quá trình cố định carbon được thúc đẩy bởi phân tử hydro dẫn đến sự phát triển tăng cường hóa vô cơ tự dưỡng của helicobacter pylori

HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Quá trình cố định carbon được thúc đẩy bởi phân tử hydro dẫn đến sự phát triển tăng cường hóa vô cơ tự dưỡng của Helicobacter pyloriBài báo t

dưỡng của Helicobacter pylori

Bài báo tham khảo: Carbon fixation driven by molecular hydrogen results in

chemolithoautotrophically enhanced growth of Helicobacter pylori

1

Nội Dung

Helicobacter pylori

Nguyên liệu – Phương pháp

Kết quả và thảo luận

Thu hoạch

2

• Tác nhân gây loét dạ dày và viêm dạ dày mãn tính

• Nguồn: Acid hữu cơ nhỏ, amino acid, peptide

• Sử dụng H2 làm cơ chất

• Hydrogenase - hấp thu [Ni-Fe] tăng đáng kể khi

được bổ sung H2

• Sử dụng CO2 và HCO3 đều có thể được kết hợp vào

các phân tử hữu cơ

• Enzyme cố định CO2: acetyl coenzyme A

(acetyl-CoA) carboxylase (ACC), pyruvate ferredoxin

oxyoreductase và oxoglutarate ferredoxin

oxyoreductase

Trong nghiên cứu này, chỉ ra việc bổ sung H2

tăng nồng độ enzyme ACC

Helicobacter pylori

3

Nguyên liệu – Phương pháp

Chủng và điều kiện tăng trưởng.

Nuôi cấy tế bào và phân đoạn dưới tế bào

Phân cắt bằng tryptic trong gel.

Phân tích LC-MS/MS.

Phân tích hấp thu [14C] bicarbonate toàn tế bào.

Phân tích hoạt tính acetyl-CoA carboxylase.

4

Chủng và điều kiện tăng trưởng

H.Pylori:

WT 26695 ATCC 43504

SS1

26695 ∆ℎ𝑦𝑑ABCDE

Môi trường BHI có 0.4% β- cyclodextrin- 1

µM NiCl2

Chọn lọc trên môi trường BA/24h

Tạo huyền phù trong môi trường

BHI-βc-Ni

Ủ 370C, lắc 200 v/p ĐK: 10% O2, 5%

vào bình 165 ml

5

Chủng và điều kiện tăng trưởng

6

Nuôi cấy tế bào và phân đoạn dưới tế bào

Rửa bằng đệm phosphate pH 7.5 có PMSF

Huyền phù trong

3 ml PBS + French pressure cell 18.000 lb/in2

Loại vụn

vỡ TB

Thu dịch nổi

Ly tâm

Thu dịch nổi, phần

tế bào màng được huyền phù lại PBS

WT-SP

MP

WT-Ly tâm

Ly tâm

7

Khử màu

Dịch phân cắt được sấy chân không + bảo quản ở -20°C chờ phân tích khối

Tạo huyền phù/2%

thông qua Proteomic

Phân tích hấp thu [14C] bicarbonate toàn tế bào

nhấp nháy (0,3 ml TCA 60%)

Lặp lại 3 lần

- Mật độ tế bào

Phân tích hoạt tính acetyl-CoA carboxylase

Xác định bằng cách sử dụng enyme kết hợp với pyruvate kinase và

Kết quả và thảo luận

2.1 lần

12

Điều kiện Vi hiếu khí (Microaerophilic)

13

14

HYDROGENASE

[NiFe]

17

Hấp thụ [C14]bicarbonate

18

Tăng hoạt tính ACC

19

Kết luận

- Tăng biểu hiện của hydroase và tiểu đơn vị ACC biotin carboxylase

- Tăng hoạt tính ACC.

- Chuyển hóa và tăng trưởng tổng thể tốt hơn, thể hiện qua năng suất tăng trưởng cao hơn.

- Các vai trò cụ thể của H pylori liên quan đến động lực proton

20

Thu hoạch

•Biết được cơ chế hoạt động của hydrogenase trong việc liên kết với co-factor là [Ni-Fe].

•Biết được 1 số protein nằm trên màng và protein trong

tế bào chất

21

Thank you!

22

Cơ chế Beckman LS6000TA scintillation counter

23