đầ tài: " PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ " ppt

PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ GVHD: Th.S Nguyễn Xuân Tòng Tiểu luận nhóm 3: BỐ CỤC THUYẾT TRÌNH Lược sử phương pháp sắc kí 1 Phân loại 2 Các đại lượng ảnh hưởng 3 Những kĩ thuật sắc kí phổ biến 4 Lược sử phương pháp sắc kí • Nhà thực vật học người Nga Mikhai Tswett (1872- 1919) • Phát minh ra kĩ thuật sắc kí vào năm 1903 khi ông đang nghiên cứu về chlorophyll Định nghĩa Sắc ký: Sắc ký là một phương pháp tách hỗn hợp dựa vào sự phân bố khác nhau của chúng giữa hai pha động và tĩnh thành các thành phần để phân tích, nhận biết, tinh chế hoặc định lượng hỗn hợp hay các thành phần. tách • phân tích • nhận biết • tinh chế • định lượng Các thành phân cấu thành Hỗn hợp Phương pháp sắc ký dựa vào: -Sự phân bố khác nhau của các chất giữa hai pha động và tĩnh. -Có nhiều nguyên nhân đưa đến sự phân bố khác nhau của các chất, chính sự lặp đi lặp lại hiện tượng hấp phụ - phản hấp phụ của các chất khi dòng pha động chuyển động qua pha tĩnh là nguyên nhân chủ yếu của việc tách sắc ký. Hệ quả là các chất có ái lực lớn với pha tĩnh sẽ chuyển động chậm hơn qua hệ thống sắc ký so với các chất tương tác yếu hơn pha này. Nhờ đặc điểm này mà người ta có thể tách các chất qua quá trình sắc ký. Nguyên tắc hoạt động chung Ví dụ: Sắc Ký Giấy Trạng thái của pha động Cơ chế trao đổi của pha tĩnh & động Sắc ký lỏng Sắc ký khí Phân Phân loại sắc loại sắc ký ký DỄ BAY HƠI KHÓ BAY HƠI Khí - hấp phụ Khí – lỏng Sắc kí lỏng Gia nhiệt mạnh Ko phân cực Phân cực Sắc kí khí Thuận pha Ngược pha Yếu Mạnh Thuận pha Ngược pha Bị ion hóa Ko bị ion hóa Sắc kí trao đổi ion Sắc kí ngược pha CHẤT NGHIÊN CỨU Dạng sắc ký Pha động Pha tĩnh Cách bố trí pha động Cơ chế trao đổi Khí Khí – hấp thụ Khí - lỏng Khí Khí Rắn Lỏng Cột Cột Hấp phụ Phân bố Lỏng Lỏng – rắn Lỏng – lỏng Lỏng – nhựa trao đổi Lớp mỏng Giấy Rây phân tử Lỏng Lỏng Lỏng Lỏng Lỏng Lỏng Rắn Lỏng Rắn Rắn Lỏng Lỏng Cột Cột Cột Lớp mỏng Lớp mỏng Cột Hấp phụ Phân bố Trao đổi ion Hấp phụ Phân bố Theo kích thước phân tử [...]... sự phân tán của cấu tử trong hai pha Những kĩ thuật sắc ký phổ biến A .Sắc lý lỏng (Liquid Chromatography-LC) B .Sắc ký khí (Gas Chromatography- GC) C .Sắc ký bản mỏng (Thin Layer Chromatography-TLC) D .Sắc ký giấy ( Paper Chromatography) E .Sắc ký trao đổi ion (Ion exchange chromatography) A .Sắc lý lỏng (Liquid Chromatography-LC) Định nghĩa sơ lược • Sắc kí lỏng là quá trình tách do ái lực khác nhau của... 3.Đầu dò • Các tín hiệu thu được từ đầu dò tỷ lệ thuận với hàm lượng chất cần xác định và được chuyền tải tới bộ phận ghi đo • 1 số dạng đầu dò như: Đầu dò UV Đầu dò huỳnh quang Kỹ Thuật Sắc Ký Lỏng Cao Áp (HPLC) • HPLC là một sắc ký cột đi kèm với một detector nhạy để có thể phát hiện được các chất tách ra trong quá trình chạy sắc ký • Với những tiến bộ kỹ thuật về cột, detector đã chuyển sắc ký. .. đó hai mũi sẽ nhọn hơn , cách này tiết kiệm • được thời gian phân tích và cho kết quả tốt hơn PHƯƠNG TRÌNH VAN DEEMTER • Phương trình Van Deemter ra đời bổ sung cho ,một số điểm của quá trình sắc ký theo lý thuyết đĩa chưa lột tả được các vấn đề ảnh hưởng bên trong cũng như bên ngoài của quá trình sắc ký • Phương trình Van Deemter sẽ mô tả ảnh hưởng của các quá trình này như sau: B H = H A + H B + H... Trong đó: N :Số đĩa lý thuyết của cột L:chiều dài của lớp chất nhồi trong cột H:chiều cao của đĩa lý thuyết W:bề rộng đáy mũi sắc ký W1/2:bề rộng đáy mũi sắc ký 1/2     2 α ĐỘ PHÂN GIẢI • Độ phân giải là đại lượng đặc trưng cho quá trình tách của các • chất ra khỏi nhau , ký hiệu là RS RS = t R2 − t R1 W1 + W2 2 • Mối liên hệ giữa RS , K’,N và qua công thức như sau : 1  α − 1  K 2  RS =  ... môi có hằng số điện môi càng cao sẽ giải hấp càng kém Mô hình hệ thống máy sắc ký lỏng 1.Bộ phận tiêm mẫu • Dùng để đưa mẫu từ ngòai vào cột bằng kim bơm • Loop có tác dụng khi lấy mẫu đảm bảo lượng mẫu chuẩn và mẫu thật được đưa vào cột như nhau  Loop cần được tráng bằng chính dung dịch sắp phân tích 2.Cột sắc ký • Cột sắc kí có thể làm bằng vật liệu nhựa hoặc thép, chiều dài 20 cm, đường kính...Các đại lượng ảnh hưởng HỆ SỐ PHÂN BỐ • Trong phương pháp sắc kí,sự chuyển nồng độ chất phân tích X giữa pha động và pha tĩnh Cân bằng của một cấu tử trong hệ sắc kí có thể mô tả bằng phương trình đơn giản sau đây: Apha động Apha tĩnh • Hằng số cân bằng (1) còn được gọi là hằng số phân bố được tính như sau: C( • CS:nồng... đã chuyển sắc ký cột thành phương pháp phân tích có tốc độ nhanh và hiệu suất cao • Loại này cần phải có hệ thống bơm cao áp để đẩy pha động với áp suất cao đến khoảng 30Mpa (300 atm) nhằm tạo dòng chảy với lưu lương vài mm/phút Lượng mẫu phân tích bằng HPLC chỉ cần khoảng 20µl Mô hình máy HPLC 1.Bình đựng dung môi 2.Bộ khử khí 3.Bơm cao áp 4.Bộ phận tiêm mẫu 5.Cột sắc ký 6.Đầu dò 7 Bộ phận ghi tín... vấn đề này chúng ta suy ra rằng luôn lớn hơn 1 • Hệ số chọn lọc phụ thuộc vào bản chất của A,B,pha động và pha tĩnh LÝ THUYẾT ĐĨA MARTIN VÀ SYNGE • Được áp dụng cho quá trình sắc ký vào năm 1942.theo lý thuyết này ,cột sắc ký được xem như gồm nhiều phần nhỏ gọi là đĩa.trong mỗi đĩa ,cân bằng vật chất được thiết lập nhanh giữa pha động và pha tĩnh • Số đĩa được biểu diễn bởi hệ thức sau: 2 • • • •... nghĩa là thời gian cần thiết để cấc tử đi từ đầu cột đến cuối cột hay chính là thời gian cấu tử bị lưu giữ trong cột • Hiệu số giữa thời gian lưu và thời gian lưu chết được gọi là thời gian lưu đã được hiệu chỉnh (tR’) • tsốRchứa này hay còn(Hệ là dung lượngdung lượng ) số quan ' = t R − t Mgọi số chứa hệ số là một thông Hệ trọng được sử dụng trong sắc ký , được ký hiệu là K’ C S VS VS tR − tM K'= =K =... hấp phụ bao gồm lực Van de Walls, lực cảm ứng, lực liên kết hóa học và lực liên kết hydrogen • Sắc ký lỏng xác định được rất nhiều loại cấu tử đặc biệt là các chất có khối lượng phân tử lớn Sắc kí lỏng hấp phụ được trên lí thuyết hấp phụ từ dung dịch Khái quát các yếu tố ảnh hưởng • Pha tĩnh : Pha tĩnh trong sắc kí lỏng thường ở thể rắn, có nhiều loại pha tĩnh khác nhau, tuỳ theo nhu cầu mà người ta . sắc ký. Nguyên tắc hoạt động chung Ví dụ: Sắc Ký Giấy Trạng thái của pha động Cơ chế trao đổi của pha tĩnh & động Sắc ký lỏng Sắc ký khí Phân Phân loại sắc loại sắc ký ký . thuật sắc ký phổ biến A .Sắc lý lỏng (Liquid Chromatography-LC) B .Sắc ký khí (Gas Chromatography- GC) C .Sắc ký bản mỏng (Thin Layer Chromatography-TLC) D .Sắc ký giấy ( Paper Chromatography) E .Sắc. PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ GVHD: Th.S Nguyễn Xuân Tòng Tiểu luận nhóm 3: BỐ CỤC THUYẾT TRÌNH Lược sử phương pháp sắc kí 1 Phân loại 2 Các đại lượng ảnh hưởng 3 Những kĩ thuật sắc kí phổ