Luận văn: NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CÓ TRONG CÂY PHÈN ĐEN (PHYLLANTHUS RETICULATUS POIR EUPHORBIACEAE) doc

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM PHAN VĂN DÂN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CÓ TRONG CÂY PHÈN ĐEN (PHYLLANTHUS RETICULATUS POIR EUPHORBIACEAE) L L U U Ậ Ậ N N V V Ă Ă N N T T H H Ạ Ạ C C S S Ĩ Ĩ K K H H O O A A H H Ọ Ọ C C H H O O Á Á H H Ọ Ọ C C THÁI NGUYÊN - 2009 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM PHAN VĂN DÂN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CÓ TRONG CÂY PHÈN ĐEN (PHYLLANTHUS RETICULATUS POIR EUPHORBIACEAE) Chuyên ngành : Hoá hữu cơ Mã số : 60.44.27 L L U U Ậ Ậ N N V V Ă Ă N N T T H H Ạ Ạ C C S S Ĩ Ĩ K K H H O O A A H H Ọ Ọ C C H H O O Á Á H H Ọ Ọ C C Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS PHẠM VĂN THỈNH THÁI NGUYÊN - 2009 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc của mình tới PGS.TS.NGƯT Phạm Văn Thỉnh - người Thầy đã tận tình hướng dẫn, động viên và giúp đỡ tôi trong suốt quá trình học tập, nghiên cứu và thực hiện luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn TS. Nguyễn Quyết Tiến, TS. Phạm Thị Hồng Minh, ThS. Vũ Anh Tuấn đã giúp đỡ tôi nhiều kiến thức bổ ích và những kinh nghiệm trong nghiên cứu khoa học. Nhân dịp này, tôi xin trân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu, Ban Lãnh đạo khoa Hóa, khoa Sau Đại học - Trường Đại học Sư phạm Thái Nguyên, phòng hoạt chất sinh học - Viện Hóa học, Hội đồng giáo dục trường THPT Bắc Đông Quan - Thái Bình, Bố - Mẹ tôi cùng những người thân trong gia đình, anh em bè bạn… đã hết lòng tạo mọi điều kiện thuận lợi giúp đỡ tôi trong thời gian học tập, nghiên cứu khoa học và hoàn thành luận văn này. Thái Nguyên, tháng 9 năm 2009 Tác giả Phan Văn Dân Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, các số liệu, kết quả nêu trong luận án này là trung thực và chưa từng được ai công bố trong bất kỳ công trình nào khác. Tác giả PHAN VĂN DÂN Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DÙNG TRONG LUẬN VĂN SKLM : Sắc kí lớp mỏng UV : Ultraviolet spectrocopy MS : Mass Spectroscopy EI-MS : Electron Impact Mass Spectroscopy LC-MS : Liqud chromatography - Mass Spectroscopy FT-IR : Fourier Transform Infrared Spectroscopy NMR : Nuclear Magnetic Resonance 1 H-NMR : 1 H-Nuclear Magnetic Resonance 13 C-NMR : 13 C- Nuclear Magnetic Resonance DEPT : Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer COSY : Correlated Spectroscopy HSQC : Heteronuclear Spectroscopy- Quantum Coherence HMBC : Heteronuclear multiple - Bond Correlation HIV : Human Immunodeficiency Virus U : Unit Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn MỤC LỤC Trang Lời cảm ơn Lời cam đoan Danh mục các chữ viết tắt dùng trong luận văn Danh mục các bảng, hình và sơ đồ Mục lục MỞ ĐẦU 1 CHƯƠNG I. TỔNG QUAN 3 1.1. Mô tả thực vật 3 1.2. Các hợp chất hoá học có hoạt tính sinh học trong chi Phyllanthus 4 1.2.1 Một số đại diện của khung axit 4 1.2.2 Một số đại diện của nhóm tecpenoit 6 1.2.3 Một số đại diện của lignan 9 1.2.4 Một số đại diện của khung flavonoit 12 1.2.5 Một số hợp chất phenolic khác 14 1.2.6 Một số hợp chất nhóm ankaloit 17 1.3. Tình hình nghiên cứu hóa học của loài Phyllanthus reticulatus Poir 18 1.4 Tác dụng sinh học của chi Phyllanthus 19 1.4.1 Một số công dụng của chi Phyllanthus 19 1.4.2 Một số tác dụng dược lý của chi Phyllanthus 21 CHƯƠNG II. THỰC NGHIỆM 22 2.1. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu 22 2.1.1. Thu mẫu cây, xác định tên khoa học và phương pháp xử lý mẫu 22 2.1.2. Phương pháp phân lập các hợp chất từ các dịch chiết 22 2.1.3. Phương pháp khảo sát và xác định cấu trúc hoá học các hợp chất 23 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn 2.2. Dụng cụ, hoá chất và thiết bị nghiên cứu 23 2.2.1. Dụng cụ và hoá chất 23 2.2.2. Thiết bị nghiên cứu 24 2.3. Các dịch chiết từ cây Phèn đen (Phyllanthus reticulatus P.) 25 2.3.1. Các dịch chiết 25 2.3.2. Khảo sát định tính các dịch chiết 26 2.4. Phân lập, tinh chế các chất từ cây Phèn đen (Phyllanthus reticulatus P.) 29 2.4.1. Dịch chiết n-hexane (HP) 29 2.4.1.1 Chất HP-2 29 2.4.1.2 Chất HP-4 30 2.4.1.3 Chất HP-5 30 2.4.2. Dịch chiết ethylacetate (EP) 31 CHƯƠNG III. THẢO LUẬN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 32 3.1. Nguyên tắc chung 32 3.2. Phân lập và nhận dạng các hợp chất 32 3.2.1. Chất HP-2 33 3.2.2. Chất HP-4 34 3.2.3. Chất HP-5 36 KẾT LUẬN 43 KIẾN NGHỊ 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO 44 PHỤ LỤC 49 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn D D A A N N H H M M Ụ Ụ C C C C Á Á C C B B Ả Ả N N G G , , H H Ì Ì N N H H & & S S Ơ Ơ Đ Đ Ồ Ồ Trang Bảng 2.1: Khối lượng chất tổng số được chiết từng phân đoạn của cây Phèn đen Phyllanthus reticulatus P., Euphorbiaceae…………… … ……….26 Bảng 2.2: Kết quả định tính các nhóm chất trong cây Phèn đen Phyllanthus reticulatus Poir, Euphorbiaceae …………………… ………………28 Bảng 3.1: Độ chuyển dịch hóa học 13 C-NMR của một số sterol trong loài Phyllanthus ………………………… ………………………….… 35 Bảng 3.2: Số liệu phổ NMR của HP-5………… 38 Bảng 3.3: Bảng so sánh số liệu phổ 1 H và 13 C-NMR (500MHz, CDCl 3 ) của - acetylamino-phenylpropyl -benzoylamino-phenylpropinoate và chất thực nghiệm (HP-5) 40 Hình 1.1: Cây Phèn đen Phyllanthus reticulatus P., Euphorbiaceae…… 3 Sơ đồ 2.1: Quy trình ngâm chiết mẫu 25 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn 1 MỞ ĐẦU Lãnh thổ Việt Nam nằm trong vùng nhiệt đới, gió mùa, độ cao không đều, diện tích vùng núi và vùng trung du chiếm đến 70% - với điều kiện môi trường tự nhiên thuận lợi tạo nên một hệ thực vật rất phong phú và đa dạng. Theo các số liệu thống kê mới nhất, thảm thực vật Việt Nam - nguồn tài nguyên sinh học quý giá - có trên 12000 loài, trong số đó có tới hơn 3200 loài được sử dụng làm thuốc hay thực phẩm chức năng trong Y học dân gian. Dân số Việt Nam gồm nhiều dân tộc anh em sinh sống, từ xa xưa đã có truyền thống chữa bệnh bằng cây cỏ mà Hải Thượng Lãn Ông gọi chung là Thảo dược. Từ nhiều thế hệ, người dân đã sử dụng tri thức bản địa để phòng và chữa bệnh cho bản thân và cộng đồng. Ngày nay, mặc dù công nghệ tổng hợp hoá dược đã phát triển mạnh mẽ nhờ những thành tựu mang tính đột phá và hiện đại của khoa học công nghệ nhằm giảm thiểu bệnh tật và làm tăng tuổi thọ của con người. Song nhu cầu sử dụng cây cỏ để làm thuốc vẫn ngày càng tăng lên, vì trong chúng có chứa những biệt dược rất khó tổng hợp, ngoài ra, việc dùng thuốc Nam hầu như không gây tác dụng phụ. Theo điều tra của Bộ Y tế, trong những năm gần đây, ở Việt Nam số người có mầm bệnh viêm gan chiếm tỷ lệ khá lớn, nó đã trở thành đề tài nghiên cứu cho nhiều ngành khoa học nhằm chăm lo tốt hơn đối với sức khỏe cộng đồng. Tham gia vào việc tìm thuốc từ nguồn thực vật, Y học dân gian đã phát hiện khoảng 20 loại cây cỏ có khả năng chữa trị viêm gan, trong đó đáng chú ý là các loài thuộc chi Phyllanthus (họ Thầu dầu, Euphorbiaceae) [2]. Cây Phèn đen (Phyllanthus reticulatus Poir) là thực vật thuộc chi Phyllanthus được dùng trong Y học cổ truyền của Việt Nam và nhiều nước trên Thế giới. Các bộ phận của cây đều được sử dụng làm thuốc: rễ Phèn đen được dùng trị lỵ, viêm ruột, ruột kết hạch, viêm gan, viêm thận và trẻ em cam tích. Lá thường dùng chữa sốt, lỵ, ỉa chảy, phù thũng, ứ huyết do đòn ngã, Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn 2 huyết nhiệt sinh đinh nhọt, còn dùng chữa bị thuốc độc mặt xám da vàng và rắn cắn. Vỏ thân dùng chữa lên đậu có mủ và tiểu tiện khó khăn. Cho đến nay, ở Việt Nam chưa có công trình nghiên cứu nào về thành phần hóa học của cây Phèn đen. Với mong muốn làm sáng tỏ kinh nghiệm sử dụng trong dân gian, nâng cao tính hiệu quả, an toàn của dược liệu, đưa dược liệu vào sử dụng một cách khoa học hơn và có thể đẩy mạnh khai thác sử dụng cây thuốc này vào việc phòng và chữa bệnh cho nhân dân trong cộng đồng các dân tộc Việt Nam. Chúng tôi tiến hành “Nghiên cứu thành phần hóa học có trong cây Phèn đen (Phyllanthus reticulatus Poir, họ Thầu dầu, Euphorbiaceae)” - đó chính là tên của đề tài cho công trình nghiên cứu này. [...]... thực vật Hình 1.1: Cây Phèn đen (Phyllanthus reticulatus Poir, Euphorbiaceae) Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 3 http://www.Lrc-tnu.edu.vn Cây Phèn đen còn được gọi là cây Nỗ hay Sáp tràng thảo, Tảo phàn diệp Tên khoa học là: Phyllanthus reticulatus Poir, họ Thầu dầu, Euphorbiaceae Phân bố địa lý: là loài cổ nhiệt đới, mọc hoang khắp nơi, ở bờ bụi ven đường, ven rừng có khi được trồng... bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 21 http://www.Lrc-tnu.edu.vn Chương 2 THỰC NGHIỆM 2.1 Đối tượng và phương pháp nghiên cứu 2.1.1 Thu mẫu cây, xác định tên khoa học và phương pháp xử lý mẫu Nguyên liệu để nghiên cứu gồm toàn bộ phần trên mặt đất của cây Phèn đen, được thu hái vào tháng 11 năm 2008 tại làng Nguyễn, huyện Đông Hưng, tỉnh Thái Bình Cây Phèn đen có tên khác là cây Nỗ hay Sáp... Cây tươi giã nát với một ít muối đắp ngoài da với liều lượng không hạn chế Theo các lương y, lá cây Phèn đen có vị chát, tính mát, đã được dùng lâu đời trong y học dân tộc với tác dụng làm mát máu, cầm máu, thu sáp và giảm đau Rễ tính lạnh có tác dụng tiêu viêm, thu liễm, chỉ tả Vỏ gây chuyển hóa [5] Một số bài thuốc dùng cây Phèn đen (Phyllanthus reticulatus P.) [5, 7]: Chữa kiết lỵ: dùng rễ cây Phèn. .. màu đen dài 5 mm, rộng 3mm Hạt hình 3 cạnh, màu nâu có những đốm rất nhỏ Ra hoa kết quả tháng 8 - 10 [7] 1.2- Các hợp chất hoá học có hoạt tính sinh học trong chi Phyllanthus Người ta đã phát hiện chi Phyllanthus, họ Thầu dầu (Euphorbiaceae) có trên 700 loài gồm từ những cây thân thảo đến cây bụi hay cây gỗ nhỏ Ở Việt Nam có 44 loài, các loài đáng được chú ý nhiều hơn cả là Phyllanthus urinaria L (cây. .. Việt Nam chưa có công trình nghiên cứu nào về thành phần hóa học của loài Phyllanthus reticulatus Poir [7] Ở Kenya - các nhà khoa học của nước này đã sử dụng dịch chiết từ lá của loài Phyllanthus reticulatus Poir để khảo sát khả năng chống sốt rét trên chủng chloroquine - nhạy (K67) và chloroquine - kháng (ENT36) ở nồng độ thử nghiệm cho kết quả IC50  10 g /ml [24] Một số nghiên cứu ở Đại học Hồng Kông... miệng ống nghiệm, lắc trong vòng 5 phút theo chiều dọc, quan sát sự xuất hiện và mức độ bền vững của bọt Nếu bọt cao quá 3 - 4 cm và bền trên 15 phút là phản ứng dương tính Kết quả phân tích định tính các nhóm chất trong cây Phèn đen Phyllanthus reticulatus Poir, Euphorbiaceae được nêu trong bảng 2.2 Bảng 2.2: Kết quả định tính các nhóm chất trong cây Phèn đen Phyllanthus reticulatus Poir, Euphorbiaceae... dò DAD - Phổ 1H và 13C-NMR ghi trên máy Bruker 500MHz AVANCE, chuẩn Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 24 http://www.Lrc-tnu.edu.vn nội TMS, dung môi CDCl3, CD3OD, DMSO-D6 2.3 Các dịch chiết từ cây Phèn đen (Phyllanthus reticulatus P.) 2.3.1 Các dịch chiết Toàn bộ phần trên mặt đất của cây Phèn đen đã phơi khô, nghiền nhỏ được ngâm chiết kiệt bằng ethanol ở nhiệt độ phòng cho đến khi... Phyllanthus reticulatus Poir (cây Phèn đen) và Phyllanthus amarus Schum et Thonn (cây Diệp hạ châu đắng) Thành phần hoá học của chi này rất phong phú và đa dạng [20] 1.2.1- Một số đại diện của khung axit Năm 1995, từ loài Phyllanthus amarus L Yeap Foo [40] và Thales R Cipriani, Caroline G Mellinger - năm 2008 đã phân lập được axit amariinic, axit thiobarbituric và axit ascorbic [61] Số hóa bởi Trung tâm Học. .. nguội rồi mỗi ống cho thêm 4ml nước cất Nếu chất lỏng ở ống có kiềm trong hơn ở ống không kiềm có thể xem là phản ứng dương tính, nếu đem axit hoá ống có kiềm bằng một vài giọt HCl đậm đặc sẽ làm cho dịch đang trong mất màu vàng xuất hiện vẩn đục và có thể tạo ra tủa là phản ứng dương tính Ngoài ra có thể làm phản ứng điazo hoá với axit sulfanilic trong môi trường axit, nếu cho màu da cam đến cam nhạt,... lá, đậu đen sao, mỗi thứ 40g, đổ 4 bát nước sắc lấy 1 bát, chia ra uống làm 3 lần (Hoạt nhân toát yếu của Hoàng Đôn Hòa) Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 20 http://www.Lrc-tnu.edu.vn Chữa đại tiện ra máu: cây Phèn đen cả cành và lá, thái nhỏ 3 bát, sắc đặc uống (Bách gia trân tàng) Chữa chảy máu nướu răng: lá Phèn đen phối hợp với lá Long não và lá Xuyên tiêu phơi khô, chế thành viên . tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM PHAN VĂN DÂN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CÓ TRONG CÂY PHÈN ĐEN. tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM PHAN VĂN DÂN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CÓ TRONG CÂY PHÈN. hóa học có trong cây Phèn đen (Phyllanthus reticulatus Poir, họ Thầu dầu, Euphorbiaceae) - đó chính là tên của đề tài cho công trình nghiên cứu này. Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái