Báo cáo thí nghiệm

Do khi thủy phân saccarozo bằng acid tạo thành Glucose và Fructose đều có tính khử nên phản ứng được với thuốc thử - _ Dung dịch AgNO; 1% : 100g dung dich AgNO; 1% thi can lay 1g AgNO3;c

BO GIAO DUC VA DAO TAO

TRUONG DAI HQC YERSIN DA LAT KHOA DUOC - DIEU DUONG

Giáo viên hướng dẫn: TS.Trịnh Thanh Kiều

Sinh viên thực hiện:

Da Lạt, ngày 24 tháng 02 năm 20253

1 Thí nghiệm phản ứng Fehling 0 221212212211 221 1211151111221 1 1821115811112 821 112 xe 3

IL Thí nghiệm phản ứng SeliwanofÏ L1 012111211121 11111211101 1111115111118 KH kkg 4

IV _ Thí nghiệm phản ứng trâng ĐƯƠNĐ 5 c1 11211211121 1211 1111111111511 1188151211 xe 5

VỊ _ Thí nghiệm phản ứng thủy phân tỉnh bột - 2 2 2211221222122 12512552812 1222 s2 7

BÀI 2: ACID AMINE VÀ PROTEIN 22-csvese©rrxeererxsertrrssrtrrssrsrrseosrrsrrree 8

IL Thi nghiém phan tng ninhydrin xác định acid - amine ee eee enter 8

II Thinghiém phan tng Xanthoprotein voi dung dich protein eee eee 9

IV _ Thi nghiém phan tng Xanthoprotein voi dung dich gelatin 1% .- 10

V Thí nghiệm phan ứng Adamkiewicz dé tìm trytophan 2 22s czz2z22z H

VỊ _ Thí nghiệm phản ung tao chi sulfide tim acid amine có chứa lưu huynh 12

VIL Khảo sát phản ứng kết tủa của protein phản ứng kết tủa không thuận nghịch ee 13 VIII Thi nghiém phan tng két tủa thuận nghịch kết tủa bang phuong phap mudi két 16

IX Thí nghiệm định tính amino acid bằng phương pháp sắc ký giấy 17

X Thí nghiệm định lượng N tổng bằng phương pháp Kjedahl - 2s sccse: 19

1 Thi nghiém Vitamin A (Retinol) phan ứng với FeSÖ c2 cà 20

IL Thí nghiệm Vitamin B6 (Pyridoxin) phản ứng với FeCÌ: 552252552 21

IH Thinghiém Vitamin C (Acid ascobic) phản ứng với xanh metylen 22

IV Thí nghiệm Vitamin C (Acid ascobic) phản ứng với 1od - -‹- sec ccccssssss 22

V Thí nghiệm Vitamin C (Acid ascobie) bằng phương pháp chuân độ 23

L Thí nghiệm chiết xuất lecithin từ lòng đỏ trứng gả -55 5S 222212 xe 24

IL Nhũ tương hóa lecithin c0 2012211211221 151 112111511111 11111021 1011181101111 11 1118 x re 24

V Thi nghiém xac dinh chi s6 x phong ccc csccssessesscseseseeseeseesesseeecenseesenes 27

BAL 6: ENZYME sssssssssscssesecssessesnessesnesscenssscensssssnsssssnsessensessesnsssesnsessensessenscensesenessnessnes 28

1 Thi nghiém anh hong cua nhiét dé dén hoat dong cla enzyme ccc: 28

IL Thí nghiệm tính đặc hiệu của enzyme - 0 2021121121 1121 121115323111 211 1112 te 29

II Thí nghiệm ảnh hưởng của chất hoạt hóa và chất ức chế lên hoạt động của

IV Ảnh hưởng của pH lên hoạt động của enzyme - c2 2 2 2221112211125 x xe 31

BAI 1: TINH CHAT HOA HOC GLUCID

I Thí nghiệm phản ứng Fehling

1 Nguyên tắc:

- _ Phản ứng Fehling dùng để xác định các đường khử như lactose, maltose, glucose,

fructose, pentose Trong môi trường kiềm mạnh, các monosaccharide ở dạng endiol

không bền đễ dàng khử các kim loại nặng như Cu2+, As+, Hg2+ Các nối đôi bị cắt

đứt tạo ra những hỗn hợp đường — acid

- _ Phản ứng Fehling được ứng dụng trong hóa sinh lâm sàng đề kiếm tra nhanh lượng đường có trong nước tiêu cảu bệnh nhân mắc bệnh đái tháo đường

2 Cách pha hóa chất

- Dung dich Fehling:

¢ Dung dich A: 40g CuSO,.5H,O ~ IL nude cat

© - Dung dịch B: 20g C,H;O¿.KNa,4H;O + 150g NaOH ~ 1L nước cất

=> V (dung dich A : dung dich B=1: 1)

- Dung dich Lacto 1%

- Dung dich Saccarozo 1%

3 Cách tiến hành

- Pha dung dich Fehling ( dung dịch A : dung dịch B = 1 : 1)

- _ Chuẩn bị 2 ống nghiệm

e Óng 1: Iml dung dịch Fehling, 5 giọt lacto 1%

® ng 2: Iml dung dịch Fehling, 5 giọt saccarozo 1%

- _ Lắc đều, đun sôi cách thủy 2 phút

4 Kết quả, hiện tượng - giải thích

-_ Khi trộn dung dịch Fehling A và Fehling B ta thấy dung dịch chuyển sang mảu xanh

dương đậm Vì khi trộn 2 dung dịch Fehling A và Fehling B với thê tích bằng nhau,

natri kali tartrate sé hòa tan tủa Cu(OH); do CuSO; trong môi trường kiềm sinh ra, tao

phức chất Cu?” alcolate mảu xanh dương đậm Phức chất này cung cấp Cu”' cho phản

ứng oxy hóa - khử tiếp theo

cCuso sH_O + 2maœH + KirmưacC tr? C©, 401C

Fehline chỉ xảy ra khi có sự tồn tại của

aldehid hoặc ceton trong vật liệu cần kiểm

tra Trong khi đó, saccharose là một loại

disaccharide và không gồm aldehid hoặc

ceton, do đó sẽ không có phản ứng với

dung dich Fehling

Hinh 1: Hinh anh thi nghiém phan wng fehling

IL Thi nghiém phan wng Seliwanoff

1 Nguyên tắc:

Khi đun nóng với acid vô cơ, fructose và những cetohexose khác tạo thành hydroxy methyl furfural Các chất này tác dụng với resorcinol cho phức màu đó Các aldose

cũng có thể tạo thành hydroxy methyl furfural khi đung nóng với acid, nhưng phản

ứng xảy ra rất chậm, nên phản ứng Seliwanoff có tính đặc hiệu cho cetose

Phản ứng dùng đề nhận biết đường aldose và đường cetose

2 Cách pha hóa chất

Dung dich glucose 1%

Dung dich frucose 1%

Thuốc thứ Resoisine: 60ml dụng dich HCI dam đặc + 0,22 thuộc thử

3 Cách tiến hành

Chuẩn bị 2 ống nghiệm

° Ong 1: 1ml dung dịch Saliwanoff, 5 giot fructose 1%

® Ong 2: 1ml dung dich Saliwanoff, 5 giot glucose 1%

Lắc đều, đun sôi cách thủy 10 phút

4 Kết quả, hiện tượng - giải thích

CH;0H ™" CH.OH CH;0H "CHO WAAAY T ]

Ong 1: Xuất hiện màu đỏ Dưới tác

dụng của acid HCI đậm đặc và nhiệt

độ, các cetohexose và cetopentose tạo

thành hydroxy methyl furfural và

furfural Các chất này ngưng tụ với

resorcinol tạo thành phức chất có màu

đỏ

Phương trình hóa học

- Ông 2: Không xảy ra hiện tượng

Các aldose cũng có thể tạo thành

hydroxy methyl furfural khi đun nóng

với acid nhưng phản ứng xảy ra rất chậm

Dung dich NaOH 15%

Dung dich saccarozo 1%

- Dung dich Fehling:

© Dung dich A: 40g CuSO 5H;O + 1L nước cất

¢ Dung dich B: 20g C,H,O, KNa,4H,0 + 150g NaOH ~ 1L nước cất

> V (dung dich A: dung dich B=1: 1)

- Dung dich Selliwanoff: Tién hanh héa tan 1g resorcinol (C7HsO2) trong 300ml HCl đậm đặc sau đó pha loãng thành 1L (HCI xấp xỉ 4M)

3 Cách tiến hành

- Pha dung dich thuy phan

* Buée 1: Cho 2 giot Hcl dam dac va 1ml dung dich saccarozo 1% vao ống nghiệm đun cách thủy 85 độ C trong vòng 5 phút

© Bước2: Tiếp theo đề nguội dung dịch rồi cho 2 giọt NaOH 15% > dụng dịch thủy phân

- _ Thuốc thử trên các ống nghiệm

Bước 1: Chuẩn bị 2 ống nghiệm sạch

e©_ Óng 1: Iml dung dịch Fehling +

5 giot dung dịch thủy phan

® Ong 2: 1ml dung dich Selliwanoff

+5 giot dung dich thuy phan

Bước 2: Ðun nóng 2 ống nghiệm trên bếp

cách thủy và quan sát

4 Kết quả, hiện tượng- giải thích

- Ong 1: Xuất hiện kết tủa màu đỏ sạch Do

khi thủy phân saccarozo bằng acid tạo

thành Glucose và Fructose đều có tính

khử nên phản ứng được với thuốc thử

- _ Dung dịch AgNO; 1% : 100g dung dich AgNO; 1% thi can lay 1g AgNO3;cho vao céc

có dung tích 100ml, đong lấy 99ml nước cất, đổ vào cốc khuấy tan

- Dung dich glucose 1%: 100g dung dich glucose 1% thi cân lấy 1ø ølueose cho vào cốc có dung tích 100ml, đong lấy 99ml nước cất, đổ vào cốc khuấy tan

- NH; dam dac

2 Cách tiến hành

- _ Bước 1: Chuân bị ống nghiệm sạch cho vào ống nghiệm Iml dung dịch AgNO3 1%

- — Bước 2: Thêm từ từ vào ống nghiệm dung dịch NH3 đậm đặc đến khi thấy kết tủa tan

- _ Bước 3: Cho 3ml dung dịch glueose 1% vào ống nghiệm

- _ Bước 4: Đem ông nghiệm đun nóng cho đến khi kết tủa xuất hiện

3 Két qua, hién twong — giai thích:

Hiện tượng : đầu tiên tạo tủa nâu đen Sau đĩ đem ống

nghiệm đun nĩng để nguội thấy xuất hiện kết tua bac Ag

bám vảo thành ống nghiệm

Giải thích : Ở bước 2, đầu tiên tạo tủa nâu đen Ag20

sau đĩ tủa tan hịa toan tao dugc phức tan

[As(NH;);]OH Sau đĩ đem ống nghiệm đun nĩng để

nguội thây xuất hiện kết tủa bạc Aø bám vào thành ống

nghiệm Thí nghiệm chứng minh được glucozơ cĩ —

CHO

Phương trình hĩa học

AgNO; + NH.OH => AgOH + NH,NO;

AgOH + NH,OH => Ag(NH3),OH +2H;O

RCHO + Ag(NH;)OH => RCOOH + Ag + NH; + H,0

dé bao quan hé tinh bột lâu hơn

Thuốc thử lugol: Cho vào cốc cĩ mỏ đun sơi 100ml nước cất đề nguội Hịa tan 2g

Kali iodid + 1ø iod trong 3ml nước khuấy tan, sau đĩ thêm nước vừa đủ 100ml

2 Cách tiến hành

3 Kết quả, hiện tượng - giải thích:

Bước I: Cho vào ống nghiệm 2ml dung

dich tinh b6t 1% + 3 giot thuốc thử lugol

Bước 2: Quan sat mau dung dich , dem

dun nong , quan sát màu, để nguội, quan

sat mau

Hiện tượng: tạo ra sản phẩm cĩ màu xanh

đen Khi tác dụng nhiệt thì mắt màu, lành

lạnh thì lại cĩ màu trở lại

Giải thích: Màu xanh lam xuất hiện khi

thuốc thử tiếp xúc với tinh bột vì thành

phần chính của Logol là I-ot và Kali I- ốt

(K]) I-ot tác dụng với tỉnh bột ở điều kiện

thường vả tạo ra sản phâm cĩ màu xanh

đen Khi tác dụng nhiệt thì mắt màu, lành

lạnh thì lại cĩ màu trở lại

Hình 5: Hình ánh thí nghiệm tác dụng I; tinh bột

VỊ, Thí nghiệm phản ứng thủy phân tinh bot

Dung dich NaOH

Thuốc thir Liugol: Cho vao céc có mỏ đun sôi 100ml nước cất đề nguội Hòa tan 2ø Kali iodid + 1ø iod trong 3ml nước khuấy tan, sau đó thêm nước vừa đủ 100ml

ba, thứ tư, thứ năm

3 Kết quả, hiện tượng - giải thích:

Hiện tượng:

© Ông nghiệm I, 2, 3, 4 có màu tím

© Ông nghiệm 5 có màu vàng nhạt

Giải thích:

Ban đầu ở ống nghiệm 1,2,3,4 có màu tím do ban đầu HCI chưa thủy phân tỉnh bột nên khi cho lốt vào, dung dịch có màu đen tím, chính là tinh bột chưa thủy phân tác dụng với acid HCI

Ở ống nghiệm 5 có màu vàng nhạt do sau thời gian 10 phút, 17 phút, 24 phút, 31

phút và 38 phút lượng hỗ tính bột trong ông nghiệm đã bị HCI thủy phân hết tao thành các dextrin Thời p1an càng đài , lượng dextrin bị HCI thủy phân thành các dextrin với phân tử lượng cảng nhỏ và cuối cùng là glueose Mà các đextrin với phân

tử lượng nhỏ và ølucose không cho

phản ứng tạo màu với lốt Vì vậy, ống 5

có màu vàng nhạt là do lượng dextrin

chưa bị phân hủy thành phân tử thấp

tác dụng với lốt giảm dân

Kết luận: Thời gian phản ứng càng lâu

thì lượng tinh bột bị acid phân hủy

càng nhiều và cảng tạo thành các

dextrin voi phân tử lượng cảng nhỏ và

cho cuối cùng là glucose

Hình 6: Hình ảnh thí nghiệm thủy phân tỉnh bột

BÀI 2: ACID AMINE VÀ PROTEIN

Ï Thí nghiệm phản ứng Biure

1 Nguyên tắc

- Phản ứng Biure được dùng để xác định protein trong dung dịch Đây là phản ứng đặc

trưng của liên kết peptide, tất cả đều có chứa từ hai liên kết peptide trở lên đều có phân tử nảy Trong môi trường kiềm mạnh, liên kết peptide trong phân tử protein

phản ứng với Cu2+ tạo thành phức chất màu xanh tím,tím, tím đỏ Màu của dung dịch tùy thuộc vào lượng Cu2+ và số lượng liên kết peptide tham gia phản ứng

2 Cách pha hóa chất

- - Thuốc thử:

¢ Dung dich protein trimg( dung dich Albumine)

e Dung dich NaOH 10%

© Dung dich déng sulfate 1%

3 Cách tiến hành

- Bước 1: Chuẩn bị l ống nghiệm, cho vào ống nghiệm 5 giọt protein, 3 giọt dung dich

NaOH 10% va | giot dung dich déng sulfate

- _ Bước 2: Lắc đều.( Chú ý không do thừa dung dịch đồng sulfat)

4 Kết luận, giải thích và hiện tượng

- _ Hiện tượng: Sau khi lắc đều ta thấy dung dịch có màu xanh tím.(Nếu cho dư dung dịch đồng sulft thì màu xanh của đồng hydroxyd sẽ cho lắp mau tím của phức hop buire - protein

- _ Giải thích: Trong môi trường kiềm, các hợp chất có

chứa từ hai liên kêt peptide trở lên có thề phản ứng với

CuSO4 tạo thành phức chât màu xanh tím, tím, tím đỏ

8

2 Cach pha dung dich

- Thudc thử:

¢ Dung dich protein tring

¢ Dung dich Ninhydrin 0.1% trong nước

3 Cach tién hanh

- Bước 1: Cho vảo ống nghiệm 5 giọt dung dịch protein va 5 giot Ninhydrin 0.1%

- Bước 2: ĐÐun sôi từ 1-2 phút Quan sát

4 Kết quả, hiện tượng và giải thích

- _ Sau khi đun sôi dung dịch trong ống sẽ có màu tím hay xanh tím, để lâu biến thành

màu xanh

- _ Giải thích: Ninhydrin là chất oxy hóa nên

có thể tạo nên phản ứng khử carboxyl öy hóa của acid amin với H2O, để cuối cùng cho ra CO2, NH3 và aldehyde ngắn đi một carbon so với acide amine géc va Ninhysrin bị khử Sau đó Nynhydrin bị khử lại tác dụng với NH3 vừa tạo được

HạN `r°®ee" HạN._ _„COOH HạN._ „COOH

Tyrosin Nitrotyrosin Muối của nitrotyrosin

(màu vàng) cé cau tao quinoid (mau cam)

2 Cach pha héa chat

- Acid nitric dam dac

- Dung dich NaOH 10%

- Dung dich protein tring

3 Cach tién hanh

- Buse 1: Cho vao éng nghiém sach 10 giot

protein, 5 giot acid nitric dam dac va dun s6i

nhe

- _ Bước 2: Sau đó đề nguội dung dịch phản ứng,

nhỏ thêm từng giọt NaOH 10% ( có thể thay

NaOH bằng ammoniac dam dac)

4 Kết quả, hiện tượng giải thích

- _ Lúc đầu do tác dụng của acid, protein bị tủa von

„ khi đun sôi vừa có mùa vàng vừa tủa

- Khi đun dung dịch có màu vàng của dẫn xuất

nitro Khi thêm kiểm, sản phẩm này chuyên

thành muối có màu vàng đa cam đặc trưng

- _ Kết luận Phản ứng Xanto protein là phản ứng

đặc trưng đề phát hiện acid amin nhân thơm

Hình 9 thí nghiệm phản ứng Xanthoprotein dung dịch protein

IV Thi ngiệm phản ứng Xanthoprotein với dung

dich gelatin 1%

1 Cách pha hóa chất

- Acid nitric dam dac

- Dung dich NaOH 10%

- Dung dich gelatin 1%

2 Cach tién hanh

- Buse 1: Cho vao éng nghiém sach 10 giot

dung dich gelatin 1% , 5 giot acid nitric dam

đặc và đun sôi nhẹ

- _ Bước 2: Sau đó đề nguội dung dịch phản

ứng, nhỏ thêm từng giọt NaOH 10% ( có thé

thay NaOH bằng ammoniac dam dac)

10

3 Kết quả, hiện tượng và giải thích

Ong nghiệm này dung dịch có màu vàng nhạt

Khi cho HNO3 vào protein trứng, cac acid amin nhân thơm có trong protein trứng sẽ

bi nitro héa nhân thơm tạo dân xuat nitro có màu vàng

Hình 10 thí nghiệm phản ứng Xanthoprotein dung dịch gelatin 1%

V Thi nghiém phan tng Adamkiewicz dé tim trytophan

1 Nguyên tắc

Phan tng Adamkiewicz là phản ứng dùng để xác định sự hiện diện của trytophan Trong phản ứng này trytophan có trong protein kết hợp với glyoxylic ( có trong acetic đậm đặc) hoặc hydroxymethylfrfuran (hình thành do sự khử nước fructose) cho sản phâm co mau do tim Acid sulfuric dam dac dong vai tro khử nước Độ đậm của màu phụ thuộc vào luong trytophan Gelatin khéng chira trytophan

2 Cach pha dung dich

dich protein tring

Dung dich gelatin 1%

Acid acetic dam dac

Acid sulfuric dam dac

Dung dich fructose 10%

3 Cách tiến hành

Cho vào 2 ống nghiệm

Ong 1: 5 giot protein trứng Ông 2: 5 giot gelatin 1%

Thêm vào mỗi ống 5 giọt acid acetic dam đặc, đun nhẹ, rồi nghiêng ống nghiệm nhỏ từ

từ dọc theo thành ống 1 thể tích tương tự acid sulfuric đậm đặc, đung cách thủy Một vòng đỏ tím xuất heienj ở vạch ngăn cách giữa hai chất lỏng trong ống 1, không cso phản ứng ở ông thứ 2

Cho 2 ống nghiệm khác

Ống 3: 5 giọt protein trứng Ông 4: 5 giọt gelatin 1%

Thêm vào mỗi ống 3 giọt fructose 10% khuấy đều, rồi nghiêng ống nghiệm nhỏ từ từ đọc theo thành ống 3 piọt acid sulfurie đậm đặc, đun cách thủy Một vòng đỏ tím xuất hiện ở vạch ngăn cách giữa hai chất lỏng trong ống 3, không có phản ứng ở ống thứ 4

4 Kết quả, hiện tượng và giải thích

- _ Ông 1: Một vòng đỏ tím xuất hiện ở vạch ngăn cách giữa hai chất lỏng Try tophan

có mặt trong lòng trăng trứng sẽ tác dụng với acid ølyoxylix( có mặt trong acid axetic đậm đặc) tạo sản phẩm ngưng kết làm thành một vòng tím đỏ giữa 2 dung dịch lỏng

Trong phản ứng này H25O4 có vai trò khử nước

- _ Ông 2: Không có phản ứng

11

- Ong 3: Mét vong do tim xuat hiện ở vạch ngăn cách giữa hai chất lỏng Trytophan có mặt trong lòng trắng trứng sẽ tác dụng với oxymetyl furfrol ( có trong fructose)

- Ong 4: Không có hiện tượng

- _ Khi đun nóng dung dịch protein có chứa cystein hay cystin với kiềm và muối chi, chất lỏng sẽ bị nhuộm đen hay xám đo tạo thành tủa chỉ sulfid

dich mau xam hay den)

4 Kết quả, hiện tượng và giải thích

- Khi đun nóng dung dịch protein có chứa cystein

hay cystin với kiểm và muối

chỉ, chất lóng sẽ bị nhuộm đen hay xâm do tạo

thành tủa chỉ sulfid

- _ Trong dung dịch protein trứng có chứa các acid

amin có S ( xystein, xystin) Khi đun với kiềm

dư và muối chỉ sẽ tạo kết tủa sunfuia chì lơ lửng

Na;§ + HOOC-CH(NH,)-CH;-OH +H,O

® Na;S + Na;PbO; + HạO => PbS + 4NaOH

Hình 12 thí nghiệm phản ứng tạo chì sulfide tìm acid amine có chứa lưu huỳnh

VII Khao sat phan ứng kết tủa của protein phản ứng kết tủa không thuận nghịch

- Buée 1: Dé 1 ống nghiệm chứa sẵn 0.5 mL dung dich protein nghiéng 45°

- _ Bước 2: Dùng ống hút cho từ từ vào thành éng (khéng lac 6ng) 0.5 mL HNO; dam đặc Một vòng tủa trắng tạo thành ở mặt ngăn cách giữa 2 chất lỏng Lắc nhẹ ống nghiệm, thêm 1 lượng thừa HNO;, tủa protein không tan

- _ Bước 3: Dùng 1 ống nghiệm khác với cách làm như trên nhưng thay acid HNO3 bằng H2SOA4 Khi thêm lượng thừa acid protein sẽ tan ra

13

4 Kết quả, hiện tượng và giải thích

- _ Ông khi thêm lượng thừa HNO3, tủa

protein không tan

băng acid mạnh (acid HNO; )

- Ong thay HNO3 bằng H2SO4

- _ Hiện tượng: Protein tan ra

- _ Giải thích: Tủa protein sẽ hòa tan trở lại khi cho thừa acid sulfuric dam đặc

Hình 14 thí nghiệm kết tủa

băng acid mạnh (acid H;SO.)

® Acid hữu cơ:

1 Nguyên tắc:

- - Phần lớn các protein khi tác dụng với acid hữu cơ mạnh ở nhiệt độ thường sé bi kết tủa, nhất là đối với acid tricloacetic va sulfosalicylic Phan img nay duoc ap dung rộng rãi: acid tricloacetic được su dụng, để loại protein ra khỏi mẫu máu trước khi tiến hành định lượng các thành phần khác, acid sulfosalicylie được sử dung dé tim va

định lượng protein trong nước tiêu

2 Cách pha thuốc thử

- _ Dung dịch protem trứng14

- Dung dich acid sulfosalicylic 20%

- Dung dich acid tricloacetic 10%

14

3 Tién hanh

- Buée 1: Cho vao 2 6ng nghiệm: mỗi ống 0.5 mL dung dịch protein

- Bước 2: Thêm vào ống thir nhat 0.5 mL dung dich acid sulfosalicylic 20%

- Bước 3: Thêm vào ống thir hai 0.5 mL dung dich acid tricloacetic 10% Quan sát sự hinh thanh tua

4 Kết quả, hiện tượng và giải thích

Ông 1 xuất hiện kết tủa nhưng thời Ong 2 chứ TCA xuất hiện kết tủa đục

gian nhanh hon và độ đục nhiêu hơn

Hình 15 thí nghiệm kết tủa bằng Hình 16 thí nghiệm kết tủa bằng

acid mạnh (acid sulfosalicylic acid mạnh (acid tricloacetic 10%)

20%)

-_ Giải thích:

-_ Vì axit sunfosalisilic có thé kết tia protein polypeptide và axit amin còn TCA chỉ có

khả năng kết tủa protein

- Viaxit sunfosasilic la axit manh hon TCA nên sẽ có thời p1an nhanh hơn và độ đục

nhiều hơn

- Luu y: Sau khi tác dụng với acid hữu cơ, protein đã kết tủa, biến tính và không thê

trở lại trạng thái ban dau vì acid hữu cơ là tác nhân gây kết tủa không thuận nghích

Tủa bằng kim loại nặng

3 Cách tiến hành

Cho vào ống nghiệm 0.5 mL dung dịch protein, thêm 0.2 mL dung dịch CuSO4 1%

Quan sát hiện tượng

4 Kết quả, hiện tượng và giải thích

Giải thích:

Các muối kim loại nặng khi tác dụng với protein sẽ tạo thành kết tủa do các ion kim loại nặng làm lộ các đầu kị nước của protein ra ngoai va bién tinh protein sau sắc, phá vỡ cấu trúc bậc 2, 3 của protein

VIII Thí nghiệm phản ứng kết tủa thuận nghịch kết tủa bằng phương pháp muối

kết

1 Nguyên tắc:

Protein trong dung dich bi kết tủa ở nhiệt độ thường bởi các muối tan trong nước đặc biét la amoni sulfate, magnesi sulfate, natri sulfate va cac phosphate kiềm Hiện tượng này xảy ra do các muỗi này khử nước xung quanh phân tử protein vì vậy làm giảm sự hòa tan cảu protein và làm protein kết tủa

Sự kết tủa này phụ thuộc vào nhiều yếu tố như tính chất và nỗng độ các loại muỗi, tính chất protein hay pH của dung dịch Ví dụ Globulin tủa ở nồng d6 amoni sulfate

bán bão hòa còn albumine tủa ở nồng dộ amoni sulfate bão hoa do globulin có trọng

lượng phân tử lớn hơn albumin Khả năng tủa của NaCl yếu hơn amoni sulfate vì tác dụng khử nước yếu hơn Do đó, globulin tủa ở nồng độ NaCl bão hoa con albumin thì không

Sự kết tủa bằng muối là quá trình thuận nghịch, khi giảm nồng độ muối bằng cách

pha loãng với nước hay thâm tách, protein có thê hòa tan trở lại

Dung dich acid acetic 1%

Dung dich NaOH 10%

Dung dich déng sulfate 1%

- Buée 1: Cho vao éng nghiém 20 giọt protein trứng + 20 giọt amonisulfate bão hòa,

ta có dung dịch amoni sulfate bán bão hòa Glubulin sẽ tủa

- Bước 2: Sau 5 phút lọc bỏ tủa plobulin, trong dịch lọc có chứa albumin Thêm vào dịch lọc bột amonisulfate đến bão hòa

- Bước 3: đun nhẹ

Tủa bằng dung môi hữu cơ

-_ Bước 1; 2 ống nghiệm méi éng Iml dd albumin 1% (protein trứng), làm

lạnh trong nước đá

- _ Bước 2: Ông thứ 1: 2ml ethanol lạnh, ống thứ hai 2ml acetone lạnh

- _ Bước 3: Cho vài giọt NaCl bão hòa vào ống 1,2

- _ Bước 4: Sau khi kết tủa lắng hết xuống đáy ông nghiệm, gạn bỏ dung môi Thêm

nước vào các ống nghiệm, lắc đều

* Lau ý :Tiến hành song song với thí nghiệm ở nhiệt độ phòng

4 Kết quả, hiện tượng — giải thích

- Tua bang NaCl :phan tg 4m tinh , không có protein trong dich loc

- Giải thích:

- _ Tủa của NaCl yếu hơn vì tác

dụng khử nước yếu hơn, giảm

nồng độ muối bằng cách pha

loãng với nước hay thấm tách, protein có thê hoa tan trở lại

- Tủa bằng amonisulfte :thì xuất

hiện tủa albumine sẽ nổi lên trên

vi ty trong chất lỏng cao

- Giải thích:

- Protein trong dung dich bi kết tủa

ở nhiệt độ thường bởi các muối amomIsulfate tan trong nước Xảy

ra do các muối này khử nước

xung quanh phân tử protein vì vậy

làm giảm sự hòa tan của protein và làm protein kết tủa

17