Ứng Dụng Các Kỹ Thuật Sắc Ký Để Phân Tích Các Thành Phần Gây Nghiện, Ảo Giác, Độc Tính Trong “Shisha Thuốc Lào Ả Rập.pdf

Theo các y bác sĩ, thật ra shisha cũng giống hệt như thuốc lá và thuốc lào, thành phần của shisha vẫn chứa nicotine - một chất gây hưng phấn, thậm chí gây nghiện.. Không những thé, tại

we BO Y TE Was

KHOA DƯỢC LIEN BO MON HOA PHAN TICH - KIEM NGHIEM - DOC CHAT

Ͽ|l&

UNG DUNG CAC KY THUAT SAC KY

DE PHAN TICH CAC THANH PHAN

GAY NGHIEN, AO GIAC, DOC TINH TRONG

“SHISHA/THUOC LAO A RAP”

Giảng viên hướng dẫn: Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ

BO Y TE TRUONG DAI HOC Y DUOC CAN THO

KHOA DUOC LIEN BO MON HOA PHAN TICH - KIEM NGHIEM - DOC CHAT

Ͽ|l&

UNG DUNG CAC KY THUAT SAC KY

DE PHAN TICH CAC THANH PHAN

GAY NGHIEN, AO GIAC, DOC TINH TRONG

“SHISHA/THUOC LAO A RAP”

Giảng viên hướng dẫn: Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ

Nhóm thực hiện: Nhóm 6 - Dược K45

§ Lê Ngọc Câm Tú 1953030082

DANH MỤC TỪ VIẾT TAT

(Hormone vỏ thượng thận) Central Nervous System

IS Internal Standard

Liquid Chromatography Tandem Mass LC-MS/MS

Spectrometry LLOD Lower Limit of Detection LLOQ Lower Limit of Quantification LOD Limit of Detection MAO monoamine oxidase MRM Multiple Reaction Monitoring

MS Mass Spectrometry NADH nicotinamide adenine dinucleotide NADPH nicotinamide adenine dinucleotide phosphate NNK N-nitrosonornicotine

NNN N-nitrosonornicotine nAChRs nicotinic acetylcholine receptor SIM Selected Ion Monitoring SPE Solid-phase extraction SPME Solid-phase microextraction SRM Selected Reaction Monitoring TEN Tobacco-Free Nicotine

(Nicotine khéng thudc 1a)

DANH MỤC BẢNG

Trang Bang I: Một số nhà sản xuất đã được cấp băng sáng chế, nguyên liệu đầu vào và HiP.91085)(710) NIIẢÝÝỶŸÝÝŸ 6 Bang 2: Bang tom tắt các trường hợp ngộ độc CO liên quan đến hút shisha 11 Bang 3: Xác định cotinine trong huyết thanh bằng phương pháp sắc ký lỏng ghép

khối phô hai lần LC-MS/MS

Bảng 4: Xác định nicotine và notinine nước tiêu bằng phương pháp GC-MS 19 Bảng 5: So sánh phương pháp sắc ký lỏng ghép khối phô hai lần LC-MS/MS và

phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ GC-MS 2 52s s22 20

DANH MỤC HÌNH ẢNH

Trang Hình 1: Shisha - thuốc lào Ả 712 2 Hình 2: Các thành phần cấu tạo thiết bị hút shisha -2 2 2S S1 S125 5253 5321252551515252555 3 Iiiic.461008)01) 1 4 Hin lái 00 4

ii m109 i62 0n 5 Hình 6: Cấu trúc hóa học của S-nicotine và R-nicotine 222222 2252155252252525e 5 Hình 7: Quy trình tong hop ,Š-nicotine - s5: s2 121211211121111121111.11.11 11 c6 6 Hình §: CO tranh vị trí gắn của oxy dẫn đến oxy không được hemoglobin vận chuyỂH - - 111 21111211211211 11211 11 111 10110111 1121112111121 8 Hinh 9: Nicotine tác động lên receptor nicotime, làm tăng dòng Na”, Ca?” đi vào và

KT đi ra, tạo điện thế hoạt động, tạo tác động kích thích receptor này 9 Hình 10: Nicotine kích thích thụ thế của tế bảo thần kinh dẫn đến phóng thích

501 1777 cece ceccets cesses sessesssessesssessssssesssesessssssessesesstestenseeseeteees 10 Hinh 11: Co ché tac AGNG CUA MICOMINC ee eee cece cece cte sete ceseseceesesessesesessesesseasenes 10 Hình 12: Chuyên hóa nicotine thành cofinine -s- 2s 22c 2222212221212 crrxe 13 Hình 13: Sơ đồ tạo ion dương bằng nguồn ESI 5 52 SE 2E1211211221211 211221 xe 14 Hình 14: Post-column infusion of cotinine c2 211211112111 1212512121 E111 xe, 16 Hình 15: Nồng độ cotinine định mức so với nồng độ cotinine đo được (ng/mL) L7

Hình 16: Sắc ký đồ ion - s21 1211111110211 1111121 0111111111111 terrty 18

Hình 17: Sac ky d6 ion tong sé va cua nicotine (m/z 162), cotinine (m/z 176), diphenylamine (IS, m/z 169) trong nước tiểu của người nghiện thuốc lá với 21,2 ng/L của nicotin và 28,4itp/L của cofIIH€ - óc cc sec cccsscxccces 20

MUC LUC

Trang

1 Nguồn gốc, tính chất ly ha ceccsseesessessesseesecssessessessecsesseesessensessesseesevsesees 2 1.1 Nguồn gỐC - ST T211 11 11 11 1111111011111 1111 11g11 ng 2 1.2 Thành phần ¡i08 2 3

1.3 Tính chất lý hĩa -s- s51 T1 212112111111 11211 11211 11 1011101111121 errau 4

1.4 Điều chế, tống hợp s- 5s t2 111111111111211111111 71121 121210121 ru 5

2 Độc tính, cơ chế gây độc và xử trí ngộ độc - s- s2 211E11211211212121 xe 7 2.1 Độc tính ¿- + 22122122212112111211211121112111211211121121121121121 222 re 7 2.2 Cơ chế gây ngộ độc s- s1 EH 211 11 111 1011101211111 § 2.3 Xử lí ngộ độc - 5+ 2112 12212211221221121122112112121212111211 re 10

3 Phân tích, so sánh các phương pháp định tính, định lượng mẫu dịch sinh học các thành phần gây nghiện, ảo giác, độc tính trong “Shisha” băng các kỹ thuật sắc ký hiện điại - á 11111101 1111105111111 1 1155111111011 111111151111 111 1111115115161 1 1101111111511 1 1 1c ctg 13

3.1 Phương pháp sắc ký lỏng ghép khối phơ hai lần LC-MS/MS 13 3.2 Phương pháp sắc ký khí ghép khối phố GC-MS -5s 2s 19

3.3 So sánh phương pháp sắc ký lỏng ghép khối phơ hai lần LC-MS/MS và

phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ GC-MS -2- 5+ 2c c22cExcrrvg 20 kiến: dinớỘớỚŨnŨnŨnABÂẬẠ5ỤẠ 21

4 Đề xuất biện pháp chống “Shisha/ thuốc lào Á rập” s- 2sccccccEczzzreg 22

I MỞ ĐẦU

Shisha thực chất là một loại cỏ có xuất xứ từ Ả Rap, co cach hut giống như thuốc lào nên còn được gọi lả "thuốc lào Ả Rập", có tâm kèm các hương liệu trái cây như: bạc hà, táo, dâu, đào, đứa, chanh, nho Trước đây, khi mới bắt đầu du nhập vào Việt Nam, shisha chỉ xuất hiện trong các vũ trường, quán bar nhưng

hiện nay nó thậm chí phô biến nhiều tại nhiều quán cà phê, giải khát

Theo các y bác sĩ, thật ra shisha cũng giống hệt như thuốc lá và thuốc lào, thành phần của shisha vẫn chứa nicotine - một chất gây hưng phấn, thậm chí gây

nghiện Tuy nhiên, một bình shisha có thời gian sử dụng ít nhất là 40 phút, số lần hít

vào sẽ là từ 50 — 200 lần, như vậy lượng khói đưa vào cơ thể sẽ gấp từ I00 — 200

lần so với hút I điều thuốc lá, đó là lượng khói rất khủng khiếp Không những thé,

tại nhiều quán bar, vũ trường, đề tăng độ “khoái cảm” khi hút shisha, người dùng còn bỏ vào mỗi bình hút thêm các chất khác như heroin, rượu Chính những chất này cộng với shisha đã gây ra những tác hại khôn lường đối với sức khỏe, khiến cho người hút đễ nghiện và mất kiểm soát

Ngoài ra, giá thành sử dụng shisha cũng khá cao Bình shisha cho một lần

hút có giá trung bình từ 150.000 đồng đến 200.000 đồng, thậm chí, đối với một bình

shisha “xịn” sẽ có giá trên 200.000 đồng Bình quân mỗi tháng các "con nghiện" phải chi trả gần 4 triệu đồng mới thỏa mãn nhu cầu

Từ những tác hại trên, khi các đối tượng sử dụng đã nghiện thì việc cần được đáp ứng cơn nghiện, cơn thèm thuốc sẽ khiến họ vi phạm pháp luật, kéo theo các vấn đề liên quan tới tệ nạn xã hội như trộm cắp, cướp của, giết người Nghiêm trọng hơn đó là phần lớn người dân vẫn chưa có hiểu biết nhiều về tác hại của shisha, họ vẫn cho rằng “shisha không gây nghiện và không độc”, “vì được lọc qua nước nên lượng độc td co thé hap thụ sẽ nhẹ hơn thuốc lá” Chính sự lầm tưởng tai hại này đã khiến cho trào lưu hút shisha ngày càng một gia tăng

Vì thế, ngoài việc tiến hành tuyên truyền, giải thích cho người dân hiểu về tác hại của shisha thì Nhà nước nên đưa shisha vào danh mục hàng hoá hạn chế kinh doanh hoặc đánh thuế cao Đồng thời nên siết chặt kinh doanh mặt hàng này, kết hợp với quản lý nhà nước chặt chẽ trong quá trình kinh doanh hoặc có chế tài

nghiêm khắc cho những hành vi mua bán, tàng trữ và sử dụng Bên cạnh đó, việc nghiên cứu và đưa ra những bằng chứng khoa học đáng tin cậy về tác hại của shisha cũng như tìm ra những phương pháp tối ưu định tính, định lượng các hoạt chất trong shisha, cũng đã góp phần hỗ trợ Nhà nước trong việc phát hiện, kiểm soát và hạn chế sự du nhập tràn lan của mặt hàng “thuốc lào” này

II NOI DUNG

Chau Au, Chau Uc va Brazil [24]

*Cách hoạt động:

Người ta đỗ nước vào bình ở phía đưới shisha để ống thân đã gắn chặt ngập trong nước khoảng vải phân (centimet) Nước càng sâu thì lực hút khi dùng cảng

phải lớn Thuốc lá được bỏ vào trong chén đặt ở đầu shisha và than hồng đặt trên

đầu thuốc lá Một số nền văn hóa phủ chén bằng một miếng thiếc hoặc màn kim loại

để ngăn cách than với thuốc, làm tôi thiểu lượng tro than lẫn trong khói Cách này cũng giúp giảm nhiệt độ đốt thuốc, dé tránh làm cháy thuốc trực tiếp [24]

Chén sứ Ron cao su

ra khói, rồi được truyền xuống ống thân đề đi vào nước trong bình Khí sẽ tạo ra bọt, mất nhiệt, và tràn lên phần trên của bình, nơi có gắn vòi Khi người hút hút vòi, khói sẽ đi vào phôi, và sự thay đối áp suất trong bình sẽ lại kéo khí vào than, tiếp tục quá trình

Nếu shisha được đốt và tạo ra khói nhưng không aI hút trong thời gian dài, khói bên trong bình nước sẽ được coi là "cũ" và không ngon nữa Khói cũ sẽ được đây ra ngoài qua van làm sạch, nếu có

1.2 Thành phần hóa học

Thanh phần có trong shisha chủ yếu là lá thuốc kết hợp với các nguyên liệu khác gồm mật ong và các hương vi phố biến như nho, cam, táo, dâu , lá thuốc khi đốt dưới than hông tạo khói và mùi vị cho người sử dung

Hình 3: Khói shisha Khói shisha có chứa các thành phần từ cả thuốc lá và than đá Thành phần chủ yếu là nicotine Đường hút các chất bằng phản ứng đốt cháy nên hút shisha làm cho máu người dùng có hàm lượng rất cao khí độc carbon monoxide Ngoài ra chúng còn bao gồm hydrocarbon thơm đa vòng, aldehyde dễ bay hơi, NO, furan và các hạt nano [24]

Cac aldehyde dé bay hơi được tìm thấy trong khói shisha: formaldehyde, acetaldehyde, acrolein, propionaldehyde va methacrolein [24]

Khói shisha có chứa các chất gây ung thư ở nhiều cơ quan khác nhau trong

cơ thể, như: benzopyrens, dibenzoanthracene, benzofluenthene, dibenzopyrene, các phức hợp mitrite đa vòng [3]

- Công thức hóa học: CioHi4Ni |

thuốc lá (Nicotina tabacum Solanaceae) Tỷ

lệ < 2,8% tuy loại

- Là một chất ở thể lỏng như dầu, tan trong nước rất nhiều, tan trong côn, dầu, ether Độc tính rất mạnh và tác dụng rất nhanh [5]

*Carbon monoxIde:

- Công thức phân tử: CO 2

- Ti trong: 1,25 kg/m? 6 273°K hoadc Ti 3 4 o 5 'C O:

- Độ hòa tan trong nước: 26 gám” ở 112.8 pm

273°K, Hinh 5: Carbon monoxide

- Diém nong chay: -205°C (68°K) Diém séi: -192°C (81°K)

- CO là chất khí không màu, không mùi, rất dé chay, hoi nhe hon khéng khi (dCO/kk = 28/29), rất độc Ở điều kiện bình thường tan rất ít trong nước, tan trong etanol và benzen, có thê cháy với ngọn lửa màu xanh lam tạo thành CO; [4] 1.4 Điều chế, tổng hợp

- Nicotine tồn tại dưới dạng hai đồng phân lập thể, S-nicotine và R- nicotine Trong khi S-nicotine là dạng nicotine phô biến (>99%) trong thuốc lá, một dạng nicotine tông hợp hàng đầu trên thị trường chứa cả hai chất đồng phân lập thể với lượng bang nhau, gây thêm nguy cơ về việc ghi nhãn không chính xác và các tác động sức khỏe chưa được hiểu rõ của R-nicotine Vi nicotine tong hợp chỉ có săn dưới dạng hỗn hợp racemic, chứa cả S-nicotine va R-nicotine với tỷ lệ 50/50 S- nicotine chiết xuất từ thuốc lá được coi là an toàn hơn và kinh tế hơn [23]

Bảng 1: Một sô nhà sản xuât đã được câp băng sáng chê, nguyên liệu đầu vào và

Contraf-Nicotex- oo - Stereoselective

Ethyl nicotinate S-nicotine a Tobacco recrystallisation Zanoprima Myosmine S-nicotine Enzymatic Lifesciences stereoselective step

reductase enzyme

ee 7 NADH or NADPH myosmine

được chuyên thành S-nicotine thông qua quá trình methyl hóa Tuy nhiên quá trình methyl hóa cũng có thế hình thành chất ví dụ: N-formyl-(S)-nornicotin, nên thêm vào đó HCHO làm tác nhân khử chất này thành S-nicotine, nên bước 2 đôi khi gọi

- Hút shisha có liên quan đến ba tác hại chính đối với sức khỏe: tổn thương

tim mạch, nhiễm trùng và hình thành ung thư Phần lớn các bệnh tật và tử vong liên

quan đến hút shisha có thể là đo suy giảm hệ thống tim mạch [24] Một nghiên cứu tiét 16 rang hut shisha lam tăng gấp 4 lần nguy cơ ung thư phôi, khi so sánh với những người không hút thuốc [8], hút shisha đã được báo cáo là làm gián đoạn sự điều hòa tự chủ của chu kỳ tim, bằng cách gây ra sự biến đối nhịp tim giảm cấp tính [L7] khả năng chống oxy hóa của người hút shisha cũng thấp hơn đáng kế so với người không hút, tăng LDL-Cholosterol, Triglyceride, Apoprotern AI, Apo B, giảm HDL-Cholesterol cho thấy sự tăng nguy cơ các bệnh mạch vành [L1] Ngoài ra, hút shisha còn tăng nguy cơ mắc các bệnh truyền nhiễm do dùng chung đồ hút [L5] Cuối cùng, một mỗi liên hệ có ý nghĩa thống kê giữa hút shisha và sự phát triển của ung thư phôi đã được báo cáo, chủ yếu là do tiếp xúc với các chất gây ung thư có

trong cả thuốc lá và than [24]

- Nicotine là nguồn chính gây nghiện chính, cơ chế gây nghiện là do phóng thích dopamine [14] Khi một người hít phải khói thuốc lá, nicotine được chưng cất

từ thuốc lá và được đưa theo các hạt khói vào phối, được hấp thụ nhanh chóng vào

hệ tuần hoản tĩnh mạch phôi Sau đó, nó đi vào tuần hoàn động mạch và di chuyển nhanh chóng đến não Nicotine đễ dàng khuếch tán vào mô não, nơi nó liên kết với nicotinic acetylcholine receptor (nAChRs), là các kênh ion tạo phối tử [13], trung bình một điếu thuốc chứa khoảng lmg nicotine, hút một điều thuốc có thê hấp thụ 0,1-0,4mg nicotine [6], liều gây chết người cho người lớn là 60 mg hoặc ít hơn (30-

60 mg) [6], [26], ở trẻ em là LD50 = 10mg [27]

Ngộ độc cấp: xảy ra nhanh bao gồm buồn nôn, tiết nước bọt, đau bụng, nôn

và tiêu chảy, vã mồ hôi, tim đập nhanh Trường hợp nặng rối loạn hô hấp, ngừng thở, loạn nhịp tim, trụy tim, co giật kiểu tentani, có thể tử vong trong vòng 5 phút -

4 giờ [6] Tử vong có thể xảy ra do tê liệt các cơ hô hấp và/hoặc suy hô hấp [27] Ngộ độc mạn: các bệnh mạch vành, bệnh phôi tắc nghẽn mãn tính (COPD), ung thư thanh quản, thực quản, khoang họng, túi mật, tụy, thận, ung thư phối (ty lệ

chết 80-90%) [6]

- Ngộ độc CO sau khi hút shisha đang là vấn đề mới nỗi, lượng CO trong môi trường xung quanh cao là do đốt than và việc hút shisha trong các phòng thông

khí kém [29], hàm lượng CO trong khói shisha cũng nhiều hơn thuốc lá [31]

Ngộ độc cấp: nhức đầu (90%), buồn nôn, khó thở, loạn nhịp tim, suy thận cấp do thiếu hụt oxy [20], hoa mắt, chóng mặt, đau bụng, mệt mỏi, Trường hợp

tử vong, tử thi có sắc thái đặc biệt như môi đỏ, có những vết đỏ thăm ở đùi và bụng

vì nhiễm CO có máu đỏ tươi [6]

Ngộ độc mạn: nhức đầu liên tục, buồn nôn, suy nhược, trầm cảm, lú lẫn, mất

9›9

Hemoglobin Ø QQ eo

Red blood cell eo

- CO kết hợp với enzyme cytocromoxydase gây ức chế hô hấp tế bảo [6]

- CO kết hợp với myoglobin dan đến giảm sử dụng oxy, giảm lực co cơ tim,

hạ huyết áp và thiếu máu cục bộ não [6]

- Ái lực của CO với hemoglobin và myoglobin lần lượt là 250 và 60 [6]

- CO peroxid hóa các acid béo chưa bão hòa dẫn đến phù, hoại tử, thoái hóa

- Kích thích các hạch dẫn truyền thông qua thụ thê nAChRs cua hé giao cam

và đối giao cảm [27], biểu hiện độc tính cường giao cảm và đối giao cảm

- Nicotine chủ yếu thể hiện tác dụng của nó thông qua các thụ thê nAChRs ở CNS Kích thích thụ thé nAChRs lam giai phong ACh, nor-epinephrine, dopamine, serotonin, vasopressin, hormone tang truéng va ACTH [7]

- Nó cũng kích thích giải phóng cac catecholamine tủy thượng thận làm tang nhịp tim, lực co bóp cơ tim và huyết áp [19], sau đó dẫn đến liệt [6]

OQ Nicotine TL nAChR

Hinh 9: Nicotine tac déng lén receptor nicotinic, lam tang dong Na‘, Ca?* đi vào và K* di ra, tạo điện thế hoạt động, tạo tác động kích thích receptor này