3.1 Tỷ lệ phát hiện kháng nguyên bề mặt virus viêm gan B với 4 thử nghiệm khác nhau.. Những giám sát dịch tễ học huyết thanh đã phát hiện có khoảng 2 tỷ người bị nhiễm virus viêm gan B t
KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
Các thử nghiệm phát hiện kháng nguyên HBs
Trong 3 thử nghiệm để phát hiện kháng nguyên bề mặt virus viêm gan B (HBsAg) thử nghiệm miện dịch gắn men (ELISA) được tiến hành song song với hai bộ sinh phẩm chẩn đoán : Micro ELISA HBsAg của viện vệ sinh dịch tể trung ương sản xuất (Việt Nam) và bộ Monolisa HBs do hảng sanofi (Pháp) sản xuất với mục đích so sánh độ nhạy của hai bộ sinh phẩm này Ngoài ra cũng tiến hành cùng 1 mẫu huyết thanh đề tài còn tiến hành thử nghiệm HBsAg với kỹ thuật ngưng kết hồng cầu thụ động ngược (SERODIA – HBs) bộ sinh phẩm của Nhật và thử nghiệm nhanh (Quick test) với sinh phẩm genedia – HBs của hãng Green Cross Corp (Hàn Quốc) Kết quả được ghi nhận như sau :
Bảng 3.1 : Tỷ lệ phát hiện kháng nguyên bề mặt virus viêm gan B với 4 thử nghiệm khác nhau
Soá maãu huy eát than h
Micro ELISA- HBs vieọn VSDTTW (VN)
Ghi chuự : (+) : Dửụng tớnh (-) : AÂm tính
• Trong 50 mẫu huyết thanh, tỷ lệ HBsAg(+) khi thực hiện bằng bộ sinh phẩm Micro ELISA HBsAg (VN) và Monolisa HBs (Pháp) là như nhau : HBsAg(+) là 11/50 chiếm tỷ lệ 22% Kết quả được ghi trên máy đọc
Kết quả xét nghiệm bằng phương pháp Serodia-HBs cho thấy có 10/50 mẫu (20%) dương tính với HBsAg Trong khi đó, xét nghiệm nhanh cũng ghi nhận tỷ lệ dương tính với HBsAg là 18% (6/50).
• So sánh tỷ lệ phát hiện HBsAg(+) của 3 thử nghiệm ta thấy : Thử nghiệm test nhanh có tỷ lệ phát hiện HBsAg(+) thấp hơn 4% so với thử nghiệm ELISA và thấp hơn 2% so với thử nghiệm Serodia, kết quả này 1 lần nữa khẳng định thử nghiệm test nhanh ứng dụng phần lớn trong sàng lọc dịch tể học HBV, hay nói cách khác thử nghiệm ELISA-HBs phát hiện kháng nguyên bề mặt HBV dương tính cao hơn 2% so với thử nghiệm ngưng kết hồng cầu thụ động ngược và nếu so với thử nghiệm test nhanh thì thử nghiệm ELISA có tỉ lệ phát hiện HBsAg(+) cao hơn 4%.
Các thử nghiệm phát hiện kháng thể kháng HBs
Có 39 mẫu huyết thanh HBsAg âm tính (HBsAg(-)) trong thử nghiệm ELISA được chọn để tiến hành tiếp với 3 bộ sinh phẩm (Kit) chuẩn đoán để xác định thêm một dấu ấn miễn dịch khác là anti-HBs, đồng thời có cơ sở để so sánh các thử nghiệm; kết quả được ghi nhận như sau:
Bảng 3.2 : Ket quả HBsAg thử nghiệm ELISA (Kít MONOLISA-HBs).
SANOFI DIAGNOSTICS PASTEUR PR21OO
ST NAME : Ag HBSt ÃTE Í 0092
JUALITY CONTROL Kiol.lM ằ|IU|K|ằJ KCioM'K
W/L MODE s DUAL TEST FILTER : 450 nm REF FILTER : 620 nm
OIILMI MHoMO MN^MI O.Hh'MI
.3 ( Ilb’MIB (.OHM ins 0.O2HM1B l.nux.ins L>) Mb'O 5
MOi NEG ^ ’ NEG 0.007 POS Mil -JiSG (.017 A
(.017 NEG < NEG (.HI NEG M(t NEG Mi? NEG 0.000 NEG 0.(22 NEG (.021 FOS LUS NEG 0.0)2 c
D MU NC4 < NEG MOL NEG MỈỈ NEG MB NEG 0.(14 NEG Mil NEG 0.017 POS MB NEG 0.022 NEG 0.(10 NEG MB D
***** INDICATES VALUE OUT OF RANGE OH If INDICATES COMBINED DATA
POS INDICATES A POSITIVE REACTION NEG INDICATES A NEGATIVE REACTION 7?? INDICATES EQUAL TO OR BETWEEN LIMITS
* INDICATES VALUE OUT OF RANGE N INDICATES COMBINED DATA
Bang 3.3 (a) : Ket qua HBsAg (kit Micro-ELISA-VN), may doc: ELISA Epson P_40.
Bang 3.3(b) : Ket qua HBsAg (kit Micro-ELISA-VN) may doc: ELISA Epson P_4.
Bảng 3.4 : Tỷ lệ phát hiện kháng thể kháng HBs với 3 thử nghiệm khác nhau
Thử nghiệm Số mẫu huyeát thanh
Ghi chuự : (+) : Dửụngn tớnh (-) : aâm tính Kết quả (Bảng 3.4) cho thấy :
- Nếu thực hiện bằng thử nghiệm ELISA sẽ có 16/39 trường hợp anti-HBs (+) chiếm tỷ lệ 41,02% và anti-HBs (-) là 23/39 mẫu, chiếm tỷ lệ 58,97
- Nếu thử nghiệm bằng thử nghiệm ngưng kết hồng cầu thự động ngược và test nhanh cho kết quả giống nhau : 14/39 mẫu huyết thanh anti-HBs (+) chiếm tỷ lệ 35,90 % và 25/39 mẫu huyết thanh anti-HBs (-) chiếm tỷ lệ 64,10% (Hình 3.2)
Hình 3.1 : So sánh tỷ lệ HBsAg dương tính và âm tính của 3 thử nghiệm
Hình 3.2 : So sánh tỷ lệ anti-HBs dương tính và âm tính của 3 thử nghiệm
NHANH anti-HBs(+) anti-HBs(-)
So sánh một số chỉ tiêu của các thử nghiệm
Trong 3 thử nghiệm trên tuỳ theo điều kiện và hoàn cảnh của mỗi nơi, mỗi phòng thí nghiệm mà ta chọn thử nghiệm để ứng dụng Bảng 3.5 sẽ cung cấp một số các chỉ tiêu để so sánh
Bảng 3.5 : So sánh các chỉ tiêu của các thử nghiệm HBs
Thử nghiệm Kỹ thuật Độ chính xác Độ nhạy Thời gian đọc kết quả
ELISA-HBs Phức tạp cao cao 4-5 Cao 40.000-
QUICK TEST a HBsAg 1-step-test MS : 58003 b Hepatitis-B latex
MS : 40048 d Genedia HBs Rapid ẹụn giản
Cả ba thử nghiệm đuợc ứng dụng trong các phòng xét nghiệm ở các cơ sở Y tế Trong đó thử nghiệm miễn dịch gắn men ELISA được áp dụng ở hầu hết các phòng thí nghiệm chuẩn thức bởi thử nghiệm này có độ chính xác và độ nhạy cao, vì thế giá thành của test ELISA thường cao hơn nhiều lần các thử nghiệm khác Để áp dụng được kỹ thuật này đòi hỏi ngoài các thuốc thử có trong bộ kit cần phải có trang thiết bị, máy móc… hiện tại Việt Nam đã có một số cơ sở lớn trang bị những máy móc thế hệ mới, tự động rất hiện đại nhưng cũng rất đắc tiền dùng để phát hiện kháng nguyên và kháng thể của HBV, HCV… cũng như để định lượng bằng phương pháp sinh học phân tử như các test : HBV-DNA, HBV bDNA, HCV-RWA, HCV-SEROTYPE, M.TB-RNA…giá thành của 1 test của các thông số này rất cao, từ 200.000đ đến 400.000đ/test hoặc như test HCV-b.RNA lên đến 600.000đ/test
Thử nghiệm ngưng kết hồng cầu thụ động ngược (Serodia) và test nhanh có hạn chế so với thử nghiệm ELISA vì chỉ thực hiện test định tính, mặc dù vậy 2 thử nghiệm này cũng có độ chính xác và độ nhạy tương đối đạt yêu cầu : Trong 50 mẫu huyết thanh thực hiện để phát hiện kháng nguyên HBs và 39 mẫu huyết thanh thực hiện phát hiện kháng thể anti-HBs ta thấy tỷ lệ phát hiện mẫu kháng nguyên và kháng thể dương tính của thử nghiệm Serodia và Quick test là tương đương nhau nhưng tỷ lệ này luôn luôn thấp hơn thử nghiệm ELISA (Bảng 3.1, Bảng 3.4)
Thử nghiệm Serodia không yêu cầu trang thiết bị máy móc cồng kềnh, giúp đọc kết quả dễ dàng bằng mắt thường sau 1 giờ Tương tự, xét nghiệm nhanh không cần bất kỳ thiết bị nào, vận hành đơn giản và cung cấp kết quả trong chỉ 10-30 phút bằng mắt thường Phương pháp này có giá thành hợp lý, tuy nhiên, một số cơ sở có thể tăng giá tùy ý vì mục đích lợi nhuận.
