Tối ưu hóa quá trình thu nhận dịch chiết nấm thượng hoàng (phellinus igniarius) ứng dụng sản xuất thực phẩm bổ trợ sức khỏe

ứng dụng sản xuất thực phẩm bổ trợ sức khỏe” tiến hành bước đầu khảo sát ảnh hưởng siêu âm đến tế bào nấmvà các thông số công nghệ nhằm tìm ra điều kiện phù hợp trích ly polyphenol từ nấ

Bộ CÔNG THƯƠNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THÀNH PHỐ HÔ CHÍ MINH

BÁO CÁO TỔNG KÉT ĐỀ TÃI KHOA HỌC

KÉT QUẢ THựC HIỆN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌCCÃP TRƯỜNG

Tên đề tài: Tối ưu hóa quá tình thu nhận dịch chiết nấm Thượng hoàng

(Phellinus igniarius). ứng dụng sản xuất thực phẩm bổ trợ sức khỏe

Mã số đề tài: 20/1.5SHTPSV07

Chủ nhiệm đề tài: Lê Ngọc Anh

Đơn vị thực hiện: Viện Công nghệ Sinh học và Thực phẩm

Ban Giám Hiệu trường Đại học Công nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh, Ban lãnh đạo Viện Công nghệ Sinh học đãtạo điều kiện cơ sở vật chất kỹ thuật tốt nhất cho em trong suốt quátrình họctập và rèn luyện tại trường.

Bộ môn Công nghệ Thực Phẩm, bộ môn Đảm bảo chất lượng trường Đại học Công nghiệp

Thành phố Hồ Chí Minh, quý thầy cô của bộ môn, tập thể cán bộ quản lý phòng thí nghiệm

đãtận tình hướng dẫn, tạo điều kiện em cho em về thời gian và cơ sở vật chấttrong suốtquá

trình thực hiện đềtài

Đặc biệt, em xin gửi lời cảm ơn đến thầy Nguyễn Đức Vượng, thầyNguyễn Ngọc Tuấn đãtận tình hướng dẫn và truyền đạt những kiến thức quý báu giúp em thực hiện đề tài từ nhữngbước cơbản cho đến kếtquả cuối cùngcủa đề tài này Cảm ơn quý thầy cô, tất cả bạn bè đãgiúp đỡ, đóng góp ý kiến và chia sẻ những kiến thức, kinh nghiệm của mình trong suốtthời

gian thực hiện khóa luận này

Mặc dù đã nỗ lực vàcố gắng tìm hiểu, học hỏi kiến thức mà Thầy hướngdẫn, Quý Thầy Cô trong viện đã truyền đạttrong suốt quá trình họctập và thực hiện đề tài Nhưng do thời gian

có hạn, những sự cố, sai sót xảy ra trong quá trình làm việc, kiến thức chuyên môn và kinh

nghiệm thực tế còn non kém, nên trong thời gian hoàn thành khóa luận, không thể tránh khỏi những khiếm khuyết và thiếu sót Em rất mong nhận được sự thông cảm và đónggóp ý

kiến từ Quý Thầy Cô và các bạn để khóa luận của em được hoàn thiện hơn

Em xin chân thành cảm ơn!

i

PHẢN I THÔNG TIN CHUNG

1.5 Thời gian thực hiện:

1.5.1 Theo hợp đồng: từ tháng 05 năm 2020 đến tháng 05 năm 2021

1.5.2 Gia hạn (nếu có): đến tháng năm

1.5.3 Thựchiện thực tế: từ tháng 05 năm 2020 đến tháng 10 năm 2023

1.6 Những thay đổi so với thuyết minh ban đầu (nếu có):

(về mục tiêu, nội dung, phương pháp, kết quả nghiên cứu và tổ chức thực hiện; Nguyên nhân; Ý kiến của Cơ quan quản ỉỷ)

1.7 Tổng kinh phí được phê duyệt của đề tài: 5 triệu đồng

IL Ket quả nghiên cứu

1 Đặt vấn đề:

Pheỉỉinus igniarius hay gọi là nấm Thượng hoàng là loại nấm có tính dược liệu cao đượcphân bố chủ yếu ở Trung Quốc, Hàn Quốc, Nhật Bản v.v Từ thời xưa, con người đã sử

dụng loại nấm này để điều trị một số bệnh lý nhờ vào hoạt tính sinh học củanó như hỗ trợ

điều trị ung thư, tiểu đường, tiêu chảy, v.v

Hiện nay, vấn đề sức khỏe đang nhận được sự quan tâm đặc biệt của con người Nấm Thượnghoàng (Pheỉỉinus igniarius) được biết đến như một loại nguyên liệu chứa nhiều hoạt

chất tốt và mang hoạt tính sinh học cao Nhận thấy được nhu cầu này, đề tài “Tối ưu hóa quá tình thu nhận dịch chiết nấm Thượng hoàng (Phellinus igniarius) ứng dụng sản xuất

thực phẩm bổ trợ sức khỏe” tiến hành bước đầu khảo sát ảnh hưởng siêu âm đến tế bào nấm

và các thông số công nghệ nhằm tìm ra điều kiện phù hợp trích ly polyphenol từ nấm

Thượng hoàng

2 Mục tiêu

-Khảo sát các yếu tố công nghệ ảnh hưởng quá trình trích ly nấm Thượng hoàng bao gồm các yếu tố: biên độ siêu âm, nổng độ dungmôi ethanol, tỉ lệ nguyên liệu/dung môi, thờigian, nhiệt độtrích ly

-Tối ưu hóa các thông số công nghệ ảnh hưởng đến quá trình trích ly polphenol của

nấm Thượng hoàng

-Xác định khảnăng kháng oxi hóa của cao chiết nấm Thượng hoàng

3 Phuong pháp nghiên cứu:

Dựa trên tài liệu tổng quan về nấm Thượng hoàng bao gồm thành phần hóa học, hoạt tínhsinh học, các phưong pháp trích ly hiện đại, đề tài tiến hành lựa chọn phương pháp trích lybằng sóng siêu âm nhằm nâng cao hiệu suất trích ly

Phương pháp nghiên cứu được thực hiện cụ thể như sau:

Nội dung 1: Nghiên cứu, lựa chọn phương pháptrích ly

Nội dung 2: Nghiên cứu một số yếu tốcông nghệ ảnh hưởng đến quá trình trích ly

Nội dung 3: Xác định hoạt tính kháng oxi hóa

iii

Phương pháp phân tích:

- Xác định hàm lượng polyphenol tổngtheo Follin and Ciocalteu (1927)

- Khả năng phá vỡ tế bào theo phương pháp quan sát hình ảnh Scanning electronmicroscopy (SEM)

- Hoạt tính khángoxi hóabằng phương pháp thu nhận gốc tự doDPPH

4 Tổng kết về kết quả nghiên cứu

Qua quá trình nghiên cứu và thực hiện, đề tài đã tìm ra được sự ảnh hưởng của công suấtsiêu âm tác động đến tế bào nấm Thượng Hoàng (Pheỉỉinus igniarius). Cụ thể, khi sử dụngphương pháp siêu âm hỗ trợ quá trình trích ly hàm mục tiêu là khảo sát khảnăng phá vỡ tế bào nấm cho thấy, sóng siêu âm có tần số 20 kHz có khả năng phá vỡ cấu trúc tế bào nấm

Thượng Hoàng Khi tăng biên độ, khả năng phá vỡ tế bào tăng dần, cụ thể ở 25%, cấu trúc

tếbào nấm bị phá vỡ, hiện tượng này diễn ra mãnh liệthơn ở biên độ 37%

Song song đó, tiến hành các thí nghiệm khảo sát các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình trích ly

hàm mục tiêu là polyphenol từ nấm Thượng hoàng (Pheỉỉinus igniarius) với 5 yếu tố ảnhhưởng bao gồm: nồng độ dung môi ethanol, công suất siêu âm, tỉ lệ nguyên liệu/dung môi,

thời gian, nhiệt độ trích ly

Kết quả khảo sát chothấy với hàm mục tiêu polyphenol tổng thì điều kiện trích ly tốt nhất trong phạm vi nghiêm cứu tại phòng thí nghiệm là: nồng độ dung môi 80%, tần số 20 kHz,

biên độ 25%, tỉ lệ nguyên liệu/dung môi (w/v) là 1/30, thời gian trích ly là 280 phút, nhiệt

độ trích ly là 60°C

5 Đánh giá các kết quả đã đạt được và kết luận

Nghiên cứu này đã cung cấp cơ sở khoa học cho việc sử dụng sóng siêu âm vào quá trình

trích ly nhằm nâng cao hiệu suất thông qua xác định khả năng phá vỡ tế bào và hàm lượng polyphenol trong nấm Thượng hoàng Kết quảnghiên cứu cho thấy hàm lượng polyphenol

cao nhất là 22.76 mg/g khi trích ly tron điều kiện nồng độ dung môi 80%, tần số 20 kHz, biên độ 25%, tỉ lệ nguyên liệu/dung môi (w/v) là 1/30, thời gian trích ly là 280 phút, nhiệt

độ trích ly là 60°C Kết quả trên cung cấp cơ sở khoa học cho việc trích ly nhằm ứng dụng

nguyên liệu vào sản phẩm thực phẩm bổ trợsức khỏe

6 Tóm tắt kết quả (tiếng Việt và tiếng Anh)

Tiếng Việt:

Đe tài “Tối ưu hóa quá tình thu nhận dịch chiết nấm Thượng hoàng (Phellinus igniarius)

ứng dụng sản xuấtthực phẳm bổ trợ sức khỏe” là bước đầu nghiên cứu về quá trình trích ly

các chấtnội bào nói chung và polyphenol nói riêng bằng phưong pháp hỗ trợ sóng siêu ằm

từ loài nấm ThượngHoàng (Phellinus igniarius) Thông qua phưong pháp quan sát hình ảnh

scanning electron microcope (SEM) đểxác địnhkhảnăng phá vỡ tế bào nấm bằng sóng siêu

âm, xác định hàm lượng tổng polyphenol với thuốc thử Folin-ciocalteu có trong loài nấm

này

Tiến hành nghiên cứu khả năng phá vỡ tế bào nấm bằng phưong pháp siêu ằm vói sự thay đổi biên độ từ 20-37% Kết quả cho thấy sóng siêu ằm có khả năng phá vỡ tế bào nâm

ThượngHoàng Biên độ sóng ở25% cho thấy tế bào sợi nấm bị phávỡ, hiện tượngnàydiễn

ramãnh liệthon ỏ biên độ 37%

Đe tài thực hiện nghiên cứu các thông số công nghệ cua quá trình trích ly bao gồm: công

suất (W), nồng độ dung môi ethanol (%), tỉ lệ nguyên liệu/dungmôi (w/v), thời gian trích ly

(phút), nhiệt độtrích ly (°C) hàm mục tiêu là polyphenol tổng Kếtquả nghiên cứu cho thấy,

trong phạm vi nghiên cứu, ở điều kiện nồng độ dung môi ethanol 80%, biên độ 25%, tỉ lệ

nguyên liệu dung môi 1/30, thời gian trích ly 280 phút, nhiệt độ 60°C cho hàm lượng polyphenol tổng cao nhất là 22.76 (mg GAE/g)

Tiếng Anh :

This research isthe firststep to study extracting intracellular and polyphenol components by

the ultrasonic method from Thuong Hoang mushroom (Phellinus igniarius'). The study

focused on determining effect ofultrasound on material and extraction by using scanning electron microscope (SEM) to determine the ability to disrupt fungal cells by ultrasonic waves, Folin-ciocalteu reagent to determine polyphenol content in Phellinus

The result showed influencing factors include ultrasonic amplitude, alcohol solyentconcentration, material-solvent ratio, extraction time and extraction temperoture to total

extracted polphenol content have exffecting to polyphenol in this higher fungi The total

obtained polyphenols reached a maximum of 22.7 + 0.8 mglg at the extraction conditionsincluding alcohol solvent concentration of 80%, ultrasonic amplitude of 25%, material -

V

solvent ratio 1-30 (%vv/v), extraction time of 280 minutes and use temperature at 60°C.These results of this study have useful reference valuefor studies related to polyphenol

extractionfromPheỉỉinus igniarius.

III Sản phẩm đề tài, công bố và kết quả đào tạo

3.1 Kết quả nghiên cứu ( sản phẩm dạng 1,2,3)

chiết nấm với hàm lượng polyphenol cao

- Các ấn phẩm khoa học (bài báo, báo cáo KH, sách chuyên khảo ) chỉ dược chấp

nhân nếu có ghi nhận địa chỉ và cảm on trường ĐH Công NghiệpTp HCM đã cấpkính phí

thực hiện nghiên cứu theo đúng quy định

- Các ấn phẩm (bản photo) đính kèm trong phần phụ lục minh chứng ở cuối báo cáo.(đối với ấn phẩm là sách, giáo trình cần có bản photo trang bìa, trang chính và trang cuối kèm thông tin quyết định vàsố hiệu xuấtbản)

3.2 Kết quả đào tạo

TT Họ và tên

Thòi gian

thực hiện đề tài

Tên đề tài

Tên chuyên đề nếu ỉàNCS

Tên luận văn nểu ỉà Cao học

(triệu đồng)

Ghi

chú

A Chi phí trực tiếp

2 Nguyên, nhiên vật liệu, cây con

3 Thiếtbị, dụng cụ

vii

V Kiến nghị ( về phát triển các kết quả nghiẻn cứu của đề tài)

-Tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học, một số hoạt tính sinh học khác của nấm

Thượng hoàng nhằm cung cấp co sở khoa học về lợi ích của nguyên liệu đối với sức khỏe

con người

-Định hướng ứng dụng dịch chiếtvàothực tế

VI Phụ lục sản phâm (Hệt kê minh chứng các sản phđm nêu ở Phân lĩỉ)

Sơđồ: Quy trình thu nhận dịch chiết và cao nấm Thượng hoàng

Thuyết minh quy trình:

Nguyên liệu ban đầu gồm bộtnấm Thượng hoàng và cồn thực phẩm 80% với tỉ lệ nguyên liệu/

dung môi là 1/37 (w/v) trích ly có hỗ trợ siêu âm trong thời gian 281 phút, nhiệt độ 64°c Sau đó đem dịch trích ly cô quay ởnhiệt độ40°C, áp suất 120 mbar thu dịch sau cô quay Dịch trích ly sau

khi cô quay được đem đi đông khô trong thời gian 24 giờ Sàn phẩm cuối cùng là cao chiết nấm Thượng hoàng

Cao nấm

PHẨN II BÁO CÁO CHI TIẾT ĐÈ TÀI NGHIÊN cứu KHOA HỌC

(báo cáo tổng kết sau khi nghiệm thu, đã bao gồm nội dung góp ý của hội đồng nghiệm thu)

TÓM TẤT

Đe tài thực hiện “Tối ưu hóa quá trình thu nhận dịch chiết nấm Thượng hoàng (Pheỉỉinus igniarius). ứng dụng sản xuất thực phẩm bổ trợ sức khỏe” theo hợp đồng nghiên cứu khoa học công nghệ số 50/HĐ-ĐHCN, mã số 20/1.5SHTPSV07 được tiến hành tại Viện Công

nghệ Sinh học & Thựcphẩm của trường Đại học Công nghiệp TP HCM

Mục tiêu của nghiên cứu được chia thành 2 nhiệm vụ chính bao gồm:

- Nghiên cứu quá trình thu nhận dịch chiết nấm Thượng hoàng (Phelhnus igniarius)

bằng phưong pháp trích ly có hỗ trợ siêu âm thông quá các thông số công nghệ: nhiệt độtrích ly (50-70°C), thời gian trích ly (250-310 phút), tỉ lệ nguyên liệu/dung môi (1/10-1/50

w/v) vói hàm mục tiêu là hàm lượng polyphenol (mg GAE/g DW) cótrong dịch chiết

- Nghiên cứu quy trình sản xuất dịch chiết từ nấm Thượng hoàng Từ đó đề xuất quytrình sản xuất thực phẩm bổ trợ sức khỏe quy mô phòng thí nghiệm và thử hoạt tính khángoxi hóabằng phưong pháp đo khảnăng bắt gốc tự do DPPH

Kết quả của nghiên cứu:

- Điều kiện tối ưu thu nhận dịch chiết: nồng độ dung môi ethanol 80%, tỉ lệ nguyênliệu/dung môi 1/30 (w/v), nhiệt độ trích ly 60°C, hàm lượng polyphenol tối ưu trong diều kiện thí nghiệm là 22.76 mg GAE/g

- Đe xuất được quy trình sản xuất dịch chiết, caonấm Thường hoàng và xác định khả

năng khánggôc tự do của cao chiết IC50 là 11,722 pg/ml

Từ kết quả nghiên cứu trên, em xin được kiến nghị hướng pháttriển của đề tài bao gồm: có

những nghiên cứu chuyên sâu hon về thành phần hóa học của nấm Thượng hoàng, nghiên cứu quy trình sản xuất quy mô lón, nghiên cứu ứng dụng, xằy dựng, bổ sung nấm Thượng

hoàng vào các quy trình sảnxuấtthực phẩm

xi

MỤC LỤC

TÓM TẤT xi

MỤC LỤC xii

MỤC LỤC HÌNH XV DANH MỤC BẢNG xvi

DANH MỤC Sơ ĐỒ xviii

DANH MỤC TỪ VIẾT TẤT xix

MỞ ĐẦU 1

CHƯƠNG 1: TỔNGQUAN 2

1.1 Nguồn gốc và đặc tính củanấm Thượng Hoàng (Phellinus igniarius) 2

1.1.1 Nguồn gốc và vị trí trong phân loại nấm học 2

1.1.2 Đặc điểm nấm học 2

1.2 Thành phần hóahọc của nấm Thượng Hoàng 4

1.2.1 Thành phần dinh dưỡng trong nấm ThượngHoàng 4

1.2.2 Lớp chat polyphenol 5

1.3 Hoạt tính sinh học 7

1.3.1 Hoạt tính kháng oxi hóa 7

1.3.2 Hoạt tính kháng viêm 8

1.3.3 Hoạt tính chốngungthư 8

1.4 Côngnghệ trích ly các hoạtchấttừ nấm Thượng Hoàng 8

1.4.1 Các yếu tốảnh hưởng đến quá trìnhtrích ly 8

1.4.2 Phưong pháp tríchly có hỗ trợ siêu âm 10

CHƯƠNG2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊNCÚƯ 13

2.1 Địa điểm thực hiện nghiên cứu: 13

2.2 Đốitượng nghiên cứu 13

2.2.1 Đối tượng nghiên cứu 13

2.2.2 Nguyên liệu 14

2.2.3 Hóachất 14

2.2.4 Thiếtbị, dụngcụ 14

2.3 Nội dung nghiên cứu 16

2.4 Bố trí thí nghiệm 17

2.4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ dung môi đến hàm lượng polyphenol 17

2.4.2 Thí nghiệm 2: Khảo sátảnh hưởng công suất siêu âm đến sự phá vỡ cấu trúc tế bào nấm Thượng Hoàng 18

2.4.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng công suất siêu âm đến hàm lượng polyphenol 19

2.4.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng của tỉ lệ nguyên liệu/dung môi đến hàm lượng polyphenol 20

2.4.5 Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hưởng của thời gian trích ly đến hàm lượng polyphenol 21

2.4.6 Thí nghiệm 6: Khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ trích ly đến hàm lượng polyphenol 22

2.5 Phưongpháp phân tích 22

2.5.1 Xác định sự phá võ cấu trúccủa tế bào nấm Thượng Hoàng 22

2.5.2 Xác định tổng hàm lượng Polyphenol 24

2.5.3 Xác định khảnăng kháng oxi hóa 26

2.6 Phưong pháp xử lí số liệu 27

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 28

3.1 Xác định sựphávỡ cấu trúc tế bào nấm Thượnghoàng 28

3.2 Kết quả khảo sát điều kiện trích lynấm Thượnghoàng(Phellinus igniarius) 30 3.2.1 Kết quả khảo sát ảnh hưởng của nồng độ dung môi đến hàm lượng polyphenol tổng 30

xiii

3.2.2 Kết quả khảo sát biên độ sóng siêu âm đến tríchly polyphenol 32

3.2.3 Ket quả khảo sát tỉ lệ dung môi ảnh hưởng đến tríchly polyphenol 34

3.2.4 Kết quả khảo sát nhiệt độ 35

3.2.5 Kết quả khảo sát thờigian 37

3.2.7 Kiểm tra mô hìnhtối ưu hóa vàđánh giá hiệu qủa trích ly 41

3.2.8 Khảnăng khángoxi hóa 42

3.2.9 Xây dựng quy trình trích ly 43

CHƯƠNG IV: KẾT LUẬNVÀ KIẾN NGHỊ 46

TÀI LIỆU THAM KHẢO 47

PHỤ LỤC 51

MỤC LỤC HỈNH

Hình 1.1: Phellinus igniarius sinh trưởngtại rừng Bialowieza, Poland 3

Hình 1 2: Dãy tần số hoạt động của sóng âm 10

Hình 1.3: Hiệu ứngcavitation của sóng siêu âm 11

Hình 2 1: Mau nấm Thượnghoàng công ty Linh Chi Vina 13

Hình 2 2: Môtả phương pháp xác định sự phá vỡ cấu trúc tếbàonấm Thượng Hoàng 23

Hình 3 l:Kếtquảchụp SEM (thang đo 50 pm), độ phóng đại 1000 28

Hình 3 2: Kết quảchụp SEM (thang đo 10 Lim), độ phóng đại 5000 29

Hình 3 3: Biểu đồ biểu thị ảnh hưởng nồng độ dung môi đến hàm lượng polyphenol tổng 31 Hình 3 4: Biểu đồ biểu thị ảnh hưởng biên độ sóng siêu âm đến quá trình trích ly polyphenol 33

Hình 3.5: Biểu đồ biểu thị kết quả khảo sát yếu tố tỉ lệ nguyên liệu/dung môi đến trích ly polyphenol 35

Hình 3.6: Biểu đồ biểu thị ảnh hưởng nhiệt độ ảnh hưởng quá trình tríchly polyphenol 36

Hình 3.7: Biểu đồ biểu thị ảnh hưởng thời gian ảnh hưởng quá trình tríchly polyphenol 37

Hình 3 8: Biểu đồ thể hiện xu hướng hàm lượng phenolic 41

XV

DANH MỤC BẢNG

Bảng 1.1: Thành phần dinh dưỡng quả thể nấm Phellinus igniarius thu hái tại Đài Loan 4

Bảng 2 1: Bảng nguyên liệu sử dung trong phạm vi nghiên cứu củađề tài 14

Bảng 2 2:Bảng hóachất sử dụng trong phương pháp đo chỉ tiêu polyphenol 14

Bảng 2 3: Thiết bị sử dụngcho thí nghiệm nghiên cứu 14

Bảng 2 4: Dụng cụ sử dụng trong thí nghiệm nghiên cứu 15

Bảng 2.5: Bảng bố trí thí nghiệm 1 17

Bảng 2 6: Bảng bố trí thí nghiệm 2 18

Bảng 2 7: Bảng bố trí thí nghiệm 3 19

Bảng 2 8: Bảng bố trí thí nghiệm 4 20

Bảng 2 9: Bảng bố trí thínghiệm 5 21

Bảng 2 10: Bảng bố trí thí nghiệm 6 22

Bảng 2 11: Xây dựng đường chuẩn polyphenol bằng phương pháp Folin-Ciocalteu 25

Bảng 2 12: Phương pháp thử nghiệm khángoxi hóabằng phương pháp DPPH 26

Bảng 3 1: Kết quả khảo sát nồng độ dung môi ethanol ảnh hưởng đến quá trình trích ly polyphenol 31

Bảng 3.2: Kết quả khảo sát biên độ sóng môi ảnh hưởng đến quá trình trích ly polyphenol .33

Bảng 3 3: Kết quả khảo sát yếu tố tỉ lệ nguyên liệu/dung môi đến trích ly polyphenol 34

Bảng 3.4: Kết quả khảo sát yếu tố nhiệt độ đến trích y polyphenol 36

Bảng 3 5: Kết quả khảo sát thời gian ảnh hưởng đến trích ly polyphenol 37

Bảng 3 6: Bảng ma trận thực nghiệm tối uu hóatheo môhình Box-Behnken (BBD) 38

Bảng 3 7:Phân tích hồi quy hàm mục tiêu phenolic 39

Bảng 3 8: Kết quả trích ly polyphenol theo điều kiện tối ưu và đối chứng của nấm Thượng hoàng 42

Bảng 3 9: Kết quả khảnăng kháng gốc tự do DPPH của cao chiết nấm p.igniarius 43

Bảng 3.10: Đặc tính dịch chiết, cao nấm Thượng hoàng 45

xvii

DANH MỤC Sơ ĐỒ

Sơ đồ 2 1: Sơ đồnội dung nghiên cứu 16

Sơ đồ 2 2: Sơ đồ chuẩn bị mẫuchụp SEM 23

Sơ đồ 3 1: Sơ đồ quy trình trích ly dịch chiết nấm Thượng hoàng 44

DANH MỤC Từ VIẾT TẮT

GAE gallic acid equivalents

HSCCC high speedcounter current chromatography

EC5o effective concentration

xix

MỞ ĐẦU

1 Đặt vấn đề

Pheỉỉinus igniarius hay gọi là nấm Thượng hoàng là loại nấm có tính dược liệu cao đượcphân bố chủ yếu ở Trung Quốc, Hàn Quốc, Nhật Bản v.v Từ thời xưa, con người đã sử

dụng loại nấm này để điều trị một số bệnh lý nhờ vào hoạt tính sinh học củanó như hỗ trợ

điều trị ung thư, tiểu đường, tiêu chảy, v.v

Hiện nay, vấn đề sức khỏe đang nhận được sự quan tâm đặc biệt của con người Nấm Thượnghoàng (Pheỉỉinus igniarius) được biết đến như một loại nguyên liệu chứa nhiều hoạt

chất tốt và mang hoạt tính sinh học cao Nhận thấy được nhu cầu này, đề tài “Toi ưu hóa

quá trình thu nhận dịch chiết nấm Thượng hoàng (Phellinus ỉgniarius) ứng dụng sản xuất thực phẩm bo trợ sức khỏe” tiến hànhtối ưu hóa qúa trình trình thu nhận dịch chiết và xây dựng quy trình sản xuấtthực phẩm bổ trợ sức khỏeở quy mô phòng thí nghiệm

2 Mục tiêu của đề tài

- Tối ưu hóa quy trình sản xuấtdịch chiết nấmThượng hoàng thông qua tối ưu các điều kiệntrích ly bao gồm: nhiệt độ, tỉ lệ nguyên liệu/dung môi, thời gian trích ly

- Đề xuất quy trình sản xuất thực phẩm bổ trợ sức khỏe dạng dịch chiết, cao nấm Thượnghoàng

- Xác định khả năng kháng oxi hóa bằng phưong pháp xác định khả năng khử gốc tự do

DPPH

3 Đối tượng và phạm vi nghiên cứu

Đối tương nghiên cứu lànấm Thượng Hoàng tên khoahọc là Pheỉỉinus igriarius, đây là loại nấm códược tính cao Nguyên liệu được muavề ở dạng xay nhỏ mịn, có màu nâu

4 Ý nghĩa thực tiễn của đề tài

Đe tài nàycó ý nghĩa khoahọc trong việc xác định điều kiện tối ưu thu nhận dịch chiết bằng

phương pháp trích ly có hỗ trợ siêu âm nhằm xác định điều kiện thu được polyphenol caonhấttrongđiều kiện thí nghiệm

Ngoài ra, kết quả đề tài cũng đề xuất quy trình sản xuất thực phẩm bổ trợ sức khỏe dạngdịch chiết, cao nấm Thượng hoàng làm tiền đề cho những nghiên cứu nhằm ứng dụng vào

nghiên cứu quy trình sản xuất quy mô lớn hơn và ứng dụng rộng rãi nấm Thượng hoàng

CHƯƠNG 1: TỎNG QUAN

1.1 Nguồn gốc và đặc tính của nấm Thượng Hoàng (Phellinus igniarius)

ỉ 1.1 Nguồn goc và vị trí trong phân loại nấm học

Chi Pheỉỉinus thuộc họ Hymenochaetaceae là một loại nấm được sử dụng hơn 2000 nămtrước và được nhắc đến nhiều trong dược điển Trung Quốc, phân bố chủ yếu ở Trung Quốc,Nhật Bản, Mông cổ, Hàn Quốc và một số nước châu Á khác cũng như Mỹ và Châu Phi ChiPhellinus có nhiều loài như: Pheỉỉinus ỉinteus, Pheỉỉinus baumii, Pheỉỉinus igniarius, gọi

chung là Sanghuang (Trung Quốc) hay còn có tên gọi khác là Nấm Thượng Hoàng (Việt

Theo nghiên cứu đã công bố của Ewa Zapora và cộng sự, tính đến 2016 có 138 loài thuộc

chi Pheỉỉinus như: p niỉghenriensis, p pini, p andinus, p giỉvus, p nigricans, p

rhabarnarinus, p ribis, p rimosus, p merrilii, [2]

1 ĩ 2 Đặc điểm nấm học

Đặc điểm phát triển của Pheỉỉinus phát triển theo từng giai đoạn tại Poland được Ewa

Zapora và cộng sự ghi nhận lại theo nghiên cứu đã công bố tại hình 1.1

2

A B

Hinh 1.1: Phellinus igniarius sinh trưởngtại rừngBialowieza, Poland

A Quảthểnonsinh trưởng tại Salix fiagili

B Sinh trưởng trênthân cây Betula pendulachết

c Quảthểtrên 10 năm tuổi tại CarpinusbetuTus

D Ouảthể 2Ĩà sinh trưởna taiCaroinus betulusQuả thễPhellinus thường códạng quạt, thân gỗ cứng, mặt trên có màu đạm, mặt dưới có thể

có lông mịn, màu nhạt Các loại nấm nàythường mọc ỏ vùng rừng sâu, núi cao, các khurừngnguyênsinh, có thể chịuđược các yếu tốkhắc nghiệt như mưakéo dài hay hạn hán [3]

Hằng năm,nấm pháttriển tạo thành các lớp thụ tầng chồng lên nhau, qua thòi gian, các lớp này sẽtrở nên cứng và khô tạo thànhlóp thân gỗ của nấm Khi nấm còntươi thường có màu

vàng nhạt, khi già hoặc được sấy khô sẽ trở nên sậm màucóthểchuyển sang màu xám đen

Ở Việt Nam, nấm Thượng Hoàng tự nhiên thường xuất hiện xung quanh khu vực Nghệ An, Huế Quả thể của loài nấm này được tìm kiếm, thường là đối tượng nghiên cứu trong lĩnh

vực y dược [4]

1.2 Thành phần hóa học của nấm Thượng Hoàng

Có nhiều bài báo, nghiên cứu về thành phần hóa học của nấm Thượng hoàng, các bài báo này chỉ ra nhiều hợp chất mang hoạt tính sinh học, có tác dụng tích cực đến sức khỏe của

con người

1.2.1 Thành phần dinh dưỡng trong nấm Thượng Hoàng

Nấm Thượng Hoàng (Phellnus igniarius) đượcbiết đến và sử dụng như một vị thuốc trong

y học cổ truyền ở nhiều quốc gia, đặc biệtlà các quốc gia chằu Á Bên cạnh đó, các nghiên cứu về thành phần trong nấm cũng chỉ ra rằng đây là một loại nấm có giá trị dinh dưỡng,chứa các hợp chất mang hoạt tính sinh học Theonghiên cứu của Nae-Cherng Yang (2016)

[5], một số thành phần dinh dưỡng thiết yếu của nấm ThượngHoàng đượctrình bày ở bảng

1.2.2 Lởp chất polyphenol

Các họp chất polyphenol có thế được phân loại thành các phenol đon giản, các acid

phenolic bao gồm: acid gallic, acid benzoic, acid syringic, v.v các polyphenol như:

flavonoid, tanin, v.v được biếtđến là các họp chất mangđặc tính có lợi cho sức khỏe, chống

gốc tự do, ức chế thủy phân và oxi hóa enzym, hoạt động như 1 chất chống oxi hóa hiệu quả

[6]

Polyphenol có tác dụng chống viêm, hạ đường huyết, kích thích hệ miễn dịch hoạt động chống lại các tác nhân gây bệnh.Theo nghiên cứu của Ziaja (2017) và cộng sự, chứngminh trong 4 loài nấm thuộc chi Phellinus bao gồm p igniarius, p pint, p pomaceus and p

robustus có sự hiện diện của aicd syringic và acid protocatechuic (í), các chất này có hoạt

tính sinh học cao, trong đó acid protocatechuic là chất có khả năng chống oxi hóa, khángkhuẩn, kháng nấm, kháng viêm cao [7]

Năm 2010, Lee và cộng sự tách được 9 họp chất trong đó có 4 họp chất thuộc lóp phenolic

bao gồm acid protocatechuic (1), protocatechualdehyde (2), acid caffeic (3), và acid ellagic

(4) tò loài Phellinus linteus. Ngoài ra trong trong khuôn khô nghiên cún của mình, Lee vàcộng sự chứng minh được khả năng ức chế protein Tyrosine phosphatese 1/? của các họp

chất được phân lập từ quả thểPheỉỉinus ỉinteusđượckì vọng làbước đi mới trong lĩnh vực ydược [8].

Năm 2015, Suabjakyong và cộng sự xác định 7 hợp chất thuộc lớp polyphenol bao gồm

3,4-dihydroxybenzaldehyde (5), 4-(3,4-dihydroxyphenyl-3-buten-2one (6), inonoblin c (7),

phelligridin D (8), inoscavin c (9), phelligridin c (10) và interfungin B (11) từ Pheỉỉinus igniarius. Polyphenol sau khi định danh tiếp tục được nghiên cứu khả năng ức chế Acrolein

và môhình chống đột quỵ trên chuột Kết quả nghiên cứu chothấy chiết xuất polyphenol từloài Pheỉỉinus igniarius có khảnăng kiềm hãm độc tínhAcrolein 0,5 và 2 gM ở nồng độ 0,5

và 2 ựg/mỉ tưong ứng, các cá thể chuộtgiảm 62,2% khảnăng đột quỵ sau khi được điều trịbằng chiếtxuấtpolyphenol được chiếttách từ nghiên cứu [9]

buten-2one(6)

hyde(5)

OH OH

Năm 2017, Zheng và cộng sự nghiên cứu tác động polyphenol từ Pheỉỉinus igniarius đến hoạt động chống tiểu đường loại 2 Theo nghiên cứu, Zheng chứng minh được sự có mặt của 4 hợp chất thuộc lớp polyphenol bao gồm 7,8-dihydroxycoumarin (12) , 3,4-

dihydroxybenzalacetone (13), 7,3'-dihydroxy-5'-methoxyisoflavone (14) vàinoscavin c (9).

Ket quả nghiên cứu cho thấy Phellinus igniarius giàu polyphenol, các loại polyphenol này thể hiện khả năng chống tiểu đườngthông qua việc làmtăng khả năng hấp thu glucose của

dòng tế bào L6, cải thiện khả năng dung nạp glucose giảm khả năng kháng insulin, giảm nồng độ glucose trong máu[10]

1.3 ỉ Hoạt tính kháng oxi hóa

Năm 2014, Jin Ga-Heonvàcộng sựnghiên cứu hoạttínhkháng oxihóa, khảnăng ức chếsựhoạt động của enzyme Acetylcholinesterase, Xathine oxyase từ quả thể, sợi nấm, và dịch

nuôi cấy Pheỉỉinus igniarius. Trong nghiên cứu, Jin và cộng sự sử dụng dung môi ethanol 70%trích ly dịchchiết, sau đó sấy ở nhiệt độ 40°C và lấy mẫu thử hoạt tính kháng oxi hóa

bằng DPPH nhằm xác định khả năngkháng oxi hóa từ loài Phellinus igniarius. Ket quả thu

được khả năng nhặt gốc tự do từ dịch chiết quả thể, sợi nấm và dịch nuôi cấy là 90,25- 95,60%, 78,82-85,24%, 76,32-82,50% tương ứng ởnồng độ 50-400 ụ.g/mi [11].

viêm hiệu quả theo mô hình trong phòng thí nghiệm [11] Năm 2019, Kim và cộng sự

nghiên cứu hiệu quả kháng viêm và kháng oxi hóa từ Pheỉỉinus igniarius trên dòng tế bào

RAW 264.7 Ket quảnghiên cứu kết luận các tế bào được xử lí bang lipopolysaccharide cókhảnăng kháng viêm và kháng oxi hóa đáng kể, phụ thuộc vào nồng độ lipopolysaccharide khi xử lí mẫu, đây là mộtnghiên cứu triển vọng nhằm tìm ra một phương pháp có giá trị

trong điều trị các bệnh viêm nhiễm [12]

ỉ 3.3 Hoạt tính chong ung thư

Một so polysaccharide chiết tách từ Pheỉỉinus được chứng minh có tác dụng chống ung thư

hiệu quả Năm 2011, Song và cộng sự nghiên cứu về tác động của Pheỉỉinus ỉinteus đến

dòng tế bào SW480 ung thư đại trực tràng Kếtquả nghiên cứu cho thấy sự ứcchế tăng sinh các tế bào ung thư bằng cách ức chế tín hiệu Wnt/p-catenin [13] Năm 2007, Gou và cộng

sự nghiên cứu ảnh hưởng của các hợp chất từ loài Pheỉhnus ỉinteus đến sự pháttriển của các

tế bào ung thư phổi Kết quả báo cáo cho thấy các hợp chất này ngăn cản việc kích hoạt

CKD liên kết với cyclin D, E hoặc A làm chậm hoặc gây tắc nghẽn chu trình tế bào ở nồng

độ thấp [14]

1.4 Công nghệ trích ly các hoạt chất từ nấm Thượng Hoàng

Trích ly là quá trình tách một phần hay hoàn toàn chất hòa tan trong hỗn hợp chất lỏng hay

chất rắn đồng nhấtbằng dung môi phù hợp Quá trình này ảnh hưởng bởi nhiều yếu tố khácnhau

1.4.1 Các yeu to ảnh hưởng đen quá trình trích ỉy

❖ Ảnh hưởng của dung môi đến quá trình trích ly

Dung môi là một yếu tố quan trọng trong quá trình chiết tách các chất hòa tan bên trong nguyên liệu Lựa chọn dung môi phù hợp là công việc quan trọng trong các nghiên cứu về

8

quá trình trích ly các hợp có hoạt tính sinh học Việc lựa chọn dung môi có thể ảnh hưởng đến loại và hàm lượng các chất nghiên cứu từ nguyên liệu, dựa trên nhiều yếu tố khác nhau

như: khả năng hòa tan của chất trích ly, độ phân cực của dung môi, độc tính, mục đích sử

dụngdung môi,

Theo nghiên cứu của Chengshan Cai và công sự (2019), khi tiến hành khảo sát khả năng

trích ly tri terpenoid loài Pheỉỉinus ở các nồng độ ethanol từ 60-100% cho thấy khả năng

trích ly triterpenoid cao nhấtởnồng độ ethanol là80% [15]

❖ Ảnh hưởng của nhiệt độ đến quá trình trích ỉy

Nhiệt độ là mộtyếu tố quan trọng ảnh hưởng đến quá trình trích ly có ảnh hưởng lớn đến hiệu suất trích ly và hoạt tính sinh học của nguyên liệu, nó có tác động đến quá trình khuyếch tán, hòa tan của chất trích ly vào dung môi Khi nhiệt độ tăng, các phân tử trongdung dịch chuyển động hỗn loạn, nhanh hon làm tăng tốc độ trích ly Nhiệt độ cũng ảnhhưởng đến khả năng bay hoi của dung môi và độ nhớt của dung dịch, khả năng truyền khối

và xâm nhập của dung môi vào tếbào thực vật.Neu nhiệt độ quá cao, làm bay hoi một phần dung môi, ảnh hưởng đến quá trình khuyếchtán các chất trong dung dịch Ngoài ra, nhiệt độ

cao sẽ thúc đẩy một số phản ứng xảy ra làm ảnh hưởng đến hàm mục tiêu, thiết bị trích ly

Theo nghiên cứu của Chengshan Cai và công sự (2019), khi tiến hành khảo sát khả năng

trích ly triterpenoid từ loài Pheỉỉinus ở các nhiệt độ từ 30-70°C cho kết quả hàm lượng triterpenoid cao nhấtỏnhiệt độ là 60°C [15]

❖ Ảnh hưởng của thời gian đến quá trình trích ly

Thời gian làmộtyếu tố thường được quan tâm trongcác nghiên cứu về quá trình trích ly cáchợp chất tự nhiên Khi kéo dài thời gian trích ly, hàm lượng chất trích ly trong dung môi

tăng lên, khi đạt trạngthái cân bằng cuối cùng giữa nồng độ chấttan và chất rắn trong dungmôi cóthể đạt được sau một thời gian nhất định [16]

Theo nghiên cứu của ZuofaZhang và công sự (2020), khi tiến hành thí nghiệm trên đốitượng nấm Oudemansieỉỉa radicata, hàm mục tiêu là polyphenol vói phưong pháp trích ly

hỗ trợ siêu âm Kết quả chothấy vói thời gian trích ly là 35,5 phút, công suất 88 (W), cho

hàm lượng polyphenol là cao nhất 12.24 mg GA/g [17]

❖ Ảnh hưởng của tỉ lệ dung môi đến quá trình trích ly

Tỉ lệ nguyên liệu/dung môi cùngvới các yếu tố khác như: nhiệt độ, thời gian, loạidung môi,nồng độ dung môi lànhững yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến quá trình trích ly Yeu tốnày

ảnh hưởng đến hiệu suất trích ly, khả năng hòa tan, tốc độ trích ly ở một tỉ lệ nguyên

liệu/dung môi xác định, chất trích ly đạt hiệu suất tối ưu, nếu tiếp tục tăng tỉ lệ này gây lãng phí dungmôi làm giảm hiệu quả kinh tế

Theo nghiên cứu của Chengshan Cai và công sự (2019), khi tiến hành khảo sát khả năngtrích ly tnterpenoid (một lớp chất thuộc polyphenol) từ loài p hell inns các tỉ lệ nguyên

liệu/dung môi (w/v) từ 1/10-1/30, kết quả hàm lượng polyphenol cao nhất ở mức tỉ lệ

ỉ.4.2.2 Tác động của sóng slêuâm

♦ > Chuyển động rung: trong siêu âm, chuyểnđộng rung được tạo ra và tác động lên bề

mặt vật chất [19], Bản chất của siêu âm là sóng đặt trung bởi các thông số vật lí như: công

suất (W), tần số (Hz)từđótính được cườngđộ siêu âm (W.cm’2

Hình 1 2: Dãy tần số hoạt động của sóng âm

❖ Tác động nhiệt: do sóng siêu âm có bản chất sóng, nên chuyển động của sóng siêu

âm là nguyên nhân gây ra tác động nhiệt lên bề mặt vật chất mà nó đi qua ở tần số cao,

sóng siêu âm cóthể tạo ranhiệt độ cao và áp suất lớn [20]

❖ Hình thành_Ph á V ỡ b ọt kh í:

10

Khi sóng siêu âm được truyền vào môi trường chất lỏng, các chu trình kéo và nén liên tiếp đượctạo thành Trong điều kiệnbình thường, các phântử chất lỏng ở rất gần nhau nhờliên

kết hóa học Khi có sóng siêu âm, trong chu trình nén các phântử ở gầnnhauhơn và trong

chu trình kéo chúng bị tách ra xa Áp lực âm trong chu trinh kéo đủ mạnh để thắng các lực

liên kết giữa các phântử và tạo thành những bọt khí nhỏ Các bọt khí nhỏ lớn dần lên, khi

một tần số cụthể được áp dụng đến một kích thước cân bằng tối đa Tuy nhiên các trường

âm thanh tác động lên một bọt khíriêng biệt không thống nhất nhau, hình thành nên sự daođộng với các bọt khí xung quanh, làm các bọt khí mất ổnđịnh vàvỡra [21], Sựphávỡnàytạora một năng lượngảnh hưởng đến quá trình biếnđổi hóa học và cơ học, đồng thời tạo ra

nhiệt lượng nhỏ tại bề mặt bóng khí bị vỡ [22],

Pressure direction > Gas direction Stable

cavitation

Transient cavitation

creation cycle cycle Bubbles Compression Rarefation

Bubble collapse

Hình 1.3: Hiệuứng cavitation của sóng siêu âm

Trongtrích ly lỏng rắn, quá trình hình thành jphávỡ bọt khí diễn ra liêntục tại bề mặt tiếp

xúc của dung môi vànguyên liệu (bề mặt phân cách giữa 2 pha) không giong với hệ đồng

thể lỏng - lỏng Đối với hệ đồng thể, dokhông có sự ngăn cản củabề mặt phân cách nên bọt khí vỡ có xu hướng đối xứng Đối với hệ dị thể lỏng - rắn, do có sự ngăn cản bởi bề mặt phân cách nên bọt khí vỡbất đối xứngtạo lên sự chênh lệch áp suấtgâyra hiện tượng phuntrào chất lỏng với tốc độ cao tại bềmặt phân cách [21 ]

ỉ 4.2.3 ứng dụng sống siêu ãm vào nghiên cứu quá trình trích ỉy

Trong nghiên cứu của Ammar Altemimi và cộng sự, sử dụngphương pháp siêu âm để trích

ly polyphenol trên spinacia oỉeracea Kết quả nghiên cứu cho thấy khi sử dụng sóng siêu

âm với tần số 37 kHz, thời gian 30 phút, nhiệt độ 40°C, cường độ siêu âm 50% các hàm

mục tiêu tổng polyphenol, flavonoid, hoạt tính khử gốc tự do đều tăng Ammar Altemimi và cộng sự nhận định phương pháp siêu âm phù hợp đểtrích ly polyphenol [23].

Năm 2019, Gabriela Aguilar-Hernandez và cộng sự nghiên cứu điều kiện tối ưu trích ly

polyphenol từ các sản phẩm phụ của Annona muricata. Trong nghiên cứu này, nhóm tác giả nghiên cứu các điều kiện chu kì sóng, cường độ siêu âm, thời gian trích ly đến khả năng

chiếttách polyphenol cho thấy với điều kiện tối ưu của từng nguyên liệu cụ thể, hàm lượng polyphenol từ vỏ quả là 187,32 mg/g DW, hàm lượng từ lõi là 164,12 mg/g DW, từ hạt là

36,15 mg/gDW đều co hon so với phưong pháp chiếtthông thường [24]

1.4.2.4 ưu, nhược điểm của phương pháp trích ỉy hỗ trợ siêu âm

<♦ Ưu điểm:

Hiệu suất trích ly cao hon so với một số phưong pháptrích ly thông thường

Sóng siêu âm có tần số lớn hon 20 kHz truyền qua môi trường vật chấttác động lên tế bào nguyên liệu, do sự phá vỡ bóng khí làm tăng nhiệt độ hỗ trợ tốt cho quá trình trích ly

Những tác động này làm tăng vận tốc hòa tan, khuếch tán các chất vào dung môi, rút ngắn

thời gian trích ly

Thiết bị tưong đối đon giản, bảo quản và vận hành đon giản

Trích ly được nhiều nhóm hoạt chất, dung môi trích ly đa dạng

Giảm đượcnhiệt độ và áp suất, thường áp dụngchocác hoạtchất khôngbền với nhiệt

❖ Nhược điểm:

Sự thoái hóa bềmặt của đầu dò theo thời gian sẽ ảnh hưởng đến hiệu suất chiết

Lượng mẫu trích ly thườngít, phụ thuộc vào điều kiện thiết bị

12

CHƯƠNG 2: VẶT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu

2.1 Địa điểm thực hiện nghiên cứu:

Nghiên cứu được tiến hành tại Phòng thí nghiệm của Viện Công nghệ Sinh học - Thựcphẩm, nhà Flầu 4, 5, 6, 7 trường Đại học Công nghiệpThành phố HồChí Minh

2.2 Đối tượng nghiên cứu

2.2 ĩ Đổi tượng nghiên cứu

Nguyên liệu sử dụng là Nấm thượng hoàng tên khoa học làPheỉỉinus igriarius, đây là loại nấm có dược tính cao Nguyên liệu được muavề ở dạng xay nhỏ mịn, có màu nâu

Nguyên liệu được mua ở Công ty TNHH Linh Chi Vina Địa chỉ: 394/1 Hà Huy Giáp,

phường Thạnh Lộc, quận 12, thành phố Hồ Chí Minh

Phưong pháp bảo quản: Sau khi mua nguyên liệu, đồng nhất mẫu qua rây, tiến hành hút

chân không trong túi zip bạc2 mặt, bảo quản ởnhiệt độ 4°c đến khi trích ly và phân tích

Hình 2 1: Mau nấm Thượnghoàngcông ty Linh Chi Vina

2.2.2 Nguyên liệu

Bảng 2 1: Bảng nguyên liệu sử dung trong phạm vi nghiên cứu của đề tài

Bảng 2 3: Thiếtbị sử dụng cho thí nghiệm nghiên cứu

3 Máy sấy ẩm hồng ngoại Sartorius ag Germany MA150C 00023V1

14

Bảng 2 4: Dụng cụ sử dụng trong thí nghiệm nghiên cứu

2.3 Nội dung nghiên cứu

(Pheỉỉinus igniarius)

Trích ly

Khảo sát ảnhhưởng sóngsiêu âm đến sự phá vỡ cấu

trúc tếbào nấm Thượng

HoàngKhảo sát các yếu tố ảnhhưởng trích ly polyphenol

- Nồng độ dungmôi

-Biên độ siêu âm

-Tỉ lệ dung môi

-Thời gian-Nhiệt độ

Dịch chiết

Sơ đồ 2 1: Sơ đồ nội dung nghiên cứu

16

2.4 Bố trí thí nghiệm

2.4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng của nong độ dung môi đến hàm lượng polyphenol

Mục đích thí nghiệm: tìm ra nồng độ dung môi ethanol thích hợp trích ly polyphenol tổng

từ nguyên liệu nấm Thượng hoàng

- Thời gian trích ly:

Ethanol

80%

Ethanol90%