Nghiên ứu mứ độ nhiễm tạp aflatoxin theo huỗi sản xuất và ung ứng ngô trên địa bàn tỉnh phú thọ

4 AFPA Aspergillus flavus and parasiticus Agar 6 HPLC High Perfomence Liquid Chromatography 7 ELISA Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay 9 PCR Polymerase Chain Reaction 10 FDA Food and Dru

Đào Thị Hiên

 Hiên

LUC Chuyên ngành: Công Ngh  Thc Ph m 

Đào Thị Hiên

L I C  M 

Tôi xin bày t lòng bi ỏ ết ơn sâu sắc đế n GS.TS Hà Duyên Tư và TS Cung Thị ố T Quỳ nh đã thu nhậ n, tr c ti ự ếp hướ ng d n, quan tâm t n tình ch b o tôi trong su t quá ẫ ậ ỉ ả ố trình h c t p, nghiên c u và hoàn thành khóa lu n này ọ ậ ứ ậ

Tôi xin c ảm ơn các thầ y cô giáo, các cán b nhân viên c a Vi ộ ủ ện sau đạ ọ i h c, Vi ện công ngh sinh h c và th c ph ệ ọ ự ẩm, Đạ ọ i h c Bách Khoa Hà n i ộ đã giả ng d y và ch b ạ ỉ ả o cho tôi nh ng ki n th c và k ữ ế ứ ỹ năng quý báu trong quá trình họ c t p hoàn thành ậ chương tr ình th c s t ạ ỹ ại nhà trườ ng

Tôi xin chân thành c ảm ơn các thầ y cô ph trách, anh ch k ụ ị ỹ thuậ t viên thu ộc Trung tâm đào tạ o và phát tri n Công ngh Sinh h c - ể ệ ọ trường Đạ ọ i h c Bách khoa Hà

N i, Phòng thí nghi ộ ệm trường Cao đẳ ng Công nghi p Th c ph m Vi t Trì ã nhi t tình ệ ự ẩ ệ đ ệ giúp đỡ ề cơ sở ậ v v t ch t và ch d y tôi trong quá trình tôi th c hi n ph n thí nghi m ấ ỉ ạ ự ệ ầ ệ

c a lu ủ ận văn này

Tôi g i l ử ời cám ơn chân thành tớ i anh Lê Thiên Minh cùng các anh ch cán b t ị ộ ạ i

vi ệ n sau thu ho ạ ch, Việ n Công nghi p Th c ph m ệ ự ẩ đã giúp đỡ tôi nhi t tình trong quá ệ trình tôi ti n hành m t s thí nghi ế ộ ố ệm đánh giá tạ i vi n ệ

L i cu i cùng, tôi g i l i c ờ ố ử ờ ảm ơn sâu sắ ớ c t i cha m , nh ẹ ững ngườ i thân trong gia đình tôi và bạn bè đã ủ ng h , t ộ ạo điề u ki n và chia s ệ ẻ khó khăn cùng tôi trong suố t th i ờ gian qua

Xin chân thành cảm ơn!

Tác gi lu

4 AFPA Aspergillus flavus and parasiticus Agar

6 HPLC High Perfomence Liquid Chromatography

7 ELISA Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay

9 PCR Polymerase Chain Reaction

10 FDA Food and Drug Aministration

Đào Thị Hiên

DANH M C CÁC B NG   B ng 1.1 Các tính ch t hóa lý c a Aflatox    in 8

B ng 1.2 T l dân s b      ng aflatoxin trung bình có trên th c  ph m  12

Bnh v  ng aflatoxin trong th c ph m và th  a FDA (theo Smith và Tara, 2005) 14

B ng 1.4 Gi i h n aflatoxin m t s       c theo tiêu chu n c a FDA   14

Bnh v  ng aflatoxin trong các s n ph m th c ph m c a B Y t        Vit Nam 15

Bnh v c t   aflatoxin B1 và aflatoxin tng s c a Vi t Nam ( s      16

B ng 1.7 Các ch ng t o aflatoxin c   a A flavus và A parasiticus phân lc 18

B ng 1.8 M t s loài n m m    c có kh   18

Bm hình thái ca A flavus và A parasiticus 20

B ng 3.1 M t   A.flavus và A.parasiticus  t tr ng ngô 43

B ng 3.2 T l nhi m n m m c trên ngô gi      c gieo tra bàn t nh Phú  Th 45

B ng 3.3 T l nhi m n m m c trên ngô STH Phú Th        47

B ng 3.4 K t qu    kia bàn t nh Phú Th   49

B ng 3.5 M  nhi m aflatoxin trên ngô STH 50

B ng 3.6 T l nhi m n m m      c t afltoxin trên ngô bo qu n 51

Đào Thị Hiên

M C L C    1

Phn I :  3

1.1 Aflatoxin 3

1.1.1  3

1.1.2  3

1.1.3  6

1.1.4 S chuy 13

1.2  14

1.2.1  14

1.2.2  16

1.2.3  20

1.2.4  21

1.3  21

1.3.1  21

1.3.2  24

1.4  25

1.4.1  25

Đào Thị Hiên

1.4.2  26

Phn II :  32

 32

2.1.1. 32

 32

 33

 35

p mu 35

 36

nh m nhi m m c 36  

nh aflatoxin 37

 i n m m c 39 

 lý s li u 39  

Phn III :  40

3.1 Nghiên c u m  các loài Aspergillus flavus và Aspergillus parasiticus sinh t tr ng ngô 40 

3.2 Nghiên c u m  nhi m t p n m m c và aflatoxin trên ngô gi    ng 42

3.3 Nghiên c u m  nhi m n m m  c và aflatoxin ngô sau thu hoa  bàn t nh Phú Th   44

Đào Thị Hiên

3.4 Nghiên c u m  nhi m n m m  c và aflatoxin trên ngô b o qu n sau thu   hoch 48

Phn IV :  50

 51

 54

Đào Thị Hiên 1



An toàn v sinh th c ph m là v     hi n nay c c  th gii quan tâm

c bi t là các lo i nông s  o, ngô, khoai, s n, cây có d 

là ngu n nguyên li u nuôi s  i, là nguyên li  s n xu t th c ph  m

và thm b o v sinh an toàn th c ph m cho các lo i nông s n là vi c       kim tra cng và tìm ra bin các chc h i ô nhi m  trên các lo i nông s ng thm b o an toàn trong quá trình ch bi n Chính vì   

v y vi c nghiên c      góp ph n nâng cao ch     ng thm b o v sinh an toàn th c ph m cho các lo    c chú tr ng 

t Nam c nhi i có khí h u nóng u ki n thu n l

c a h ng th i ti  c t c t Aflatoxin do 

n m m c Aspergillus flavus, Aspergillus parasiticus   t c t nguy hi m nh t và  

ng nhi m trên nông s i và gia súc, bi u hi n c p tính, mãn tính   gây tt bi n th m chí có th   

Đào Thị Hiên 2

n m m  c t vi n m, các bi n pháp phòng tr c t m     c, thc ph m Gi i h n v m c nhi      m t trong nh ng tiêu chu n v an   toàn v sinh th c ph m   

 c ta hi t s tác gi nghiên c u v v    nhi m n m m c   trên m t s   loc b o qu Nguy n Phùng Ti n và c ng s     (1970) nghiên c u m c nhi m n m m c trên thóc o b o qu      kh  c mi n B c Vi  t Nam và m t s     , l , ng Hu

s nhi m n m m c và Aflatoxin trên l c, Nguy n Thu Châu và c ng s (1996)          nghiên c u tình hình nhi   c t n m mxin, Ochotoxin A,

    n pháp phòng tr K t qu nghiên c u cho    th  c c    m nhi u lo      nhim  ng khá cao Tuy nhiên vi c nghiên c u v   mycotoxin m i ch  c tình tr ng nhi  c t vi nm    m t s vùng, mi rõ ngu n g c, nguyên  

G1 22   14]  oi aflatoxin B1    1 2   

12

1.1.2 

Aflatoxin là tinh th màu tr ng, có kh    nh khi  i ánh sáng c     a vào tính ch t này cho phép phát hi n các h p ch   t aflatoxin    n r t th p (0,5 ng hay th    t v t c a s c ký b n m ng), là  

   ng aflatoxin bóa lý

Aflatoxin hòa tan t t trong các dung môi phân c c nh      

c bi  c s d n trong vi  ng v   ng t 10 ÷ 20 

Đào Thị Hiên 4

mg/l [1]



Các aflatoxin r t b n nhi     cao, không b phân h     

ng mà ch có th b phân h y khi h p 120      0C trong 30 phútn có th 

t n t i trong th c ph m khi n m m      tiêu di t b i x lý nhi   

 ng không khí c bi t là có tia t ngo i aflatoxin l     i không

b n 

Aflatoxin b n v ng trong các dung môi chloroform và benzene khi gi     u ki n t i và nhith  b phá h y hoàn toàn b ng vi c x    

lý m nh b i ammoniac ho c hypoc   lorit

S có m t c a vòng lacton trong phân t aflatoxin làm chúng nh y c m v i vi       c

thng kic tính này r t quan tr ng trong ch bi n th c ph     m

vì x lý ki m làm gi m s nhi m aflatoxin trong các s n ph m th c ph m Tuy nhiên         

n u sau quá trình s lý ki m mà có s axit hóa s làm ph n       c tr l   t o

Đào Thị Hiên 6

aflatoxin [1]

Các aflatoxin khá b n v i enzym tiêu hóa, aflatoxin B1 là phân t ái m có  

trng phân t th p d  c h p th    chuy n hóa aflatoxin B1 

 ng tiêu hóa chính là nh s ho  a protein niêm m c ng tiêu hóa t o ra s n ph m aflatoxin B   1 - epoxie, aflatoxin B 1  dihydrodiol ho c aflatoxin B

AFB1 và các s n ph m chuy n hóa c   c bài ting chính

c a RNA M t khác, tác d ng h n ch trong t ng h p RNA và tác d ng         c ch polymerase t-RNA là các nguyên nhân làm gi m sút t ng h p protein trong t bào    

   ng minh r   -lacton không bão hòa có trong phân t aflatoxin làm cho hot ch t này có ho gây c ch t ng h p DNA nhân t      i lo n s   ng

+ H n ch quá trình sinh t ng h p protein    

H u qu   u mô t bào gan  

Aflatoxin làm thi t h i kinh t cho ngành tr ng tr    

r t l n do nó làm gi m t l s ng, gi m s         ng, s c s n xu t c   ng v

trng, sc bi t aflatoxin còn tích t   tr ng gan, tr ng, s a gây nguy hi m cho s   c kh e c i tiêu dùc tính cng v t thí nghi m gây m t lo t    các tri u ch ng c p tính và mãn tính Nhi   c cng bi u hi n b ng cái ch   t

cng v t thí nghi m v i tri u ch ng là ho i t nhu mô gan, ch y máu gan và viêm        

c u th n c p Nhi   ng bi u hi n b  m l n, gan 

t máu, ch y máu và ho i t nhu mô     Long t i y u t di truy   

ng v i 3 ki t bi n 

+ Kh  a afc Wogan nghiên c c IARC

   m t bào, vi c cho u ng aflatoxin v i li   chóng c ch rõ ràng enzym DNA và RNA polymerase    

c quan sát vi c nuôi c y t      ng v t Quá trình sinh t ng h p ch u nh     

ng mnh b ng s bi   i quá trình sinh t n h p ARN thông tin Các u gan và  thn: khi cho các aflatoxin u ng qua 

Đào Thị Hiên 8

ng mi ng, ch y u là    AFB1      t t c ng v t nghiên c u  (gm c ng v t lin   ng không phi)

+ Tính gây quái thai: vi c tiêm aflatoxin B 1 vào chung b ng v i li u 4   µg/kg th tr  t b t t ho c ch  t

t bi n: aflatoxin B1 gây ra s   ng nhi m s c th     

n nhi m s c th có các c u n i       , các c u nhi m s c t , s      n DNA các t  ng th c v t bi n gen các vi khu n nghiên c u,    khi ho t hóa b ng các ch ph m microsom t gan chu     i [17 ]

i, m t lo t các nghiên c u cho th y t l m      

  các vùng có t l    m cao v       ng ca

    nào v n còn nhi tìm thây s g n k t c a aflatoxin B    1 vi DNA c a t bào gan c a các b nh nhân ung    

c hc trong máu ngo i vi, máu nhau thai 

và máu dây r n c a các s n ph     m v i aflatoxin B 1 Bên cliên quan gim aflatoxin B1 v i s  t bi n gen các b nh nhân này, mà   nhi u nh t là s t bi n gen p53 m      t gen ki m soát s ch t t     

t bi n gen này s    i s ng t   bào s chuy n  thành ác tính

y aflatoxin có kh  c c p tính và mãn tính các loài ng v t    

c tính nguy hi m nh t là kh    phát M t lo t các nghiên c  y s  

Đào Thị Hiên 9

  th i tai bi    l ng t 3,5 ÷ 22,1 µg/kg trng  trong 1 ngày và gây tai bing t 

    nh aflatoxin c  c thông báo, có l  ng xuyên theo dõi Có th k   ng h p ba tr em   

t tr em Uganda b ho i t gan c p tính liên quan t i vi       i go

và s n nhi m aflatoxin u 200 µg/kg và 1700 µg/kg là b ng ch ng có tính thuy   li   t

ph c nh t v s liên quan gi a aflatoxin v i b nh gan c p tính vùng Tây b         c 

  t v d ch, hàng  nhi m aflatoxin m c 15   µg/kg có d u hi u b ng     i ch t [14  ]

B ng 1.2 T l dân s b      ng aflatoxin trung bình có

Vùng cao trung bình Kenya

Tho nguyên cao trung bình Th y S  

Vùng th p Kenya 

Tho nguyên vùng th p Th y S   



0,1 0,2 0,2 0,2 0,3 0,3 1,5 7,8

1,2 2,0 2,2 2,5 3,8 4,0 9,2 10,0

Đào Thị Hiên 10

K t qu b ng cho th y t l dân s b                ng aflatoxin có trong thc ph m mà h s d ng    

ng vào th n gây viêm th n, n u kéo dài có th     ng vào h tun hoàn gây xu t huy  t h ng c u, gi ng kháng th

Theo m t s nghiên c u c        n t   i h c UCI (University of California Irvine) cho th y: t i nh  c, Vi t Nam và Nam Phi, s k t h p c a aflatoxin và b     gan lên gp 60 l c t     t trong nh     chim 10% t l t vong t i các qu c gia này     

V i m    ng nghiêm tr ng c  c t   n s c kh e con  

i, r t nhi u qu c gia trên th gi    nh v n    gi i h n

c phép có m t trong th c ph m C c qu n lý th c ph       c ph m Hoa K   c khuy n cáo v   ng aflatoxin trong th c ph m và  th    m b o v  s c kh i tiêu dùng và s c kh  ng v t Khuyc trình bày trong b ng 1.3 và b ng 1.4   :

 i v i ngô và các lo i h t dùng cho l n t 100 pound tr     lên 200

 i v i ngô và các lo i h t dùng cho bò   n cu i (v béo)  

  i v i b t hat bông dùng cho l n, bò và gia c m  

Châu Âu Thc ph m s d  i 5

Trung Qu c 

u th c v t   5 ÷ 20 Trong các lo i th c ph m khác    10 ÷ 50 Châu Á

T t c các lo  c, th c ph m   30 Trong các s n ph m t l c     120

(Ngu n: B Nông nghi p Hoa K )    

 Vi  i h n t m sinh h c và hóa h c trong th c   

 i v i aflatoxin B1 trong th c ph m nói chung   5

 i v i aflatoxin B1, B2, G1, G2 trong th c ph m nói chung   15

Đào Thị Hiên 13

 i v i aflatoxin M1 trong s a và các s n ph m t s a      0,5

B Nông nghi p và phát tri  nh v  ng ti

1 ng t ng s các aflatoxin (B  1 +B2 + G1 + G 2c tính b ng 

µg trong 1 kg thn h p hoàn ch nh cho gia súc, gia c  m[ ].13

Bnh v c t aflatoxin B1 và aflatoxin t ng s c a Vi t Nam ( s        

Đào Thị Hiên 14

P1 và aflatoxin M1 Cùng vi nh ng s n ph       

ng s n ph m chuy n hóa này tùy thu    nh y c m ca  DNA và v t ch b ng cách xen vào DNA, hình thành liên k t v i guanine c a DNA      S xen gi a này c a epoxide gây ra s    chuyn v trí gi a G và T    codon 249 c a gen p53 trong gan du này quan sát thây h u h t các m u thí nghi    m

 ra nguyên nhân chính da aflatoxin Kh  

c vào kh    c c a gan, y u t di truy     tu i và m t s y u t    

N m m  c t aflatoxin ch  y u thu c chi  Aspergillus Chi Aspergillus

phân b r ng rãi trên kh  t có th có l i ho c có h   t chúng s 

Đào Thị Hiên 15

di ta nh n th y   A flavus và A parasiticus có m i quan h  cht ch 

v m t c u trúc gen và là hai loài có kh      c t aflatoxin mnh nh t Vi c

nh các lo i sinh aflatoxin hi n t i d   m hình thái, vào lo i mycotoxin 

s n sinh ra ho c d a vào trình t DNA (Ito và c ng s , 2000)      

Các ch ng sinh aflatoxin c a A flavus và A parasiticus là r t ph bi n và  

c phân l p các nguyên li u khác nhau B ng 1.5 cho th y các ch ng phân      

l p  c a A.flavus ủ có kh ng t o aflatoxin chi m t l      cao

B ng 1.7 Các ch ng t o aflatoxin c a     A flavus và A parasiticus

phân lc

Ngun Các ch ng 

phân l p 

Các ch ng t o aflatoxin, %

(Nguồn: Schroder và Boller, 1976)

Ngoài hai loài A flavus và A parasiticus còn có m t s loài khác có kh    sinh m t s   c trình bày trong b ng 1.8 

B ng 1.8 M t s loài n m m c có kh        sinh aflatoxin

A bombysis (Varga et al, 2003) B,G

A flavus (Samson 2001, Varga et al, 2003) B

Đào Thị Hiên 16

A nomisnus (Samson 2001, Varga et al, 2003) B,G

A parasiticus (Samson 2001, Varga et al, 2003) B,G

i th t và nhi u th  

xâm nh p vào th c ph m ti p h p nh nh ng ch côn

A flavus        trùng h y ho i gây ra Tuy nhiên cây l   A flavus khó xâm nhy mà chúng xâm nh khi c l  t là sau khi thu ho ch  A flavus xâm nh p vào h t

l c ch c, t c là vào th u c a vi c làm khô  

Hình 1.3 m hình thái c a  Aspergillus flavus

có màu vàng l c hay xanh l c c khi chín trên m m c

A flavus     a

hng nuôi c y nhân t o (Czapeck hay th ch Sabouraud) hình thái khu   n

l c sau 24 gi nuôi c y có màu vàng nh   t  trung tâm rìa mép b có màu tr ng m n,   sau 48 gi hình thành bào t trung tâm rìa  

Đào Thị Hiên 17

mép b có màu tr ng m n xu t hi n các kh i bào t chín màu vàng nh t chuy n sang         màu vàng, sau 72 ÷ 96 gi khu n l c phát tri n c    i, t i 6 ÷ 7 ngày sau nuôi c y nhi phòngng kính b ng  u

 n t các bào tng có 5 ÷ 6 vòng tròn màu xanh l c trên b m t khu n l     c

Có ho c không 

6 ÷ 8

D ng len, x p nh   

L c vàng, xanh l c  Kem, nâu nh t Không

Theo k t qu nghiên c u không ph i t t c các lo      u có kh  

 n l n các ch ng  A parasiticus phân l p u sinh t ng 

h p aflatoxin Pháp 25% s   chng A flavus phân l  c t c, th c ph m

và tho thành aflatoxin Các ch ng c a loài   A flavus  t o thành aflatoxin trên l c chi m 96%, h t bông chi m 78%, lúa m ch chi m 49% và g o chi          m 35% [10 ]

Các ch ng g c vùng nhi   i có nhi     c t i các ch ng 

i M t s ý ki n cho r ng các ch     c t bao gi  u bào t 

c, ngay c các gi ng nuôi c y lâu ngày, có th bình 2 l p, cu ng       bào t  ng ch c t có s phình to m t ph n s i trên    

s i n m t o thành nh ng m t nh [10] Tuy nhiên ch d       m hình thái s r t

t t trên các lo cht có d  i nông s n   c, ngô, g o, bông Hàm 

t thích h p cho s phát tri n c a A flavus    và A parasiticus là

t 15 ÷ 30%   c th u c ch s phát tri n c a    chúng[10]

ng Czapeck Dox có ngu n th   i d ng

c s d ng nuôi c y và phân lo i c a A flavus   

Đào Thị Hiên 21

t t c   mui nitrat và amôn Ngoài ra chúng còn có kh    d ng axit glutamic, prolin, tryptophan, alanin, asparagin, histidin, lysine, methionine [6 ]

Ngoài ngut ch y   m b o cho s t n t i và phát tri n, các vi     

n i mng c n thi t các nguyên t    ng (P, K, S, Mg, Ca), các nguyên t  i MgSO4, K2SO4, KCl, FeSO4

 t c n thi t cho s phát tri n c a A flavus và     A parasiticus.

n m men ho c pepton ho c là các axit amin cùng v   u ki n pH, nhi  thích h p (pH = 5 ÷ 5,4; nhi  26 ÷ 280  u ki n t t nh t cho s t      c t aflatoxin

         ng kích thích s t o thành các  aflatoxin Tuy nhiên riboflavin và piridoxin thì không có tác dng nhi

c khi A flavus phát trin trên h t lúa m   ng aflatoxin t o ra  

n phôi m m nhi   n c chi t t m m   lúa m , lipit hay các axit béo s kích thích t t s     u này khin

ngng các ch t này có vai trò quan tr ng trong vi c sinh t ng h p aflatoxin     

vì s phân h y c a chúng t o thành các ch     i tham gia vào vòng chuy n hóa sinh t ng h p aflatoxin [10   ]

1.3  a 

1.3.1 

u Ng c Hào và c ng s    nh t l nhi m aflatoxin B1 trong 168   

m u nguyên li u s n xu t th      l nhi m trên ngô h t là 33%, ngô b  t

Nguy n Thùy Châu và c ng s (1994) phân tích m    nhi m aflatoxin trên 18 

m u ngô b t c a Hà N i, Hà B    u nhi m aflatoxin chim 82,3% t ng s m  ng t  n

 t Hà Tây có m nhi m aflatoxin cao nh t   [4]

c ti u 10 ÷ 25 l n Vi c không tìm th y aflatoxin B1 trong t ch     ng

và tìm th y s có m t c a aflatoxin B1 trong m u gan b nh ph      

hc ti   c

Đào Thị Hiên 23

khnh m i quan h 8  gi ]

Lê Th  Ngc Di p (2003) nghiên c u s d ng        h n ch tác h i c a   aflatoxin trong th    i v i gà th t nuôi công nghi p   i d ng b t v  i liu 0,25 và 0,5% có tác d ng h n ch   tác h i c  c t n m m  c aflatoxin m c 

n 300ppb B sung 0,5% actiso b t có tác d  i v i m c nhi m 500ppb   aflatoxin B1      nhi m aflatoxin B1 m c 100ppb ho c 300ppb, n    u

c b sung actiso b t v i t l 0,25% ho c 0,5% có t       ng và hi u qu  

s d ng th   t, nuôi t 49 ngày tu i v n có các ch tiêu sinh lý, sinh hóa bình i   

ng, không có b nh tích nhi  c và không có t   1 gan[5 ]

Nguy n Thùy Châu, Nguy n Th H ng Hà (2002) nghiên c u kh        t

n m m c A.flavus và c ch  aflatoxin ca ch t di t n m sinh h   u

u xanh và cà phê K t qu cho th y Inturin A hoàn toàn có kh     

ng d phòng tr n m m    c t n m m c trên nông s n trong quá trình b o   

m t s m u ngô thu th   c b o qu n g  p 2 ÷ 3 l n so v i m c cho phép (10ppb)   Sau th i gian b o qu      ng aflatoxin trong ngô    



u Ng c Hào, Ph m Minh H ng và Tô H   c (2000) nghiên c u ng d ng   chng n m men s ng   Saccharomyces

  2002) các nhà nghiên cu m nhi m 

A.flavus nh r ng m c nhi  m A.flavus tr t tr ng ngô b nh  

ng b i các v    c M  A.flavus t trnh  t tr ng bông g i v       

t tr ng lúa mì g i v là 457 CFU/g S nhi m A.flavus trên ngô h     

ng t  n 100% (trung bình là 15% h t ngô b nhi  ng aflatoxin

ng trong kho ng 0 ÷ 1590 ppb (trung bình là 57 ppb) M c nhi m   aflatoxin phân b ng u nhiên trong ngô   i m c nhi m

A.flavus Nghiên c u cho th y 43% n 59% các ch ng     A.flavus phân lt có kh   i s nhi m cao nh t   qu n th t c a ngô g i v       

2001, k t qu cho th y 84% s    chng A.flavus phân l p t các h t ngô có kh     o aflatoxin[16 ]

r t ít d chuyn hóa    c t l tìm th y aflatoxin B1 

c ti u (26,9%) là th t nhi u trong t  chc gan (88,2%) [17 ]

T i Thái Lan, nghiên c u cho th y 35% m u ngô phân tích nhi m aflatoxin B     1 (trung bình 400µg/kg) trong khi 40%

Đào Thị Hiên 25

nhi m aflatoxin B 1   c tìm th y Uganda và 97% o    Cebu  ng aflatoxin trong m u ngô các gia  

n s bùng n c a b      c t c p tính Tây b c   , 80 85% s m u ngô thu th p t các kho b o qu      1985 Thái Lan 

nhn sau: 25g mc say m n trên máy xay cà phê, chi t xu t aflatoxin   

b ng h n h p aceton (100ml) và dung d ch NaCL 10% (50ml) M    c nghi n trên máy nghing th Polytron L c qua gi y l c Whatman N    0 1 L y 50ml d ch l c và   

t a b ng Pb(CH  3COO)2 lo i b protein, l c qua gi y l c Whatman N   0 1 80ml d ch l c chuy n vào ph u chi   chit xu t b ng hai pha l ng l ng v     i 40ml hexan (2l n) L c chi t xu t v i 40ml cloroform (3l n), lo i b      

lc axeton Lc gi l  ng cloroform có aflatoxin  máy c t quay cô chân không Ph n c  c hòa tan vào 100

    ng b u Nh      n aflatoxin B1 v i n  0,71 ng/µl trên cùng m t phi n b n m ng Nh     

Đào Thị Hiên 26

5mcl chun aflatoxin B1 vào cùng m t v t c a m    ) n trong

H dung môi dùng cho s c ký b n m ng m t chi u là: cloroform : aceton 9:1      

Gi i h phát hi n c  pháp là 1 µg aflatoxin/kg s n ph m (1ppb),  

h s   ng là 0,3÷5,0

Phát hi n aflatoxin b ng cách phát hi n s phát quang c a phi n l p m ng         

bu ng t  phát x c i 365nm) Phát hi n b ng m t   

ng trên s   c a m u chi    phát quang c a các v t có giá tr Rf   

b ng v i chu n Ch n ph      ng thích h p c a m u phân tích cho vi    nh

ng c a aflatoxin 

Th xác minh aflatoxin:

Th v n m ng dung d ch axit H  2SO4 c, t l  1: 2 Na các v t c a m u chi t không chuy n sang màu vàng     

  m u chu n, t c là không có aflatoxin trong m u th   u màu phát quang

c a các v t c a m u th      aflatoxin ng v ng sn thành màu

 u th 

1.4.2 

* c chi t tách t m u th b ng dung môi h     

D ch chi  c l c qua ph u v i ch t tr l c celit, m t ph n d ch l        c c làm sch qua c t silicagen ( ho c florisil, SPE) R a gi i c t b ng dung môi chloroform aceton       (4:1) Dung d ch r a gi  c c n c n khô, hòa c n b ng dung   

ng r  th ng s c ký l ng hi  

* Thi .d t b ng c , hóa ch t  

Thi t b :