Untitled TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA CÔNG NGHỆ HOÁ HỌC VÀ THỰC PHẨM KHOÁ HỌC CHUYÊN ĐỀ TIỂU LUẬN Giảng viên T s Nguyễn Minh Xuân Hồng Bộ môn hoá sinh và dinh dưỡng con người Sin[.]
lOMoARcPSD|38146348 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA CƠNG NGHỆ HỐ HỌC VÀ THỰC PHẨM KHOÁ HỌC CHUYÊN ĐỀ TIỂU LUẬN Giảng viên:T.s Nguyễn Minh Xuân Hồng Bộ mơn hố sinh dinh dưỡng người Sinh viên thực hiện: Nhóm Họ tên Mã số sinh viên Nguyễn Khánh Dư 20125360 Võ Công Luận 20125503 Nguyễn Trần Đăng Khoa 20125455 Tp Hồ Chí Minh, tháng năm 2023 Downloaded by van Nguyen (hacngocbachvan.1003@gmail.com) lOMoARcPSD|38146348 LỜI CẢM ƠN Trước tiên với tình cảm sâu sắc chân thành nhất, cho phép em bày tỏ lòng biết ơn đến nhà trường tạo điều kiện giảng dạy cho em môn học tuyệt vời Với lòng biết ơn sâu sắc, em xin gửi đến cô Nguyễn Minh Xuân Hồng truyền đạt vốn kiến thức quý báu cho chúng em suốt thời gian học tập Nhờ có hướng dẫn Cơ mà tảng chúng em hồn thiện tốt Đây chắn kiến thức có giá trị sâu sắc giúp em nhiều cho công việc sau Em xin chân thành cảm ơn Cô! Downloaded by van Nguyen (hacngocbachvan.1003@gmail.com) lOMoARcPSD|38146348 MỤC LỤC Contents MỤC LỤC CHƯƠNG I: GIỚI THIỆU CHƯƠNG II: NỘI DUNG CHÍNH .6 2.1: Tổng quan trình Multiplex PCR: 2.2: Các loại Multiplex PCR 2.2.1: Phản ứng PCR mẫu đơn .8 2.2.2: Phản ứng PCR nhiều mẫu 2.3: Thiết kế mồi cho Multiplex PCR 2.3.1: Chiều dài mồi .9 2.3.2: Nhiệt độ nóng chảy mồi (Tm) .9 2.3.3: Độ đặc hiệu 2.3.4: Tránh hình thành dimer primer 2.3.5: Thiết kế mồi cho phản ứng multiplex PCR phần mền PrimerPlex 2.4: Ưu điểm multiplex PCR 10 2.4.1 Kiểm soát nội 10 2.4.2 Hiệu 10 2.4.3 Chỉ định Chất lượng Tiêu .10 2.4.4 Chỉ định Số lượng Tiêu .10 2.5: Nhược điểm multiplex PCR .10 2.6: Tối ưu hoá thành phần cho phản ứng multiplex PCR .11 2.6.1: Nồng độ mồi 11 2.6.2 Nồng độ dNTP MgCl2 11 2.6.3: Sự cân dNTP/ MgCl2 .12 2.6.4: Nồng độ dung dịch đệm (buffer) 12 2.6.5: Lượng ADN khuôn Taq ADN polymerase 12 2.6.6: Sử dụng chất điều chỉnh: DMSO, Glycerol, BSA 13 2.7: Ứng dụng Multiplex PCR 13 2.7.1: Các mục đích phản ứng multiplex PCR 14 2.7.2: Multiplex PCR thực phẩm 14 CHƯƠNG III: KẾT LUẬN .16 TÀI LIỆU THAM KHẢO 17 Downloaded by van Nguyen (hacngocbachvan.1003@gmail.com) lOMoARcPSD|38146348 CHƯƠNG I: GIỚI THIỆU Multiplex PCR( PCR đa mồi) biến thể PCR cho phép khuếch đại đồng thời nhiều mục tiêu quan tâm phản ứng cách sử dụng nhiều cặp mồi Multiplex PCR kỹ thuật sinh học phân tử phổ biến Trong thử nghiệm ghép kênh, khuếch đại nhiều trình tự đích cách sử dụng nhiều cặp mồi hỗn hợp phản ứng Là phần mở rộng cho việc sử dụng PCR thực tế Downloaded by van Nguyen (hacngocbachvan.1003@gmail.com) lOMoARcPSD|38146348 Kỹ thuật tiết kiệm đáng kể thời gian công sức cách khuếch đại đồng thời nhiều trình tự phản ứng đơn lẻ, trình gọi phản ứng chuỗi polymerase đa nhân (PCR) Multiplex PCR yêu cầu đoạn mồi dẫn đến khuếch đại vùng DNA nhất, cặp riêng lẻ kết hợp nhiều đoạn mồi, tập hợp điều kiện phản ứng Ngồi ra, phải có sẵn phương pháp để phân tích sản phẩm khuếch đại riêng lẻ từ hỗn hợp tất sản phẩm Multiplex PCR trở thành xét nghiệm sàng lọc nhanh chóng thuận tiện phịng thí nghiệm lâm sàng nghiên cứu Sự phát triển multiplex PCR hiệu thường yêu cầu lập kế hoạch chiến lược nhiều nỗ lực để tối ưu hóa điều kiện phản ứng Đối với xét nghiệm PCR ghép thành công, nồng độ tương đối mồi, nồng độ dung dịch đệm PCR, cân nồng độ magie clorua deoxynucleotide, nhiệt độ chu trình, lượng DNA mẫu Taq DNA polymerase quan trọng Một kết hợp tối ưu nhiệt độ ủ nồng độ dung dịch đệm điều cần thiết PCR ghép để thu sản phẩm khuếch đại có tính đặc hiệu cao Nồng độ magie clorua cần tỷ lệ thuận với lượng dNTP, đồng thời việc điều chỉnh nồng độ mồi cho trình tự đích cần thiết Danh sách yếu tố khác ảnh hưởng đến phản ứng khơng có nghĩa đầy đủ Việc tối ưu hóa tham số thảo luận tổng quan cung cấp cách tiếp cận thực tế để giải vấn đề phổ biến gặp phải PCR ghép kênh (chẳng hạn sản phẩm khuếch đại giả, khuếch đại không đồng không khuếch đại số trình tự đích, khó khăn việc tái tạo số kết quả) Việc đánh giá xác nhận kỹ lưỡng quy trình PCR ghép kênh điều cần thiết Độ nhạy độ đặc hiệu phải đánh giá kỹ lưỡng cách sử dụng axit nucleic tinh khiết chuẩn hóa Nếu có thể, nên sử dụng đầy đủ biện pháp kiểm sốt chất lượng bên ngồi bên trong, biện pháp phải áp dụng nghiêm ngặt Khi số lượng tác nhân vi sinh vật phát PCR tăng lên, trở nên mong muốn cho mục đích thực tế để đạt phát đồng thời nhiều tác nhân gây hội chứng lâm sàng tương tự giống hệt và/hoặc chia sẻ đặc điểm dịch tễ học tương tự Downloaded by van Nguyen (hacngocbachvan.1003@gmail.com) lOMoARcPSD|38146348 CHƯƠNG II: NỘI DUNG CHÍNH 2.1: Tổng quan q trình Multiplex PCR: Phản ứng chuỗi Multiplex polymerase (PCR Multiplex) sửa đổi phản ứng chuỗi polymerase nhằm phát nhanh chóng đoạn xóa chép gen lớn Quá trình khuếch đại mẫu DNA gen cách sử dụng nhiều đoạn mồi DNA polymerase làm trung gian nhiệt độ máy quay vịng nhiệt Multiplex-PCR lần mơ tả vào năm 1988 phương pháp để phát đoạn gen dystrophin.Nó sử dụng với gen sulfatase steroid Năm 2008, multiplex-PCR sử dụng để phân tích microsatellites SNPs Multiplex-PCR bao gồm nhiều mồi hỗn hợp PCR đơn lẻ để tạo khuếch đại có kích thước khác dành riêng cho trình tự DNA khác Bằng cách nhắm mục tiêu nhiều gen lúc, thơng tin bổ sung thu từ lần chạy thử nghiệm mà không cần nhiều lần thuốc thử nhiều thời gian để thực Nhiệt độ ủ cho mồi phải tối ưu hóa để hoạt động xác phản ứng kích thước khuếch đại, tức chiều dài cặp sở chúng, phải đủ khác để tạo thành dải riêng biệt hiển thị điện di gel Bộ dụng cụ ghép kênh thương mại dành cho PCR có sẵn nhiều phịng thí nghiệm pháp y sử dụng để khuếch đại mẫu DNA phân hủy Quy trình thực hiện: Downloaded by van Nguyen (hacngocbachvan.1003@gmail.com) lOMoARcPSD|38146348 Đầu tiên cần thu thập mẫu DNA từ nhiều nguồn sau đảo ngược đoạn mồi đặc hiệu cho Gen với trình tự phổ biến chuyển đoạn mồi đặc hiệu cho Gen với trình tự phổ biến Cho DNTP, Taq polymeraza, Taq buffer (containing MgCl2) vào ống nghiệm tiến hành ủ đem phân tích điện di 2.2: Các loại Multiplex PCR Các phản ứng ghép kênh chia thành hai loại: 2.2.1: Phản ứng PCR mẫu đơn Kỹ thuật sử dụng mẫu DNA gen với số cặp mồi xuôi ngược để khuếch đại vùng cụ thể mẫu Downloaded by van Nguyen (hacngocbachvan.1003@gmail.com) lOMoARcPSD|38146348 2.2.2: Phản ứng PCR nhiều mẫu Nó sử dụng nhiều mẫu số mồi ống phản ứng Sự diện nhiều đoạn mồi dẫn đến lai chéo với khả bắt nhầm với mẫu khác Tuy nhiên phản ứng PCR có nhược điểm là: xuất nhiều đoạn mồi dẫn đến lai chéo với Vì nhiều đoạn mồi nên có nhiều DNA nên chúng có lai chéo điều khiến cho việc ghép nối sai với mẫu khác 2.3: Thiết kế mồi cho Multiplex PCR Thiết kế mồi cụ thể điều cần thiết cho phản ứng ghép kênh thành công Các cân nhắc thiết kế mồi quan trọng mơ tả chìa khóa để khuếch đại cụ thể với suất cao 2.3.1: Chiều dài mồi Xét nghiệm PCR Multiplex Chiều dài mồi liên quan đến việc thiết kế số lượng lớn mồi, mồi thiết kế phải có độ dài phù hợp Thơng thường, mồi có độ dài ngắn, khoảng 18-22 base (nucleotide) sử dụng 2.3.2: Nhiệt độ nóng chảy mồi (Tm) Các mồi có Tm tương tự, tốt khoảng 55°C-60°C sử dụng Đối với trình tự có hàm lượng GC cao, mồi có Tm cao (tốt 75°C-80°C) khuyến nghị Vì hàm lượng GC cao có nhiều liên kết hydro làm cho nhiệt độ nóng cao Độ dao động Tm mồi nên nằm khoảng 3°- 5°C 2.3.3: Độ đặc hiệu Điều quan trọng phải xem xét tính đặc hiệu mồi thiết kế trình tự mục tiêu, chuẩn bị xét nghiệm ghép kênh, đặc biệt có cạnh tranh nhiều trình tự mục tiêu bình phản ứng Downloaded by van Nguyen (hacngocbachvan.1003@gmail.com) lOMoARcPSD|38146348 2.3.4: Tránh hình thành dimer primer Các mồi thiết kế nên kiểm tra để phát hình thành primer dimer, với tất primer có hỗn hợp phản ứng (hiện tượng mồi bắt cặp với nhau) Giảm kích thước dẫn đến khuếch đại không đặc hiệu Tất số cần lưu ý thiết kế mồi gần giống với thiết kế mồi cho phản ứng PCR thông thường Thông thường, tỷ lệ Mồi/Khuôn cao dẫn đến việc hình thành primer dimer, phải ý số thành phần phản ứng 2.3.5: Thiết kế mồi cho phản ứng multiplex PCR phần mền PrimerPlex PrimerPlex công cụ hữu ích cho q trình thiết kế mồi phản ứng multiplex PCR Chương trình giúp kiểm tra oligo xem chúng có phản ứng chéo với hay khơng, đồng thời tăng thích ứng mồi Q trình phân tích hàng triệu cặp mồi vài giây, sau chương trình đưa danh sách mồi để người thiết kế lựa chọn 2.4: Ưu điểm multiplex PCR 2.4.1 Kiểm soát nội Các vấn đề tiềm ẩn PCR đơn giản bao gồm âm tính giả phản ứng khơng thành cơng dương tính giả nhiễm bẩn Âm tính giả thường tiết lộ thử nghiệm ghép kênh khuếch đại cung cấp biện pháp kiểm soát bên cho đoạn khuếch đại khác 2.4.2 Hiệu Chi phí thuốc thử thời gian chuẩn bị PCR đa thành phần so với hệ thống sử dụng nhiều ống PCR đơn thành phần Một phản ứng ghép kênh lý tưởng để bảo tồn polymerase đắt tiền khuôn mẫu thiếu hụt 2.4.3 Chỉ định Chất lượng Tiêu Chất lượng tiêu xác định multiplex hiệu so với phản ứng PCR đơn giản Downloaded by van Nguyen (hacngocbachvan.1003@gmail.com) lOMoARcPSD|38146348 2.4.4 Chỉ định Số lượng Tiêu Khuếch đại hàm mũ tiêu chuẩn nội PCR ghép kênh sử dụng để đánh giá số lượng tiêu cụ thể mẫu Để định lượng xác mẫu PCR ghép kênh, số lượng mẫu tham chiếu, số chu kỳ phản ứng ức chế tối thiểu việc nhân đôi sản phẩm theo lý thuyết cho chu kỳ phải tính đến 2.5: Nhược điểm multiplex PCR Mặc dù multiplex PCR có nhiều ưu điểm có số nhược điểm khơng thể bỏ qua: Thứ nhất, xảy tượng tự ức chế nhóm mồi khác Primer dimer sản phẩm phụ tiềm PCR, bao gồm hai phân tử primer lai với chúng có chung chuỗi bazơ bổ sung Sau đó, DNA polymerase khuếch đại dimer mồi, cạnh tranh thuốc thử PCR có khả ức chế q trình khuếch đại trình tự DNA đích Do đó, dimer mồi gây nhược điểm thứ hai, hiệu suất khuếch đại thấp Nói chung, điều làm cho PCR ghép kênh trở nên khó thiết kế có nghĩa kỹ thuật khơng thể dễ dàng nhân rộng đến mục tiêu lớn Thứ hai, việc chia nhỏ mẫu thường yêu cầu để giảm bớt thách thức cỡ mẫu lớn Tuy nhiên, điều lại làm giảm độ nhạy thử nghiệm biến thể Sử dụng giọt nhỏ mồi liên kết để tăng tính đặc hiệu giải pháp thay sử dụng để vượt qua số trở ngại giảm hình thành dimer mồi Một vấn đề phức tạp khác đặt điều kiện khuếch đại cho sản phẩm PCR Do đó, thiết kế mồi cho số mục tiêu đa kênh khó khăn Có nguy ưu tiên số sản phẩm sản phẩm khác Một tùy chọn xem xét số yếu tố trình thiết kế mồi, chẳng hạn trình tự axit nucleic đích, độ dài hàm lượng GC Điều làm cho nhiều khả tập hợp điều kiện khuếch đại tối ưu cho tất sản phẩm nhắm mục tiêu PCR ghép kênh Hầu hết nhà nghiên cứu sử dụng công cụ thiết kế silico , máy tính, để đơn giản hóa tác vụ 10 Downloaded by van Nguyen (hacngocbachvan.1003@gmail.com) lOMoARcPSD|38146348 2.6: Tối ưu hoá thành phần cho phản ứng multiplex PCR 2.6.1: Nồng độ mồi Nồng độ mồi ban đầu cho phản ứng có nồng độ từ 0.1 µM đến 0.5 µM Có thể điều chỉnh số tùy thuộc vào điều kiện phản ứng, ví dụ, người ta tăng hàm lượng mồi locus “yếu” giảm nồng độ mồi với locus “mạnh” Nồng độ cuối mồi phản ứng nên nằm khoảng từ 0.04 µM đến 0.5 µM Với số lượng thấp hay ADN phức tạp, nồng độ mồi nên nằm khoảng 0.3 µM đến 0.5 µM Ngược lại số lượng lớn hay ADN khn phức tạp nồng độ mồi nên nằm khoảng 0.04 µM đến 0.4 µM 2.6.2 Nồng độ dNTP MgCl2 Nồng độ MgCl2 nên giữ cố định mức mM Nồng độ dNTP dao động từ 0.5 mM đến 1.6 mM Nồng độ thích hợp loại dNTP từ 0.2 mM đến 0.4 mM Quá ngưỡng làm giảm tốc độ phản ứng Nồng độ loại dNTP thấp 0.1 mM giữ tốc độ phản ứng lại làm giảm số lượng sản phẩm dNTP gốc (stock) nhạy cảm với trình rã đơng, làm hiệu phản ứng multiplex PCR giảm Để khắc phục nhược điểm này, dNTP nên chia thành lượng nhỏ trước bảo quản -20ºC Do MgCl2 ảnh hưởng trực tiếp đến hiệu hoạt động enzyme Taq ADN polymerase nên nồng độ Mg2+ phải kiểm tra chặt chẽ Enzyme Taq polymerase, khuôn, dNTP mồi liên kết với MgCl2 nên nồng độ MgCl2 phụ thuộc vào nồng độ thành phần Hơn nữa, khuôn mồi có chứa EDTA hay EGTA nồng độ MgCl2 điều chỉnh Mg2+ giúp ổn định cấu trúc sợi đơi, bảo vệ ADN khỏi bị biến tính Nồng độ Mg2+ cao dẫn đến việc làm tăng lượng sản phẩm khơng đặc hiệu tác động đến q trình gắn mồi lên sợi khn Tuy nhiên hàm lượng Mg2+ không đủ làm giảm lượng sản phẩm cần thiết 11 Downloaded by van Nguyen (hacngocbachvan.1003@gmail.com) lOMoARcPSD|38146348 2.6.3: Sự cân dNTP/ MgCl2 Để làm việc hiệu quả, Taq ADN polymerase cần Mg tự (bên cạnh Mg liên kết với dNTP ADN) Đây lí tăng nồng độ dNTP tốc độ phản ứng PCR lại giảm tăng nồng độ Mg lại cho kết ngược lại 0.2 mM dNTP kết hợp với 1.5 đến mM MgCl2 hợp lí 2.6.4: Nồng độ dung dịch đệm (buffer) Dùng đệm nồng độ 2X cải thiện hiệu phản ứng multiplex PCR Nó hiệu chất điều chỉnh (như DMSO, glycerol, BSA) Các cặp mồi dùng để nhân đoạn ADN có chiều dài lớn hoạt động tốt nồng độ muối thấp cặp mồi dùng để nhân đoạn ADN ngắn yêu cầu nồng độ muối cao 2.6.5: Lượng ADN khuôn Taq ADN polymerase Khi lượng khuôn ADN thấp, hiệu khuếch đại độ đặc hiệu phản ứng tăng lên hạ thấp nhiệt độ gắn mồi Người ta tiến hành thử nghiệm nồng độ Taq ADN polymerase khác nhau, sau đưa nồng độ tối ưu enzyme 2.5U/ 50µl dịch phản ứng Nếu nhiều enzyme, nồng độ glycerol dùng để bảo quản enzyme làm cân trính khuếch đại làm tăng nhiễu Tỷ lệ mồi đặc hiệu hỗn hợp phụ thuộc vào hoạt tính enzyme, thành phần thiết yếu phản ứng MgCl2, dNTPs chất ADN đích Vì vậy, loạt cải tiến thực nhằm cải thiện trình PCR chủ yếu định hướng trực tiếp vào yếu tố tác động đến việc gắn mồi kéo dài chuỗi 2.6.6: Sử dụng chất điều chỉnh: DMSO, Glycerol, BSA Hầu hết phản ứng multiplex PCR khó thực phải hỗ trợ chất phụ gia DMSO, glycerol, formamide betaine Những phụ gia giúp làm lỏng chuỗi ADN, ADN dễ dàng bị biến tính nhiệt nhanh Tuy nhiên, phản ứng multiplex PCR, DMSO glycerol lại gây cạnh tranh Vì vậy, nồng độ chất nên xem xét kiểm tra chặt chẽ 12 Downloaded by van Nguyen (hacngocbachvan.1003@gmail.com) lOMoARcPSD|38146348 Nồng độ BSA đạt tới 0.8 µg/µl làm tăng hiệu phản ứng nhiều so với việc bổ sung DMSO glycerol 2.7: Ứng dụng Multiplex PCR Multiplex PCR có nhiều ứng dụng rộng rãi, xác định có mặt lúc nhiều tác nhân khác virus, vi khuẩn tác nhân xâm nhiễm khác Đồng thời, phản ứng multiplex PCR dùng để xác định thành phần có hỗn hợp mẫu dùng để xác định có mặt nhiều gen đơn lẻ hệ gen 2.7.1: Các mục đích phản ứng multiplex PCR Xác định tác nhân gây bệnh Định lượng mẫu Hiệu suất SNP genotyping cao Phân tích liên kết Phát đột biến Phát ARN Phát đột biến gen Nghiên cứu pháp y 13 Downloaded by van Nguyen (hacngocbachvan.1003@gmail.com) lOMoARcPSD|38146348 2.7.2: Multiplex PCR thực phẩm 2.7.2.1: Xác định giống sản phẩm nông sản biến đổi gen multiplex PCR Multiplex PCR để phát GMO Trong nghiên cứu này, Fourplex PCR thiết kế thử nghiệm để phát hiệu đậu tương GM Bốn cặp mồi xác định dựa dấu hiệu DNA phát triển với khuếch đại đặc trưng cho đậu tương để phân biệt đậu nành thông thường GM không GM Ba cặp mồi cụ thể GMO P35Sfor/P35Srev (141 bp), TNOSfor/TNOSrev (224 bp) EPSPSfor/ EPSPSrev (256 bp) sử dụng để xác định vùng chuyển gen RRS Cặp mồi LECTfor/LECTrev (101 bp) áp dụng cho phát gen lectin nội sinh để kiểm tra khả khuếch đại DNA đậu tương Việc phân tích bột đậu nành GM chứa 0, 0,1, 0,5 10% Roundup Ready cho phép kiểm tra độ nhạy độ tin cậy phương pháp PCR Sản phẩm PCR 101 bp tồn tất mẫu đậu tương bao gồm mẫu trắng (0% RRS), mong đợi Các sản phẩm khuếch đại dự kiến 141, 224 256 bp có mặt tất mẫu chuyển gen, ngoại trừ dải DNA 224 bp tương ứng với đầu cuối NOS mẫu RRS 0,1% Mẫu 0,1% GMO tạo dải yếu, mẫu chứa 0,5 10% RRS tạo dải rõ ràng Hơn nữa, cường độ dải DNA tăng tương ứng với lượng vật liệu chuyển gen tăng lên mẫu Không quan sát thấy sản phẩm PCR mẫu âm tính (khơng phải DNA) Kết thu cho thấy phương pháp multiplex PCR phát triển cho phép phát GMO với độ đặc hiệu cao độ nhạy (0,1% GMO) Ngồi ra, quy trình sử dụng để sàng lọc nhiều loại GMO, bao gồm giống không phê duyệt chúng chứa khuếch đại xác định phương pháp Các quy trình phân tích mơ tả cho phép sàng lọc nhanh chóng, hiệu đáng tin cậy GMO, cụ thể trồng Roundup Ready Bt chuyển gen khác có chứa yếu tố đặc trưng GMO như: promoter 35S, NOS terminator, epspsgen Tương ứng, phương pháp PCR ghép kênh phát triển triển khai dễ dàng để kiểm soát việc phân phối sử dụng thực phẩm biến đổi gen 14 Downloaded by van Nguyen (hacngocbachvan.1003@gmail.com) lOMoARcPSD|38146348 2.7.2.2: Xác định loài Multiplex PCR Cách tiếp cận đặc hiệu việc phát tổ hợp khác lồi thịt mục tiêu mà khơng có phản ứng chéo với thịt lừa, cá, tơm, thịt chuột gà Kết Multiplex PCR sử dụng để cải thiện điều kiện khuếch đại Mồi đặc hiệu thử nghiệm cho năm loại thịt: thịt lừa, cá, tôm, thịt chuột thịt gà Người ta thử nghiệm mồi dành riêng cho thịt không cho thấy phản ứng chéo với loại thịt khơng phải mục tiêu Tính đặc hiệu xét nghiệm tăng gấp bốn lần thiết lập cách thực PCR Khuếch đại 100 ng DNA thịt pha lỗng từ 100 đến 0,001 bốn lồi dương tính rõ ràng 0,1 bốn loài giới hạn phát thấp Những kết chứng minh xét nghiệm nhạy cảm với thịt lợn, thịt bò, vịt thịt cừu thử nghiệm 15 Downloaded by van Nguyen (hacngocbachvan.1003@gmail.com) lOMoARcPSD|38146348 CHƯƠNG III: KẾT LUẬN Multiplex PCR (PCR đa nhân) phương pháp PCR mà cho phép phát đồng thời nhiều gen loạt biến đổi genetic tạo nên gen mẫu DNA Điều tiết kiệm thời gian chi phí so với việc thực nhiều phản ứng PCR độc lập để kiểm tra gen Multiplex PCR sử dụng nhiều cặp oligonucleotide primers thiết kế để nhận dạng đoạn DNA khác lúc Quá trình cho phép nhân đơi đoạn DNA cách đồng thời đo lường số lượng sản phẩm amplification cách sử dụng dấu hiệu quang học phương pháp phân tích khác Tuy nhiên, Multiplex PCR có số hạn chế Các hạn chế bao gồm khả xuất sai sót độ dài khác đoạn PCR, cạnh tranh cặp oligonucleotide primers số vấn đề khác gây kết sai Ngoài ra, tăng cường đồng thời gen khác mẫu dẫn đến bất thường mát số sản phẩm PCR Tóm lại, Multiplex PCR cơng cụ hữu ích việc phát phân tích đồng thời nhiều gen mẫu DNA Tuy nhiên, hạn chế cần xem xét sử dụng phương pháp 16 Downloaded by van Nguyen (hacngocbachvan.1003@gmail.com) lOMoARcPSD|38146348 TÀI LIỆU THAM KHẢO https://biomedia.vn/review/mutiplex-pcr.html http://www.premierbiosoft.com/tech_notes/multiplex-pcr.html https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11835531/ http://www.premierbiosoft.com/tech_notes/multiplex-pcr.html https://www.youtube.com/watch?v=DNn1JVAwecc https://www.youtube.com/watch?v=sAT2E1IwvWk https://frontlinegenomics.com/what-is-multiplex-pcr/ http://www.premierbiosoft.com http://www.chimicare.org https://onlinelibrary.wiley.com/journal/10982825 http://article.foodnutritionresearch.com/pdf/JFNR-3-6-6.pdf https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2015.00757/full https://www.youtube.com/watch?v=KyuxaESzwYY&t=2s 17 Downloaded by van Nguyen (hacngocbachvan.1003@gmail.com)