tận tình hướng dẫn, truyền đạt cho em nhiều kiến thức chuyên môn và nhiềukinh nghiệm quý báo trong suốt quá trình thực hiện khoá luận

Em xin gửi lời cảm ơn đến tập thé lớp DHI9BV đã đồng hành với em trong 4năm học tập và nghiên cứu ở Trường Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh vàcuối cùng em xin đặc biệt gửi lời cảm ơn đến anh Ngô Văn Ngợi, Hồ Minh Cường đã

cô van, xây dựng dé tai cùng em trong quá trình hoàn thành khóa luận tốt nghiệp

Tran trọng cam on!

Thành phố Ho Chi Minh, tháng 02 năm 2024

Sinh viên

Bùi Quang Bảo

TÓM TẮT

Đề tài “Khảo sát hiệu lực phòng trừ của các vật liệu nano trên mẫu nắm đạo ôn(Pyricularia oryzae Cav.) gây bệnh trên lúa (Oryza sativa L.) có tinh kháng thuốcBVTV” thực hiện tại phòng thí nghiệm Bệnh cây của Bộ môn Bảo vệ Thực vật — KhoaNông học, Trường Đại học Nông Lâm thành phó Hồ Chí Minh

Mục tiêu nghiên cứu: Đánh giá khả năng kháng với một số hoạt chất hóa hóa họccủa mau phân lập nam Pyricularia oryzae Cav gây bệnh đạo ôn trên lúa và hiệu lực ứcchế của một số vật liệu nano

Các kết quả nghiên cứu đạt được:

Phân lập và định danh nắm gây bệnh đạo ôn dựa vào đặc điểm hình thái bao tửcho thay 20 MPL đều là nam gây bệnh đạo ôn trên lúa Pyricularia oryzae Cav gây ratheo đặc điểm nhận dạng của Emmanuel và ctv (2013) Các chủng phân lập có sợi nắmmọc sát mặt thạch hoặc mọc nổi lên bề mặt thạch và có sự hình thành sắc tố melanin,đặc điểm bào tử là có 1 — 2 vách ngăn

Đánh giá nồng độ hiệu quả tối đa một nữa (ECso) của các hoạt chất trừ nắm đốivới nắm Pyricularia oryzae Cav theo phương pháp của Mecozzi v Giá trị ECso củatricyclazole là 55,5 - 117,1 ug/mL, giá trị ECso của azoxystrobin và chlorothalonil lầnlượt là 0,04 - 4,25 ug/mL và 5 - 22,5 g/mL Dựa vào hệ số kháng (RF) cho thấy trong

30 MPL có sự hình thành tính kháng đối với hoạt chất azoxystrobin và chlorothalonil,kháng yếu ở hoạt chất tricyclazole

MPL TM4 và TAT2 có khả năng kháng thuốc trừ nam cao được chọn dé đánhgiá khả năng ức chế của một số vật liệu dang nano Ở mức nồng độ 60ppm đối vớiAg/SiOa-CMC và AgSiOz-cts ở nồng độ 90ppm đạt hiệu lực ức chế 100% tại thời điểm

12 NSC MPL TAT2 quan sát tác động cua vật liệu nano lên sợi nam cho thấy các vậtliệu nano làm biến dạng và gây sưng phù sợi nam Ở nồng độ 60ppm, AgSiO2 -CMC,AgNPs, AgSiO; - cts và AgSiO› - TW mang tỷ lệ ức chế nảy mam bào tử của MPLTAT2 lần lượt là 100%, 61,8%, 69,9%, 48,7%

MỤC LỤC

09099090 — ÔỎ iiO_o iii

1.2.1 Lich sử, phân bố và thiệt hại - 2: 2©22+222+2E22EE22E222222232221222122212222 4

1.2.2 Tác nhân gây bệnh và triệu chứng bệnh 5+ 5< <£++£<+*ceexeeereeerree 51.2.3 Tổng quan về nắm Pyricularia oryZqe ClaV -c 5< c+Sc+++‡+esskkseesrereeervrs 61.2.4 Quy luật phát sinh phát triỀn - 2-2 2S2+SE+SE£EE£EE£EEEEEEEEEEEEEEeEErrkrrrrrree 8

1.2.5 Các yếu tô ảnh hưởng đến quá trình phat sinh phát triển của bệnh 8

1.2.6 Biện pháp quản lý bệnh đạo ôn - ceeeeeeceeeeeceseeeseeceneteeeesneesneeeeees 101.2.7 Các hoạt chất trị nắm đạo On 2-52 Ss+ESEE2EEEE 1E EEEEE12121112121111211 xe 11

1.4 Vat liéu nano đồng va nano bạc/silica (Ag/S1O) - - 5-5 S+xcssssereeeree 13

1.4.1 Nano bac Öˆnn Ỏ 13

I ĐÀN t5) x00 290177 17

Chương 2 NOI DUNG VÀ PHƯƠNG PHAP NGHIÊN CỨU - 19

2 1 NOi dung nghién CUU eee 192.2 Thời gian và dia điểm nghiên cứu -2- 2 2222++2++2E+2E++£E++E+zzxzrrsrxez 19

2522101 Tei 0811810 HIỆH /ðUÊUsezseosesssstesosieErdliociesoisggtiotsgedgodioiiolsgsrdotäididunibscãurEninigtgisgl3Mgugig4880iđd- 192.2.2 Địa điểm nghiên cứu - 2: 22©22222222222122112212212211221211211221211221 21.2 xe 19

2.3 Vật liệu và dụng cụ thí nghiệm 222222212221 22122E22EE2EEEEEESrkrrrerek 19

2.3.1 4 8i 000200 192.3.2 Môi trường nuôi cấy nắm - 2-22 ©22222E22EE22EE2EE2EE22122E2221221e2Ercrvee 21

2.3.3 Dung ấu 0i)0:1)0) 15 000757 2]

3:4: Phương PHáp:nghHiỂH GỮU: sacsxoeeceeossbs1cegsloESsudibcsEgsdgbinddssgdhodEobpdpulssicg900ugg0ksiglx2a3410g8u 212.4.1 Phan lập va định danh tác nhân gây bệnh đạo ôn trên lúa dựa vào đặc điểmHHHH that bảo TỬ: scseecessebienikd nindskEtolg G3ESI20384881840GG531DA3841300SGG5L1S84G603/004-383 311883880030588 212.4.2 Đánh giá tính kháng thuốc của tác nhân gây bệnh đạo ôn trên lúa với các hoạt

chất thuốc diệt nấm - 2-2 +s+SS+SE£EE£EE£EEEEE2322112112112112112112121121211212111 2e 23

2.4.3 Đánh giá khả năng phòng trừ của một số vật liệu dang nano đối với tác nhângây bệnh đạo ôn trên lúa có tính kháng thuốc trừ nấm - 222 2222z222552+< 24Chương 3 KET QUÁ VÀ THẢO LUẬN -2- 22 2222222E+2E22E22E22E22E22222222222ze2 27

3.1 Kết quả phân lập, mô tả hình thái và màu sắc của 30 mẫu nắm phân lập trên môitrường PDA ở 12 ngày sau cấy : 22- 5222222222222 2212712712212 re 27

3.2 Kết quả định danh mẫu nắm gây bệnh đạo ôn phân lập trên lúa dựa trên hình thái

3.3 Kết quả tính kháng của các chủng nam Pyricularia oryzae Cav đối với các hoạt

chất hóa học trong phòng thí nghiệm - 2 2 2222zszzzzzszzssssssse-sc . 3

3.3.1 Khả năng ức chế của hoạt chất tricyclazole đối với nắm P.oryzae Cav trongđiều kiện phòng thí nghiệm - ¿2 +S2S2SE£SE£2E22E22E2E2E2232212212212212222 21 33

3.3.2 Kha năng ức chế của hoạt chất azoxystrobin đối với nắm P.oryzae Cav trong

điều kiện phòng thí nghiệm 22 2 2¿22222E22E22EE2EE22EE2212312212212221221 22 2zxe2 37

3.3.3 Khả năng ức chế của hoạt chất Chlorothalonil đối với nam P.oryzae Cav trong

điều kiện phòng thí nghiệm 22 2 22222EE22E2EE2EE22E1221221222122122212212222 22x 2 41

3.4 Kết quả đánh giá khả năng ức chế tan nam Pyricularia oryzae Cav của một số

vật liệu dang nano trong điều kiện phòng thí nghiệm . 2-5252 55z£- 463.5 Quan sát và đánh giá chi tiét ảnh hưởng của các vật liệu nano lên tê bào sợi nam

và sự nảy mam của bao tử nam đạo ôn Pyricularia oryzae Cav - 49

3.5.1 Quan sát ảnh hưởng của các vật liệu nano lên tê bào sợi nâm đạo ôn

Pyricularia oryzae Cav ở thời điểm 12 NSC 2-52255ccccccccccrccee 49KET LUẬN VÀ DE NGHỊ, ¿- 2 ©2¿22222S22E22E1225222122312212212211221221221 21.2 xe 52

CC rẽ nh brrbrrrnirorprrrprrrrtrtrtirlrasttrgsaatotsinoitiisasrarroiqauyrgegoi 52

001210 8£ 52

TÀI LIEU THAM KHẢO - 22 2SSE+SE£EESE£EE£EE2EEEEEEEEEEE1E2121121112112111 21.22 xe, 53PHU LỤC 2-22 ©2222222E22212212212212112112211211112111121121111211121111 12c 61

DANH SÁCH CHỮ VIET TAT

CMC Carboxymethyl Cellulose

Cts Chitosan

Ctv Cộng tác viên

MPL Mẫu phân lập

NSC Ngay sau cay

OMA Môi trường bột yến mach — Oatmeal Agar

P oryzae Pyricularia oryzae

PDA Môi trường khoai tay - Potato Dextro Agar

DANH SÁCH CÁC BANG

Trang

Bảng 2.1 Bảng danh sách mẫu nắm bệnh được thu thập và phân lập tai tỉnh An Giang

ya Kiền Cliang (Nguôn: V8 CHÍ TH NHÍ] xung tk ghh tu DAA08605:8A8880190/0300130A.008.04800/680 20Bảng 3.1 Bảng danh sách mẫu nắm bệnh được thu thập và phân lập tại tỉnh Long An vàDOng Thap HỒ 37Bang 3.2 Kết quả quan sát hình thái sợi nắm của 20 mẫu nam phân lập trên môi trườngPDA tại 12 ngày sau cấy -522222222221221222122122112112211211211211211111211 21 xe 29Bang 3.3 Đường kính tan nam và hiệu lực ức chế của hoạt chất tricyclazole đối với namP.oryzae Cav trong điều kiện phòng thí nghiệm tại thời điểm 12 NSC 34Bảng 3.4 Đường kính tản nâm và hiệu lực ức chê của hoạt chât azoxystrobin đôi vớinam P.oryzae Cav trong điều kiện phòng thí nghiệm tại thời điểm 12 NSC 38Bang 3.5 Đường kính tản nam và hiệu lực ức chế của hoạt chất chlorothalonil đối vớinam P.oryzae Cav trong điều kiện phòng thí nghiệm tai thời điểm 12 NSC 42Bảng 3.6 Đường kính tan nam và hiệu lực ức chê của vật liệu nano đôi với namPyricularia oryzae Cav nuôi cay trên môi trường PDA 12 NSC - 48Bang 3.7 Tỷ lệ nảy mam của bao tử đạo ôn Pyricularia oryzae Cav trong lam kính lõm

820077755 cecceeeseeeccceccececcceesessssssseesecececeseesesessessssescececeeecetssessssssseseeeeeeeesseenseeees 51

DANH SÁCH CÁC HÌNH

Trang

Hình 1.1 Triệu chứng bệnh đạo ôn lá - - 5 5-2222 +22*++£+zerererrrrrerrrrrrrrrerree 5Hình 1.2 Triệu chứng bệnh đạo ôn cổ bông 2- 2-2 22 52+2E+2E££E+£E+zxzzxczxezed 6Hình 1.3 Cuống bao tử và bào tử nắm Pyricularia oryzae Cav : -: (iHình 1.4 Vòng đời va quá trình xâm nhiễm của nam gay bệnh dao ôn 8Hình 1.5 Tac động của AgNPs lên vi khuan 2.02.00 ccc cccccceeceeceeseeceeeseessesseesseeseeseeens 14Hình 1.6 Co chế diệt khuan của AgNPs thông qua sự tương tac với thành tế bào, cácE20:010đ17 NHÀ DJ: cassenneinengiionoidtdtilttoiEEIEtGGGGIHIGGSINBGHRSEHRIREGHISGESOESNG 2Gi00M3230100G900000G001000S481 15Hình 1.7 Sự tương tác giữa AgNPs với tế bảo nấm . -2- 2¿©2¿22z+22z2zz+z+2 17Hình 3.1 Hình thái, màu sắc tản nắm 20 mẫu nam phân lập trên môi trường PDA ở 12INS Ca: sxessseussasresneneessay 00930450 83588588909085940.5813801080010364383048528S0IBiTqS8i3i805G80113000G88807834301:S95g816/309.03dv18 28Hình 3.2 Hình thái, màu sắc tan nấm 10 mẫu nam dao ôn trên môi trường PDA ở 12

Hình 3.3 Hình thái bào tử của 20 MPL trên môi trường OMA -3⁄2Hình 3.4 Biéu đồ biểu thị giá trị nồng độ ức chế một nữa (ECso) và hệ số khang (RF)của 30 MPL đối với hoạt chất tricyclazoÌe -2- 5 5ssxecxerserxerxerserxerxerxerxe 3/7Hình 3.5 Biéu đồ biểu thị giá trị nồng độ ức chế một nữa (ECso) và hệ số khang (RF)của 30 MPL đối với hoạt chất AZoxystrobin - 2-2 ©2222+22E22E221221221 2222222 AlHình 3.6 Biéu đồ biểu thi giá trị nồng độ ức chế một nữa (ECso) và hệ số khang (RF)của 30 MPL đối với hoạt chất Chlorothalonil - 2: 2 2+s22E+S22££E2£22E££Ez£zzZzzzzzzzzz 45Hình 3.7 Tỷ lệ phần trăm độ nhạy cảm/không mẫn cảm (kháng trung bình, kháng, khángcao) của các MPL dựa vào hệ số [100 45Hình 3.8 Hiệu lực ức chê của vật liệu nano dén sự phát triên cua nam Pyricularia oryzae Gav chủng TME-iỡ 12 NS C ecco creer se rye ie arate remanence etree 46

Hình 3.9 Hiệu lực ức chê của vật liệu nano đên sự phat triên cua nam Pyricularia oryzae (Case, GHÚNH TẠ L2: 12 NS G sessnssessesnsneanean tragidbingitii gia GLSS1380SGGBEEOSGSB400130S5E38G8198830088.s8ESsgSẺ 47

Hình 3.10 Tác động của các vật liệu nano lên tê bào sợi nam đạo ôn P oryzae Cav .49

Hình 3.11 Tác động của các vật liệu nano lên sự nảy mâm bào tử nam đạo ôn Pyricularia oryzae Cav trên lam kính lõm sau 24 gI1Ờ - ce 225522221221 12212211221221121 E1 ke 50

GIỚI THIỆU

Đặt vấn đề

Cây lúa (Oryza sativa L.) là một trong năm loại cây lương thực chính đồng thời

cũng là loài cây cung cấp năng lượng lớn nhất cho con người với khoảng 20% lượng

calo hàng ngày cho 3 tỷ dân số thế giới (Gnanamanickam, 2009) Khoảng 40% dân sốthé giới, 100% người dân ở Việt Nam lấy cây lúa làm nguồn lương thực chính Vì vậy,cây lúa là cây lương thực chính trong mục tiêu phát triển nông nghiệp dé đảm bảo anninh lương thực của nhiều quốc gia trên thế giới (Garris và ctv, 2005) Trong các tácnhân gây hại trên cây lúa, bệnh đạo ôn do nắm Pyricularia oryzae Cav gây ra là mộttrong những bệnh gây hại nghiêm trọng nhất đến các vùng trồng lúa tại Việt Nam vàtrên toàn thế giới

Đề giảm thiểu thiệt hại của bệnh, người ta sử dụng các biện pháp phòng trừ tổnghợp như vệ sinh đồng ruộng, bón phân hợp lí, sử dụng giống kháng bệnh, sử dụng thuốcbảo vệ thực vật Tuy nhiên, việc lạm dụng thuốc bảo vệ thực vật đã và đang mang lạinhiều hiểm họa đối với môi trường, đe dọa sức khỏe con người, có nghiên cứu cho rằngtrong tong số 30.594 người tiếp xúc với thuốc bảo vệ thực vật hóa học có đến 1.081người được chuẩn đoán mắc bệnh ung thu (Emily va ctv, 2000) Việc lạm dụng thuốchóa học cũng ảnh hưởng xấu đến môi trường nước, ngăn cản sự sinh trưởng và câu trúccủa hệ sinh thái thủy vực (Margni va ctv, 2002).

Song với những thiệt hại của bệnh đạo ôn gây ra, khoa học đã nghiên cứu và từngbước áp dụng các hướng tiếp cận mới trong sản xuất thuốc bảo vệ thực vật an toàn vàhiệu quả Trong đó, công nghệ nano đã đạt được nhiều thành tựu trong nông nghiệp nóichung và ngành bảo vệ thực vật nói riêng (Khot và ctv, 2012) Trong lĩnh vực bảo vệthực vật, công nghệ nano đã có những ứng dụng quan trọng trong sản xuất các chế phẩmphòng trừ bệnh do nam, vi khuẩn, tuyến trùng, nguyên sinh động vật, tảo và động vậtnhỏ gây nên (Adisa và ctv, 2019) Các hạt nano bạc có phô hoạt động mạnh với nhiềuloại nam và khuẩn có hại trên lúa như Pyricularia oryzae Cav (bệnh đạo ôn),Rhizoctonia solani (bệnh khô van), Xanthomonas oryzae pv (bệnh bạc lá lua), (Zhang

va ctv, 2016) Tuy nhiên, ở Việt Nam việc ứng dung công nghệ nano trong công tac bao

vệ thực vật, cũng như việc nghiên cứu kết hợp các vật liệu dạng nano kim loại hiện nay

van còn nhiêu hạn chê đặc biệt là đôi với bệnh đạo ôn trên lúa Do đó dé tài “Khảo sathiệu lực phòng trừ của các vật liệu nano trên mau nam đạo ôn (Pyricularia oryzae Cav.)

gây bệnh trên lúa (Oryza sativa L.) có tính kháng thuốc BVTV” được thực hiện

Mục tiêu nghiên cứu

Xác định nam gây bệnh đạo ôn Pyricularia oryzae Cav trong nguồn mau thuthập trên ruộng lúa tại các huyện thuộc tỉnh Long An và Đồng Tháp bằng đặc điểm hìnhthái.

Đánh giá hiệu lực ức chế của một số hoạt chất thuốc trừ nam đặc trị đạo ôn đượckhảo sát từ nông dân dé đánh giá khả năng kháng thuốc trừ nam

Đánh giá khả năng ức chê của một sô vật liệu dạng nano đôi với nam Pyricularia

oryzae Cav gây bệnh đạo ôn trên lúa trong phòng thí nghiệm.

Yêu cầu

Phân lập được các mẫu nam Pyricularia oryzae Cav từ những mẫu bệnh đạo ôn

trên lúa được thu thập tại tỉnh Long An và Đồng Tháp

Định danh được tác nhân gây bệnh đạo ôn trên lúa dựa vào đặc điểm hình thái.Đánh giá tính kháng 30 dong nam Pyricularia oryzae Cav gây bệnh đạo ôn trên

lúa đối với một số hoạt chất thuốc hóa học đối với nắm trong phòng thí nghiệm

Đánh giá hiệu lực ức chê của một sô vật liệu dạng nano đôi với nam Pyricularia oryzae Cav gây bệnh đạo ôn trên lúa trong phòng thí nghiệm.

Chương 1

TỎNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 Sơ lược về cây lúa

Trên thế giới có hai loài lúa trồng có tên khoa học là Oryza sativa L và Oryza

glaberrima Steud thuộc ho Gramineae (hòa thảo), chi Oryzae (Pham va ctv, 2015).

Trong đó, Oryza sativa L xuất hiện lâu đời nhất tại Trung Quốc, An Độ và các nước ở

Đông Nam A, trong đó có Việt Nam và cũng là loài được trồng phổ biến nhất trên thé

giới Theo công bố của Khush (1997) va Second (1982), chi Oryza đã xuất hiện từ 130triệu năm trước và loài O sativa L có hai loài phụ là Indica cùng với Japonica đã xuấthiện cách đây từ 2 đến 3 triệu năm trước ở dãy Himalaya

Theo Nguyễn Ngọc Đệ (2008), điều kiện ngoại cảnh ảnh hưởng sâu sắc đến sựsinh trưởng cũng như năng suất cây lúa Cường độ ánh sáng ảnh hưởng trực tiếp đến sựquang hợp của cây lúa Trong điều kiện bình thường, lượng bức xạ trung bình từ 250 —

300 cal/cm2/ngày thì cây lúa sinh trưởng tốt và trong phạm vi này thì lượng bức xạ càngcao thì quá trình quang hợp xảy ra cảng mạnh Giai đoạn lúa non nếu thiếu ánh sáng câylúa sẽ ốm yếu, màu lá từ xanh nhạt chuyền sang vàng, lúa không nở bụi được Thời kỳphân hóa đòng nếu thiếu ánh sáng thì bông lúa sẽ ngắn, ít hạt và hạt nhỏ, hạt thoái hóanhiều, dé bị sâu bệnh phá hại Giai đoạn lúa chín nếu ruộng lúa khô nước, nhiệt độ khôngkhí cao, ánh sáng mạnh thì lúa chín nhanh và tập trung hơn; ngược lại thời gian chín sẽkéo đài Kết quả từ nhiều thí nghiệm cho thấy, thời kỳ cần năng lượng mặt trời cực trọngnhất đối với lúa là từ lúc phân hóa dong đến khoảng 10 ngày trước khi lúa chín, vì sựtích lũy tinh bột trong lá va thân đã bắt đầu ngay từ khoảng 10 ngày trước khi trổ vàđược chuyền vị vào hạt rất mạnh sau khi trồ

Ở Việt Nam cây lúa là cây lương thực chính và có vị trí trọng yếu trong an ninh

lương thực, chiếm diện tích gieo trồng và sản lượng lớn nhất (Hoang, 2016) Chiến lượcphát triển nông nghiệp nông thôn Việt Nam 2011 — 2020 đã chỉ rõ: Phát triển sản xuất lúa

gạo Việt Nam trở thành mũi nhọn có hiệu quả và đảm bảo an ninh lương thực.

Theo tạp chí khoa học nông nghiệp Việt Nam (2023), lúa gạo xuất khâu dat 7,3triệu tan, đóng góp 3,54 tỷ USD trong tổng 53,2 tỷ USD kim ngạch xuất khẩu nông lâmsản trong năm 2022 Về mặt xã hội, tính toán từ dir liệu Khảo sát mức sống hộ gia đìnhnăm 2020 cho thấy lúa gạo vẫn là nguồn thu của hơn 8,3 triệu hộ dân Việt Nam Trong

cơ cau kinh tế của đất nước, nông nghiệp Việt Nam có vai trò làm giá đỡ nền tảng, đóng

góp 22,1% GDP, gần 30% giá trị xuất khâu va trên 60% lực lượng lao động

1.2 Bệnh đạo ôn do nắm Pyriculara oryzae Cav gây hại trên lúa

1.2.1 Lịch sử, phân bố và thiệt hại

Bệnh đạo ôn là một trong những bệnh hại quan trọng đối với các vùng trồng lúa vìphân bồ rộng và gây thiệt hại nghiêm trọng (Ou, 1985) Năm 1560, bệnh chính thức đượcphát hiện đầu tiên tại Ý, sau đó được phát hiện thấy ở Trung Quốc vào năm 1637, NhậtBan năm 1760, An độ năm 1913, các nước Trung A, Tay A; ở Bắc Mỹ, Nam Mỹ, quan

đảo Antin; ở Châu Âu: Yas, Bungari, Rumani, Bồ Đồ Nha, Liên Xô (Mew và Gonzales,

2002); ở Việt Nam được phát hiện năm 1921 ở Nam Bộ va ở Bắc Bộ xuất hiện vào năm

1951 với tên gọi là bệnh tiêm lụi hay bệnh cháy lá lúa (Vũ Triệu Man, 2007).

Sự thiệt hại về sản lượng lúa do dịch bệnh đạo ôn gây ra có thể chiếm 10 - 30%(Pooja và Katoch, 2014), trong khi đó 10% sản lượng lúa đủ cung cấp lương thực cho 60

triệu người mỗi năm (Valent, 1990) Trong điều kiện thuận lợi về thời tiết, khí hậu, phân

bón, bệnh có thé gây thiệt hại lên đến 100% sản lượng (Cruz va Vazquez và ctv., 2007).Trong trường hợp độ am cao trong khoảng 12 giờ sẽ tạo điều kiện thuận lợi cho bệnh phátsinh va chủ yêu phổ biến ở các ruộng lúa ngập nước (Arshad và ctv., 2008)

Hiện có khoảng hơn 85 quốc gia khác nhau có lúa bị nhiễm đạo ôn (Scardaci,2003) Đặc biệt, những quốc gia có khí hậu ôn hòa, độ am cao, sẽ tạo ra môi trườngthuận lợi cho nắm bệnh phát tán và phát triển mạnh (Nguyễn Thị Thanh Nga và ctv.,2013) Theo Viện Nghiên cứu lúa Quốc tế, mỗi năm An Độ mat hơn 266.000 tan lúahay khoảng 0,8% tổng sản lượng do bệnh đạo ôn Ở Nhật Bản, bệnh này có thé nhiễmcho 865.000 hecta lúa Còn tại Philippines, hàng nghìn hecta lúa mat hơn 50% sản lượng

Chúng đặc biệt gây hại ở các quốc gia nóng 4m như Việt Nam, Thái Lan nhiều nước

trồng lúa khác

1.2.2 Tac nhan gây bệnh và triệu chứng bệnh

Theo Vũ Triệu Mân (2007), bệnh đạo ôn có thê gây hại trên tất cả các giai đoạnsinh trưởng va phát triển của cây lúa — từ thời kỳ mạ đến lúa chín và có thé gây hai ở be

lá, lá, lóng thân, cổ bông, gié và hạt Một báo cáo gần đây cho thấy rằng rễ lúa cũng cóthé bị tan công bởi nam gây bệnh đạo ôn (TeBeest, 2012)

Vết bệnh trên mạ: lúc đầu hình bầu dục sau tạo thành hình thoi nhỏ hoặc dạng

tương tự hình thoi, mau nau hồng hoặc nâu vàng Khi bệnh nặng, từng đám vết bệnh kếtiếp nhau làm cho cây mạ có thé héo khô hoặc chết

Vết bệnh trên lá: lúc đầu là những chấm nhỏ màu xanh lục hoặc mờ vết dầu,

sau đó chuyền sang mau xám nhạt Su phát triển của vết bệnh sau đó còn phụ thuộcvào phản ứng của cây Trên các giống lúa man cảm các vết bệnh to hình thoi, dày

màu nâu nhạt, có khi có quang màu vàng nhạt, phần giữa vết bệnh có màu nâu xám.Trên các giống kháng, vết bệnh là các vết cham rất nhỏ hình dạng không đặc trưng

(Nguôn: Phan Văn Kim, 2016)

Hình 1.1 Triệu chứng bệnh đạo ôn lá A) Vết bệnh điền hình; B) Vét bệnh đang

sinh bào tửVết bệnh ở cỗ bông, cé gié và trên hạt: triệu chứng các vết màu nâu xám hơi

teo that lại Vết bệnh trên cô bông xuất hiện sớm thì bông lúa bị lép, nếu bệnh xuất hiệnmuộn khi hạt đã vào chắc thì gây hiện tượng gãy cổ bông Vết bệnh ở hạt không định

hình, có màu nâu xám hoặc nâu đen Nam gây bệnh đạo ôn ký sinh ở vỏ trau và có thé

ở bên trong hạt Hạt giống bị bệnh là nguồn truyền bệnh từ vụ này qua vụ khác

(Nguồn: Lanoiselet và Cother, 2016)Hình 1.2 Triệu chứng bệnh đạo ôn cổ bông A) Vết bệnh trên cổ bông; B) Bông

lúa bị bạc trắng và lép hạt; C) Bông lúa bị gãy cổ bông

A z K A K ^ z ` A x K PON A AR

Trên các dot thân: vêt bệnh có màu nâu sam đên đen Trong điêu kiện độ âm cao vét bệnh ướt và có moc xám xanh, vêt bệnh bị nhăn lại Bệnh có thê lam gãy thân

lúa (Võ Thanh Hoàng, 2005).

1.2.3 Tống quan về nắm Pyricularia oryzae Cav

Pyricularia oryzae Cav (Magnaporthe oryzae) là một loài đơn bội của ngành namAscomycota, phân ly từ Pyricularia grisea, gây bệnh đạo ôn chủ yếu trên cây cỏ và một

số loài khác trong đó có lúa Là hai loài phát sinh khác nhau nhưng P oryzae và P

grisea không có sự khác biệt rõ ràng về hình thái từ nghiên cứu của Couch và Kohn(2002).

Nam Pyricularia oryzae Cav thuộc họ Moniliales, lớp nam bat toàn

Phan loai khoa hoc:

Hình 1.3 Cuống bào tử và bao tử nam Pyricularia oryzae Cav (A-E) Thanh tỷ

lệ: A-E= 10um

(Nguôn: Luo J, Zhang N 2022)Bao tử phân sinh có hình quả lê, có từ 2 — 3 vách ngăn, bào tử không có mauhay có màu xanh nhạt, kích thước trung bình của bao tử nam 19 - 23 x 10 — 12 wm

(Vũ Triệu Man, 2007) Mỗi bào tử gắn với cuống bao tử bởi rốn hat (hilum) như nhú

lồi (Nguyễn Văn Bá và ctv., 2005) Nhìn chung bảo tử có kích thước và màu sắc biếnđộng theo từng chủng nam (isolates), điều kiện ngoại cảnh cũng như trên các giốnglúa khác nhau (Ou, 1985).

Các bao tử từ đỉnh của cành bao tử phát tán đi nhờ gió và rơi trên bề mặt lá lúa,

trong điều kiện gặp nước và đủ độ âm, các bào tử nảy mầm sau 2 giờ và phía đầu ống

mam phinh to ra thành giác bám (appressorium) dé bám chặt và bề mặt kí chủ (1 ngàysau xâm nhiễm) Từ giác bám mọc ra sợi hút chọc thủng biểu bì và xâm nhập và bêntrong tế bào kí chủ (2 ngày sau xâm nhiễm) Sợi hút phát triển thành sợi nắm và sinhnhiều nhánh dé tăng diện tích hap thụ dinh dưỡng rồi tiếp tục xâm chiếm các tế bao lân

cận (3 - 4 ngày sau xâm nhiễm) và cuối cùng lam cho các tế bao lá bị chết biểu hiện rõ

qua bên ngoài vết bệnh (5 - 7 ngày sau xâm nhiễm) (Vũ Triệu Mân, 2007)

Theo Võ Thanh Hoàng (2005) ở độ 4m cao trên 93% tạo điều kiện tối ưu cho bao

tử nam bệnh hình thành, sự gia tăng của âm độ đồng thời cũng tỉ lệ thuận với tốc độ sảnsinh bao tử Trên bề mặt lam kính 4m, lượng bào tử nảy mam có thé lên đến 80% và sau

24 giờ có thé sinh sản được Quá trình sinh sản bào tử đa phần diễn ra về đêm lúc trời

sam tối và đạt đỉnh điểm và lúc 1 - 2 giờ sáng, sau đó giảm dan khi trời về sáng.

1.2.4 Quy luật phát sinh phát triển

Theo nghiên cứu của Talbot (2003) cho thay sự xâm nhiễm của nắm Pyricularia

oryzae Cav gây bệnh trên lúa xuất phát ban đầu là một bào tử bám trên bề mặt của lálúa, đính kèm bản thân nó vào lớp cutin nhờ giải phóng một loại chất bám dính trongxoang đỉnh của bào tử Những bào tử này tiếp tục lây lan sang cây khác nhờ, gióm mưa

và các giọt sương (Ou, 1985).

Nature Reviews | Microbiclogy

(Nguôn: Donofrio và ctv, 2014)

Hình 1.4 Vòng đời va quá trình xâm nhiễm của nam gây bệnh đạo ôn

Trong quá trình gây bệnh nam tiết ra một số độc tố như axit a — pycolinic(CøHszNO;) và pyricularin (CisHi4N203) có tác dụng kiềm hãm hô hap và phân hủy

các enzyme chứa kim loại của cây, kìm hãm sự sinh trưởng của cây lúa (Vũ Triệu

Mân, 2007).

1.2.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình phát sinh phát triển của bệnh

Các yếu tố ngoại cảnh

Nhiệt độ: Nắm Pyricularia oryzae sinh trưởng thích hợp ở nhiệt độ 25 — 28°C và

âm độ không khí là 93% trở lên, nhiệt độ thấp nhất nắm có thé phát triển được rơi vào 8

- 9°C và cao nhất ở đỉnh điểm 51 - 52°C (Nishikado, 1917) Pham vi nhiệt độ nắm sinh

san bào tử 10 — 30°C Theo Awoderu va ctv., (1991), ở 25°C cường độ sinh sản bao tử

nhanh và mạnh nhưng sức sinh sản giảm dan sau 9 ngày, trong khi đó 6 16°C, 20°C và

24°C sự sản sinh bào tử nhanh và kéo đài tới 15 ngày sau đó mới giảm xuống Điều kiện

ánh sáng âm u có tác dụng thúc đây quá trình sinh sản bào tử của nam Bào tử nảy mâm

tốt nhất ở nhiệt độ 24 - 28°C và có giọt nước (Vũ Triệu Man và Lê Lương Té, 2001)

Âm độ không khí: El-Refaei va ctv (1986) đã chỉ ra rằng khi 4m độ nhỏ hơn 80%

ảnh hưởng xấu đáng kề đến sự nảy mam của bảo tử, ngược lại nếu độ âm đủ dé làm mặt

lá bị ướt từ 12 - 15 giờ thì hiệu quả xâm nhập của nam tăng lên 30% Bệnh xuất hiện

và phát triển mạnh trong điều kiện khô hạn có biên độ dao động nhiệt độ ngày và đêmlớn cùng với trời trở lạnh, sương mù kéo dài, áp thấp nhiệt đới, gió mùa Đông Bắc, mưachuyền mùa (lat phat), mưa xuân, trời âm u (thiếu nắng), khi ruộng thiếu nước, bón thừa

phân đạm, mật độ sa cấy quá dày (Castejón-Muñoz, 2008; Võ Thị Thu Oanh, 2011)

Gió: Gió cũng có tiềm năng làm giảm mức độ nghiêm trọng của bệnh, bằng cáchgiảm cả số bào tử dính vào bề mặt cây trồng và hạn chế độ âm ướt trên bề mặt lá nênhạn chế nhiễm bệnh (Adachi, 1981) Taguchi va ctv (2014) đã nghiên cứu và nhận thay

áp dụng gió nhân tạo tốc độ từ 2,6 đến 7,3 m/s trong vòng 30 phút vào hai thời điểm lúc

11 giờ đêm và 4 giờ sáng làm giảm đáng ké tỉ lệ bệnh đạo ôn lá và đạo ôn cô bông, hiệuquả giảm bệnh từ gió cao hơn cả việc việc áp dụng thuốc trừ nắm hóa học truyền thống.Tuy nhiên, nếu tốc độ của gió thấp hơn 2,6 m/s và cao hơn 7,3 m/s thì hiệu quả ngượctức là làm bệnh càng trầm trọng hơn

Độ mặn: Mot số tài liệu và các nghiên cứu liên quan đến sự nhiễm mặn đến cácvùng trồng lúa cho thấy khi cây lúa bị mẫn cảm với điều kiện mặn thì sức đề kháng trởnên kém và do đó dé nhiễm đạo ôn và có thé nặng hơn so với điều kiện cây lúa không

bị stress mặn (Bùi Chí Bửu và Nguyễn Thị Lan, 2003) Trên mức chịu mặn mà lúa có

thé chống chịu (2 - 4%o) thì ảnh hưởng đến quá trình sinh lý cây lúa cũng như khả năngchống chịu với các loài dịch hại nói chung, bệnh đạo ôn nói riêng

Yếu tố dinh dưỡng phân bón

Ou (1983) chỉ ra rằng việc bón phân cảng nhiều Nitơ khi cây đang bị đạo ôn tấncông thì tỷ lệ thuận với độ thiệt hại do bệnh gây ra, do khi bón nhiều Nitơ thì hàm lượngmuối amoni trong tế bào tăng cao, các tế bảo phải chứa nhiều nước dé trung hòa từ đólàm nguyên nhân bệnh phát triển Ngoài ra việc bón nhiều phân đạm cũng kích thíchđên sự nảy mâm của bào tử nâm đạo ôn mạnh mẽ.

1.2.6 Biện pháp quản lý bệnh đạo ôn

Biện pháp canh tác

Thời vụ: Thời vụ gieo trồng cũng có ảnh hưởng rõ rệt đến sự phát triển của bệnhđạo ôn (Prabhu va Morais, 1986) Bồ tri thời vụ sao cho tránh các tháng quá 4m haynhiều sương mù, mật độ sạ vừa phải trong khoảng 80 - 120kg/ha (Nguyễn Thị PhongLan và ctv, 2015).

Phân bón: bón phân hợp lý, cân đối N, P, K theo từng giai đoạn sinh trưởng củacây lúa, kết hợp bảng so màu lá Phân đạm có ảnh hưởng quan trọng đến sự phát triểnbệnh, bón thừa phân đạm luôn gây ra tình trạng dé nhiễm bệnh đạo ôn, bệnh phát triểnnhanh và nặng hơn so với việc bón ít đạm, đồng thời rất khó phòng trị (Phan Văn Kim,2016; Law và ctv, 2017) Khi có bệnh xuất hiện phải tạm ngừng bón thúc đạm và tiễnhành phun thuốc phòng trừ Đối với phân lân: vùng ít phèn thì phân lân ảnh hưởng tớibệnh không rõ, còn ở vùng đất phèn việc bón lân cũng có tác dụng hạn chế được bệnh.Phân kali ảnh hưởng đến bệnh khá phức tạp có liên quan đến phân đạm Nếu bón đạmvừa phải (dưới 75 kg N/ha) thì kali giúp giảm bệnh đáng ké, còn nếu bón đạm cao (trên

150 kg N/ha) thì kali làm bệnh nặng thêm Ngoài ra, Silic cũng được ghi nhận là có anhhưởng đến sự xuất hiện và phát triển bệnh đáng kể (Ou, 1985) Sự tương quan giữa hàmlượng silica va tỷ lệ mắc bệnh được nghiên cứu trên các giống lúa khác nhau cho thấycây trồng có hàm lượng silic cao hơn trong tế bao thì nhiễm bệnh đạo ôn nhẹ hon (Pooja

và Katoch, 2014) Các nghiên cứu tiến hành tại Đại học Florida USA, cho thấy việc ápdung silica (silicat canxi) quản lý đạo ôn có hiệu quả cao hơn so với chất diệt nambenomyl (Datnoff và ctv, 1997).

Nhìn chung, việc áp dụng biện pháp canh tác tốt sẽ giúp hạn chế nam bệnh đạo

ôn phát triển, làm giảm thiệt hại về năng suất và mang lại hiệu quả kinh tế Tuy nhiên,nếu điều kiện thời tiết bat lợi cho cây trồng và thuận lợi cho mầm bệnh phát triển thì cầnkết hợp các biện pháp khác, trong trường hợp bệnh quá nặng (áp lực mầm bệnh quá caovượt ngưỡng gây hại) thì biện pháp hóa học vẫn được xem là giải pháp tối ưu nhất déphòng trừ bệnh đạo ôn, song đây cũng là phương pháp gây rủi ro về an toàn sức khỏe

cho con người và môi trường xung quanh.

Biện pháp hóa học

Theo thông tư 19/2021/TT-BNNPTNT về danh mục thuốc BVTV được phép sử

dụng, các loại thuốc được khuyến cáo đặc trị đạo ôn tập trung chủ yếu vào các hoạt chất

như: 1) Chlorothalonil (1966, chất phá vỡ quá trình tạo enzym sản xuất đường: 2)

Tricyclazole (1979, chất ức chế sinh tông hợp melanin); 3) Azoxystrobin (1996, chất ứcchế hô hap); các hoạt chat có thé sử dụng riêng rẽ hoặc kết hợp với nhau dé tăng hiệuquả.

Cho đến thời điểm hiện tại, việc việc kiểm soát hóa học bệnh đạo ôn vẫn được sửdụng phô biến và cho hiệu quả cao nhất (Hirooka và Ishii, 2013; Lan va ctv, 2016) Tuy nhiên, không nên lạm dụng thuốc bảo vệ thực vật vì tiềm ân nhiều nhược điểm nhưgây ra sự kháng thuốc, tạo ra nhiều chủng nam mới có tính kháng khó quản lý mambệnh, trong thực thế gần đây có những nghiên cứu ghi nhận về khả năng kháng của nhiềuquan thé nắm Pyricularia oryzae Cav ở nhiều vùng trồng lúa lớn; ngoài ra, lạm dungthuốc hoá học còn gây mat cân bang sinh thái, 6 nhiễm môi trường, ảnh hưởng đến sức

khỏe con người, động vật va vi sinh vật (Pimentel và ctv, 1991, Komarek và ctv, 2010;

Suprapta, 2012; Yoon va ctv, 2013; Law và ctv, 2017).

1.2.7 Các hoạt chất trị nắm đạo ôn

Chlorothalonil

Công thức hóa hoc: CsCluN2

Công thức cấu tạo:

Nhom hoa hoc: Thalonil

Chlorothalonil là một hợp chat hữu co chủ yêu được sử dụng làm thuốc diệt nam

pho rộng, không có hệ thống, với các công dụng khác như chất bảo vệ 26, thuốc trừ sâu,

thuốc diét ve va để kiểm soát nắm mốc, vi khuẩn, tảo Các sản phẩm có chứa

Chlorothalonil được bán dưới tên Bravo, Echo va Daconil Nó được đăng ký sử dụng

lần đầu tiên ở Hoa Kỳ vào năm 1966

Hoạt chất Chlorothalonil có khả năng làm giảm hoạt tính glutathione, liên kếtcác axit amin chứa S, phá vỡ các quá trình tao enzyme sản xuất đường — nguồn cungcấp năng lượng của nam bệnh bị cham dứt Do đó nắm bệnh không thể thực hiện đượccác chức năng thiết yếu, đồng thời hoạt chất còn gây hại cho mang tế bao nam bệnh, ứcchế sự mọc mam, ức chế sự phát triển khuẩn ty, nam bị chết khô trên bề mặt lá

Tricyclazole

Công thức hóa học: CoH7N3S

Công thức cấu tạo:

CH,Nhóm hóa hoc: Benzothiazole

Theo tác gia Froyd va ctv (1978), Tricyclazole là một loại thuốc trừ nam thé hệmới cho phòng trừ bệnh nam Pyricularia oryzae Cav trên lúa Thuốc hoạt động trongđiều kiện cơ thể sống lớn hơn gấp 25 - 35 lần so với điều kiện trong ống nghiệm Trênlúa, Tricyclazole phòng trừ bệnh đạt kết qua từ sự phân tích lưu tồn có hệ thống theothứ tự phân tích rễ, hạt, và đất Kết quả nghiên cứu đồng ruộng cho thấy sự hiệu quả vàdai hạn phòng trừ bệnh đạo ôn (P oryzae) dat được theo thứ tự từ phun lên 14, xử lý hat

và phun ướt đất trong lô lúa cây và ngâm rễ lúa trước khi cấy

Hoạt chất Tricyclazole hoạt động với cơ chế gây ức chế quá trình hình thành nênMelanin Thông thường, Melanin sẽ được hình thành ở tế bao mam trong sợi nam Thànhphần này rất cần thiết và quan trọng giúp cho lớp đệm cứng lại Từ đó, nhờ Tricyclazole

ức chế không hình thành Melanin mà tế bao nam hai sẽ không đủ độ cứng để xâm nhập

hại cây trồng.

Azoxystrobin

Công thức hóa học: C22H17N3Os

Công thức cấu tạo:

1.4 Vật liệu nano đồng và nano bạc/silica (Ag/SiO2)

1.4.1 Nano bạc

Nano bạc được xem là một chat kháng sinh phố rộng thế hệ mới với nhiều đặctính mới và có khả năng ứng dụng rộng rãi mà không bị kháng thuốc (Franci và ctv.,2015; Kim và ctv., 2012) Với các hạt nano AgNPs có kích thước nhỏ hơn 100 nm đem

đến sự tiếp xúc bề mặt lớn hơn khối lượng, cùng với tính bám dính tốt và đễ dàng hòatan trong nước và khả năng thích ứng với nhiều loại chất nền vô cơ như silica, zeolite,

titania, (Keat và ctv, 2013; Horta-Fraijo và ctv, 2013; Wu và ctv, 2001) Nano bạc sớm

được xem có tác dụng làm thuốc trừ bệnh thế hệ mới có khả năng kháng nam, kháng vi

rút và diệt khuân mạnh (Bui va ctv, 2020)

Cơ chế kháng khuan của AgNPs

Hình 1.5 Tác động của AgNPs lên vi khuân

Nhờ vào sự linh động của lớp electron ngoải cùng mà AgNPs có thé dé dangchuyên hóa thành Ag+ Các ion Ag+ có khả năng liên kết mạnh với lớp peptidoglican(thành phan cấu tạo nên thành tế bào của vi khuẩn) từ đó ức chế khả năng vận chuyểnoxy vào bên trong tế bao làm cho vi khuẩn bị tê liệt Nhưng vi khuan vẫn có thé phụchồi khả năng hoạt động nếu như các ion này được lấy ra khỏi tế bào ngay sau đó Do tế

bào động vật không có thành tế bào, nên khi tiếp xúc với các ion này chúng không bị

ton thương

Một số nghiên cứu khác cũng cho thấy các hạt AgNPs có khả năng tương tác trựctiếp với các protein trên thành tế bảo của vi sinh vật và từ đó làm thay đồi cấu trúc cũngnhư tính chất của thành tế bào (Nasrollahi và ctv, 201 1)

Ngoài ra, khi các hạt AgNPs bị ion hóa bề mặt tạo thành các Ag+ bao quanh hạt

nano (Ag+ /AgNP), các hat nano này có khả năng tương tác với các protein cũng như

các acid nucleic tích điện âm bên trong tế bao chất bằng cách liên kết với các nhóm chứcnăng như thiol, phosphate, hydroxyl, imidazol và indole, Các tương tác này dẫn tớiviệc thành tế bào vi khuẩn bị phá hủy, các protein quan trọng như ribosome cũng nhưcác protein vận chuyên bị thay đổi cấu trúc dẫn tới sự bất hoạt các protein này (Franci

và ctv., 2015).

“ AgNP _AgNE`

extracottulor : >»

wae? fe ®& S4 & im oS SS oS i> &eoeeeaseeaasesesasd

AgNP ROS

(Nguon: Franci va ctv, 2015)Hình 1.6 Co chế diệt khuân của AgNPs thông qua sự tương tác với thành tế bào,

các bảo quan và ADN.

Cơ chế kháng nam của AgNPs

Khả năng ức chế của dung dịch nano bạc đối với sự phát triển của nắm bệnh là nhờ

sự chuyên hóa từ Ag0 thành ion Ag* tan công đồng thời nhiều vị trí trong tế bao vi sinhvật, vô hiệu hóa các tổ chức chức năng quan trọng trong tế bào, làm ảnh hưởng đến quátrình tổng hợp thành tế bảo, quá trình vận chuyền các chất qua mảng, tổng hợp và dịch

mã axit nucleic (RNA, DNA), tổng hợp protein cũng như vận chuyên điện tử qua mang.lon bạc có ái lực mạnh đối với các nhóm chức mang điện tích âm trên phân tử sinh học,

đó là các nhóm -SH, -COOH, PO¿Ÿ' và các nhóm chức tích điện âm khác phân bố khắptrong tế bao vi sinh vật Chính phản ứng liên kết đó đã làm thay đổi cấu trúc của các đạiphân tử, làm chúng trở nên mat tác dụng trong tế bao Tuy cơ chế tác động ức chế của ionAg' đối với vi sinh vật đến nay vẫn chưa hoàn toàn được giải thích rõ ràng, nhưng có thểhiểu đơn giản là AgNPs tương tác với một loạt các quá trình phân tử trong vi sinh vật dẫnđến một loạt các tác động từ ức chế sự phát triển, mất khả năng lây nhiễm đến chết tế bảo,phụ thuộc vào hình dạng, kích thước, nồng độ AgNPs (Asharani và ctv, 2009)

Các hoạt tính kháng nắm của nano bạc được đánh giá hiệu quả cao đối với nắm

Collectotrichum gloeosporioides gây bệnh than thư trên cây ăn trái Một thử nghiệm cácnông độ khác nhau của nano bạc ức chế các tác nhân gây bệnh: Alternaria, Sclerotiniasclerotiorum, Rhizoctonia solani, Curvularia lunata, cho thay sử dung 5 mg nano bạc cho

hiệu quả hạn chế sự phát triển của các loại nắm này (Sondi va ctv, 2004).

Cac hoat tinh khang nắm của nano bạc được đánh giá hiệu quả cao đối với nắm

Collectotrichum gloeosporioides gây bệnh than thư trên cây ăn trai Một thử nghiệm các

nồng độ khác nhau của nano bạc ức chế các tác nhân gây bệnh: Alternaria, Sclerotiniasclerotiorum, Rhizoctonia solani, Curvularia lunata, cho thay sử dụng 5 mg nano baccho hiệu qua hạn chế sự phát triển của các loại nắm này (Sondi và cs, 2004)

Một nghiên cứu của Elamwi và El-Shafey, 2013 về sit dụng nano bạc đề trừ bệnhđạo ôn hại lúa đã cho kết quả hết sức khả quan Với các hạt nano bạc khoảng 20 — 30

nm đã cho hiệu quả phong trừ bệnh đạo ôn cao trong cả hai điều kiện thi nghiệm invitro

và invivo Trong điều kiện phòng thí nghiệm, bốn nồng độ 25, 50, 100 và 200 ppm cho

thay sự ức chê đáng kê sự tăng trường của sợi nam và sô lượng bảo từ/ml.

Nghiên cứu khả năng ức chế của nano đồng + bạc (có kích thước 15 — 20 nm, vớicác nồng độ khác nhau 50, 100, 150, 200, 250 ppm) đến sự phát triển của tản namPyricularia oryzae gây bệnh đạo ôn lúa trong điều kiện invitro cho thấy: Đường kínhtản nắm Pyricularia oryzae giảm dan theo chiều tăng nồng độ nano đồng + bạc từ 0 ppmđến 250 ppm, hiệu lực ức chế sinh trưởng của nam cao nhất ở 200 và 250 ppm ở 5 ngàysau nuôi cấy lần lượt là 78,59% và 100% (Nguyễn Thị Thu Thủy và cs, 2017)

Theo nghiên cứu của Nguyễn Thị Thanh Hải và cs (2019), nano bạc được tổnghợp ở dạng keo theo phương pháp khử hóa học (có kích từ 20 — 40 nm, với các nồng độ

0, 50, 70, 100 ppm) đã cho thay hiệu qua ức chế sự phát triển của tan nấm Pyricularia

oryzae gây bệnh đạo ôn lúa trong điều kiện invitro: Kết quả cho thay ở các nồng độ

AgNPs khác nhau, khả năng sinh trưởng và phát triển của sợi nắm Pyricularia oryzae

là khác nhau Kích thước tản nắm giảm dần theo chiều tăng nồng độ AgNPs Hiệu lực

ức chế cao nhất ở nồng độ 70 và 100 ppm ở 5 ngày sau cấy lần lượt là 63,38% và 100%

(Nguôn: Nisar va ctv, 2019)

Hình 1.7 Sự tương tác giữa AgNPs với tế bao nam (1), AgNPs lam vỡ tế bao

thành nam (2)

1.4.2 Nano bạc silica (AgSiO2)

Một số nghiên cứu cho thay nano bạc có đường kính nhỏ hơn 20 nm có xu hướngtập hợp lại thành các cụm lớn hơn làm xấu đi hoạt tính kháng vi sinh vật cua chúng Đềgiải quyết vấn đề này, nhiều loại vật liệu như TiOa, SiOa, AlOs, zeolit, sợi than hoạt

tính, đã được sử dụng như một chất mang cho phép nano bạc được phân bố đồng đều

trên bề mặt của chất mang mà không kết tụ Các nano bạc được cố định trong chất nềnrắn nhằm cải thiện tính ôn định của các hạt nano bạc và giảm lượng bạc so với nano bạc

nguyên chất (Miola va ctv, 2014) Trong số đó, vật liệu nano bạc trên nền silica được

nghiên cứu sâu rộng và được kỳ vọng là ứng viên tiềm năng cho ứng dụng trong nôngnghiệp nhờ độ bên hóa học cao và diện tích bê mặt lớn cua silica.

Hơn nữa, đối với cây trồng, silica là nguồn bổ sung dinh dưỡng thiết yếu silicgiúp cứng cây, quang hợp tốt, tăng sức đề kháng cho cây và thúc đây sự phát triển của

các vi sinh vật có lợi như Bacillus megaterium, Bacillus brevis, Pseudomonas

fluorescens và Azotobacter vinelandii, dan đến làm giàu chất dinh dưỡng N, P, K trongđất (Karunakaran, 2013)

Một nghiên cứu của Nguyễn Thu Thủy (2017), cho thấy trong điều kiện invitro,

4 nồng độ thử nghiệm nano đồng — bạc/silica đều cho kha năng hạn chế sự hình thànhkhuẩn lạc của vi khuẩn Xanthomonas oryzae và hiệu lực ức chế tăng theo chiều tăng củanồng độ nano Kết quả chỉ ra rằng, ở nồng độ 70 và 100 ppm nano đồng - bạc/silica thểhiện sự ức chế mạnh mẽ đối với sự phát triển khuẩn lạc của vi khuẩn Xanthomonas

oryzae Hiệu lực ức chê sự phát triên của vi khuan Xanthomonas oryzae ở nông độ 30ppm đạt hơn 90%, các nồng độ còn lại đều đạt rất cao, hiệu lực tại các nồng độ.

Một nghiên cứu của Nguyễn Thu Thủy (2018), cho thấy trong điều kiện invitro,

4 nồng độ thử nghiệm nano đồng — bac/silica đều cho khả năng hạn chế sự hình thành

khuẩn lạc của vi khuân Xanthomnas oryzae và hiệu lực ức chế tăng theo chiều tăng củanồng độ nano Kết quả chỉ ra rang, ở nồng độ 70 và 100 ppm nano đồng - bac/silica théhiện sự ức chế mạnh mẽ đối với sự phát triển khuẩn lạc của vi khuan Xanthomonasoryzae Hiệu lực ức chế sự phát triển của vi khuan Xanthomonas oryzae ở nồng độ 30

ppm đạt hơn 90%, các nồng độ còn lại đều đạt rất cao, hiệu lực tại các nồng độ 50, 70

và 100 ppm là 100%.

Theo kết quả nghiên cứu của Bùi Thị Thu Thảo và cs (2020), hoạt tính khángnam của Ag/SiO› ở 4 nồng độ thử nghiệm đều có khả năng ức chế khả năng phát triểncủa nam Bipolaris oryzae gây bệnh đốm nâu trên lúa Kết quả cho thấy khi tăng nồng

độ của Ag/SiO> thì hiệu lực ức chế nam tăng lên Hiệu lực ức chế của Ag/SiO› đối với

nam B oryzae ở các mức nồng độ 4, 8, 16, 32 ppm lần lượt là 30,6; 34,3; 69,0 và 99,3%,cao hơn so với hiệu lực ức chế của nano bạc thông thường ở cùng mức nồng độ, tương

ứng là 18,1; 36,0; 54,1 và 80,4%.

Chương 2

NOI DUNG VA PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CUU

2 1 Nội dung nghiên cứu

Phân lập và định danh tác nhân gây bệnh đạo ôn trên lúa dựa vào đặc điểm hìnhthái bào tử.

Đánh giá tính kháng thuốc của tác nhân gây bệnh đạo ôn trên lúa với các hoạtchất thuốc điệt nắm

Đánh giá khả năng phòng trừ của một sé vật liệu dang nano đối với tác nhân gâybệnh đạo ôn trên lúa có tính kháng thuốc điệt nam

2.2 Thời gian và địa điểm nghiên cứu

2.2.1 Thời gian nghiên cứu

Đề tài được tiến hành từ tháng 08 năm 2023 đến tháng 02 năm 2024

2.2.2 Địa điểm nghiên cứu

Mau có triệu chứng đặc trưng của bệnh đạo ôn được thu tai tỉnh Long An và Đồng Tháp.Các mẫu nắm được phân lập từ 2022 được thu thập tại tỉnh Kiên Giang va An Giang bởi

Võ Chí Thông.

Các thí nghiệm được thực hiện tại phòng thí nghiệm Bệnh cây của Bộ môn Bảo

vệ Thực vật — khoa Nông học, Trường Dai học Nông Lâm thành phó Hồ Chí Minh.2.3 Vật liệu và dụng cụ thí nghiệm

2.3.1 Vật liệu nghiên cứu

Các mẫu lá có triệu chứng đặc trưng của bệnh đạo ôn được thu thập khi vết bệnhvừa mới xuất hiện và chưa qua xử lý bằng thuốc bảo vệ thực vật từ các cánh đồng tạitỉnh Long An và Đồng Tháp Tiến hành thu mẫu trong điều kiện thời tiết tốt

Bảng 2.1 Bảng danh sách mẫu nắm bệnh được thu thập và phân lập tại tỉnh An Giang

và Kiên Giang (Nguôn: Võ Chí Thông)

Mau Sia điểm thu mẫu Vi tri lay Thoi gian thunam mau mau (nim)

TS1 “ ễ A i ñ xã Vọng Thuê, huyện Thoại Sơn, tỉnh An Lá 2022

Ghi chi: Tén mẫu: Huyện lay mẫu (TS — Thoại Son, TB — Tịnh Biên, TT~ Tri Tôn, GT - Giang Thanh)

- số thứ tự vị trí khác nhau thu mẫu — 1, 2, 3, 4 (ki hiệu ruộng khác nhau trên cùng xã thu mẫu).

Hoạt chất trị nam bệnh đạo ôn (chlorothalonil 98%, tricyclazole 95%,azoxylstrobin 98%) được cung cấp bởi Công ty cổ phần bảo vệ thực vật Sài Gòn

Ag/SiO2: composit bạc-silica bổ sung chất bám dính (Ag/SiO2-TW);composit bac-silica sử dụng chitosan lam chat bao vé (Ag/S102-cts); composit bạc-silica sử dụng chất bảo vệ carboxymethyl cellulose (CMC) ; AgNPs: nano bạc sửdụng chat bảo vệ chitosan (cts), các vật liệu tông hợp theo phương pháp khử hóahọc và được cung cấp bởi nhóm nghiên cứu Green Nano Lab thuộc Trường Đại họcKhoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia TPHCM Kết quả phổ hấp thụ UV-Vis cuacác vật liệu nano trên ở vi trí khoảng 400 nm, là đỉnh plasmon bề mặt của nano bạc.Bên cạnh đó, qua phép đo kính hiển vi điện tử truyền qua, kích thước trung bìnhcủa của các hạt nano trên bề mặt silica và kích thước của nano bạc trong dung dich

dao động từ 6,5 đến 50 nm Từ những điều trên cho thấy các vật liệu sử dung dé

thử thuốc tồn tại ở kích thước nano

2.3.2 Môi trường nuôi cấy nắm

Sử dụng các loại môi trường WA, PDA dé phân lập nam và môi trường OMA dékích thích sự hình thành bào tử.

Môi trường WA: 20 g agar và 1000 mL nước cat

Môi trường PDA: 200 g khoai tây, 20 g agar, 20 g glucozo và 1000 mL nước cất.Môi trường OMA: 50 g bột mach, 20 g agar, 20 g glucozo và 1000 mL nước cất.2.3.3 Dụng cụ thí nghiệm

Dụng cụ thí nghiệm trong phòng: dia petri, pipette, lam, nước cất khử trùng, ống

đong, dao cay, côc đong Tat cả dụng cụ và môi trường đêu được vô trùng.

Thiết bị thí nghiệm trong phòng: Tủ cấy khử trùng (2AC2 - 6E8, Esco,Singapore), tủ say khử tring (180°C, MC40L, ALP, Japan), nồi hap khử trùng bang hơinước nóng (121°C) autoclave, cân điện tử, bếp điện tử, lò viba, kính hién vi (OlympusCX23, Japan).

2.4 Phương pháp nghiên cứu.

2.4.1 Phân lập và định danh tác nhân gây bệnh đạo ôn trên lúa dựa vào đặc điểmhình thái bào tử.

Phương pháp lấy mẫu

Mẫu bệnh được lấy từ ruộng lúa có vết bệnh đặc trưng của bệnh đạo ôn Tiến hànhthu mẫu vào buổi sáng sớm và ruộng lúa thu mẫu chưa qua xử lý thuốc hóa học Thu 20 mẫu,tỉnh Đồng Tháp thu mẫu ở 2 huyện, tỉnh Long An thu mẫu ở 3 huyện, mỗi huyện thu mẫu 1

xã, mỗi xã thu mẫu 4 địa điểm, mỗi địa điểm thu 1 mẫu bệnh

Lay mẫu lá có bề mặt khô ráo, nếu trong điều kiện mưa 4m, bề mặt lá ướt thì

có thé dùng giấy báo thấm khô trước khi kẹp mẫu giữa các lớp giấy báo hoặc các loạigiấy thấm nước khác Khi ép và làm khô mẫu lá, cần chú ý rải lá ra sao cho khôngtrùng lên nhau.

Áp dụng theo phương pháp quản lý mẫu bệnh thực vật của Roger và Dean (2005):

Sử dụng túi zip dé lay và giữ mẫu bệnh, gói mẫu cân thận dé tránh va đập và hơi nướcngưng tu, sử dụng bút lông dé viết thông tin mẫu

Phương pháp phân lập mẫu bệnh

Những mẫu nam gay bệnh đạo ôn thu được sẽ được phan lập dựa trên kỹ thuậtđơn bao tử Các bước được tiền hành theo trình tự sau:

Chọn lá có vết bệnh còn mới vì nam thường dang phát trién mạnh ở những mô lánày Mẫu bệnh được bảo quản ở điều kiện khô thoáng trong quá trình thu lấy mẫu và

vận chuyền Sau đó sử dụng kẹp, kéo đã được hấp khử trùng và say khô cắt một đoạn vết bệnh đặt trong miếng lam sạch trong dia petri có giấy lọc 4m, đậy nắp, dé đĩa ở nhiệt

độ khoảng 26 - 28°C khoảng 1 — 2 ngày giúp cho nắm bệnh phát trién

Dùng kim thủy tinh vô trùng chấm lên vết bệnh có bào tử nam đạo ôn rồi ria hìnhzig - zag lên môi trường WA Dua đĩa WA lên kính hién vi quan sát bào tử và nhẹ nhànglay ra bằng đầu kim thủy tinh (điều chỉnh kính và kim thủy tinh sao cho mỗi lần lấy chínhxác một bao tử) Sau đó đưa từ từ bào tử lay được sang đĩa PDA dùng bút lông đánh dau

vị trí đặt bào tử bên ngoài đĩa dé dé dang quan sát sau nay

Khi quan sát thấy sợi nắm bắt đầu mọc thì tiến hành cấy truyền sang môitrường PDA bang cách dùng que cấy vô trùng lấy một phan sợi nam mọc lan từ cáctan nam va một phân hệ sợi lan trực tiép từ vét bệnh cây sang các đĩa môi trườngPDA khác nhau, đậy nắp đĩa lại và giữ ở nhiệt độ khoảng 27°C Sau 2 ngày sợi nắmmọc thành tan nam, quan sát và chọn vùng đồng nhất về mặt hình thái, dùng que cây

vô trùng lay một mẫu thạch có sợi nắm non cấy vào ống nghiệm thạch nghiêng chứamôi trường PDA và đĩa petri chứa môi trường PDA có giấy lọc để giữ làm nguồndùng nghiên cứu.

Định danh nam Pyricularia oryzae Cav dựa vào đặc điểm hình thái bao tửKích hoạt sự hình thành bào tử nắm được thực hiện theo Nguyen và ctv(2008) Mẫu nắm phân lập được nuôi cấy trong môi trường bột yến mạch (OMA) ởnhiệt độ 25°C Mỗi đĩa cấy 5 điểm dé cho nam phát triển nhanh Nam sau khi ủ trênOMA, và phát triển đầy mặt thạch Tiến hành rửa sạch sợi nắm bằng nước cất tiệttrùng và bằng tăm bông 2 dau Sau đó đặt đĩa nam dưới đèn có ánh sáng tim(Blacklight, 20W, phát sóng ánh sáng (UV 330 - 400 nm) khoảng 72 giờ ở điềukiện phòng.

2.4.2 Đánh giá tính kháng thuốc của tác nhân gây bệnh đạo ôn trên lúa với các hoạtchất thuốc diệt nam.

Bồ trí thí nghiệm

Thí nghiệm được bồ trí 3 lần lặp lại, mỗi lần lặp lại 5 dia petri va theo kiéu hoan

toàn ngẫu nhiên 1 yếu tô theo từng loại thuốc (trong đó 20 mẫu nam phân lập tại mục2.4.1 và 10 mẫu nam được phân lập từ năm 2022 với 3 hoạt chất diệt nắm riêng biệt với

5 mức nồng độ khác nhau)

Dựa vào báo cáo Kunova va ctv (2013), nồng độ của 3 hoạt chất diét nam(Tricyclazole, Chlorothalonil, Azoxytrobin) được rà soát nồng độ từ 0,01ug/mL đến150ug/mL để xác định 5 mức nồng độ thích hợp

Phương pháp thực hiện:

Hòa tan 0,5g các hoạt chất thuốc diệt nam dạng bột với 100mL acetone 99,6%, sau

đó thêm nước cất dé dat thé tích 100mL Thu dung dịch stock đạt nồng độ 5000ug/mL

Thí nghiệm được thực hiện theo phương pháp đầu độc môi trường (Poisonedfood technique) (Grover và Moore, 1962) Môi trường PDA được hấp thử trùng ở nhiệt

độ 121°C trong 30 phút, dé nguội ở nhiệt độ 45 - 50°C sau đó đầu độc môi trường ở cácnồng độ thí nghiệm Đồ môi trường ra dia petri (8cm) với 15mL/đĩa Sau đó, cay nam cóđường kính 0,5 x 0,5 cm cùng tuổi đặt mặt sợi nam tiếp xúc với bề mặt môi trường ở trung

tâm dia và dat ở nhiệt độ 28 + 2°C.

Chỉ tiêu theo dõi

Đo đường kính tản nắm ở 3, 6, 9, 12 NSC cho đến khi tản nắm phát triển chạm

thành đĩa ở đĩa đối chứng thì ngừng quan sát, đường kính tan nam được tính bằng cách

đo hai đường chéo vuông góc và lấy giá trị trung bình

Đường kính trung bình tản nắm được tính theo công thức:

đ= (d1 + d2)/2Với d là kích thước tan nam, d1 và d2 là hai đường kính vuông góc của tan nắmĐánh giá hiệu lực phòng trừ của các loại thuốc hóa học được xác định theo côngthức Abbott:

DHH (%) = ((D — d)/D) *100

ĐHH (%) : Độ hữu hiệu của thuốc

D : Đường kính tan nam trên môi trường không xử lý thuốc

d : Đường kính tản nam trên môi trường có xử ly thuốc

Tính kháng thuốc diệt nam được xác định:

Các giá trị ức chế tăng trưởng sợi nắm (%) được vẽ dưới dạng probits so vớinồng độ thuốc diệt nam (ug/mL) và được phân tích bằng phương trình hồi quy tuyếntính với hàm Polynomials (Mecozzi và Conti, 2007) Phương trình được sử dụng đểđánh giá nồng độ hiệu qua 50% (ECso) đối với khả năng ức chế sự phát triển của sợinam của mỗi loại thuốc diệt nam đối với từng chủng phân lập

Các mẫu nắm phân lập được tách thành các nhóm kháng thuốc dựa trên về hệ

số kháng (RF) theo (Gouot, 1964) cho tất cả các loại thuốc diệt nấm đã được thửnghiệm Hệ số kháng (RF) được biểu thị bằng tỷ lệ của ECso va ECso thấp nhất trong

số các mẫu nắm Các mẫu nam phân lập được coi là nhạy cảm với thuốc diệt nắm nếu

RF < 3, kháng trung bình nếu RF = 3 — 20, kháng nếu RF = 20 — 100, va kháng caonếu RF > 100

2.4.3 Đánh giá khả năng phòng trừ của một số vật liệu dạng nano đối với tác nhângây bệnh đạo ôn trên lúa có tính kháng thuốc trừ nắm

Dựa trên kết quả của thí nghiệm ở mục 2.4.2, chọn các mẫu nắm gây bệnh đạo

ôn có tính kháng thuốc diệt nắm cao nhất đề tiến hành thí nghiệm tiếp theo

nồng độ phù hợp dựa trên báo cáo của Bùi Thị Thu Thảo và ctv (2020)

Các nồng độ các thuốc qua thí nghiệm khảo sát được xác định như sau: 15ppm,45ppm, 60ppm, 75ppm, 90ppm.

Phương pháp tiến hành:

Thí nghiệm được thực hiện theo phương pháp đầu độc môi trường (Poisonedfood technique) (Grover và Moore, 1962) trên môi trường PDA Chuẩn bị môi trườngPDA được hấp khử trùng trong nồi hấp (121°C), sau đó dé nhiệt độ giảm xuốngkhoàng 45 — 50°C rồi pha với thuốc theo nồng độ quy định san, lắc đều rồi d6 môi

trường ra dia petri (ghi kí hiệu loại thuốc, nghiệm thức, lần lặp lại và ngày tiến hành

thí nghiệm, mặt dưới dia petri kẻ hai đường vuông góc di qua tâm dia) Cay tan nam(đường kính 0,5 cm) vào trung tâm dia petri, mặt nam úp xuống mặt môi trườngPDA.

Chỉ tiêu theo dõi: Do đường kính tản nam ở 3, 6, 9, 12 NSC cho đến khi tản namphát triển chạm thành đĩa ở đĩa đối chứng thì ngừng quan sát, đường kính tản nam đượctính bằng cách đo hai đường chéo vuông góc và lấy giá trị trung bình

Đường kính trung bình tản nắm được tính theo công thức:

đ= (d1 + d2)/2Với d là kích thước tan nam, d1 và d2 là hai đường kính vuông góc của tan namĐánh giá hiệu lực phòng trừ của các vật liệu dạng nano được xác định theo công thức Abbott (1925)

DHH (%) = ((D - d)/D) *100

DHH (%) : Độ hữu hiệu của thuốc

D : Đường kính tản nắm trên môi trường không xử lý thuốc

d : Đường kính tan nam trên môi trường có xử lý thuốc

2.4.4 Quan sát và đánh giá chỉ tiết ảnh hưởng của các vật liệu nano lên tế bào sợi

k Š = À z 4 > k re ‘ : 3

nam và sự nảy mam của bào tử nam đạo ôn Pyricularia oryzae Cav.

Qua két quả ở thí nghiệm với các vật liệu nano, chọn mau nam có sức sông cao

nhât đê thí nghiệm tại nông độ phù hợp (nông độ cận tử trong các nghiệm thức của loại

thuốc tốt nhất được sử dụng làm nồng độ chung) để tiến hành thí nghiệm sự nảy mầm

của bao tử trên lam kính lõm, tiến hành kích bao tử sau 15 ngày thu được lượng dich

bao tử (xấp xỉ 4000 bào tử/mL) Nhỏ 10 pL lên các nghiệm thức lam kính lõm chứa

nồng độ 60 ppm mỗi vật liệu nano, mỗi nghiệm thức có 3 lần lặp lại, mỗi lần lặp lại 1

lam kính lõm.

Chỉ tiêu theo đõi: Quan sát bào tử và thu thập số liệu tại thời điểm lam kính đốichứng nước đã nảy mam 100% (sau 24 gid), số liệu nảy mầm của các nghiệm thức đượctính theo số bào tử đã nảy mầm sau 24 giờ của thời điểm ban đầu các nghiệm thức lamkính lõm đó.

2.4.5 Phương pháp xử lý số liệu

Số liệu được tổng hợp bằng phần mềm Excel 2010 và được xử lý thống kê bằngphần mềm SAS 9.1, phân hạng theo kiểu ducan ở mức ý nghĩa alpha 0.01

Chương 3

KET QUA VÀ THẢO LUẬN

3.1 Kết quả phân lập, mô tả hình thái và màu sắc của 30 mẫu nắm phân lập trênmôi trường PDA ở 12 ngày sau cấy

Bảng 3.1 Bảng danh sách mẫu nắm bệnh được thu thập và phân lập tại tỉnh Long An vàĐồng Tháp

Mẫu Tọa độthu x- : Mau Thờigian

HỒ Bi "mã Địa điềm thu mau bênh thu mẫu

: (nam) BLI

BL2 10°37'22.8"N xã Phước Lợi, huyện Bến Lức, Lá 2023BL3 106°32'14.3"E tinh Long An BL4

TTHI

TTH2 10°36'54.1"N xa Nhi Thanh, huyén Thu LA 2023 TTH3 106°25'46.1"E Thừa, tinh Long An TTH4

TATI

TAT2 10°32'42.9"N xa Tan Thanh, huyén Tan LA 2023

TAT3 105°54'18.9"E Thanh, tinh Long An

TAT4

TMI

TM2 10°38'56.5"N xã Hưng Thanh, huyện Tháp Lá 2023 TM3 105°46'38.0"E Mười, tỉnh Dong Tháp ` TM4

CLI

CL2 10°39'24.4"N xa Phuong Thinh, huyén Cao LA 2023 CL3 105°40'24.6"E Lanh, tinh Dong Thap

CL4

Ghi chú: Tên mẫu: Huyện lây mẫu (BL — Bến Lite, TTH — Thủ Thừa, TAT — Tân Thanh, CL- Cao Lãnh,

TM-Tháp Mười) - số thứ tự vị trí khác nhau trên huyện thu mau — 1, 2, 3, 4(ki hiệu 4 ruộng khác nhan

trên cùng xã thu máu).

Hình 3.1 Hình thái, màu sắc tan nắm 20 mẫu nam phân lập trên môi trường PDA

ở 12NSC.

Hình 3.2 Hình thái, màu sắc tản nắm 10 mẫu nắm đạo ôn trên môi trường PDA ở

BLI Soi nam mọc trên bề mặt thạch, tản nam mịn có màu xám nâu,

sắc tố melanin sản sinh đều màu từ trung tâm đến ngoài đĩaSoi nam mọc nồi trên bê mặt thạch, xốp và phát trién manh mé xã PhướcBL2 ở ngoai ria tản nam Sắc tố đen phát triển kém và chỉ tồn tại ở Lợi, huyện

một điểm nhỏ tại trung tâm tan nam Bến Lực,