báo cáo hóa sinh y học bài 3 xác định hoạt độ enzyme

- Amylase trong cơ thể người có nguồn gốc từ tuyến tụy, tuyến nước bọt và có ở nhiều mô khác.- Trị số bình thường của amylase huyết thanh là 220U/l 37°C- Amylase tăng trong viêm tụy, gi

ĐẠI HỌC Y DƯỢC TRƯỜNG ĐẠI HỌC DUY TÂN

KHOA Y - 

-BÁO CÁO

MÔN: HÓA SINH Y HỌC

Bài 3: XÁC ĐỊNH HOẠT ĐỘ ENZYME

Lớp : BCH 251 A1

Thành viên : Trần Diệu Linh

Lê Ngọc Mỹ Ngân Phan Nguyễn Thảo Ngân

Lê Khang Nghi

MỤC LỤC

I CHỈ SỐ Α-AMYLASE 3

1 T ỔNG QUAN VỀ CHỈ SỐ Α - AMYLASE 3

2 N GUYÊN TẮC ĐỊNH LƯỢNG 4

3 S Ự THAY ĐỔI CHỈ SỐ A MYLASE 5

II CHỈ SỐ LIPASE 6

1 T ỔNG QUAN VỀ CHỈ SỐ L IPASE 6

2 N GUYÊN TẮC ĐỊNH LƯỢNG 7

3 C ÁC BƯỚC TIẾN HÀNH 8

4 S Ự THAY ĐỔI CHỈ SÔ L IPASE : 8

III CHỈ SỐ ALKALINE PHOSPHATASE (ALP) 8

1 T ỔNG QUAN VỀ CHỈ SỐ ALP 8

2 N GUYÊN TẮC ĐỊNH LƯỢNG 9

3 S Ự THAY ĐỔI CHỈ SỐ A LKALINE HOSPHATASE P 9

IV CHỈ SỐ CREATINE KINASE 10

1 T ỔNG QUAN VỀ CHỈ SỐ CREATINE KINASE 10

2 N GUYÊN TẮC ĐỊNH LƯỢNG 11

3 S Ự THAY ĐỔI CHỈ SỐ C REATINE KINASE : 11

V NGUỒN: 12

I Chỉ số α-amylase

1 Tổng quan về chỉ số α-amylase

 Enzyme α-amylase (EC 3.2.1.1) còn có tên gọi khác là 1,4-alpha-D-glucan glucanhydrolase

 Đây là một enzyme thuộc nhóm enzyme thủy phân và có khả năng thủy phân ngẫu nhiên liên kết α-1,4-glycosid trong tinh bột để tạo thành các đoạn dextrin mạch ngắn hoặc có thể thủy phân ra glucose và maltose

Tinh bột − 𝛼 𝑎𝑚𝑦𝑙𝑎𝑠𝑒 → Dextrin phân tử lượng thấp

- Amylase trong cơ thể người có nguồn gốc từ tuyến tụy, tuyến nước bọt và có ở nhiều mô khác

- Trị số bình thường của amylase huyết thanh là 220U/l ( 37°C)

- Amylase tăng trong viêm tụy, giảm trong một số trường hợp tác ống dẫn dịch tụy

2 Nguyên tắc định lượng

* Nguyên tắc

CNPG3 : 2-chloro-p-nitrophenyl- α-D-maltotrioside

CNP: 2-chloro-4-nitrophenol

CNPG2 : 2-chloro-p-nitrophenyl- α-D-maltoside

G3: maltotriose

G: glucose

Cường độ mẫu của CNP tỷ lệ với nồng độ α amylase

* Các bước tiến hành:

- Thuốc thử: dung dịch RGT đã pha sẵn

- Mẫu thử: huyết thanh.

- Bước sóng đo: 400 – 410nm

- Nhiệt độ: 25 C, 37 Co o

- Đọc đối chiếu với nước cất.

- Trong ống nghiệm cho vào:

+ Thuốc thử : 500 µl

+ Huyết thanh : 5 µl

Trộn đều, cho vào máy đo và đọc giá trị sau 5p.-

* Nhận định kết quả

Giá trị bình thường: Amylase huyết thanh <220U/L

3 Sự thay đổi chỉ số Amylase

 Tăng chỉ số α-amylase

Amylase huyết thanh tăng cao trong viêm tụy cấp, đặc biệt cao trong viêm tụy cấp

có hoại tử

Ngoài ra amylase huyết thanh còn tăng trong một số trường hợp khác như:

- Đợt cấp của viêm tuy mạn

- Tắc ống dẫn tụy do: sỏi hoặc u; thuốc gây co thắt đột ngột cơ vòng (như opiat, codein, methylcholin, chlorothiazide), mức tăng amyluse huyết thanh từ 2 - 15 lần

so với bình thường

- Biến chứng của viêm tụy (nang giả tụy, cổ trướng apxe).Chấn thương tụy, vết thương bụng

- Các u ác tính (đặc biệt là u phổi, u buồng trứng, u tụy, u vú ) thường tăng hơn 25 lần so với giới hạn bình thường (điều này hiếm khi thấy ở viêm tụy)

- Suy thận tiến triển: thưởng tăng, thậm chỉ cả khi không có viêm tụy

- Tăng tiết amylase

- Loét dạ dày - tá tràng thủng vào tụy

- Do sỏi, hoặc u chèn ép tắc đường dẫn của tụy.

- Ung thư tuyến tụy

- Đôi khi, trong viêm gan truyền nhiễm, amylase không có nguồn gốc tụy vào máu tăng Tắc ruột, xơ gan, các bệnh về thận, thiểu niệu thì amylase nước tiểu giảm làm tăng amylase máu

 Giảm chỉ số α-amylase

Amylase giảm khi tụy bị hoại tử lan rộng, ngoài ra nó còn giảm trong một số bệnh

lý như:

- Viêm tụy mạn tính

- Viêm tụy mạn tính tiến triển

- Xơ hóa ống dẫn tụy tiến triển

Có nhiều tác giả cho rằng:

 Hoạt độ amylase máu tăng cao, lớn hơn 1850 u/l thì tụy luôn có tổn thương

mà tổn thương này có thể điều trị bằng phẫu thuật (hay xảy ra nhất là sôi đường dẫn mật), tuyến tụy mất chức năng hay chỉ là phù nề tụy

 Nếu hoạt độ amylase từ 460- 925 U/L thì luôn luôn kết hợp với tổn thương tuy mà tổn thương này không thể điều trị bằng phẫu thuật Ví dụ: chảy máu tụy, hoại tử tụy

II Chỉ số Lipase

1 Tổng quan về chỉ số Lipase

- Lipase là chất chỉ được sinh ra ở tuyến tụy , vận chuyển vào tá tràng thông qua ống tụy

- Là chất xúc tác trong phản ứng thủy phân các chất béo thành axit béo tự do và glycerol

- Sau quá trình chuyển hóa, Lipase được lọc lại tại thận và hấp thụ hoàn toàn tại ống lượn gần

2 Nguyên tắc định lượng

* Nguyên tắc

Lipase xúc tác phản ứng thủy phân cơ chất para-nitrophenyl palmitate (p-NPP) tạo

ra para-nitrophenol (p-NP) biểu hiện màu vàng đặc trưng Hoạt độ của lipase được xác định bằng cách đo cường độ màu của dung dịch chứa p-NP ở bước sóng λ = 410nm

* Giá trị bình thường

1 - 9 tuổi 5 - 31 U/L

U/L: đơn vị trên 1 lít máu

3 Các bước tiến hành

Lưu ý: Khi làm xét nghiệm máu:

Bệnh nhân cần nhịn đói ( 12 giờ sau khi ăn)

Trong ống nghiệm: 500μl thuốc thử

5μl huyết thanh

4 Sự thay đổi chỉ sô Lipase:

 Tăng chỉ số lipase

+ Bình thường, lipase xuất hiện với một lượng nhỏ trong máu đủ để tiêu hoá thức

ăn Khi các tế bào tuyến tụy bị tổn thương, viêm tuỵ, khối u tuyến tuỵ,lượng lipase vận chuyển vào máu tăng dẫn đến nồng độ lipase trong máu tăng cao

+ Viêm túi mật cấp

+ Suy thận cấp/mãn tính

 Giảm chỉ số lipase

+ Tổn thương các tế bào sản xuất lipase tuyến tụy

III Chỉ số Alkaline Phosphatase (ALP)

1 Tổng quan về chỉ số ALP

- Alkaline Phosphatase (hay ALP) là một enzym có chức năng khử phospho của nhiều hợp chất trong cơ thể như protein, nucleotide,…

- ALP có mặt ở tất cả các mô của cơ thể người và tồn tại ở nhiều dạng khác nhau Chúng được sản sinh nhiều nhất ở gan, xương và một lượng ít hơn ở ống mật, thận, nhau thai của phụ nữ

Chỉ số ALP ở thanh thiếu niên đang phát triển sẽ cao hơn nhiều so với người trưởng thành do quá trình hình thành và tăng trưởng xương

2 Nguyên tắc định lượng

* Nguyên tắc

Phản ứng tạo thành p-nitrophenyl có màu đỏ, nên có thể đo hoạt độ enzyme ALP bằng độ tăng độ hấp thụ quang của p-nitrophenyl ở bước sóng 405 nm theo thời gian

* Các bước tiến hành

- Trong ống nghiệm cho vào:

+ Thuốc thử: 500 µl

+ Huyết thanh: 10 µl

- Lắc kỹ, tiến hành đo

* Nhận định kết quả

ALP có nhiều ở gan, xương, nhau thai và biểu mô ruột

- Hoạt độ ALP bình thường trong huyết tương:

Nam: 10-50 U/L

Nữ: 4,8-13,5 U/L

3 Sự thay đổi chỉ số Alkaline Phosphatase

- Một số nguyên nhân chính gây tăng nồng độ Alkaline Phosphatase

+ Bệnh về gan: viêm gan, xơ gan, tắc mật (trong gan hoặc ngoài gan), u gan =>

Các TB niêm mạc lót đường mật của gan là nguồn cung cấp ALP, do đó dòng chảy

tự do của mật qua gan, xuống đường mật và túi mật sẽ chịu trách nhiệm duy trì chính xác mức độ của enzym này trong máu Nên khi gan, ống dẫn mật, túi mật

không hoạt động bình thường hoặc bị tắc nghẽn thì ALP sẽ không được đào thải qua mật mà sẽ được đào thải trực tiếp vào máu

+ Bệnh về xương: loãng xương, còi xương, u xương, gãy xương đang hàn gắn,

viêm tủy xương

=> ALP được sản xuất bởi các TB tạo xương và trong quá trình hình thành xương, nồng độ ALP tăng lên đáng kể

+ Phụ nữ có thai đặc biệt trong thời gian mang thai 3 tháng cuối: nồng độ ALP

sẽ cao hơn bình thường vì nhau thai là cơ quan góp phần sản sinh ra ALP ALP của nhau thai có thể đẩy tổng ALP lên gấp 2-3 lần mức bình thường

- Một số nguyên nhân gây giảm nồng độ Alkaline Phosphatase

+ Suy dinh dưỡng, chế độ ăn uống thiếu chất dinh dưỡng

+ Sau truyền máu, sau phẫu thuật tim

+ Thiếu hụt trầm trọng vitamin và khoáng chất

+ Thiếu phosphat, thiếu máu ác tính

IV Chỉ số creatine kinase

1 Tổng quan về chỉ số creatine kinase

- Creatine phosphokinase ( CK hay CPK ) (số EC: 2.7.3.2) là enzym được tìm thấy

ở các tế bào mô cơ tim, cơ vân, não cơ xương và các mô khác

- Enzyme này là một dimer tạo bởi hai monomer là M (có ở cơ vân), B (có ở não ) -Có 3 isoenzyme:

+ CK-1 (BB) : có ở não

+ CK-2 (MB): cơ tim

+ CK-3 (MM): cơ vân

- Nó thực hiện xúc tác phản ứng chuyển đổi giữa ATP và creatine phosphat theo phương trình:

Creatine + ATP ⇔ ⇔ Creatine phosphate + ADP ⇔

- Vì vậy CK được xem có vai trò quan trọng trong kiểm soát dòng năng lượng cần thiết luân chuyển cho các mô cơ quan khác nhau trong cơ thể, đặc biệt là ở mô cơ

2 Nguyên tắc định lượng

* Nguyên tắc

Phản ứng biến NADP+ thành NADPH nên có thể đo hoạt độ enzyme CK huyết tương bằng độ tăng độ hấp thụ quang của NADPH ở bước sóng 340nm

* Các bước tiến hành

– Trong ống nghiệm cho vào:

+ Thuốc thử: 500 µl

+ Huyết thanh: 10 µl

- Để yên 1 phút sau đó tiến hành đo ở bước sóng 340nm

* Nhận định kết quả

– CK có nhiều trong cơ tim và cơ xương Hoạt độ CK bình thường có trong huyết tương ở 37°C

Nam: 24-195U/L

Nữ : 24-170U/L

3 Sự thay đổi chỉ số Creatine kinase:

– Hoạt độ CK tăng chủ yếu gặp trong trường hợp:

+ Nhồi máu cơ tim

+ Cơn myoglobin cơ niệu kịch phát

+ Sốt cao ác tính

+ Co giật

+ Viêm cơ, loạn dưỡng cơ, chấn thương cơ

+ Khối lượng cơ thể: Những người có khối lượng cơ thể cao, mức creatine kinase cũng cao hơn bình thường Nguyên nhân do enzyme creatine kinase một phần được sinh ra ở cơ

+ Luyện tập nặng

+ Sử dụng thuốc như thuốc hạ Cholesterol cũng làm tăng CK máu

- Các trường hợp làm giảm: bất thường khối lượng cơ vân của cơ thể và các bệnh

lý nội tiết nặng có thể làm tăng phân hủy Creatine phosphokinase và giảm CK máu toàn phần

+ Bệnh lý về gan, có khối u di căn

+ Giảm khối lượng cơ của cơ thể: người già

V NGUỒN:

https://my.clevelandclinic.org/health/diagnostics/22692-creatine-kinase-ck https://en.wikipedia.org/wiki/Amylase?

fbclid=IwAR29Ri5XqvYYtpgIsVmh9QEFtHBL8PwZLBOJPGEyKFgZzVXQsVa carBIfQM

https://bvnguyentriphuong.com.vn/xet-nghiem/do-hoat-do-lipase?

fbclid=IwAR0DmsvySpgzNQLatuQvFE0FwvLPLoCTZ7PV-2twElbK4Awih_z4h6tC71k

https://my.clevelandclinic.org/health/diagnostics/22029-alkaline-phosphatase-alp Giáo trình Thực hành Hoá Sinh Đại học Duy Tân ( BS Trần Thị Khánh Quỳnh) – trang 31

THE END