B GIÁO D O I H C BÁCH KHOA HÀ N I [.]
Trang 4M C L C 1
DANH M C CÁC KÝ HI U, CÁC CH T TT 3 VI DANH M C B NG .4
D ANH M C CÁC HÌNH V TH .5
M U 6
T NG QUAN 8
1.1 Các cht chng oxy hóa 8
1.1.1 Khái ni m ho t tính ch ng oxy hóaệ ạ ố .8
1.1.2 Các ch t có ho t tính ch ng oxy hóa trong t nhiấ ạ ố ự ên 9
1.1.3 Các peptide có hoạt tính chống oxy hóa 10
u nành và các s n ph u nành th y phân 12
1.2.1 Thành ph n cầ ủa đậu nành và bã đậu nành 12
1.2.2 Quá trình th y phânủ .14
u ki n tách và tinh s ch các peptide có ho t tính ch ng oxy hóa 16
1.3.1 Các nghiên c u vứ ề điều ki n tách các peptide có hoệ ạt tính ch ng oxy hóaố 16
1.3.2 Các nghiên c u v ứ ề tinh sạch peptide có hoạt tính chống oxy hóa 18
V T LI U 24
2.1 Vt liu 24
2.1.1 Nguyên li uệ .24
2.1.2 Thiết bị 25
2.1.3 Hóa ch tấ .21
u 21
2.2.1 Phương pháp thủy phân bã đ uậ .21
2.2.2 Phương pháp nghiên cứu điều ki n tách chi t các peptide có ho t tính ệ ế ạ chống oxy hóa 22
2.2.3 Phương pháp tách các phân đoạn peptide có ho t tính ch ng oxy hóaạ ố 23
Trang 5 K T QU NGHIÊN C U VÀ TH O LU N 30
3.1 La chn m u 30
3.2 Các y u t ng t i quá trình tách chi t peptide 31
3.2.1 Ảnh hưởng c a thủ ời gian chiế ới hoạt t t tính ch ng oxy hóa 31 ố 3.2.2 Ảnh hưởng c a nhiủ ệ ột đ chiết tới hoạt tính ch ng oxy hóa 33 ố 3.2.3 Ảnh hưởng c a ch ủ ế độ khuấ ới hoạy t t tính ch ng oxy hóa 35 ố 3.2.4 So sánh hi u qu ệ ả thu hồi peptide có hoạt tính chống oxy hóa 36
3.3 K t qu tinh s ch peptide có ho t tính ch ng oxy hóa c a d ch chi t peptide t u th y phân b ng neutrase 38
K T LU N VÀ KI N NGH .42
I Kt lun 42
II Kin ngh .42
TÀI LI U THAM KH O 43 PH L C
Trang 6kDa: kilo Dalton ROS: Reactive oxygen species MWCO: microweight cut-off TLTK:
BHA: butylated hydroxyanisole
BHT: butylated hydroxytoluen OD:
MeOH: methanol MW:
DPPH: 2,2 diphenyl -1-picrylhydrazyl
Trang 7B ng 1.1 Thành ph ng cu nành tính theo ch t khô 12
B ng 1.2 Thành ph n c u tính theo cht khô 13
B ng 1.3 Ngu n g c, thành ph n axit amin và
ho t tính ch ng oxy hóa c a m t s n peptide có ho t tính ch ng oxy hóa 20
B ng 2.1 M quang OD t i các n L-Glutathion 25
B ng 2.2 M quang OD và hot tính chng oxy hóa c a BHA 29
B ng 3.1 S i ho t tính ch ng oxy hóa c a d ch chi u sau khi tinh
s .40 ch
Trang 8Hình 1.1 C u t o c ng có trong các peptide có ho t tính ch ng
oxy hóa .16
c tinh s ch peptide có ho t tính ch ng oxy hóa b l c màng .24
ng chu n L- Glutathion 26
PPH 26
+ 27
Hình 3.1 Ho t tính ch ng oxy hóa c a các m u th y phân b ng các tác nhân khác nhau (%DPPH) 30
Hình 3.2.1 Ho t tính ch ng oxy hóa c a d ch chi c t i các m c th i gian khác nhau (%DPPH) 31
Hình 3.2.2 Ho t tính ch ng oxy hóa c a d ch chi t khác nhau(%DPPH) 33
Hình 3.3 Ho t tính ch ng oxy hóa c a d ch chi khu 35
Hình 3.4 Ho t tính ch ng oxy hóa c u ki n tách chi t khác nhau(%DPPH) 36
Hình 3.5 Ho t tính ch ng oxy hóa c a d ch chi t t u ki n tách chi t thích h p u ki n tách chi ng (%DPPH) 37
Hình 3.6 Ho t tính ch ng oxy hóa c a d ch chi c khác nhau(%DPPH) 38
Hình 3.7 Ho t tính ch ng oxy hóa c a d ch chi c >10 kDa, 3kDa, 1 kDa(%DPPH) 39
n ng v i DPPH c a m t s n peptide 41
Trang 9Trong nh an toàn s c kh e và an toàn th c ph m
c quan tâm nhi u t i Vi t Nam, trong c quan tâm nhi u là các h p
cht thiên nhiên có ho t tính sinh h i c i thi n s c kh c s
và an toàn Các peptide có ho t tính ch ng oxy hóa chính là m t trong s các ch t
chng oxy hóa t c nhiu nhà khoa hc trên th gi i quan tâm nghiên c u
Có nhi u nghiên c u cho th y kh n ph m peptide có ho t tính sinh h c
t u nành th y phân là hoàn toàn kh thi u là ph Bã
chúng tôi th c hi u ki n tách và tinh s ch peptide có ho t tính ch ng oxy hóa t s n ph u nành th
Peptide có ho t tính ch ng oxy hóa tách chi t t s n ph u nành th y phân
c m t s nhà khoa h c trên th gi i nghiên c u t nh a th k
20 Tuy nhiên v này còn khá m i m c ta V y nên m u
ctài là:
- Nghiên cu ki n tách chi t t i v ng là d ch s n
ph u nành th y phân sao cho ho t tính ch ng oxy hóa trong d ch chi t thu
Trang 10c là cao nh t; t p t c nghiên c u tinh s ch d ch chi t sao cho s n ph m thu v là thu n khi t nh t và có hot tính ch ng oxy hóa cao nh t.
th tài gm:
- L a ch c m u d ch th y phân có ho t tính ch ng oxy hóa cao nh
s d ng cho vi c nghiên c u ki n tách và tinh s peptide; ch
- Nghiên c u các y u t ng t i quá trình tách chi i gian chi t, nhi , ch khu y;
- Nghiên c ch peptide và áp d tinh s ch
n nào có ho t tính ch ng oxy hóa cao nh t
Trang 11t ch
Ch t ch t có th làm gi
ho c làm ch ng b t l i c a các lo i ph n ng gây ra b i các g c t do hay các g c oxy ho i v i các ho ng sinh h ng c a con
i, và trong các h th ng sinh h c th c ph m [19] Các ch t ch ng oxy hoá là các h p ch t ho c h ng làm ch m s oxy hóa b ng c th ách c ch s hình thành các g c t do ho c b n ho t tính c a g c t do b ng m t (nhi: (1) lo i b nh ng th kh ng ph n ng peroxit, (2) gi các ion kim lo i (4) phá v ph n ng oxy hóa t ng theo dây chuy n ho c (5) làm gi m
n c Có hai lo i ch t ch ng oxy hoá: ch t ch ng oxy hoá chính
có tác dng d ng các ph n ng dây chuy n t o ra các g c t do (kh các g c t do);
và các ch t ch ng oxy hóa th c p có tác d ng lo i b các ph n ng oxy hóa b ng cách hình thành các ch t oxy hóa ho ng (các ch t ch ng oxy hoá b o
v ) [19]
Trang 12t tính ch
Ho c hi u là kh ng oxy hoá c a ch
c s d u qu c a ch t ch ng oxy hoá t nhiên thông qua hai
hóa h c chính Quét s ch các g c t do là vai trò chính c a ch t ch ng oxy
u này có th th c hi c b n s di chuyn electron (electron migration - EM) và s chuy n giao nguyên t hydro (hydrogen atom transfer - HAT) [39, 48] Ho t tính ch ng oxy hóa ch u ng b i nhi u y u t
ng oxy hóa và tr ng thái v t lý c a ch t có kh cht ch ng oxy hoá hi u qu nh t là nh ng ch n ph n ng chu i g c
t ng chc vòng phenol Nh ng ch t ch ng oxy hoá này
Crocin Bleach Lipid
i v i ph n ng oxy hóa d a trên EM, m t s
nh ho t tính ch c s dAntioxidant Capacity (TEAC); 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) và Coper II Reduction Capacity (CRC)
1.1.2 Các ch t có ho t tính ch ng oxy hóa trong t nhiên ấ ạ ố ự
Trong t nhiên, các ch t chng oxy hoá này bao gm flavonoid, axit phenolic, carotenoid và tocopherol có th c ch quá trình oxy hóa, loi b các g c t do, và hot
t kh [20, 34] Các ch t phenolic ch ng oxy hoá ch y u có th c chia thành 4 nhóm chung: axit phenolic (gallic, protochatechuic, caffeic, rosmarinic acids), phenolic diterpenes (carnosol và carnosic acid), flavonoid (quercetin và catechin; ), và du d -ng hot chng oxy hoá bng cách b y các g c t do; Flavonoids có th
Trang 13ng h p ch t này n m trong m t s i qu (táo và cherry), h dâu tây
(dâu tây, qu các lo i h t u nành
và cacao) và v c a nhi u cây[12, 7, 3]
M t s gia v và th o m c có ch a các h p ch t này Ch t chi t xu t c a nhi u thành ph n thu c h
ng phenol cao [9] Trong s m t s lo i th o m c và gia v o, cây húng qu , kinh gi i, qu , rau mùi và b c hà) có t l cao nh t các h p ch t phenolic
n (96%) [29]
Các lo i gia v ng, ngha nhiu hp cht ch ng oxy hóa
1.1.3 Các peptide có hoạt tính chống oxy hóa
Peptide là s n ph m c a s liên k t axit amin ho c th y phân protein Các
c và trng phân t nh n protein t nhiên c a
c t quá trình thng Chúng có
dài, thành ph n axit amin, và ch
Các peptide có ho t tính sinh h n protein c th
có ng tích cn các chu ki n c và có th
n s c kho Ho ng c a peptide d a trên thành ph n và trình t axit amin v n có c a chúng Kích c c a các trình t peptide ho ng có th i
t n 20 axit amin, và nhi u peptide có th có hot tính sinh h c
ng protein và các peptide có ho t tính sinh h c sin
th, trong ng nghi m, và trong quá trình ch bi n th c ph m Các peptide ho t tính
c tìm th y trong quá trình thu phân protein b ng enzyme và các s n ph m
s c t o thành trong quá trình tiêu hóa các protein c a d dày- t [25] ru
Các peptide có ho t tính sinh h c bao g m các peptide có ho t tính chng oxy hóa, các peptide ch ng viêm, các peptide h huy t áp, các peptide
Trang 14ng nghiên c u v các peptide có ho t tính ch ng oxy hóa có trong
s n ph m th u nành [15] hay các peptide có ho t tính ch ng oxy hóa có trong s n ph m th y phân nhau thai c u M t s nghiên c c th c hi
nh các ch t ch ng oxy hoá peptide ti
m t s d ch th y phân protein t ngu ng v t và th c v c tìm thy
có ho ng ch ng oxy hoá [46]
Các peptide có ho t tính ch c nghiên c u r ng rãi, ng
du tr các b nh thoái hóa mãn tính không truy n nhi m và trong b o
qu n th c ph m M i quan h c u trúc-ho ng c c t các
c nghiên cc tính khác nhau c a c u trúc hóa h c
ng phân t nh , thành ph n các axit amin (His, Trp, Phe, Pro, Gly, lys, Ile và Val) v i tính k t c u có
n hong ch ng oxy hoá c a peptide Trong s n và chung nhi u nh n ho ng ch ng oxy hoá
Các peptide có ho t tính ch ng ng t n
650 Da, chi m 70% trong s 42 peptide có ho t tính ch c xác
c chi t tách t ph n bã trong s n xu t d u oliu b ng alcalase
có trng nh có kh so v i các phân
n có trng phân t n peptide
c a d ch th c b ng cách s d ng siêu l c màng v i MWCO ln peptit <3 kDa có ho t tính chng oxy hóa cao nhi 1000 Da th hi n ho t tính ch ng oxy hoá dài t t nh c t d ch th y phân protein lòng tr ng tr ng b ng enzyme alcalase v i MW <1 kDa có kh ng oxy hóa m nh nh t so v n peptide khác [22]
Trang 151.2.1 Thành phần của đậu nành và bã đậu nành
u nành l c phát hi n
c Công nguyên K t c d n d n lan r ng trên toàn c u, ch y u
là thông qua vi c thu a c a Anh Các s n ph m t u nành, bao g c
nên ph bi n Châu Âu và M u nhi ta
nh n ra r u nành là m t ngu n protein và d u có giá tr , và ch t
ng tr c ti n ch ng cu nành [32] Tru
c qu ng bá trên kh p th gi i do giá tr ng cu nành
c (8- u 30%) T u t c s n xu t trên toàn th gi góp trên 80% sng toàn c u [13] Canada chi m 1,3% s toàn cu Thành ph n dinh d ng c c cung cp trong B ng 1.1 [13]
ng không hòa tan 21 25 Xenlulo, pectin
Trang 16c xem là ngu n protein ch ng cao, vì chúng ch
t t c 9 axit amin thi t y u v i s ng v t c n dinh
ng h p lý [43] Nhi u l i ích s c kho quan tr ng t vi c tiêu th u
n protein bao g - - - conglycinin), 11S (glycinin), 9S và 15S globulins [16]
u (Okara) là m t s n ph m ph c a quá trình ch bi u ph
nành ho c s n xu t p u ch c coi là ch t th i công nghi p
v giá tr p trên th i th ng vì tu i th ngn Tuy nhiên trong th c t u
ng có chn 25,4-28,4% (tính theo ch t khô) v i ch ng dinh
ng cao, có th th y nó là m t ngu n protein th c v t ti i
vi chi phí thp [33]
Thành ph n c u t nh và th hi n B ng 1.2[38]
B ng 1.2 Thành ph n c u tính theo ch t khô Thành ph ng T l (% kh ng)
Trang 171.2.2 Quá trình thủy phân
y phân enzyme v y chu n b các peptide ho t tính sinh h c t protein; Lên men là m thy phân
c coi là ít hi u qu
và h n h c s d ng trong s n xu t các peptide ho t tính sinh h c [44] Nhi u enzyme khác và s k t h p c Flavourzyme, có th c s d s n xu t các peptide t protein Trong nghiên
Các v trí c t trên peptide c : glutamate, methionine, leucine, tyrosine, lysine, và glutamine [1] Ch thy phân bi alcalase là 30oC- 65oC, pH = 7-9, th i gian t 90 phút t i 6 gi
Flavourzyme bao g m endo-và exopeptidases [4] D ch th c t o
b i flavourzyme có v ng c ng
d ng nhi c ph m Các v tách chi t b i enzyme
Trang 18c nghiên c u r ng rãi Ch th y phân b i flavourzyme là
30oC- 55oC, pH = 6-7, thi gian t 90 phút t i 6 gi
i v i neutrase, ch th y phân là 30 oC- 55oC, pH = 5,5-7,5, thi gian t 90 phút t i 6 gi
ã có m t s nghiên c u v s d ng các ch ng vi sinh v th y phân
u nành thành các peptide có ho t tính ch ng oxy hóa Issoufou Amadou (2010) d ng ch ng vi khu n Lactobacillus plantarum Lp thu nành Ch y phân là 37 th oC trong 72 gi [2] M t nghiên c u khác c a Mona
M Rashad (2011) d ng n m men Candida albicans, Pichia pinus, Saccharomyces cerevisiae lên thu Ch th y phân là 30 oC trong
72 gi [27] Mai.M.M Naeem (2015) d ng ch ng n m m c Aspergillus oryzae th u Ch th y phân là 30 oC trong 10 ngày [24]
Các s n ph u nành có ch a m ng h p ch c chng minh là có kh ng oxy hoá Ngày nay, các s n ph u nành lên
c ph bi n r ng rãi nhi gi
ví d -nao (Thailand), Natto (Nh t B n), Tempe (Indonesia) và Kinema () [27]
M t trong nh ng peptide có kh nh trong
d ch th u nành là chu i peptide leucine - leucine - proline - histidine - histidine (leu - leu - pro - his - his) [8] D a trên peptide này, r t nhi u cht ch c t ng h p Chen và c ng s phát hi n ra
r ng pro-his- t peptide cá th , có kh ng oxy hoá cao nh
n a, s t n t i c a m ng leucine ho c proline t u N c a m t peptide chng kh ng oxy hoá và tính k c c a các peptide Histidine và các axit amin vòng n kh ng oxy hoá, do
c u trúc vòng c a chúng [8, 31]
Trang 19Hình 1.1 C u t o c ng có trong các peptide có ho t tính
chng oxy hóa
1.3.1 Các nghiên cứu về điều kiện tách các peptide có hoạt tính chống oxy hóa
Trong nghiên c u c a Mai.M.M Naeem (2015) v s d ng ch ng n m m c Aspergillus oryzae và Trichodema harzium thu thành các peptide
có ho t tính ch ng oxy hóa, d ch th c tách b c và dung môi
c tách chi t b c th c
hic b c c t, h n d ng hóa b b t ho t enzyme, gi 60 oC trong 1 gi v i t khu ch 3000 vòng/phút trong 15 phút thu dch, l c qua giy l c Whatman No 1 và b o qu n d ch
V t b c s y khô 60 oC trong 24 gi sung dung môi v i t l 1:5(kh ng/th tích), gi 55 oC
Trang 20trong 3 gi v i t khu y 100 vòng/phút L c qua gi y l c Whatman No1 thu
dch lc và s y khô
K t qu cho th y ho t tính ch ng oxy hóa c a d ch chi t b c cao nht
so v i các d ch chi t b ng dung môi T l quét g c DPPH (%) c a các d ch chi t
bc, methanol, ethanol, aceton, diethyl ether (2mg/ml) khi th y phân b ng A.oryzae lt là 92,8%, 84,2%, 88,4%, 81,4%, 75,7% [24]
Trong nghiên c u c a W Samruan (2012) v ho t tính ch ng oxy hóa c a
u nành và d ch chi t t u nành lên men t Bacillus subtilis -SB MYP- s
d ng 2g d ch th y phân d ng c c t ho c methanol, tr n b ng vontex trong 1 phút, ly tâm v i t 3200 vòng/phút trong 30 phút,
ph c r a l i vc c t ho c methanol Hai ph n d ch th y phân
20 phút thu l y d ch trong là d ch chi t các peptide [15]
Trong nghiên c u c a Mona M Rashad 2011 v các peptide có ho t tính chng oxy hóa thu nh n t d ch th u b ng các ch ng n m men Candida albicans NRRL Y-12, Candida guilliermondii NRRL Y-2075, Saccharomyces cerevisiae NRRL Y-12632, d ch chi c thu nh n b ng cách:
c s y khô 60 oC và nghi n thành b t, b c trn
v i methanol theo t l 1:5 (kh ng/th tích) t i 55 oC trong 2 gi trong b n
Trang 21nhit có khu y tr n t n h c l c qua gi y
l c Whatman No 1và thu d ch[27]
Trong nghiên c u c a Naifu Wang (2014) v s n xu t các peptide sinh h c
t u nành b ng r n s d ng ch ng vi khu n lactic và các enzyme th y phân protein, d ch chi c thu nhn
ng hóa vc c t nhi
n dc gia nhi t t i 98 o b t
ho t enzyme và vi khu n lactic r i ly tâm v i t 6000 vòng/phút trong 30 phút,
dc lc qua màng l c 0,45µm[40]
Trong nghiên c u c a Atsushi Yokomizo (2002) v ho t tính ch ng oxy hóa
c a các peptide thu nh n t u b ng cách s d ng các enzyme
protease, dch th y t i nhi b t
hoi t 20000 vòng/phút trong 10 phút [47]
Theo báo cáo c a Yu-ling Lee (2008) v các tính ch t ch ng oxy hóa c a
d ch chi t b c t u nành lên men b ng Monascus, ho t tính ch ng oxy hóa
c a d ch chi t b t tính ch ng oxy hóa c a d ch chi t bng
c l nh [21]
Trong nghiên c u c a Issoufou Amadou v tinh s ch các peptide có ho t tính chng oxy hóa thu nh n t u nành lên men b i ch ng Lactobaccillus plantarum Lp6, d ch chi c thu nhu nành lên men tr n v i 50ml
c cng hóa trong 1 phút và 37 oC trong 60 phút, h n d c ly tâm
v i t 9600 vòng/phút trong 2 phút, phc r a l i v c ct
c trên, dc trong hai lc tru [2]
1.3.2 Các nghiên cứu về tinh sạch peptide có hoạt tính chống oxy hóa
Trong nghiên c u c a Ferial M Abu-Salem 2013, d ch chi t peptide t
u nành lên mec tinh s ch b ng c t s c ký l c gel s d ng Sephadex G-
Trang 22c king peptide và ho t tính ch ng oxy hóa [15]
Trong nghiên c u c a Issoufou Amadou 2010, d ch chi c tinh
s ch qua c t s c ký l c gel s d ng Sephadex G- c
t tính chn nào có ho t tính ch ng oxy hóa cao nh c c t và tinh sng h th ng s c ký l ng
n P1, P2, P3, P4, P5, c ti p t t tính chn P1 có ho t tính ch ng oxy hóa cao nhc phân tích chu i peptide b ng thi t b Bio Lynx protein / peptide [2]
Trong nghiên c u c a Atsushi Yokomizo 2002, d ch chi t c tinh
s ch qua c t s c ký l c gel s d ng Sephadex G- n I và II,
n II có ho t tính ch n II qua h ng s c ký l th c bn nh m F1, F2, F3,
t tính ch ng oxy hóa cao nh nh thành ph n axit amin
c a F4[47]
Trong nghiên c u c a Sahan Ranamukhaarachchi, d ch chi t peptide t u
c tinh s ch qua màng UF v i MWCO là 10kDa và màng NF v i MWCO
là 2,5kDa [37]
ng nghiên c u v ho t tính ch ng oxy hóa và thành ph n axit amin c a các peptide có ho t tính ch ng oxy hóa tách ra t s n ph u nành th y phân hay
mt s s n ph m th y phân khác.
Trang 23B ng 1.3 Ngu n g c, thành ph n axit amin và ho t tính ch ng oxy hóa c a m t s n peptide có ho t tính
chng oxy hóa
Ngu n g c
tinh s ch peptide có hot n
tính ch ng oxy hóa cao nht,
- -HPLC RP
n II, 1kDa Ala-Tyr Gly-Tyr-Tyr
Ala- Asp -Phe Ser- Asp -Phe (có ho t tính ch ng oxy hóa cao nh t)
- -HPLC RP
n P1, <
1kDa Phe-Phe-AspAsn-His-Val-Glu -His-Leu-Asp-His
Val-Ile-Ala-Gly-His Val-Leu-Ala-Gly-His Asp -Ser-Thr- Asr -His- Asn
- -HPLC RP
n III-4, < 1kDa Gly-Ser-Gly-Gly-Leu Gly-Pro- y-Gly-Phe-Ile Gl
BSH-Phe-Ile-Gly-Pro (432.52Da, có ho t tính ch ng oxy hóa cao nh t, IC50 = 0,118mg peptide/ml)
Trang 24u nành là ngu n th c ph m có ch a nhi u ho t ch t sinh h
các peptide có ho t tính ch ng oxy hóa r t t t cho s c kh e c i Các peptide
có ho t tính ch ng oxy hóa này còn có th c s d ng trong công ngh ch n bi
và b o qu n th c ph m u nành là ph ph m c a công nghi p s n xu t s u
u thô ch n 25,4-28,4% (ch n l n không hòa tanu ch a 27% protein ch ng các acid
valine, glycine có m t trong các chu i peptide có ho t tính ch ng oxy hóa m nh Bên cu là m t ngu n nguyên li u r n, d ki m V i các phân tích ti
tài l a ch n s d ng nghiên c u vi c tách chi t và tinh sch các peptide có ho ính ch ng oxy hóa t t
Mt s nghiên c u và báo cáo v dung môi và nhi tách có nh h ng t i
ho t tính ch ng oxy hóa c a d ch chi t peptide Tuy nhiên, các y u t ng
i gian chi t, ch khu c nghiên c u sâu r ng
V nghiên cu la chn dung môi tách chit các peptide có hot tính chng oxy hóa t s n ph u nành thy phân, các báo cáo nghiên c u c a Mai.M.M Naeem (2015) và W Samruan (2012) ra dch chit peptide bc có hot tính chch chit peptide bng methanol và m t vài dung môi khác Bên cc còn là m t dung môi chi t xu t an toàn nh t v ng so vi các dung môi h giá thành, vic chit xu t b c s t n chi phí t
Trang 25vic mua hóa cht ti vi c x lý thu h i dung môi sau khi tách chi t T các phân tích trên, trong phm vi nghiên c u c tài, chúng tôi l a ch c làm dung môi tách chit các peptide có ho t tính sinh h c t u nành thy phân
K thut tinh s ch các peptide có ho t tính ch c báo cáo trong m t s nghiên c u khoa h c, ch y u t p trung p chính là
c C u d a vào kích
c c tinh s ch d ch chi t peptide
c áp d ng trong các nghiên c u v peptide có ho
tính ch ng oxy hóa c u nành u g c ký l c gel s
d ng Sephadex G-15 và Sephadex G- c ký l ng cao áp Trong
c ký lc công nh n là k thu phân tích và tinh ch m t lot các phân t
Mtinh s ch hi u qu c qua màng siêu
l c (UF) ho c màng nano (NF) v i MWCO l t là 10kDa, 5kDa, 3kDa Theo
c < 10kDa trong d ch chi t s màng lc 10kDa Các phân t có kích c < 10kDa ti p t c l c qua màng lc 5kDa và ch có các phân t c < 5kDa mi
c Các phân t c < 5kDa ti p t c l c qua màng l c kích
c 3kDa và ch có các phân t c < 3kDa mc màng l c này T i quy mô nghiên c u trong phòng thí nghi
gi n v trang thi t b khi th c hi n Trong ph m vi nghiên c u c tài, chúng tôi
a ch c cut- tinh s ch các peptide có ho t tính ch ng
Trang 26ng d ng t u nành c ta là không nhic bi t là nh ng nghiên c u
ng du nành trong th c ph m
i Nghi p (Trung tâm Phát n Khoa h c và Công ngh
tr T n d u nành t công nghi p s n xu t s u nành ch bi t s s n ph m ph u s n xu xay t [52]
lý k t có th ay th 10÷17% b t mì trong s
xu ng th i còn làm cho bánh giàu ch m t thành ph ng c n thi t qu nghiên c u c tài
u công ngh ch bi u nành t o ch ph ng giàu ch t
i h c Bách Khoa thành ph H Chí Minh) làm ch nhi 50 t vài nghiên c u khác, tuy nhiên
u nào v tách chi t các peptide có ho t tính ch ng oxy hóa t s n
phu nành th y phân
Trang 27 c s n xu t t n m m c Aspergillus oryzae, Flavourzyme v a thu u ki n t a Flavourzyme là: nhi 40oC 55oC, pH 6,0 8,0 Ch ph c b o qu n trong t l nh 4 oC Ch ph m d ng b t màu nâu (trong t ng lô, t t s n xut thì m m nh t c a màu s c c a ch phm có th khác nhau) Flavourzyme có
th th y phân trên 70% mi liên kt peptide
- Các ch ng n m m c Aspergillus oryzae A1 và A2 l y t b p gi ng c a b môn Công ngh sinh h c, Vin Công ngh sinh h c Công ngh Thc phi
h c Bách Khoa Hà N i
Trang 28- Cân phân tích, cân k thut (c)
- Thit b c votex l (Trung Qu c)
- Thit b khu y
- Màng c 10kDa, 3kDa và 1kDa (Millipore, USA)
Trang 292.2.1 Phương pháp thủy phân bã đậu
2.2.1.1 Bằng chế phẩm enzyme protease thương mại
H n h c tru b ng máy vontex trong 30 giây,
y t i nhi b t hon
h p b ng thi t b ly tâm v i t c d ch ly tâm l n m t D c l c qua gi y l c d ch chi t