đề tài ''''thiết kế vector biểu hiện gen mã hóa legumain”''''

ĐỀ TÀI “Thiết kế vector biểu hiện gen mã hóa legumain” Giáo viên hướng dẫn: PGS.TS LÊ QUANG HUẤN Sinh viên thực hiện : Vũ Văn Trường Lớp : KSCNSH 07-05 Viện Đại học Mở Hà Nội Khoa Công nghệ sinh học NỘI DUNG ĐỀ TÀI 1 1 Tổng quan tài liệu 2 2 Vật liệu và phương pháp nghiên cứu 3 3 Kết quả và thảo luận 4 4 Kết luận và kiến nghị TỔNG QUAN Bệnh nhân ung thư Tình hình ung thư trên thế giới và Việt Nam - Theo ước tính củaTổ chức ung thư Liên hợp quốc, vào năm 2030 có khoảng 13,2 triệu người chết do ung thư. - Hiệp hội nghiên cứu ung thư quốc tế - IARC cũng cho biết, khoảng 21,4 triệu người mắc ung thư mới sẽ được phát hiện vào năm 2030. - Trung bình mỗi năm ở VN có 75.000 người tử vong do bệnh ung thư, hơn 126 nghìn ca mới mắc ung thư trong năm 2010, Hội Phòng chống ung thư VN. Các phương pháp điều trị ung thư - Phương pháp điều trị tại chỗ. - Phương pháp điều trị toàn thân. - Ngoài các phương pháp điều trị trên, hiện nay có nhiều nhà nghiên cứu đã ứng dụng enzyme trong điều trị ung thư. + Điều trị ung thư não bằng E amphinase của ếch. + Enzyme CHIP trong điều trị ung thư vú. + Enzyme protease legumain. Gới thiệu protease legumain Cấu trúc không gian của legumain + Legumain là một protease phân giải protein. + Tồn tại trong cả động vật và thực vật. + Đặc hiệu cho sự thủy phân của liên kết asparaginyl. + Hoạt động tối đa ở pH=5,5. + Legumain được biểu hiện cao ở một số loại khối u như: tuyến tiền liệt, đại tràng và ung thư vú. Mục đích đề tài Thiết kế vector biểu hiện gen mã hóa legumain VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Vật liệu 1 1 - Vector tái tổ hợp pBT mang gen mã hóa legumain do phòng CNTBĐV - VCNSH cung cấp. - và trang thiết bị tại phòng CNTBĐV – VCNSH. Các loại hóa chất - Vector biểu hiện pET-32c(+) do phòng CNTBĐV - VCNSH cung cấp. Hình ảnh pET-32c(+) [...]... QSLRPHSSTT TTTTEIRLLT KPERKLSWLL 501 PPLSNN* KẾT LUẬN - Đã thiết kế thành công vector biểu hiện mang đoạn gen mã hóa legumain - Đoạn gen này đã được gắn vào vector pET-32c(+)vào giữa các vị trí nhận biết của enzyme giới hạn EcoRI và HindIII KIẾN NGHỊ - Tiếp tục nghiên cứu biểu hiện gen mã hóa legumain trên các hệ biểu hiện hợp lý - Nghiên cứu để tối ưu hóa quá trình biểu hiện và tinh chế legumain phục vụ cho... và HindIII 1 1000bp 2 3 Gen mã hóa legumain(900bp) 750bp Giếng 1: Thang DNA chuẩn (Fermantas) Giếng 2: pBT-legumain gốc Giếng 3: pBT-legumain sau khi cắt với 2 enzyme giới hạn 2 2 Kết quả tinh sạch đoạn gen mã hóa legumain từ agarose 1 1000bp 2 Gen mã hóa legumain(900bp) 750bp Đường chạy 1: Chỉ thị phân tử DNA (Fermentas) Đường chạy 2: gen legumain 3 3 Kết quả xử lý vector biểu hiện pET-32c(+) với enzyme... HindIII - Cặp mồi thiết kế đặc hiệu cho phản ứng PCR T7F: 5’-TAATACGACTCACTATAGGG-3’ T7R: 3’-TAGTTATTGCTCAGCGGTGG-5’ 2 2 Sơ đồ bố trí nghiệm Vector pET-32c(+) pBT-legumain Vector pET-32c(+) mở vòng Gen mã hóa legumain pET-32c(+) - legumain Biến nạp vào E.Coli chủng DH5α Tách plasmid từ khuẩn lạc PCR với cặp mồi T7R/T7F Giải trình tự sản phẩm PCR KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 1 1 Kết quả xử lý vector tách dòng pBT-legumain... enzyme giới hạn EcoRI và HindIII 4 4 Kết quả biến nạp sản phẩm gắn kết pET-32c(+) và gen legumain Đĩa Petri chứa khuẩn lạc sau khi biến nạp 5 5 Kết quả PCR từ khuẩn lạc chọn dòng vector pET-32c(+)/legumain 1 2000bp 2 3 4 5 6 1600bp 1500bp Giếng 1: Thang DNA chuẩn của (Fermantas) Giếng 2 →6: Sản phẩm PCR từ các khuẩn lạc 1-5 6 6 Ảnh Chromas kết quả sequence 7 7 Kết quả xác định trình tự legumain 1 atgagcgata... CTTCCGGACC CAAAGCTTgc ggccgcactc gagcaccacc accaccacca 1451 ctgagatccg gctgctaaca aagcccgaaa ggaagctgag ttggctgctg 1501 ccaccgctga gcaataacta g - Gen này có sự tương đồng 100% với các trình tự có mã số đăng ký AY409389, DQ895070 và SY:DQ891884 tại ngân hàng gen quôc tế 8 8 Trình tự amino acid 1 MSDKIIHLTD DSFDTDVLKA DGAILVDFWA EWCGPCKMIA PILDEIADEY 51 QGKLTVAKLN IDQNPGTAPK YGIRGIPTLL LFKNGEVAAT KVGALSKGQL . ĐỀ TÀI “Thiết kế vector biểu hiện gen mã hóa legumain” Giáo viên hướng dẫn: PGS.TS LÊ QUANG HUẤN Sinh viên thực hiện : Vũ Văn Trường Lớp : KSCNSH 07-05 Viện. đoạn gen mã hóa legumain từ agarose 1 2 Gen mã hóa legumain(900bp) 1000bp 750bp Đường chạy 1: Chỉ thị phân tử DNA (Fermentas) Đường chạy 2: gen legumain 3 3 Kết quả xử lý vector biểu hiện pET-32c(+). liên kết asparaginyl. + Hoạt động tối đa ở pH=5,5. + Legumain được biểu hiện cao ở một số loại khối u như: tuyến tiền liệt, đại tràng và ung thư vú. Mục đích đề tài Thiết kế vector biểu hiện