đề tài ứng dụng isnulin trị đái tháo đường

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM KHOA: MÔI TRƯỜNG VÀ TÀI NGUYÊN BÀI TIỂU LUẬN Chuyên đề: GVHD:Th.S Nguyễn Ngọc Tâm Huyên Tên nhóm: Trần Thị Kim Ngân MSV 10149122 Nguyễn Thị Hồng Nhung MSV 10149137 Trịnh Bửu Hồng Phương MSV 10149152 Cao Thị Thanh Thảo MSV 10149176 Đinh Thị Cẩm Thu MSV 10149190 Phan Thị Ngọc Tuyền MSV 10149236 TP.HCM, tháng 8 năm 2011. MỤC LỤC 1. Khái quát      !" #$%! & '& 2. Quy trình sản xuất Insulin& ()*+,-*.%)& /01& 12 ()*+3456789:;,-2 <9=9=)*+6789:;2 $%>;? @ !A!*9:;? #B' ;789:;C!'C!D EEF !4GCHIAJ KLI3456789:;,- #()*+,-M678 #$;9; #$;9; 9;;9;,-MN9" 3. Ưu và nhược điểm của Insulin2 4. Nguyên tắc dử dụng và bảo quản InsulinD )OP345D B,!=,D 5.Kết luận và kiến nghịJ Tài liệu tham khảo 2 9 Q'>CR>6STUN6*6 )M1P@)TFV W,X6S!.' HIVI Y.Z;9*[.HIC>EFE;%3C4 *)EF9C>E)EQO\F6CR+ >W]*!RNFM145R! ^W_LIHI W !*I9';`1W]aI-FN9F!!1!FbV;;G *c! C)-IdC)I)FWReWc3*%F;:'C %)NWNeF*X !*cM94;`1!9EF*!WW Y>)W;9;C!N9V;f9%C)g%*,C > /.FI4S1^! >*cWC %T0*IX%)C!945+F.R1C! I%)FVIQ)SI.C!+19C)Ih    3 GIỚI THIỆU CHUNG C_EII4ICi*A4BICI*ABA+1*I e1D(9*+O\,-WZWW;*=I*EHI9 VWBICBAQPT)'5)HIRVWC>=,CVc 99!jEQP'*I1^!*1!AWIE[5)C'- C;k[,!lIA*IIWFRC)O1C!VW c99!31CE>)99!c`)SBI kFO1m ;C%)RI')1F1^^ d9CN!IEQ;;O\C !*I'-[ ,!lIA*IF,!,1H^N'31*OYC!9 e1DFlA!I*4@!1!n:Q *cC6X @!*!!MC)opqQ'C)J9e1D#"F E2:oI#e1#9O1p !;  C  rIlA!4  C  R    k  O  Q  4S  '  -  [    ,! lIA*IopO1!lA!I*4@!1! @!*!!oII4IpI)IN BICBA'CC)e1D?FsNI*tA*AA*Q\ 1*MC1^;*!A e1D""Fi*A4A*NIA*n! ,!AQ+1*IuI-I1HI /C)Q!;U;9CN!IE !*I1^AAF4S  !*IHN`':4*)WN,e*I..^ N'I! ,-MNv>4*)kO 6)wAAA oj!I<xpC,;`1C)I*Ic*C!e1D?@*!c3F%) dCkkO9CO\\456EC!4;`1 C6 4 MỘT SỐ VI SINH VẬT TRONG ĐỜI SỐNG 1. KHÁI QUÁT: 1.1 Sơ lược về bệnh tiểu đường: n@C1^4 4!*! )WII*!)4*IAN !*1!AHI)'5)c'I),19^*!F X1\196I! nBW]a! 4!5)N6' *IF! 4!',1CN9 nBaI! 1.;9FFC! IO1CNy1A!\N61FN9. n)O%;9a4!'*I'!0N6HC'C!W ]1m,1.,1;F4m.Z*! =9*+*I!:F .FU!C,1*! 1.2 Sơ lược về Insulin: 1.2.1 Nguồn gốc: nC1^!*1!=I*EFV;;!An1^ *!RC;k];e!! nHIa @[^> • @[5)HIGI)C)I)F'M ;;9;PN]^N'WI*I! •  n/,-[^>=I9;;9;a B9:;[ @9:;AaC! *]C;kF, -MNv>9:;87F34511AC1 , '^N'WICI!FW *VZOHIF4!>)] !N9 CI945P 5 1.2.2 Cấu tạo: nlC1^;*!A1"II !Cu;!);A;4zk'9 !CFu71IIFuB1#JIIIMkn o4{Ip n@*E;%3N!,a"?JJn&JJJ8I! *VHI;%3 Hình 1. Cấu trúc của phân tử insulin r04S*+Z9II-I1N9IRI9!C1^! cHI ;%3W],!I!F9! WW\I#k4{IF,IkHI u7C99OHIkssjHIuBZ*!+Z I-I14m'*V#HIX9!CN9I*I '*V[^>W! ]EI!9!CN9 6 CẤU TRÚC KHÔNG GIAN CỦA INSULIN 1.2.3 Phân loại: nW! a W94I 9459>1o*+p 945>1 ; 1.2.4 Cơ chế: n@I9H)#n";V nBc;9H) OWIXA|)1;*!AIA 4 4C) nj;MO1r\^;5^C!^Fc *]O1F^%HI1dO1F>^ nc)WI IF>F@*!W"J} I n/C!,=I> 2.QUY TRÌNH CÔNG NGHỆ SẢN XUẤT INSULIN: 2.1 Quy trình sản xuất Insulin trước đâya 2.1.1. Đặc điểm quy trình: INICN!IEII4Ioi*A4A*NwBICI*A jBAp;9*ICI*GHIV[]1R VWF[R>;ODJ!'Re1kHI>;O D?JF !*IM96>;[)'5)HI^> A!CG@)OFWZN9*!C;kI4 I1!.GoIc*]*!u7C1^c*]*!uBp CA!o1^c*]*!uBp8!W%)*IR945 N61!1o4c\pN345W[A! 7 I)G!C*IF=9*+,-C [^>G0; NWNeIWF9;;9;9:;[ A!CGQ;9*M9345;,\) ;A;4Ao*I;A;4I!p345*); 1HI,-4S*!%1CH)'W ^>oGCp@5)HI^>C)~4S 9'F+'k1^.5)1.W,-1^ TY,-*Z';[5)^> W*VN6!C!C.F! ^ \e*!NU1!.FN,e;5 NU1FW%)*IR;,\;5r0N9*!=9*+9 'FN6! T'R9%%)HI^>F =9*+9'C)GTN•>I!F;]PFN6,- .=16*^.F9CI! 2.1.2. Nhược điểm quy trình sản xuất Insulin chiết xuất từ động vật: n^>oGCpW*VN6!C!C*V X nj! ^\e*!NU1!.HI€ n<,e;5NU1 nW%)*I;,\1•4c*!o%)4c\p n@*!=9*+9'FN6! T'99%%)[ 6> n(9*+9'GTNv>I! n;]Po4!k.5),-p n<6,-.*O=)16. nw9CI! 2.2 . Quy trình sử dụng công nghệ AND tái tổ hợp để sản xuất Insulin: 2.2.1. Khái quát về công nghệ AND tái tổ hợpa n<v>789:;C>;;Nv> !*I1^A!0 ,A‚,'*VHIAFM1 !*I9A1.*) VC!*!'C!FHM115],-9,;`1 o;*!AFA|)1FbpF9'C!FW]* 1.A!1!1 8 nR'%P9 ;%3ECXN!IEHI Nv>AoNv>4*)p1CNXkCNv>789:; n<v>789:;19.,Ia @9' !*I78F7ƒA!1!1o;%>;Ap @ !A!*9:;o`cA!*94GFA|)1P.  CA|)1p )o' ;p789:;C!'C!HC%4GA CECA!4„Z! ^HIA)C!*!' C!HF !.! 78A!1!1345C! 15]N9I 2.2.1.1. Phân lập gen: …@9'78aS)A!I-AFWRN9 'N9Ia n/.N`F6N`N.F;9f1CF ! T;*!AMA|1FN'HIC 78MWIF 416F4c']; n/.16F'C!^Z>F)OP9'78 *O@)OVI*Z';)91m;`16F WFcF19F.EF16%F*•F9b …@9'7ƒa=)*+Z9'78F4c'I NC1 ;*!AF345A|1;%H)78FN'HI7ƒ …/c78F7ƒa,;`1IN9'kW^  CC1H!O\F4S;;9;!=I ;:-9c†;;5FSW99^ CC1 k'j!04S;;9;4*OA -9 ce78F7ƒF)*I^ CC1k' !O\ 2.2.1.2. Tạo vector tái tổ hợp: ‡Vector tách dòngaC;%378WN].TFWN,e P9Ak'FZ9,F *!'C!HC0;, 1I]>'*!'C!HQ1IA!*9:; n9! A!*94G4Sa 9  Plasmida;%3784 GF-!PNU;FW*!'C! HIN`  Phagơa;k.C;IlI14IFWA\Ic*]> !C9AN9IFV;9AC)4•4C-%1>; C!N`WN,eCWN,eI!U;I  Virut của tế bào nhân thực a*YJFI4A!*F*A*!*F *A*;Ab345*!94GC)AX' C!^>FZ> ‡Enzym cắt giới hạnaCA|)1WN,e>'1^! *+ Z*O;%378CP78XR10/P A[AC!WFPA!*94G!0A!*9:;F ! NP9! Ak' ‡Enzym nối LigasaaCRA|)1=I*E*!'C!FV -V9+C9ON';!;!4AA9! I-A .I nW#! A|)1=I*E*!64*)aA|)1ˆ! 789'[N`ˆ!FA|)1@   78CA|)1@   7ƒ 9'[;IA@  !C*IFC)I)IG3459!  ok4]nI4I;!*p!9A|)1kM74I;!*-V9 9! 784!9A|)1PkM[W !Ok!9 I4I;!*0**O!1u! A|)1 8SA|)1P '[I78N9IF=IN% *^m~ !*I,;`1789:; 2.2.1.3. Biến nạp AND tái tổ hợp vào tế bào chủ và nhân dòng gena n/I789:;C!'C!HA!Nv>' ;o)*Z ';789:;C!'C!Hp‰'C!HWCN`F'C! ^>F'C!Z>‚^19)4*)HI'C!H%, 789:;F !N. nR'C!H]4Sa  YN`ˆ!a4•I!9F]NU1F,IF ! 4G789:;I 10 [...]... sinh học phân tử tách được gen mã hoá proinsulin người trên nhiễm sắc thể số 11 Tách mARN của gen tổng hợp proinsulin từ mẫu nghiền tuỵ của người Dùng phản ứng RT-PCR với mồi đặc hiệu để khuếch đại gen, loại bỏ protein Do hầu hết các mARN của người đều có đuôi polyA nên sử dụng chuỗi polyT để bắt cặp với đuôi polyA đó Sử dụng sắc kí ái lực với polyT giữ lại mARN cần thiết cho quá trình dịch mã; còn lại... ra ngoài tế bào chất Nếu sử dụng mARN tách được từ trên tiến hành như sau: - Sao mARN tinh khiết thành ADN (cADN) nhờ enzym phiên mã ngược và nhờ các dNTP (trong phản ứng RT - PCR) - Cài đoạn cADN mã hoá insulin hoàn chỉnh vào plasmit ứng sau một promoter mạnh Biến nạp vector tái tổ hợp vào vi khuẩn E.coli  Bước 3: Biến nạp plasmit tái tổ hợp vào E.coli nhờ phương pháp trộn với dung dịch ion Ca hoặc... Không dùng insulin nếu: •Insulin màu trong chuyển sang đục •Quá hạn sử dụng •Insulin đã đông cứng hoặc tiếp xúc với nhiệt độ cao •Có đóng cục hay lợn cợn trong insulin •Thấy có cặn insulin bên trong lọ và không tan ra được khi lắc (tròn) nhẹ lọ •Lọ đã mở quá 1 tháng KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ: 20 KẾT LUẬN: Khả năng ứng dụng của vi sinh vật trong y tế là vô cùng vô tận.những khám phá của con người về vi sinh... hiện tượng bắt cặp bổ sung xảy ra có nghĩa là gen đã được chuyển vào tế bào nhận 11 - Phát hiện kiểu hình: đòi hỏi dòng mục tiêu phải có biểu hiện ra ở dạng protein dễ phát hiện bằng các phép thử - Phản ứng miễn nhiễm: khi tế bào nhận được plasmit có gắn đoạn ADN lạ thì tế bào vi khuẩn mất hoạt tính kháng tetracyclin, do đó khuẩn lạc chỉ mọc được trên môi trường có ampicilin, không mọc được trên môi trường... đó tổng hợp và tách hai dòng gen này Mỗi ADN được chèn vào plasmit Sau đó sản xuất tương tự như sản xuất proinsulin Cuối cùng hai chuỗi A và B được trộn với nhau và hình thành cầu nối đisulfua qua phản ứng tái oxi hoá khử nhờ một chất oxi hoá nhất định Hình 13.Sản xuất insulin tái tổ hợp với chuỗi A và chuỗi B riêng biệt Hình 14: Tổng hợp riêng rẽ hai chuỗi A và B 2.2.4 Các phương pháp sản xuất khác:... lại rất nhiều lợi ích và tính năng vượt trội hơn so với việc thu nhận từ động vật Insulin được sản xuất trên nhiều hệ thống khác nhau như tế bào E coli, tế bào Saccharomyces và ngay cả tế bào thực vật, đều có những thành công đáng kể Tuy nhiên khi tạo ra insulin trên các hệ thống trên gặp một số hạn chế Novo Nordisk là một trong những công ty hàng đầu thế giới bán insulin với chất lượng đáng tin cậy,... điện: sử dụng dòng điện cao áp ( khoãng 500V/cm) tạo lỗ thủng nhỏ trên tế bào trần, tạo điều kiện gen xâm nhập vào hệ gen tế bào chủ  Kỹ thuật vi tiêm: tiêm lượng nhỏ AND vào tế bào chủ hoặc tế bào trứng đã thụ tinh ở giai đoạn phôi 4-8 tế bào  Kỹ thuật bắn gen: dùng thiết bị bắn vi đạn mang gen cần chuyển ( súng bắn gen) vào hệ gen của tế bào chủ Vi đạn là các hạt Volfram hoặc vàng trộn với gen cần... thế cho các cách tổng hợp Insullin truyền thống là lấy từ tế bào động vật.Biện pháp này làm giảm chi phí rất nhiều so với phương pháp cũ, đồng thời lại thân thiện với môi trường KIẾN NGHỊ: Khuyến khích ứng dụng,phát triển công nghệ sản xuất insulin bằng vi sinh vật: 1.Nhà nước nên đầu tư hợp lý các chi phí cho các công trình nghiên cứu 2.Thường xuyên mở các hội thảo để cùng thảo luận và đưa ra ý kiến... càng tự hoàn thiện chất lượng cũng như giá thành để mọi tầng lớp có thể sử dụng 5.Tăng cường hợp tác với các cơ quan nước ngoài để áp dụng và chuyển giao nhanh công nghệ cũng như kết quả nghên cứu 21 TÀI LIỆU THAM KHẢO: 1-http://d.violet.vn/uploads/resources/562/1075370/preview.swf 2-http://www.sinhhocvietnam.com/vn/modules.php? file=article&name=News&sid=1149 3-http://baigiang.violet.vn/present/show?entry_id=487936 . BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM KHOA: MÔI TRƯỜNG VÀ TÀI NGUYÊN BÀI TIỂU LUẬN Chuyên đề: GVHD:Th.S Nguyễn Ngọc Tâm Huyên Tên nhóm: Trần Thị Kim Ngân MSV 10149122 Nguyễn. kiến nghịJ Tài liệu tham khảo 2 9