Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống
1
/ 85 trang
THÔNG TIN TÀI LIỆU
Thông tin cơ bản
Định dạng
Số trang
85
Dung lượng
2,37 MB
Nội dung
BÀI TẬP BÁO CÁO NHÓM 4 Laiphântửtrênpharắn Thành viên thực hiện: 1.Phạm Lê Ngọc Băng Dương 2.Nguyễn Văn Tiền 3.Đinh thị Thắm 4. Châu Thị Kim Ngọc 5. Nguyễn Huỳnh Thảo Yến 6.Từ Thị Thanh Sơn Tìm hiểu: CÁC PHẦN CHÍNH I. Nguyên tắc: II. Các yếu tố kĩ thuật quan trọng trong các phương pháp laitrênpha rắn: III. Ứng dụng của các phương pháp laitrênpha rắn: I.Nguyên tắc: !"#$%&'()*++, !- ./0123)4+%5!*-)3 -!*&'(6753-8!/)*% !'9:!,*%5 *Ưu điểm: .0+;5)+< %%%)%- 3&3/0 =43>?4@ A*/0 *Khó khăn: B-/C!,'9/0!3DC1)-E2 6" FGGHG:6"IJK%G: +%*KL+!'9:!,5,L36H 3&M1N!'9 II)Các yếu tố kĩ thuật quan trọng trong các phương pháp laitrênpha rắn: O5+:!,L+))% )P =) $ %L%LQ ) % 5 !'9 0 +; !K - 3&R&+;+%'9!5P!*S"T3D3%) 3&5(/0)!58 *U+R3# =)$%H!*S"T%)%DSKS U+R3K% U+RV'3U+R# Các bước laitrênpharắn III.Ứng dụng của các phương pháp laitrênpharắn : F%6SW+;A'"HG '"!'90+;*X6P PHƯƠNG PHÁP SOUTHERN Y'")!'90+;!5!,,@!4- Z[\A*L@Z[\3C''Z[\+HLH ] "8A'")3^G5_L#Z[\`L) +%.%L&2?Iabc [...]... đoạn này được phân tách dựa vào kích thước qua điện di trên gel agarose 2 DNA được làm biến tính ngay trên gel rồi được chuyển lên một màng lai Trong quá trình chuyển (transfer) vị trí các đoạn được giữ nguyên 3 DNA cố định trên màng được đem lai với mẫu dò có đánh dấu phóng xạ Sau quá trình lai, người ta rửa màng lai để loại bỏ các mẫu dò không bắt cặp chuyên biệt với DNA cố định trên màng 4 Cuối... DNA cố định trên màng 4 Cuối cùng, người ta dùng kỹ thuật phóng xạ tự ghi để định vị các phântử lai( DNA bộ gen: mẫu dò).Trong kỹ thuật này, người ta đặt một phim nhạy cảm với tia xạ áp sát vào màng lai Các phântửlai sẽ tác động lên phim và kết quả được thể hiện qua các chấm đen trên phim Sơ đồ phương pháp lai Southern blot Các ứng dụng quan trọng của Southern blot: Lập bản đồ giới hạn bộ gen... kết cộng hóa trị của ARN trên màng tế bào giúp ngăn cản axit nucleic không bị rửa trôi trong bước xử lý tiếp theo + Đem lai ARN trên màng với mẫu dò có đánh dấu phóng xạ Điều kiện thí nghiệm có thể ảnh hưởng đến hiệu quả và độ đặc hiệu của lai bao gồm: lực ion, độ nhớt, các cặp cơ sở không phù hợp + Màng được rửa sạch để loại bỏ các mẩu dò không bị ràng buộc + Các phântửlai được phát hiện nhờ kỹ... thể khác nhau qua sự so sánh bản đồ giới hạn của chúng Phát hiện các đột biến mất đoạn, đột biến điểm hay tái tổ hợp trên cùng một gen vì chúng làm thay đổi bản đồ giới hạn PHƯƠNG PHÁP NORTHERN BLOT Sơ đồ phương pháp lai Northern blot Chuyển RNA từ gel lên màng lai Sơ đồ phương pháp lai Northern Click to edit Master text styles Second level Third level Fourth level Fifth level *Mục đích: Phương... Làm biến tính với formaldehyde 3) Chạy trên gel (thường dùng agarose) 3) Chạy trên gel (thường dùng agarose) 3*) Làm biến tính DNA với alkali 4) Chuyển lên màng nitrocellulose (thường 4) Chuyển lên màng nitrocellulose (thường bằng họat động mao dẫn) bằng họat động mao dẫn) 5) Tắc nghẽn với DNA dư 5) Tắc nghẽn với RNA dư 6) Lai với mẫu dò DNA được đánh dấu 6) Lai với mẫu dò DNA được đánh dấu 7) Rửa... tính protein cũng như hoà tan các ARN mARN chiếm 2-5% tổng số ARN, và để chiết xuất nó đòi hỏi một bước chọn lọc, sử dụng mARN có đuôi poly(A) + Các ARN được điện di trên gel agarose để phân tách theo kích thước + Chuyển ARN lên màng lai nylon hoặc bộ lọc nitrocellulose thông qua một hệ thống thấm bằng mao mạch hoặc chân không Theo phương pháp truyền thống, sử dụng thấm mao mạch vì nó không cần đến... thấy các mối nối thay thế sản phẩm trên cùng một gen hoặc các mẫu có trình tự lặp đi lặp lại Một sản phẩm gen không đúng kích thước có thể do xóa bỏ hoặc sai sót trong xử lý bản sao, bằng cách thay đổi mục tiêu thăm dò được sử dụng theo trình tự được biết đến, nó có thể xác định khu vực của ARN mất tích Bảng so sánh 2 phương pháp lai Southern Blot và Northern Blot Southern... gene X trong - Bao nhiêu mRNA của gene X hiện diện? chromosome - Phát hiện các fragment polymorphysm của cùng 1 gen ở các cá thể khác nhau - Ứng dụng Phát hiện đột biến mất đoạn, điểm hay tái tổ hợp trên 1 gen - Độ dài mRNA của gene X? . Nguyên tắc: II. Các yếu tố kĩ thuật quan trọng trong các phương pháp lai trên pha rắn: III. Ứng dụng của các phương pháp lai trên pha rắn: I.Nguyên tắc: . *U+R3# =)$%H!*S"T%)%DSKS U+R3K% U+RV'3U+R# Các bước lai trên pha rắn III.Ứng dụng của các phương pháp lai trên pha rắn : F%6SW+;A'"HG '"!'90+;*X6P. BÀI TẬP BÁO CÁO NHÓM 4 Lai phân tử trên pha rắn Thành viên thực hiện: 1.Phạm Lê Ngọc Băng Dương 2.Nguyễn Văn Tiền 3.Đinh thị Thắm 4.