Nghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thư

Nghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thưNghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thư

NGUYỄN THÙY LINH

NGHIÊN CỨU MÔ HÌNH UNG THƯ BUỒNG TRỨNG THỰC NGHIỆM VÀ ẢNH HƯỞNG CỦA VIRUS VACCIN SỞI TRÊN UNG THƯ

LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC

HÀ NỘI - 2023

NGUYỄN THÙY LINH

NGHIÊN CỨU MÔ HÌNH UNG THƯ BUỒNG TRỨNG THỰC NGHIỆM VÀ ẢNH HƯỞNG CỦA VIRUS VACCIN SỞI TRÊN UNG THƯ

Chuyên ngành: Giải phẫu bệnh và pháp y

Mã số: 9720101

LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC

Người hướng dẫn khoa học:

1 TS Nguyễn Văn Đô

2 PGS.TS Trần Ngọc Dũng

HÀ NỘI – 2023

Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, tôi xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành tới:

Ban Giám hiệu, Phòng Quản lý đào tạo Sau đại học, Bộ môn Y Giải phẫu bệnh, Trường Đại học Y Hà Nội đã tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt quá trình học tập.

Đảng ủy, Ban Giám đốc Bệnh viện Quân y 103, Học viện Quân Y, đã luôn quan tâm, giúp đỡ tôi trong quá trình học tập và nghiên cứu.

Bộ môn Khoa Giải phẫu bệnh lý – Pháp y, Bệnh viện Quân y 103; Bộ môn Sinh lý bệnh, Học viện Quân y; Khoa Ngoại Phụ khoa– Bệnh viện K Tân Triều, đã tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt quá trình lấy số liệu, làm thực nghiệm để hoàn thành nghiên cứu.

Đặc biệt, tôi xin bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Văn Đô và PGS.TS Trần Ngọc Dũng – là những người thầy đã tận tình hướng dẫn, dìu dắt tôi trong quá trình học tập, nghiên cứu và thực hiện

đề tài Hai thầy đã luôn hỗ trợ, động viên và giúp đỡ tôi vượt qua giai đoạn khó khăn nhất để hoàn thành luận án này.

Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô, các anh chị em, bạn bè, đồng nghiệp và người thân trong gia đình đã luôn chia sẻ, động viên và luôn bên cạnh tôi trong suốt quá trình học nghiên cứu sinh.

Hà Nội, ngày 03 tháng 12 năm 2023

Tác giả luận án

Nguyễn Thuỳ Linh

Tôi là Nguyễn Thuỳ Linh, nghiên cứu sinh khóa 38 Trường Đại học Y Hà Nội,chuyên ngành Giải phẫu bệnh và pháp y, xin cam đoan:

1 Đây là luận án do bản thân tôi trực tiếp thực hiện dưới sự hướng dẫncủa TS Nguyễn Văn Đô và PGS.TS Trần Ngọc Dũng

2 Công trình này thuộc đề tài Nhà nước “Nghiên cứu điều trị ung thưbuồng trứng bằng liệu pháp vi rút tiêu hủy u (Oncolytic Virotherapy)” Mã sốKC.10.27/16-20, đơn vị chủ trì là Học viện Quân y

3 Các số liệu và thông tin trong nghiên cứu là hoàn toàn chính xác, trungthực và khách quan, đã được xác nhận và chấp thuận của cơ sở nơi nghiêncứu Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm trước pháp luật về những cam kếtnày

Hà Nội, ngày 08 tháng 12 năm 2023

Người viết cam đoan

Nguyễn Thuỳ Linh

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

1.1 Ung thư buồng trứng 3

1.1.1 Dịch tễ 3

1.1.2 Cơ chế bệnh sinh ung thư buồng trứng 4

1.1.3 Phân loại mô bệnh học ung thư buồng trứng theo WHO 2020 6

1.1.4 Hoá mô miễn dịch trong chẩn đoán ung thư biểu mô buồng trứng 7

1.2 Phân lập và nuôi cấy tế bào ung thư buồng trứng 10

1.2.1 Phân lập và nuôi cấy tế bào 10

1.2.2 Phân lập và nuôi cấy tế bào ung thư buồng trứng 13

1.3 Mô hình gây ung thư buồng trứng thực nghiệm 17

1.3.1 Các dòng chuột thiếu hụt miễn dịch 17

1.3.2 Mô hình tạo khối u buồng trứng người trên chuột thiếu hụt miễn

dịch 19

1.4 Virus vaccin sởi và liệu pháp tiêu huỷ khối u (OLV) của virus vaccin sởi trong điều trị ung thư và ung thư buồng trứng 23

1.4.1 Virus vaccin sởi (MeV) và thụ thể của MeV trong liệu pháp tiêu huỷ khối u 23

1.4.2 Điều trị ung thư và UTBT bằng virus vaccin sởi 25

Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31

2.1 Đối tượng và vật liệu nghiên cứu 31

2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 31

2.1.2 Mẫu bệnh phẩm phân lập tế bào UTBT

2.1.3 Động vật nghiên cứu 31

2.1.4 Các dòng tế bào dùng trong nghiên cứu 32

2.2 Phương pháp nghiên cứu 32

2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 32

2.2.2 Các chỉ tiêu nghiên cứu và tiêu chí đánh giá kết quả 32

2.3 Tiến hành nghiên cứu và các quy trình được thực hiện trong nghiên cứu 34 2.3.1 Thu thập mẫu bệnh phẩm nghiên cứu 34

2.3.2 Phân lập tế bào từ mô u và dịch cổ trướng của bệnh nhân 35

2.3.3 Gây mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm 38

2.3.4 Đánh giá hiệu quả điều trị ung thư buồng trứng trên mô hình thực nghiệm 43

2.3.5 Thực hiện quy trình kỹ thuật tế bào học, mô bệnh học và hoá mô miễn dịch 44

2.4 Thời gian và địa điểm nghiên cứu 51

2.5 Phương pháp phân tích kết quả và xử lý số liệu 52

2.6 Đạo đức nghiên cứu 53

2.7 Sơ đồ nghiên cứu 53

Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 51

3.1 Kết quả gây ung thư buồng trứng thực nghiệm 51

3.1.1 điểmĐặc mô bệnh học và HMMD ung thư biểu mô buồng trứng 51

3.1.2 Kết quả phân lập tế bào từ 50 bệnh nhân UTBM buồng trứng 57

3.1.3 Kết quả phân lập dòng tế bào M4 từ khối u của bệnh nhân UTBM buồng trứng 63

3.1.4 Kết quả gây ung thư buồng trứng thực nghiệm trên chuột nude bằng cấy ghép dòng tế bào OVCAR-3 và M4 68

3.2.Kết quả tác động của virus vaccin sởi trên mô hình ung thư buồng trứng

thực nghiệm 82

3.2.2 Tác động của virus vaccin sởi lên tình trạng tại chỗ khối u thứ phát

ở 4 nhóm nghiên cứu 86

Chương 4: BÀN LUẬN 90

4.1 Kết quả gây thư buồng trứng thực nghiệm 90 4.1.1. Đặc điểm mô bệnh học và HMMD ung thư biểu mô buồng trứng 904.1.2. Phân lập tế bào từ 50 bệnh nhân UTBM buồng trứng 95 4.1.3. Phân lập tế bào dòng M4 từ khối u của bệnh nhân UTBM thanhdịch độ cao 1014.1.4. Kết quả tạo khối ung thư buồng trứng trên chuột nude 108 4.2.Tác động của virus vaccin sởi trên mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm 1214.2.1. Tác động của virus vaccin sởi lên tình trạng toàn thân và các cơquan gan, thận của chuột nude ở 4 nhóm nghiên cứu 1214.2.2. Tác động của virus vaccin sởi lên tình trạng tại chỗ khối u củachuột nude ở 4 nhóm nghiên cứu 123

KẾT LUẬN 130 KIẾN NGHỊ 132 DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH NGHIÊN CỨU ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN

TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHỤ LỤC

Bảng 1.1 Kiểu hình miễn dịch của các typ ung thư biểu mô buồng trứng 9

Bảng 1.2 Các dấu ấn dùng để phân biệt ung thư buồng trứng nguyên phát với di căn UTBM tuyến đường tiêu hoá thấp 9

Bảng 1.3 Các dòng tế bào ung thư buồng trứng 15

Bảng 1.4 Các thử nghiệm điều trị ung thư bằng virus vaccin sởi trên mô hình động vật tạo khối ung thư người tại Việt Nam 29

Bảng 3.1 Đặc điểm đại thể khối u 51

Bảng 3.2 Đặc điểm vi thể UTBM buồng trứng 53

Bảng 3.3 Biểu lộ các dấu ấn miễn dịch của UTBM buồng trứng 55

Bảng 3.4 Tỷ lệ tế bào sơ cấp bám đáy theo thời gian 57

Bảng 3.5 Hình thái tế bào sơ cấp trong môi trường nuôi cấy 58

Bảng 3.6 Đếm số lượng tế bào sơ cấp và tỷ lệ tế bào sống chết 58

Bảng 3.7 Kết quả biểu hiện thụ thể CD46 của tế bào sơ cấp được phân lập

59Bảng 3.8 Kết quả phát triển của tế bào sơ cấp trong môi trường nuôi cấy

60

Bảng 3.9 Đặc điểm của các mẫu tế bào sơ cấp phát triển tốt 61

Bảng 3.10 Tỷ lệ chuột xuất hiện u của nhóm OVCAR-3 và M4 69

Bảng 3.11 Đặc điểm vi thể khối u thứ phát sau cấy ghép dòng tế bào M4 trên chuột nude 72

Bảng 3.12 So sánh đặc điểm hình thái tế bào và kiểu hình miễn dịch khối u nguyên phát, dòng tế bào M4 và khối u thứ phát 75

Bảng 3.13 Tỷ lệ tế bào biểu lộ thụ thể CD46 trên bề mặt tế bào u ở khối u

nguyênphát, dòng tế bào M4 và tế bào u thứ phát trên chuột nude 76

Bảng 3.14 Kết quả chỉ số công thức máu ở 4 nhóm nghiên cứu 83

Bảng 3.15 Kết quả chỉ số sinh hoá máu của 4 nhóm nghiên cứu 84

Bảng 3.16 Kết quả mô bệnh học gan, thận của 4 nhóm 84

Bảng 3.17 Các đặc điểm trên vi thể khối u thứ phát của 4 nhóm 87

Biểu đồ 3.1 Tốc độ tăng sinh của dòng tế bào M4 theo thời gian 66 Biểu đồ 3.2 Trọng lượng khối u cấy ghép dòng M4 và OVCAR-3 trên

chuột nude 69 Biểu đồ 3.3 Thể tích khối u cấy ghép dòng M4 và OVCAR-3 trên chuột nude

70Biểu đồ 3.4 Trọng lượng chuột nude cấy ghép dòng M4 và OVCAR-3 nhóm

chứng và nhóm điều trị bằng virus vaccin sởi 82 Biểu đồ 3.5 Thể tích khối u cấy ghép dòng M4 và OVCAR-3 trên chuột nude

nhóm chứng và nhóm điều trị bằng virus vaccin sởi 86

Hình 1.1 Cơ chế bệnh sinh của ung thư buồng trứng 6

Hình 1.2 Các giai đoạn phát triển của tế bào được nuôi cấy 12

Ảnh 2.1 Cấy ghép dòng tế bào UTBT dưới da sườn lưng chuột nude 40

Ảnh 3.1 Đại thể của ung thư biểu mô buồng trứng 52

Ảnh 3.2 Vi thể các typ mô bệnh học UTBM buồng trứng 54

Ảnh 3.3 Nhuộm HMMD ung thư biểu mô buồng trứng typ thanh dịch độ cao 56

Ảnh 3.4 Nhuộm HMMD x 200 với dấu ấn p53 của UTBM buồng trứng 57

Ảnh 3.5 Kết quả tế bào được sơ cấp phân lập từ bệnh nhân trên máy đếm tế bào sống chết 59

Ảnh 3.6 Tỷ lệ tế bào sơ cấp bám đáy theo thời gian trên kính hiển vi ánh sáng ngược x 200 62

Ảnh 3.7 Hình thái tế bào sơ cấp phân lập từ bệnh nhân trên kính hiển vi ánh sáng ngược x 200 62

Ảnh 3.8 Các nguyên nhân gây chết tế bào trong quá trình phân lập trên kính hiển vi ánh sáng ngược x 200 63

Ảnh 3.9 Ảnh đại thể và vi thể của khối u nguyên phát của bệnh nhân UTBM buồng trứng typ thanh dịch độ cao, mã M4 64

Ảnh 3.10 Sự tăng sinh dòng tế bào M4 phân lập từ bệnh nhân theo thời gian (ngày – N) trên kính hiển vi ánh sáng ngược x 200 66

Ảnh 3.11 Đặc điểm hình thái và kiểu hình miễn dịch của dòng tế bào M4 68

Ảnh 3.12 Tạo mô hình ung thư buồng trứng người trên chuột nude bằng cấy ghép dòng tế bào OVCAR-3 71

Ảnh 3.13 Tạo mô hình ung thư buồng trứng người trên chuột nude bằng cấy ghép dòng tế bào M4 71

Ảnh 3.14 Xuất huyết mô u khi quan sát tại chỗ 72

Ảnh 3.16 Siêu cấu trúc của tế bào u thứ phát cấy ghép dòng tế bào M4 78 Ảnh 3.17 Sự tăng sinh và hình thái tế bào phân lập từ khối u thứ phát theo

thời gian (ngày – N) trên kính hiển vi ánh sáng ngược x 200 79 Ảnh 3.18 Bộ nhiễm sắc thể của tế bào dòng M4 phân lập từ khối ung thư

buồngtrứng typ thanh dịch độ cao của bệnh nhân 80 Ảnh 3.19 Bộ nhiễm sắc thể của tế bào phân lập từ khối u thứ phát cấy ghép

dòng M4 trên chuột nude 81 Ảnh 3.20 Vi thể mô gan và thận 85 Ảnh 3.21 Vi thể khối u thứ phát cấy ghép dòng OVCAR-3 và M4 88 Ảnh 3.22 Siêu cấu trúc của tế bào u thứ phát cấy ghép dòng M4 khi điều trị

bằng virus vaccin sởi 89

Chữ viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt

AJCC American Joint Committee on

Cancer

Hiệp hội ung thư Hoa kỳ

ATCC American Type Culture

DMSO Dimethyl sulfoxide

me-dium

Môi trường nuôi cấy

DNA Deoxyribonucleic acid Acid deoxyribonucleic

FIGO International Federation of

Gyne-cology and Obstetrics

Liên đoàn quốc tế về phụkhoa và sản khoa

MeV-CEA Measles vaccine virus producing

carcinoembryonic antigen

Virus vaccine sởi có biếnđổi gen tạo ra CEA

iode kiềm tuyến giáp

PBS Phosphate Buffered Saline Dung dịch đệm phosphatRPMI Roswell Park Memorial Institute Môi trường nuôi cấy

SATB2 Special AT-rich sequence

bind-ing protein 2

Protein 2 liên kết trình tựgen giàu AT đặc biệt

SCID Severe combined

WHO World Health Organization Tổ chức y tế thế giới

ĐẶT VẤN ĐỀ

Theo thống kê của Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) năm 2019, tỷ lệ mắc

và tỷ lệ tử vong do ung thư tăng cao Ung thư được xếp hàng đầu và hàng thứhai về nguyên nhân gây tử vong cho người dưới 70 tuổi ở 112 nước trên tổng

183 nước được thống kê.1 Số liệu ghi nhận ung thư toàn cầu (GLOBOCAL)năm 2020, số ca mới mắc và số ca tử vong do ung thư lần lượt là 2.261.419 và684.996 Trong đó ung thư buồng trứng (UTBT) đứng thứ 20 với số ca mớimắc và tử vong tương ứng là 313.959 và 207.252 (chiếm 1,6% tổng số ca ungthư mới mắc và 2,1% tổng số ca tử vong do ung thư).2 Dự kiến năm 2030 số

ca UTBT mới mắc tăng 55% và số ca chết vì UTBT tăng 67%

Ung thư buồng trứng được công nhận là một bệnh có nền tảng phân tửriêng biệt và có cơ chế bệnh sinh phức tạp Dù đã có những tiến bộ đáng kểtrong chẩn đoán và điều trị, nhưng tỷ lệ sống thêm của bệnh UTBT vẫn chưađược cải thiện trong nhiều thập kỷ qua.3 Để tối ưu hoá điều trị UTBT thì cầnphải hiểu rõ về nguồn gốc tế bào u, cơ chế phát triển của UTBT và sự khácbiệt về đặc tính sinh học giữa các loại mô bệnh học UTBT.4 Các dòng tếbào có nguồn gốc từ khối UTBT đóng vai trò quan trọng trong các nghiên cứu

in vitro về sinh học ung thư; tuy nhiên các mô hình cấy ghép UTBT trên động vật in vivo có thể mang lại những hiểu biết chính xác hơn về đặc điểm

phân tử của các khối u nguyên phát và trở thành nền tảng cho các thử nghiệmtiền lâm sàng.5 Hiện nay, điều trị UTBT mang tính cá thể hoá và áp dụngnhiều phương pháp điều trị tiên tiến như liệu pháp điều trị nhắm trúng đích,liệu pháp miễn dịch tế bào và đặc biệt là liệu pháp sử dụng virus gây lygiải tế bào khối u (oncolytic virus, OLV) Tại Việt Nam, liệu pháp OLV sử

dụng vaccine virus sởi để nghiên cứu điều trị ung thư trên in vitro và in vivo

với nhiều dòng tế bào ung thư khác nhau như ung thư gan, ung thư phổi, ungthư vú, ung thư máu, ung thư đầu mặt cổ, ung thư tiền luyệt tuyến.6-14 Cònđối với UTBT thì hiện chưa có mô hình cấy ghép dị loài với dòng tế bào

UTBT phân lập từ bệnh nhân

(ex vivo) được công bố cũng như chưa có nghiên cứu nào đánh giá tác động

của virus vaccin sởi trên mô hình thực nghiệm đó Do vậy tạo mô hình UTBT

ex vivo cho từng bệnh nhân là cơ sở quan trọng để thử nghiệm liệu pháp OLV

của virus vaccine sởi trên ung thư và là sự cần thiết nhằm cá thể hoá trongđiều trị UTBT

Vì vậy chúng tôi đề xuất thực hiện đề tài “Nghiên cứu mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm và ảnh hưởng của virus vaccin sởi trên ung thư”

với hai mục tiêu sau:

1 Đánh giá kết quả gây ung thư buồng trứng thực nghiệm.

2 Bước đầu đánh giá tác động của virus vaccin sởi trên mô hình ung thư buồng trứng thực nghiệm.

Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Ung thư buồng trứng

1.1.1 Dịch tễ

Thuật ngữ UTBT không phải chỉ dùng cho một loại ung thư đơn lẻ mà

nó dùng chung cho sự đa dạng các loại ung thư ảnh hưởng đến buồng trứng,vòi trứng và khoang ổ bụng Ước tính có khoảng hơn 30 loại UTBT khácnhau, mỗi loại UTBT cũng có nhiều biến thể khác nhau và mỗi bệnh nhânđược chẩn đoán UTBT cũng có hình thái khác nhau.15

Theo số liệu của Ghi nhận ung thư toàn cầu (GLOBOCAL) năm 2018,UTBT chỉ chiếm 2,5% trong tổng số các ca ung thư ở phụ nữ nhưng chiếm5% nguyên nhân tử vong do ung thư ở nữ giới vì tỷ lệ sống thêm của bệnhnhân UTBT rất thấp Nguyên nhân lớn nhất được ghi nhận là do có 4/5 bệnhnhân UTBT khi được chẩn đoán đã ở giai đoạn tiến triển với sự xâm lấn lantràn của khối u trong ổ bụng Nếu bệnh nhân được chẩn đoán ở giai đoạn sớm(khối u phát triển tại chỗ trong buồng trứng) thì 90% sống thêm sau 5 năm,ngược lại nếu ở giai đoạn tiến triển thì tỷ lệ sống thêm 5 năm chỉ là 29%.16

Tuy tỷ lệ sống sau 5 năm của bệnh nhân UTBM buồng trứng ở giai đoạn đầurất cao, nhưng với bệnh nhân UTBM buồng trứng giai đoạn tiến triển thì đápứng điều trị với liệu pháp dựa trên Taxan và Platinum còn hạn chế Hơn nữa,

do thiếu các công cụ chẩn đoán và tiên lượng hiệu quả làm cho UTBT trở nênkhó quản lý và hầu hết bệnh nhân đều kháng hóa trị và tái phát.17, 18

Có sự khác biệt về tỷ lệ mắc và tỷ lệ chết do UTBT giữa các nước kémphát triển và các nước phát triển Trong khi ở các nước phát triển tỷ lệ mắcUTBT và tỷ lệ chết do UTBT trên 100.000 dân là 9,2 và 5,0 thì ở các nướckém phát triển hai tỷ lệ này tương ứng là 5,0 và 3,1 Riêng ở Mỹ năm

2018, có

khoảng 22.240 bệnh nhân mới được chẩn đoán UTBT và 14.070 ca UTBT tửvong.16

1.1.2 Cơ chế bệnh sinh UTBT

Trong nhiều năm qua, ung thư biểu mô (UTBM) buồng trứng được cho

là phát sinh chủ yếu từ biểu mô bề mặt buồng trứng Tuy nhiên, hai giả thuyếtmới về cơ chế bệnh sinh của ung thư biểu mô thanh dịch độ cao của buồngtrứng đã được đề xuất Trong cơ chế đầu tiên, sự đột biến gen xảy ra trong tếbào biểu mô bề mặt buồng trứng bình thường hoặc các u nang dẫn đến hìnhthành khối UTBM thanh dịch độ cao trực tiếp mà không qua bước trung gianhoặc thông qua con đường hình thành khối u độ thấp bao gồm một số bước

lành tính và không xâm lấn (Hình 1.1) Giả thuyết đầu tiên này được đưa ra

vào những năm 1970 và đề xuất rằng các tế bào biểu mô bề mặt buồng trứngphải trải qua những tác động được lặp đi lặp lại qua nhiều đợt rụng trứng, dẫnđến viêm, tổn thương DNA và bắt đầu hình thành khối u Giả thuyết này mộtphần được hỗ trợ bởi bằng chứng về việc giảm nguy cơ UTBT khi sử dụngthuốc tránh thai, ức chế sự rụng trứng hoàn toàn Các bằng chứng khác cũngủng hộ mối tương quan giữa số chu kỳ rụng trứng trong toàn bộ thời giansống với sự gia tăng tỷ lệ mắc UTBT Tương tự như vậy, UTBT hiếm gặp ởcác loài linh trưởng khác có chu kỳ rụng trứng ít hơn con người Trên thực tế,Godwin và cộng sự là những nhà nghiên cứu đầu tiên thiết lập một thửnghiệm về biểu mô bề mặt buồng trứng chuột và người trong đó sử dụng môhình rụng trứng không ngừng trong ống nghiệm như một cơ chế biến đổi vàtạo khối u Sự bất hoạt của p53 và Rb1 trong tế bào bề mặt buồng trứng chuộtcũng dẫn đến sự biến đổi và hình thành khối u.19

Giả thuyết thứ hai, đã thu hút sự chú ý của các nhà khoa học trong thập

kỷ qua, là mô tả một mô hình tiến triển của UTBT từ các tổn thương tiền ungthư phát triển trong buồng trứng từ ung thư thanh dịch nội biểu mô ống dẫn

trứng, sau đó di căn đến buồng trứng Do tính chất tăng sinh tích cực của cáckhối ung thư thanh dịch độ cao và sự hiện diện sớm của sự bất ổn định về bộgen, người ta giả thuyết rằng các khối ung thư thanh dịch độ cao của buồng

trứng là các tổn thương di căn từ các tế bào biểu mô của ống dẫn trứng (Hình 1.1) Để giảm nguy cơ UTBM thanh dịch buồng trứng độ cao ở phụ nữ mang

đột biến BRCA1/2 là phẫu thuật cắt bỏ vòi trứng hai bên thay vì chỉ cắt bỏ vòitrứng với buồng trứng cùng bên Giảm nguy cơ chính đối với UTBT typ thanhdịch sau phẫu thuật cắt bỏ vòi trứng được nhắc đến trong nhiều nghiên cứu.Những nghiên cứu này không chỉ cho thấy nguồn gốc từ ống dẫn trứng đốivới các khối u thanh dịch mà còn khuyến cáo việc áp dụng phương pháp cắt

bỏ vòi trứng như là biện pháp điều trị dự phòng cho những bệnh nhân có nguy

cơ cao, từ đó đã thôi thúc các nhà nghiên cứu và nhà giải phẫu bệnh khôngngừng tìm kiếm và nghiên cứu về UTBT sớm hoặc các tổn thương tiền u Cáclát cắt vi thể biểu mô ống dẫn trứng sau khi cắt bỏ vòi trứng từ những bệnhnhân có khuynh hướng bị UTBT thấy có các tổn thương với sự thay đổiBRCA1/2 và TP53 giống với khối u thanh dịch độ cao Để theo dõi, đánh giárộng rãi cả ống dẫn trứng và bề mặt buồng trứng từ bệnh nhân đột biến BRCAcũng cho thấy các tổn thương tiền u thường gặp ở bóng loa vòi chứ khôngphải bề mặt buồng trứng Trong các mô hình di truyền trên chuột, sự bất hoạt

có điều kiện của các gen UTBT thường bị đột biến (BRCA1, TP53 và RB1)trong các tế bào biểu mô bề mặt buồng trứng dẫn đến sự hình thành các ubạch huyết chứ không phải UTBM thanh dịch độ cao sau khi được cấy vàobao cơ của chuột Cùng với sự thay đổi gen, các tổn thương ở ống dẫn trứng

từ bệnh nhân BRCA cho thấy kiểu biểu lộ gen như ung thư thanh dịch độ cao.Ngược lại với các tế bào biểu mô bề mặt buồng trứng, sự bất hoạt biểu lộ cácgen BRCA1/2, TP53 hoặc Pten, trong khi PAX8 biểu lộ ở các tế bào tiết củaống dẫn trứng chuột dẫn đến sự phát triển của UTBM thanh dịch độ cao Cácthay đổi bộ gen khác thường gặp

trong bệnh UTBM thanh dịch độ cao như khuếch đại gen CCNE1 và các thayđổi số lượng bản sao khác cũng được tìm thấy trong các tổn thương ung thưthanh dịch nội biểu mô ống dẫn trứng và có thể là một bước đầu trong sự tiếntriển của UTBM buồng trứng thanh dịch độ cao.19

Hình 1.1 Cơ chế bệnh sinh của UTBT 19

1.1.3 Phân loại mô bệnh học UTBT theo WHO 2020

Ấn bản thứ 5 của Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) về phân loại các khối usinh dục nữ được xuất bản vào năm 2020 Mặc dù việc phân loại các khối ubuồng trứng và ống dẫn trứng phần lớn không thay đổi so với ấn bản lần thứ 4xuất bản năm 2014 nhưng trong bảng phân loại mới tổng hợp những điểmquan trọng nhất và những thay đổi trong phân loại của các khối u thanh dịch,khối u không phải thanh dịch và các khối u mô đệm dây sinh dục Điểm mớiquan trọng nhất của ấn bản thứ năm của WHO về phân loại khối u bộ phậnsinh dục nữ liên quan đến việc tích hợp các tiêu chuẩn chẩn đoán hiện đại vớicác thuật toán phân tử miễn dịch để có định nghĩa tốt hơn và khả năng phântích chẩn đoán cao hơn các typ mô bệnh học chính của UTBT.20

Các nghiên cứu gần đây đã mang lại những hiểu biết sâu sắc hơn vềbệnh sinh, sự thay đổi phân tử, các vị trí khác nhau về nguồn gốc của UTBT,

mở ra cơ hội cho phương pháp điều trị được cá nhân hóa hơn và các phươngpháp điều trị nhắm mục tiêu.21-23 Đặc biệt, các nghiên cứu đặc điểm phân tửquy mô lớn đã cải thiện khả năng hiểu biết về bộ gen UTBM buồng trứng, xácđịnh những thay đổi trong từng loại mô bệnh học Dù có những tiến bộ đạtđược trong bệnh học phân tử đến điều trị UTBT, ấn bản thứ năm của phânloại khối u sinh dục nữ của WHO vẫn duy trì hầu hết các chẩn đoán của ấnbản trước, làm phong phú thêm với những phân loại mô bệnh học mới, dữ liệuhóa mô miễn dịch và phân tử Theo phân loại mới nhất của Tổ chức Y tế Thếgiới năm 2020, ít nhất năm loại UTBM buồng trứng chính được xác định dựatrên mô bệnh học, kiểu hình miễn dịch và phân tích phân tử đó là UTBMthanh dịch độ cao (70%), UTBM dạng nội mạc tử cung (10%), UTBM tế bàosáng (6–10%), UTBM thanh dịch độ thấp (5%) và UTBM tuyến nhày (3–4%).20, 24 Một số thực thể hiếm gặp đã được đưa vào (ví dụ: UTBM dạngtrung thận và UTBM hỗn hợp), trong khi những thực thể khác đã bị loại bỏ(ví dụ: UTBM nhày thanh dịch)

1.1.4 Hoá mô miễn dịch trong chẩn đoán UTBM buồng trứng

Mô bệnh học UBTM buồng trứng rất đa dạng và phong phú, trongnhiều trường hợp rất khó phân định typ mô bệnh học UTBT trên tiêu bảnnhuộm H.E vì chúng có nhiều cấu trúc tế bào và mô học giống nhau Hóa mômiễn dịch có giá trị trong những trường hợp khối u có sự chồng chéo về kiểuhình miễn dịch và các dấu hiệu trên mô bệnh học không đặc hiệu Hơn nữa,ngoài các khối u ở buồng trứng rất cần chẩn đoán phân biệt với ung thứ từ nơikhác di căn đến Do đó HMMD có vai trò hỗ trợ định typ mô bệnh học và xácđịnh nguồn gốc khối

u 25

Các nghiên cứu gần đây đã khảo sát giá trị của kháng thể kháng ratin trong việc phân biệt giữa UTBM buồng trứng nguyên phát và UTBM dicăn, đặc biệt là có nguồn gốc từ đại trực tràng Trong UTBM tuyến nguyênphát của buồng trứng gồm UTBM tuyến nhày và tuyến dạng nội mạc tử cungthường có CK7(+), CK20 thường là âm tính, trong khi UTBM tuyến trựctràng nói chung thường có CK7(-)/CK20(+) Tuy nhiên, cần thận trọng vìđôi khi UTBM tuyến trực tràng có CK7 dương tính và một số UTBM tuyếnbuồng trứng nguyên phát, đặc biệt là loại UTBM tuyến nhày âm tính vớiCK7 Khi sử dụng các kháng thể kháng CK để hỗ trợ phân biệt giữa UTBMtuyến nguyên phát và thứ phát, luôn phải có mối tương quan chặt chẽ với cácđặc điểm hình thái Giá trị của kháng thể kháng cytokeratin có thể tăng lênkhi được sử dụng như là một phần trong bảng các dấu ấn chẩn đoán, bao gồmcác kháng thể đối với giúp chẩn đoán nguồn gốc đường tiêu hoá như CDX2,SATB2, CEA và các kháng thể giúp chẩn đoán nguồn gốc buồng trứng, phầnphụ như CA125, PAX8, ER, PR.26

cytoke-Các phân typ mô bệnh học UTBM buồng trứng khác nhau có kiểu hình

miễn dịch khác nhau, được tóm tắt trong Bảng 1.1 27, 28 HMMD gợi ý sự phân

biệt giữa UTBM nguyên phát buồng trứng và khối u di căn buồng trứng có

nguồn gốc từ đường tiêu hoá thấp được thể hiện ở Bảng 1.2 29

Bảng 1.1 Kiểu hình miễn dịch của các typ UTBM buồng trứng.

UTBMthanh dịch

độ cao

UTBMthanh dịch

độ thấp

UTBM tếbào sáng

UTBM tuyến dạng nội mạc tử cung

UTBMtuyến nhày

Typ hoang dã hoặc (+) lan tỏa

Typ hoangdã

Typ hoangdã

-Bảng 1.2 Các dấu ấn dùng để phân biệt UTBT nguyên phát với di căn

UTBM tuyến đường tiêu hoá thấp

Dấu ấn UTBM tuyến

buồng trứng không phải typ nhày

UTBM tuyến nhày buồng trứng

UTBM tuyến đường tiêu hoá thấp di căn buồng trứng

1.2 Phân lập và nuôi cấy tế bào UTBT

1.2.1 Phân lập và nuôi cấy tế bào

1.2.1.1 Khái niệm

- Phân lập tế bào là quá trình được thiết lập để tạo ra dòng tế bào bằngcách đưa các tế bào khỏi cơ thể động vật hoặc thực vật vào môi trường nhântạo với đầy đủ các yếu tố thuận lợi cho sự tăng trưởng của tế bào Các tế bàođược lấy ra trực tiếp từ mô sau đó được phân tách bằng các phương tiện cơhọc hoặc enzym trước khi nuôi cấy Quá trình này bao gồm phân tách tế bào

từ mô hoặc dịch cơ thể, nuôi cấy, tăng sinh và cấy chuyển, thu hoạch và bảoquản mẫu tế bào.30

- Nuôi cấy tế bào là một phần của quá trình phân lập tế bào trong đó các

tế bào được phát triển trong các điều kiện được kiểm soát, thường là bênngoài môi trường tự nhiên của chúng Nuôi cấy tế bào còn gồm quá trình đưacác dòng tế bào có sẵn vào môi trường nuôi cấy

- Tế bào sơ cấp: Là tế bào trong giai đoạn đầu của quá trình phân lậpsau khi các tế bào được phân tách khỏi mô và được nuôi cấy trong các điềukiện thích hợp cho đến khi chúng chiếm hết chất nền sẵn có Khi đó, các tếbào được tách ra và chuyển chúng sang một đĩa/chai nuôi cấy mới với môitrường nuôi cấy mới để cung cấp thêm không gian cho tế bào tiếp tục tăngtrưởng.30

- Dòng tế bào: Các tế bào sơ cấp thường có đời sống ngắn trong môitrường nuôi cấy, nhưng khi trải qua một số lần cấy chuyển, các tế bào có khảnăng sinh trưởng cao nhất sẽ chiếm ưu thế tạo thành dòng tế bào Dòng tế bào

có thời gian sống dài và có độ đồng nhất về kiểu gen cũng như kiểu hìnhtrong quần thể.30

- Chủng tế bào: Nếu một quần thể con của một dòng tế bào được chọnlọc tích cực từ quá trình nuôi cấy bằng cách nhân bản hoặc bằng một sốphương pháp khác, dòng tế bào này sẽ trở thành một chủng tế bào Mộtchủng tế bào

thường được nhận những thay đổi di truyền bổ sung từ dòng tế bào gốc banđầu.30

1.2.1.2 Các giai đoạn phát triển của tế bào được phân lập, nuôi cấy

Các dòng tế bào đã phân lập thuộc loại đơn lớp hoặc loại tế bào nổi.Các tế bào trong quá trình nuôi cấy có thời gian nhân đôi duy nhất được xácđịnh bởi chu kỳ tế bào và các yếu tố sinh lý khác Tất cả các tế bào được nuôicấy đều trải qua các giai đoạn phát triển khác nhau, bao gồm pha chậm, phatăng trưởng, pha duy trì, pha thoái triển Pha tăng trưởng với sự gia tăng sốlượng tế bào theo cấp số nhân sẽ cung cấp cho chúng ta những tế bào khỏemạnh nhất và vật liệu tế bào tốt nhất cho nhiều nghiên cứu về tế bào.31

Điều quan trọng là phải ghi lại các đặc điểm tăng trưởng của dòng tếbào được sử dụng trước khi bắt đầu bất kỳ thí nghiệm nào Một sự thay đổitrong sự phát triển của tế bào có thể chỉ ra một vấn đề nghiêm trọng trongdòng tế bào và nếu chúng không được phát hiện sẽ dẫn đến những tác độngbất lợi cho kết quả thí nghiệm

Một đường cong tăng trưởng điển hình cho các tế bào được nuôi cấyhiển thị một mô hình tăng sinh của tế bào theo thời gian Các pha tăng trưởngliên quan đến các tế bào bình thường được xác định gồm:

1 Pha chậm là giai đoạn các tế bào không phân chia Trong giai đoạnnày các tế bào thích nghi với các điều kiện nuôi cấy và độ dài của giai đoạnnày sẽ phụ thuộc vào pha tăng trưởng của dòng tế bào tại thời điểm cấychuyển và cả mật độ khi nuôi cấy

2 Pha tăng trưởng là giai đoạn các tế bào tăng sinh tích cực và tăng sốlượng tế bào theo cấp số nhân Quần thể tế bào được coi là phát triển tốt nhất

ở giai đoạn này; do đó, nên đánh giá chức năng tế bào ở pha này Mỗi dòng tếbào sẽ thể hiện động học tăng sinh tế bào khác nhau trong pha tăng trưởng và

do đó nó là giai đoạn tối ưu để xác định thời gian nhân đôi của quần thể Tếbào

cũng thường được tách ra và chuyển sang đĩa nuôi cấy mới vào giai đoạnmuộn của pha tăng trưởng Nếu cấy chuyển tế bào quá muộn có thể dẫn đếnquá đông tế bào trong một môi trường chật hẹp và nghèo dinh dưỡng do đócác tế bào có thể bị chết và giảm sức sống cho lần cấy chuyển tiếp theo.

3 Pha cân bằng hoặc pha tĩnh là giai đoạn sự tăng sinh tế bào bị chậmlại do tế bào trở nên hợp lưu Ở giai đoạn này, số lượng tế bào trong chu trìnhhoạt động giảm xuống 0-10% và các tế bào cũng dễ bị tổn thương nhất

4 Pha thoái triển là giai đoạn tế bào chết chiếm ưu thế Trong giai đoạnnày có sự giảm đáng kể số lượng tế bào sống sót Tế bào chết không phải dogiảm chất dinh dưỡng mà là do tiến trình tự nhiên của chu kỳ tế bào

Hình 1.2 Các giai đoạn phát triển của tế bào được nuôi cấy 32

1.2.1.3 Các dạng phát triển của tế bào được phân lập, nuôi cấy

Về phương thức sinh trưởng, nuôi cấy tế bào có hai dạng, phát triển ởdạng huyền phù (dưới dạng tế bào đơn lẻ hoặc cục nhỏ nổi tự do trong môitrường nuôi cấy) hoặc dạng đơn lớp bám vào đáy bình nuôi cấy Hình thứcsinh trưởng được thực hiện bởi một dòng tế bào phản ánh nguồn gốc mô mà tếbào được lấy ra nuôi cấy Ví dụ, các dòng tế bào có nguồn gốc từ máu (bệnhbạch

cầu, ung thư hạch) có xu hướng phát triển ở dạng huyền phù trong khi các tếbào có nguồn gốc từ mô đặc (phổi, thận) có xu hướng phát triển dưới dạngđơn lớp.

1.2.1.4 Đặc điểm hình thái của tế bào phân lập, nuôi cấy

Các tế bào nuôi cấy có các dạng hình thái khác nhau được phân ra dựavào kiểu hình và hình dáng tế bào, thường có ba dạng chính sau đây.30

- Dạng biểu mô: Dòng tế bào có hình đa diện, với kích thước khá đồngdạng, loại này thường phát triển bám đáy

- Dạng nguyên bào sợi: Thường là những tế bào dài, lưỡng cực hoặc đacực, thường phát triển bám đáy

- Dạng nguyên bào lympho: Tế bào dạng hình cầu và thường phát triểndạng huyền phù hay dạng tế bào nổi

- Ngoài ra còn một số kiểu hình thái khác như dạng tế bào nội mô, dạng

tế bào thần kinh đều thuộc nhóm tế bào bám đáy

Các dòng tế bào có thể được phân loại là dạng nội mô như BAE-1,dạng biểu mô như HeLa, dạng tế bào thần kinh như SH-SY5Y, hoặc dạngnguyên bào sợi như MRC-5 và hình thái của chúng phản ánh nguồn gốc tếbào trong cơ thể

1.2.2 Phân lập và nuôi cấy tế bào UTBT

Phân lập tế bào UTBT từ khối u nguyên phát của bệnh nhân hay từ dịch

cổ trướng và khối u buồng trứng di căn đã được tiến hành từ rất sớm, tạo ranhiều dòng tế bào khác nhau có nguồn gốc từ các typ mô bệnh học khác nhaunhư typ thanh dịch độ cao, typ tuyến nhày, typ tế bào sáng, typ dạng nội mạc

tử cung Các dòng tế bào UTBT được phân lập thành công được sử dụng đểnghiên cứu in vitro về những bất thường liên quan đến kiểu hình ác tính, cơchế phát triển của ung thư và thử nghiệm thuốc Tuy nhiên phân lập tế bào vàcác

thử nghiệm trong ống nghiệm trên các dòng tế bào UTBT cũng gặp không ítkhó khăn bởi sự không đồng nhất của quần thể tế bào u.3, 33-41

Từ những năm 1984, Auersperg và cộng sự khi phân lập tế bào biểu mô

bề mặt buồng trứng ở người sử dụng phương pháp cơ học để tách tế bào biểu

mô bề mặt khỏi mô buồng trứng.42 Đến năm 2002 Langdon và Lawrie đã viết

rõ quy trình phân lập tế bào UTBT trong đó cũng nói rõ cách thức phân tách

tế bào từ mẫu mô u bằng sử dụng các dao mổ có mũi vát rất dễ dàng cắt nhỏ

mô u và nếu số lượng các cụm tế bào nhỏ được tạo ra đủ thì đủ để tạo ra mộtdòng tế bào.43 Sau này các nghiên cứu phân lập thành công các dòng tế bàoUTBT từ khối u đặc của bệnh nhân với các typ mô bệnh học khác nhau đã đềcập đến phương pháp sử dụng enztm tiêu huỷ protrin để phân tách các tế bào

u trước khi đưa vào môi trường nuôi cấy Trong nghiên cứu của ThanasakSueblinvong năm 2012 đã đưa ra một phương pháp đơn giản, nhanh chóng và

có thể lặp lại để phân lập và xác định đặc điểm của tế bào UTBT từ khối uđặc Kết quả cho thấy việc phân tách tế bào ung thư bằng enzym trong 30phút với dispase II thu được tế bào UTBM buồng trứng sống cao nhất, vớinăng suất đáng kể và không có nguyên bào sợi Chúng phát triển lên đến sáugiai đoạn cấy chuyển và duy trì khả năng hình thành các cấu trúc giống nhưhình cầu trong agarose Ngoài ra, chúng có thể được sử dụng để nghiên cứu

về mặt di truyền và để sàng lọc thuốc Đáng chú ý, việc phân lập tế bào UTBT

từ bệnh phẩm u đặc bằng phương pháp enzym có ưu điểm là cho phép phânlập tế bào ung thư từ giai đoạn đầu của UTBT cũng như lấy tế bào từ các vị tríUTBT nguyên phát và / hoặc khối u di căn.44 Tuỳ vào điều kiện các phòngnuôi cấy tế bào mà lựa chọn phương pháp tách mẫu tế bào từ khối u đặc chophù hợp

Hiện nay, một số lượng lớn các dòng tế bào UTBT được phân lập và sửdụng rộng rãi trong các nghiên cứu khác nhau về UTBT, được tổng hợp theo

Bảng 1.3 Các dòng tế bào này được phân lập từ ba nguồn chính là khối u đặc

nguyên phát, dịch cổ trướng và khối UTBT di căn Nhiều dòng tế bào trong

đó được phân lập trong các giai đoạn bệnh và giai đoạn điều trị khác nhau, typmô

bệnh học khác nhau và có thể cá thể hoá cho các tình huống cụ thể của ngườibệnh Các dòng tế bào thương mại được bảo quản và lấy ra nuôi cấy nhằm tạo

ra số lượng lớn tế bào UTBT dùng cho các thử nghiệm khác nhau.43

Bảng 1.3 Các dòng tế bào UTBT 43

STT Tên dòng tế bào Mô bệnh học bệnh Mẫu

phẩm

Điều trị trước lấy mẫu

Tác giả/năm

1 PE01 vàPE04 UTBM thanhdịch độ cao Dịch cổtrướng Hoá chất Wolf vàcs/1987

2 PE06 vàPE016 UTBM thanhdịch độ cao Dịch cổtrướng Hoá chấtvà xạ trị và cs/1988Langdon

4 PEA2 UTBM tuyếnkém biệt hoá Dịch cổtrướng Hoá chất và cs/1988Langdon

T014

UTBM thanhdịch độ thấp

Dịch cổtrướng và

u đặc dicăn

và cs/1988

6 PE023 UTBM thanhdịch độ thấp Dịch cổtrướng Hoá chất và cs/1988Langdon

10 OVCAR-3 UTBM thanhdịch độ cao Dịch cổtrướng Hoá chất và cs/1983Hamilton

11 OVCAR-4 vàOVCAR-5 UTBM tuyến Dịch cổtrướng và khôngHoá chất

điều trị

Louie vàcs/1985

12 OAW 28 vàOAW 42 UTBM tuyếnvà UTBM

thanh dịch

Dịch cổtrướng Hoá chất Hills vàcs/1989

13 41M UTBM tuyến Dịch cổtrướng điều trịKhông Wilson vàcs/1996

14 59M và CH1

UTBM tuyếndạng nội dạng

tử cung vàUTBM thanhdịch

Dịch cổtrướng

Khôngđiều trị vàHoá chất

Hills vàcs/1989

15 138D, 253Dvà 180D

UTBM thanhdịch và UTBMtuyến

Dịch cổ

Wilson vàcs/1996

16 200D UTBM thanhdịch U đặc Không Wilson vàcs/1996

và UTBMtuyến

Dịch cổtrướng vàhhối u

Khôngđiều trị vàhoá chất

Buick vàcs/1985

U đặc dicăn vàdịch màngphổi

Khôngđiều trị

Woods vàcs/1979

Dịch cổtrướng

Khôngđiều trị

và hoá xạtrị

Woods vàcs/1979

21 HTOA và UTBM thanhdịch độ thấp U nguyênphát Không Ishiwata vàcs/1987

23 DO-s UTBM thanhdịch độ thấp Dịch cổtrướng - Briersb vàcs/1989

1.3 Mô hình gây UTBT thực nghiệm

1.3.1 Các dòng chuột thiếu hụt miễn dịch

Bước đột phá tiếp theo trong lĩnh vực tạo mô hình chuột thực nghiệm là

phát hiện một đột biến tự phát ở chuột chủng C.B17 gọi là “scid” (Prkdc scid,

protein kinase DNA activated catalytic polypeptide) Đột biến scid chủ yếu

ngăn chặn sự phát triển trưởng thành của tế bào lympho T và lympho B của

hệ thống miễn dịch đặc hiệu Một số tác giả đã lai tạo chuột có đột biến scidvới một số chủng nền, bao gồm cả chủng NOD/Lt Chủng NOD có khiếmkhuyết miễn dịch bẩm sinh, bao gồm giảm hoạt động của các tế bào diệt tựnhiên, giảm mức độ kích hoạt các đại thực bào, sự bất thường trong phát triển

và chức năng của tế bào đuôi gai, và sự thiếu vắng của bổ thể Kết hợp cáckhiếm khuyết miễn dịch bẩm sinh với việc cắt bỏ đáp ứng miễn dịch đặc hiệu

bằng cách sử dụng các đột biến Prkdc scid , Rag1 null , hoặc Rag2 null sẽ được tạo ra

một chủng chuột thiếu hoàn toàn đáp ứng miễn dịch đặc hiệu và thiếu trầmtrọng miễn dịch bẩm sinh Sự đột biến này gây suy giảm nghiêm trọng quátrình phát triển và chức năng của tế bào lympho T và B, ngừng quá trình pháttriển tế bào NK Dòng chuột này cũng được sử dụng để ghép các dòng tế bàongười với khả năng tránh thải ghép, tiếp nhận nhiều hơn các tế bào tạo máu và

các tế bào khối u chính của người Dòng chuột lai NOD/Scid được tạo bởi lai giữa hai dòng chuột NOD (gây đái tháo đường) và dòng Scid Tuy nhiên

chuột này không bị đái tháo đường, khả năng hoạt động của tế bào NK thấp.Chuột có khả năng tiếp nhận các tế bào gốc tạo máu và thường để phục vụ các

nghiên cứu về HIV Khi so sánh trực tiếp với chuột C.B17-scid, chuột scid tăng khả năng hỗ trợ cấy ghép với những khối u thể đặc của người cũng

NOD-như với u lympho và bệnh bạch cầu Tuy nhiên, nhiều loại tế bào ung thư vàcác loại u tạo máu ác tính của người vẫn ghép dị loài thất bại ở chuột NOD-

scid, phần lớn là do tế

bào giết tự nhiên vẫn còn hoạt động và chức năng miễn dịch bẩm sinh còn sót lại.45

Dòng chuột Rag được tạo bởi sự thiếu hụt gen Rag-1 hoặc Rag-2 có vai trò kích hoạt tái tổ hợp gen Gen Rag bị bất hoạt dẫn đến mất khả năng biệt

hóa của dòng tế bào lympho T và B Dòng chuột Rag được áp dụng trongnghiên cứu chức năng các gen của quá trình biệt hóa lympho T và B, cũngnhư nghiên cứu về HIV/AIDS Và dòng chuột này cũng có thể áp dụng đểthay thế chuột nude hoặc Scid.45

Chuột nude không có lông từ khi sinh ra cho đến suốt cuộc đời vàhoàn toàn không có tuyến ức và do đó chúng bị thiếu dòng tế bào lympho T.46

Sự phát triển lông bất thường ở chuột nude đã được Eaton (1976) mô tả Sựvắng mặt của tuyến ức là do tuyến ức phát sinh từ biểu bì của túi hầu thứ bakhông phát triển Do không có chức năng miễn dịch phụ thuộc vào tuyến ức,những con chuột nude đã được sử dụng làm động vật cấy ghép khối u ởngười Thiếu tuyến ức ở chuột dẫn đến nhiều khiếm khuyết trong hệ thốngmiễn dịch, bao gồm sự suy giảm tế bào lympho ở các khu vực phụ thuộc vàotuyến ức như các hạch bạch huyết và lá lách, giảm đáng kể một quần thể tếbào lympho bao gồm gần như toàn bộ các tế bào lympho B, đáp ứng bìnhthường IgM liên quan đến các kháng nguyên phụ thuộc tuyến ức, phản ứng rấtkém với các kháng nguyên phụ thuộc tuyến ức, bao gồm cả việc không thảighép da, khối u dị sinh và ngoại sinh và tăng nguy cơ nhiễm trùng.47-49

Các nghiên cứu ban đầu cho thấy chuột nude rất hữu ích cho việc cấyghép trực tiếp các khối u đặc của người Hình thái và chức năng, các đặc điểmcủa khối u vẫn được duy trì trong quá trình cấy ghép nối tiếp.50 So với những

con chuột nude khác hoặc chuột thiếu hụt miễn dịch, BALB/c-nu có tỷ lệ phát

triển tương đối cao khi ghép khối u.51 Lựa chọn dòng chuột nhắt BALB/c

(chủng

chuột có đột biến Foxn1), để tạo mô hình chuột mang khối ung thư người với

các ưu điểm:

(1) Hệ miễn dịch của chuột chỉ bị thiếu hụt dòng tế bào lympho T,ngoài ra các dòng tế bào khác vẫn còn như các bạch cầu hạt, tế bào NK Vớiđặc điểm này, chuột vừa có thể bảo đảm ghép thành công khối ung thư người,đồng thời có khả năng chịu đựng nhất định với việc vận chuyển xa và môitrường khí hậu mới tại Việt Nam

(2) Chuột BALB/c có chi phí vừa phải, giá thành bằng 1/3-1/2 so vớicác dòng chuột khác

1.3.2 Mô hình tạo khối u buồng trứng người trên chuột thiếu hụt miễn dịch

Các mô hình thực nghiệm về bệnh có tầm quan trọng không chỉ đểhiểu các yếu tố sinh học và di truyền ảnh hưởng đến các đặc điểm kiểu hìnhcủa bệnh mà còn được sử dụng làm cơ sở để xây dựng các chiến lược canthiệp hợp lý Các dòng tế bào UTBT có nguồn gốc từ dịch cổ trướng hoặckhối u buồng trứng nguyên phát đã được sử dụng rộng rãi và có thể rất hiệuquả để nghiên cứu các quy trình kiểm soát điều hòa tăng trưởng và hóa trị.Các mô hình động vật giúp chúng ta hiểu biết thêm về bệnh nguyên, bệnhsinh của UTBT Một số mô hình động vật phát triển khối u buồng trứng mộtcách tự nhiên và một số mô hình khác kiểm soát các yếu tố sinh sản khácnhau hoặc tiếp xúc với chất độc môi trường đã được chứng minh là thúc đẩy

sự hình thành khối u buồng trứng Gần đây, các nghiên cứu về promoter thúcđẩy sự biểu lộ gen trong tế bào biểu mô bề mặt buồng trứng đang mang lại cơhội mới cho việc tạo ra các mô hình chuột biến đổi gen UTBT.52

Cấy ghép dị loài các tế bào biểu mô bề mặt buồng trứng được biến đổitrong ống nghiệm đã được nhiều nhà khoa học quan tâm Các tế bào biểu mônày được coi là tế bào nguồn gốc của phần lớn các bệnh UTBT chủ yếu dựatrên các phân tích mô học và hóa mô miễn dịch của các mẫu lấy từ bệnh nhân

Một số mô hình thử nghiệm gần đây với việc sử dụng các tế bào này trongống nghiệm đã cung cấp thêm những thông tin hỗ trợ cho ý tưởng đó Nuôicấy tế bào sơ cấp của tế bào biểu mô bề mặt buồng trứng ở người đượcAuersperg và cộng sự lần đầu tiên báo cáo vào năm 1984 và nhóm nghiên cứu

kể từ đó đã phát triển một số mô hình in vitro về chất sinh UTBM buồng

trứng Việc đưa virus sarcoma ở chuột Kirsten vào tế bào biểu mô bề mặtbuồng trứng của chuột có thể tạo ra các khối u dạng nội mạc tử cung sau khitiêm dưới da hoặc trong phúc mạc của chuột bị ức chế miễn dịch.42, 52

Sự phức tạp và không đồng nhất của UTBT rất khó tái tạo trong cácnghiên cứu trong ống nghiệm, điều này không thể làm sáng tỏ đầy đủ các sựkiện phân tử liên quan đến sự hình thành khối u và sự di căn của bệnh Mặc

dù nhiều thể mô bệnh học của UTBT đang được điều trị bằng các liệu pháp vàphẫu thuật tương tự nhau, nhưng trên thực tế, chúng được đặc trưng bởi cáckiểu hình riêng biệt, tế bào có nguồn gốc từ những thay đổi cơ bản về gen và

hệ gen Do đó, sự phát triển của các phương pháp điều trị được cá thể hóanhằm cải thiện việc chăm sóc và tiên lượng bệnh nhân, sẽ mang lại rất nhiềulợi ích khi hiểu rõ hơn về sự khác biệt giữa các dưới nhóm bệnh khác nhau

Để thực hiện điều này, các mô hình động vật của tất cả các phân typ UTBM

buồng trứng cần được tạo để cung cấp nền tảng in vivo chính xác cho nghiên

cứu và thử nghiệm các phương pháp điều trị đích và liệu pháp miễn dịch Cả

mô hình chuột được biến đổi gen và mô hình ghép dị loài đều có khả năngnâng cao hiểu biết của chúng ta về các cơ chế chính sinh ung thư, đồng thờicung cấp cái nhìn sâu sắc về các phương thức điều trị Trong khi các mô hình

di truyền có thể phù hợp hơn để kiểm tra các chức năng và tương tác gây ungthư trong quá trình hình thành khối u, các phương pháp ghép dị loài lấy từbệnh nhân có thể là một mô hình ưu việt để đánh giá hiệu quả của thuốc, đặcbiệt là trong các thử nghiệm lâm sàng đồng thời, do chúng tương tự với cáckhối u ban đầu

Mặc dù các mô hình này cho phép đánh giá các ung thư mà sự kíchhoạt của chúng có thể góp phần vào sự phát triển của UTBM buồng trứng,nhưng phương pháp này không cho phép tìm hiểu các sự kiện ban đầu trongviệc hình thành khối u ở chuột khi các khối u phát sinh tại chỗ Tuy nhiên,

việc thiết lập các mô hình in vitro của các tế bào biểu mô bề mặt buồng trứng

bình thường và đã được biến đổi, đồng thời sử dụng các phương pháp tiếp cậnphân tử như microarray hoặc HSS (Suppression subtractive hybridization) đểxác định các kiểu biểu lộ gen, giúp cho phân biệt tế bào biểu mô bề mặtbuồng trứng bình thường và tế bào UTBT Những dữ liệu này sẽ hữu ích choviệc làm sáng tỏ các sự kiện phân tử liên quan đến sự biến đổi tế bào biểu mô

bề mặt buồng trứng.52

Mô hình ghép dị loài, trong đó các tế bào UTBT được tiêm dưới dahoặc vào khoang phúc mạc đã được sử dụng rộng rãi để thử nghiệm cácphương pháp điều trị mới hoặc các phác đồ sửa đổi để sử dụng các loại thuốchóa trị liệu tiêu chuẩn.53 Một số mô hình chuột tận dụng lợi thế của sự hiệndiện của một túi ở buồng trứng, một cấu trúc giống như túi bao bọc buồngtrứng của loài gặm nhấm Trong nhiều thập kỷ, các nhà nghiên cứu đã sửdụng không gian trong túi để cấy ghép dị loài buồng trứng hoặc để tạo điềukiện cho buồng trứng tiếp xúc trực tiếp với các yếu tố khác nhau Đối với môhình chuột UTBT, việc tiêm tế bào UTBT vào khoang trong túi dẫn đến hìnhthành khối u có thể được xem là sinh lý hơn, vì tế bào ung thư được đặt trựctiếp trong môi trường nơi các khối u buồng trứng thường phát sinh.54

Từ năm 1989 nghiên cứu của Massazza tạo mô hình UTBM buồngtrứng người (HOC) trên chuột bằng cách tiêm dưới da và tiêm vào khoangmàng bụng ở chuột nude để nghiên cứu các đặc điểm sinh học của các mẫu ughép dị loài HOC8 và HOC18, có nguồn gốc tương ứng từ một khối unguyên phát của buồng trứng và dịch màng phổi (từ 2 bệnh nhân khác nhau)được cấy ghép bằng

cách tiêm dưới da ở chuột nude HOC10 và HOC22, có nguồn gốc từ dịch cổtrướng của 2 bệnh nhân, sau đó tiêm vào khoang màng bụng ở chuột nude.Các tế bào HOC18, HOC8 và HOC22 tạo ra khối u ngày càng phát triển saukhi tiêm dưới da nhưng tế bào HOC10 từ dịch cổ trướng không phát triểnthành khối u sau tiêm dưới da chuột nude Các tế bào có nguồn gốc từ HOC18chỉ tạo ra khối ung thư dạng biểu mô sau khi tiêm vào khoang màng bụng chochuột nude, trong khi các tế bào HOC8 tạo ra cả cổ trướng và khối u dạngbiểu mô Cả hai dòng tế bào từ dịch cổ trướng HOC10 và HOC22 tạo ra cổtrướng ở chuột nude, nhưng chỉ HOC22 hình thành khối u dạng biểu mô Cácđặc điểm mô bệnh học của khối u nguyên phát của bệnh nhân vẫn tồn tại ởnhững khối u phát triển trên chuột nude, bất kể vị trí cấy ghép khối u Thửnghiệm điều trị với cisplatin, adriamycin và cyclophosphamid cho khối u từcác tế bào HOC8 và HOC18 phát triển sau tiêm dưới da và HOC22 vàHOC10 phát triển sau tiêm màng bụng HOC8 cho thấy một phản ứng đáng

kể với DDP và hầu như không nhạy cảm với ADR và CTX HOC18 chỉ chothấy khối u bị ức chế phát triển mức độ trung bình với cả 3 loại thuốc Chuộtmang HOC10 và HOC22 cổ trướng có thời gian sống sót kéo dài sau khi điềutrị DDP và ADR.53

Năm 2012, Học viện Quân y đã thành công xây dựng mô hình thựcnghiệm bởi đề tài cấp nhà nước “Nghiên cứu ứng dụng quy trình tạo khối ungthư người trên chuột thiếu hụt miễn dịch bằng kỹ thuật ghép dị loài” Đây làtiền đề cho các thử nghiệm tiền lâm sàng trên ung thư sau này Đề tài đã ứngdụng thành công quy trình tạo khối ung thư người trên chuột thiếu hụt miễndịch với các loại ung thư gan, phổi, tiền liệt tuyến, đại tràng và vú.6, 7, 10, 55, 56

Phát triển từ kết quả đề tài nhà nước trên, mô hình UTBT người từ dòngOVCAR- 3 trên chuột nude được xây dựng thành công năm 2015.14 Tuy nhiêntại Việt Nam hiện chưa có dòng tế bào UTBT nào được lấy từ bệnh nhân ngườiViệt cho nên cũng chưa có mô hình UTBT đặc trưng cho người Việt Nam

1.4 Virus vaccin sởi và liệu pháp tiêu huỷ khối u (OLV) của virus vaccin sởi trong điều trị ung thư và UTBT

1.4.1 Virus vaccin sởi (MeV) và thụ thể của MeV trong liệu pháp tiêu huỷ khối u

Mặc dù chủng virus sởi hoang dại được ghi nhận là có khả năng tiêudiệt một số loại ung thư nhưng bệnh sởi là một bệnh có khả năng lây lannhanh tạo nên các vụ dịch lớn và đôi khi gây tử vong do suy hô hấp cấp, nhất

là đối với trẻ em.57,58 Vì sự an toàn cho cộng đồng nên việc sử dụng chủngvirus sởi hoang dại để điều trị các bệnh ung thư thường không được hội đồng

y đức chấp thuận Hơn nữa, hầu hết các khối u ác tính của người thiếu thụ thểđặc hiệu đối với virus sởi hoang dại.59,58 Trong liệu pháp OLV hiện nay, sửdụng các chủng MeV thuộc các dòng Edmonston bao gồm một số chủng biếnđổi thích nghi trong thí nghiệm, liên quan chặt chẽ nguồn gốc từ một chủnglâm sàng lấy từ họng của một đứa trẻ có tên David Edmonston (năm 1954)được cấy truyền rộng rãi trong nuôi cấy tế bào, kết quả là giảm độc lực và ítkhả năng gây bệnh.57 Ban đầu, các MeV chủng Edmonston (MeV-Edm) đãđược cấp phép vào năm 1963, nhưng lại là tác nhân gây sốt và phát ban bệnhsởi ở trẻ em.60 MeV-Edm này đã được cấy truyền trong các tế bào khácnhau, tạo ra chủng MeV giảm độc lực hơn và không gây bệnh MeV là mộtvirus RNA sợi đơn, không phân đoạn và âm tính thuộc giống Morbilliviruscủa họ Paramyxoviridae.61 Vaccin MeV sống giảm độc lực, chẳng hạn nhưchủng Schwarz, được tạo ra từ một phân lập lâm sàng bằng cách truyền rộngrãi qua nuôi cấy nguyên bào sợi phôi gà.62 Loại vaccin này đã được sử dụngcho hàng trăm triệu trẻ em kể từ những năm 1970 và được coi là một trongnhững loại vaccin an toàn và hiệu quả nhất cho con người Hơn nữa, bộ genMeV rất ổn định và chưa bao giờ quan sát thấy sự chuyển ngược của cácchủng vaccin sang dạng gây bệnh.63

Virus ly giải ung thư (Oncolytic virus - OLV), một liệu pháp chống ungthư đã được chứng minh lâm sàng là có thể làm giảm khối u bằng cách tiêudiệt có chọn lọc các tế bào khối u (được gọi là oncolysis) Khi OLV giảiphóng ra khỏi tế bào ung thư gây ly giải và phá hủy tế bào khối u Các OLVđược giải phóng tiếp tục lây nhiễm vào các tế bào ung thư khác, tạo ra một lànsóng tấn công của OLV vào các tế bào khối u Đồng thời quá trình này sẽ kíchthích đáp ứng miễn dịch chống ung thư Dòng MeV là một trong những OLVđược nghiên cứu rộng rãi nhất, MeV nhằm vào các tế bào khối u bằng cáchliên kết có chọn lọc với protein màng CD46, thường được biểu lộ quá mứctrong các khối u ác tính MeV là một morbillivirus chuỗi âm, có vỏ bọc, xâmnhập vào tế bào thông qua hai protein bề mặt của virus, đó là proteinhemagglutinin (H) và protein tổng hợp (F) Khi liên kết glycoprotein H vớithụ thể tế bào của MeV, phản ứng tổng hợp màng qua trung gian F được kíchhoạt Các thụ thể tế bào đối với MeV gây bệnh là SLAMF1 (hay CD150) trên

tế bào miễn dịch và nec- tin-4 (hay PVRL4) trên tế bào biểu mô, còn MeVhoặc các chủng MeV thích nghi trong phòng thí nghiệm thì sử dụng CD46làm thụ thể.64

Chủng MeV sống, giảm độc lực xâm nhập tế bào có tính chọn lọc, sửdụng các phân tử CD46 là thụ cảm thể đặc hiệu để xâm nhập vào các tế bào,các phân tử CD46 này được thấy rộng rãi và biểu lộ ở mức độ thấp trong các

tế bào có nhân.65-67 CD46 và protein điều hòa bổ thể khác (CRP, CD55 vàCD35) chặn các dòng hoạt hóa bổ thể ở giai đoạn hoạt hóa C3, sự có mặt củachúng ở mật độ thấp là để bảo vệ các mô bình thường bởi tổn thương do các

bổ thể đã hoạt hóa Vấn đề này đã được chứng minh khi nhiều loại tế bào khối

u biểu lộ các phân tử CD46 để thoát khỏi sự gây độc tế bào phụ thuộc vào bổthể.68, 69 Nhiều loại tế bào ung thư biểu lộ CD46 ở mật độ cao, do đó MeV cómột ái tính tự nhiên với các tế bào ung thư và khi đó MeV hình thành ấn lõm

để xâm

nhập và tiêu diệt những tế bào này, trong khi các tế bào khỏe mạnh có biểu lộCD46 thấp thì không bị tổn thương.67,70

Tất cả các chủng Edmonston của virus sởi biến đổi trong đó sử dụngthụ thể CD46 làm trung gian cho quá trình xâm nhập vào tế bào và thúc đẩyquá tạo hợp bào Hiệu ứng phá hủy tế bào của MeV đặc trưng bởi sự hình thànhhợp bào (tế bào đa nhân khổng lồ) là do sự tương tác các hemaglutinin vàprotein kết hợp của virus từ các tế bào bị nhiễm virus với các tế bào lân cận.71,72

1.4.2 Điều trị ung thư và UTBT bằng MeV trên mô hình thực nghiệm

1.4.2.1 Các nghiên cứu trên thế giới sử dụng liệu pháp OLV của virus vaccin sởi trong điều trị ung thư trên mô hình thực nghiệm

Trong số các virus có khả năng ly giải tế bào ung thư, MeV được nghiêncứu khá toàn diện Các nghiên cứu đã cho thấy MeV có khả năng ly giải tế

bào ung thư in vitro, trên chuột thiếu hụt miễn dịch mang khối ung thư người (in vivo) và đang tiến hành các thử nghiệm lâm sàng trên người mang lại kết

quả đầy hứa hẹn.73-75 Các nghiên cứu tiền lâm sàng đánh giá khả năng OLVcủa dòng Edmonston giảm độc lực được tiến hành lần đầu tiên vào cuối thế

kỷ 20 Sử dụng chủng Edmonston-B biến đổi gen từ một gen của các Edm và sau đó được tăng sinh trên các tế bào vero Chủng Edm-tag biến đổi

MeV-gen cũng được chọn lọc để phá hủy các tế bào khối u của người nuôi cấy in vitro.76, 77 Nghiên cứu của Zhang và cộng sự đã chứng minh hiệu quả điều trị

của MeV với u tế bào gan nguyên phát ở người cả trong in vitro và in vivo.78

Hoạt động của liệu pháp OLV sử dụng MeV biến đổi gen để điều trị ung thư

đã được thử nghiệm trên một số mô hình chuột mang khối ung thư người khácnhau bao gồm: ung thư hạch, đa u tủy, u thần kinh đệm, đại trực tràng, ungthư vú, ung thư gan, ung thư tiền liệt tuyến, ung thư không tế bào nhỏ củaphổi và UTBT đã mở ra nhiều hi vọng trong nghiên cứu điều trị ung thư 78-81

Bảng 1.4 tổng hợp một số nghiên cứu trên thế giới về kết quả điều trị bằng

MeV các loại ung

thư trên mô hình gây ung thư người thực nghiệm in vivo trong đó có ung thư

buồng trứng

Bảng 1.4 Các thử nghiệm điều trị ung thư bằng MeV trên mô hình động vật tạo khối ung thư người trên thế giới

Làm chậm quá trình phát triển khối u

có ý nghĩa thống kê ( p=0,005) và kéodài thời gian sống thêm của chuột( p=0,001)

chuột nude

MeV-CEA vàMeV biến đổi gene

mã hóa chất mangiode kiềm tuyếngiáp (MeV-NIS)

MV-Edm không gây độc cho chuột.Liệu pháp MV-Edm tái tổ hợp ứcchế sự phát triển của khối u và kéodài thời gian sống thêm với sự thoáilui

hoàn toàn của khối u ở 1/3 số chuột

3 Hasegawa

và cs84

2006 Cấy ghép dòng tế bào

UTBT SKOV3ip.1dưới da chuột nude

MeV-CEA và/hoặcMeV-NIS

Tất cả chuột ở nhóm chứng điều trịbằng nước muối sinh lý chết vàongày thứ 48 vì cổ trướng Thời giansống thêm trung bình của nhóm chỉdùng MV-CEA là 59 ngày so với

>70 ngày ở nhóm được điều trị bằngMV-NIS

+ MV-CEA