Thực hành hoá sinh 2

câu hỏi ôn tập học phần hoá sinh đại học thực hành hoá sinh 2, phần chuyển hoá, câu hỏi ôn tập về hoá sinh máu, hoá sinh thận, bài tiết các chỉ số hoá sinh, các phản ứng hoá sinh thường dùng, và các điều kiện đi kèm

Thực hành hoá sinh 2

1 Định lượng glucose máu

a, Đại cương

- Glucose tự do trong máu là dạng glucid vận

chuyển trong cơ thể

- Nguồn gốc: + nội sinh: sự phân ly glucose ở

gan

+ ngoại sinh: thức ăn từ ngoài vào

- Các mô trong cơ thể sử dụng glucose máu như

nguồn cung cấp năng lượng cho chúng

- Hàm lượng glucose máu duy trì hằng đimhj

3,9-6,4 mmol/l

 Điều kiện duy trì hằng định glucose máu là do

gan và hệ thống thần kinh nội tiết

 Hệ thống hormon điều hoà glucose máu:

 ACTH: do tuyến yên (kích thích vỏ thượng thận)

 T3,T4: do tuyến giáp T3: triodothyronon, T4:

thyroxin

 Adrenalin: do tuyến thượng thận

 Glycagon: làm tăng glucose

 Glucocortisol: do vỏ thượng thận

 Hormon làm giảm glucose huyết thanh là insulin

do dảo langer

b, Nguyên tắc

- Phương pháp định lượng: enzym đo quang

- Nguyên tắc

(xúc tác: glucoseoxydase, GOD)

(xúc tác: peroxydase, POD)

- Đậm độ của phức màu tỷ lệ thuận với nồng độ

glucose ban đầu

- Đo mật độ quang ở bước sóng 546nm so với

mẫu glucose chuẩn

c, Tiến hành xét nghiệm

ống trắng

ống mẫu

ống thử

Thuốc thử 1000l 1000µl 1000µl Nước cất

(thăng bằng V)

10µl

Dd glucose mẫu

10µl

Huyết thanh

10µl

 dd sau phản ứng xuất hiện màu hồng cánh sen

d, Chú ý

- Bệnh nhân không ăn 6-8 tiếng

- Sau khi lấy máu làm xét nghiệm luôn, chậm nhất

là sau 1h lấy máu

- Chuẩn bị 1 đầu col xanh, 3 đầu col vàng, 3 ống nghiệm, 4 hoá chất để làm thí nghiệm

e, ý nghĩa lâm sàng

- Glucose máu tăng (lớn hơn 6,4 mmol/l)

 Viêm tuỵ cấp và mạn

 Đái tháo đường: type I phụ thuộc vào insulin, type II không phụ thuộc insulin

 Hôn mê glucose máu có thể lên đến 44,5 mmol/

l luôn đi kèm theo đường niệu dương tính

 U tuyến yên

 Cường tuyến thượng thận

 Nhiễm độc giáp nặng

 Shock do chấn thương , nhồi máu cơ tim, bỏng nặng

- Glucose máu giảm (nhỏ hơn 3,9 mmol/l)

 Nhịn đói kéo dài

 U thân tuỵ: u adenoma, carcinoma

 Hạ đường huyết/ hôn mê hạ đường huyết: do dùng quá liều insulin, theo dõi không chặt chẽ

 Thiểu năng các tuyến nội tiết: vỏ thượng thận, tuyến giáp, tuyến yên, tổn thương vùng dưới đồi

 Xơ gan nặng

 Sốt rét

 Nhiễm độc các chất Asen, CCl4, chloroform

2 Định lượng cholesterol

a, Đại cương

- Nguồn gốc: + nội sinh: gan

+ ngoại sinh: động vật, thực

- Hấp thu: ruột hấtp thu cholesterol và este hoá

cholesterol tạo thành cholesterid và este hoá

tạo lipoprotein

- Vai trò: tiền chất acid mật, hormon càn thiết

b, Nguyên tắc

- Nguyên tắc: đậm độ phức hợp màu tỷ lệ thuận

với nồng độ cholesterol ban đầu, đo mật độ

quang ở bước sóng 546nm so với mẫu chuẩn

- Phương pháp: định lượng CHO-PA

(xúc tác: cholesterolesterase)

(xúc tác : cholesteroloxydase)

4H2O

(xúc tác: POD)

c, Tiến hành

- Chuẩn bị huyết thanh, huyết tương chống đông

- Thuốc thử

Ống trắng

Ống mẫu

Ống thử Thuốc thử 1000

µl

1000 µl

1000 µl Nước cất 10µl

Dd

cholesterol

mẫu

(5,17mmol

/l)

10µl

Huyết

thanh

10µl

- Trộn đều, ủ trong 10p ở nhiệt độ 20-25⁰C hoặc

5p ở 37⁰C

d, ý nghĩa lâm sàng

- Chỉ số bình thường: 3,9-5,2mmol/l

- Cholesterol tham gia vào thành phần các

lipoprotein như VLDL, LDL, HDL

- Khi VLDL, LDL tăng, HDL giảm có ý nghĩa dự báo

nguy cơ xơ vữa động mạch, nghẽn mạch

- Thay đổi sinh lý cholesterol huyết thanh

 Tuổi sơ sinh 0,75-1,2mmol/l

 Giới tính nam > nữ

 Nữ giới: giảm ở giai đoạn thể vàng chu kì KN, giảm ở tháng đầu mang thai > sau sinh, tăng 3 tháng cuối > mãn kinh

 Tăng khi quá trọng/sau ăn, dùng vitamin D, uống rượu hút thuốc, tuổi 50-60, uống thuốc ngừa thai, mang thai

 Ăn uống: giảm khi ăn chay, tăng khi ăn nhiều

mỡ, uống rượu

 Yếu tố khác do tâm lý, stress, động kinh

- Tăng cholesterol

 Thứ phát

 Bệnh lý ở gan: vàng da tắc mật, viêm ống mật tiến triển

 Các bệnh thận: thận hư nhiễm mỡ (10-20mmol/ l), viêm thận cấp

 Bệnh lý về tuỵ: sau phẫu thuật tuỵ, viêm tuỵ cấp mạn, thiếu insulin (tiểu đường)

 Nhược năng tuyến giáp

 Nguyên phát: các rối loạn về lipid, xơ vữa động mạch, tăng huyết áp

- Giảm cholesterol máu

 Các tổn thương gan nặng

 Xơ gan giai đoạn cuối

 Hoại tử gan cấp và bán cấp

 Nhiễm độc thuốc, hoá chất: chlorofrom, CCl4

 Nhiễm trùng huyết

 Cường giáp trạng

 Suy thượng thận

 Các chúng thiếu máu: thiếu máu ác tính, thiếu máu tan huyết, thiếu máu nhược sắc nặng

≥2,5mmol/l rối loạn lipid máu

≥6,0mmol/l xơ vữa động mạch

≥15,0mmol/l  viêm tuỵ cấp hoại tử

3 định lượng triglycerid

a, đại cương

- Nguồn gốc:

 Nội sinh

 Tổng hợp ở gan: triglycerid + apoprotein

VLDLmáu

 Dự trữ ở mô mỡ

 Ngoại sinh

Thức ăn qua Tb niêm mạc

ruộtchylomycron (80 triglycerid)qua bạch

mạchmáu

- Các dạng: VLDL, LDL, HDL

- Vai trò: thành phần lipoprotein huyết tương

b, nguyên tắc

- Theo phương pháp GPO-PAP

- Phương trình

(xúc tác: LPL)

(xúc tác: GK)

(xúc tác: GOP)

4H2O

(xúc tác:POD)

c, ý nghĩa lâm sàng

- Chỉ số bình thường: 0,46-1,88mmol/l

- Ý nghĩa:

 Giúp chẩn đoán phân biệt các thể lipid máu

 Chẩn đoán sớm nguy cơ xơ vữa động mạch và

nhồi máu cơ tim

 Theo dõi hiệu quả chê độ ăn và thuốc giảm lipid

máu

- Thay đổi sinh lý

 Tăng: quá trọng/sau ăn, dùng vtm D, uống rượu

hút thuốc, ăn nhiều mỡ, tuổi trung niên

 Giảm: ở trẻ sơ sinh=1/2 người trưởng thành,

hoạt động thể lực

- Thay đổi bệnh lý

 Tăng

 Bệnh lý về mạch máu

 Xơ vữa động mạch, nhồi máu cơ tim, thiếu máu

cơ tim

 Hội chứng tăng lipid máu

 Bệnh lý mãn tính: hội chứng thận hư, đái tháo

đường

 Bệnh lý về gan: viêm gan VR, xơ gan rượu

 Tăng acid uric có biến chứng tim mạch

 Giảm

 Xơ gan

 Thiếu dinh dưỡng: bệnh mãn tính, suy kiệt, K dạ dày

 Cường giáp

 Chú ý

 Nghi ngờ tăng khi triglycerid > 1,71mmol/l

 Tăng và có giá trị chẩn đoán > 2,29mmol/l

 ≥2,5mmol/l  rối loạn lipid máu

 ≥6,0mmol/  xơ vữa động mạch

 ≥9,0-15,0mmol/l  viêm tuỵ cấp hoại tử

3 định lượng protein toàn phần

a, Nguyên tắc

- Dựa trên phản ứng màu Biure: trong MT kiềm các liên kết pepid trong protein sẽ tạo với ion

Cu2+ thành phức hợp màu xanh tím Cường độ màu tỷ lệ thận với số liên kết peptid hay nồng

độ protein

b, tiến hành

ống trắng

ống thử ống

mẫu Thuốc

thử

1000µl 1000µl 1000µl Nước

cất

20µl

Huyết thanh

20µl

Dung dịch protein mẫu

20µl

C, ý nghĩa lâm sàng

- Xét nghiệm dùng để đánh giá chức năng gan

- Giá trị bình thường: 60-80g/l

- Tăng protein: ít gặp, trong các trường hợp máu

cô, globulin máu đơn dòng

- Giảm protein:

 Do thiểu dưỡng: ăn không đủ pro, suy dinh

dưỡng

 Do tiêu hoá và hấp thụ kém: trong các bệnh

đường tiêu hoá, thiếu enzym, thiếu hệ thống

vận chuyển aminoacid

 Do giảm tổng hợp: xơ gan, viêm gan

 Do mất pro: bệnh thận (hội chúng thận hư,

viêm cầu thận mạn, suy thận), mất qua da do

bỏng nặng

4 định lượng bilirubin toàn phần huyết thanh

a, nguyên tắc

khi có caféin, bilirubin toàn phần kết

hợp với acid diazo sulfanilic tạo thành

azobilirunin Thêm tartrat tạo dung dịch có màu

xanh

b, tiến hành

ống trắng ống thử

Thuốc thử R3 1000µl

c, ý nghĩa

- Xác định bệnh lý vàng da trước, tại hay sau gan

- Bilirubin toàn phần huyết thanh từ 3-17µmol/l

- Bilirubin liên hợp từ 0-5µmol/l

tăng trong hội chứng vàng da

Hồng cầu vecdo Hbbiliverdinbil tự do (GT,

độc, không tan)ganBil liên hợp (ít độc

tan)tá tràngphân, nước tiểu

- Vàng da trước gan:

 Bil: toàn phần tăng, gián tiếp tăng, liên hợp và

trong nước tiểu bình thường

 Do phá huỷ quá nhiều hồng cầu bởi tan máu di

truyền, bệnh về lách, hồng cầu liềm, tan máu

mắc phải do truyền nhầm nhóm máu, thuốc gây

tan máu, nhiễm độc chì, vàng da ở trẻ sơ sinh

- Vàng da tại gan

 Bil: toàn phần tăng, tự do tăng nhẹ, liên hợp

tăng nhiều, nước tiểu tăng, muối mật trong

nước tiểu âm tính

 Khi tế bào gan bị tổn thương do viêm gan VR, nhiễm độc

- Vàng da sau gan

 Bil: toàn phần tăng, tự do tăng nhẹ, liên hợp tăng nhiều, nước tiểu tăng, muối mật dương tính

5 định lượng creatin huyết thanh

a, nguyên tắc

- Là dẫn xuất của a.a

- Creatin (P) là một trong những dạng dự trữ NL dưới dạng phosphat

- Creatin (P) + acid piric (vàng)  picrat creatinin (cam)

- Phương pháp: đo quang enzym

b, tiến hành

ống trắng ống mẫu ống thử Thuốc

thử

1000µl 1000µl 1000µl Nước cất 50µl

Creatinin mẫu

50µl

Huyết thanh

50µl

c, ý nghĩa

- Đánh giá chức năng thận

- Là một chất chuyển hoá nitro sp thoái giáng của creatinin cơ

- Nguồn gốc: ngoại sinh do thức ăn cung cấp, nội sinh từ gan thận tuỵ

- Đào thải qua thận

- Tăng

 Suy thận nguồng gốc trước thận: suy tim mất

bù, mất nước, dùng thuốc lợi tiểu/ hạ áp, hẹp động mạch thận

 Suy thận nguồn gốc thận: do tổn thương thận (tăng HA, ĐTĐ, lupus ban đỏ, thuốc ức chế chuyển angiotenisin, viềm cầu thận), do tổn thương ống thận (viêm/ bể thận, hẹp đường niệu)

 Suy thận nguồn gôc sau thận: sỏi thận, u bàng quang, u tử cung

- Giảm: loãng máu, suy dinh dưỡng nặng, bệnh

gây teo cơ mô, có thai

6 định lượng ure huyết thanh

a, Nguyên tắc

- Ure là con đương thoái hoá chính của các pro

trong cơ thể và là sản phẩm quan trọng nhất

của chuyển hoá nitro

- Quá trình tổng hợp ure ở gan

proa.aNH3carbamylphosphatcitrulinar

gininure

- Pro có nguồn gốc từ thức ăn và nội sinh do dị

hoá pro mô

- Tại gan NH3 được chuyển hoá thành ure

- Đào thải qua đường tiêu hoá và đường thận

O=C-(NH2)2  2NH4+ +

(CO3)2-NH4+ + natri salicylat + nitroprusiat +

natrihypoclorid  indophenol (xanh)

- Pp định lượng: enzym đo quang

b, tiến hành

 ure color

ống trắng ống mẫu ống thử Thuốc

thử 1

1000µl 1000µl 1000µl

Huyết

thanh

10µl

Trộn đều ủ 10p

Thuốc

thử 2

1000µl 1000µl 1000µl Kết quả:

Nồng độ ure huyết thanh=(A thử/ A mẫu).13,3

 Ure UV

ống trắng ống mẫu ống thử Thuốc

thử

Huyết

thanh

10µl

C, ý nghĩa

- Chẩn đoán tình trạng suy thận, và mức độ cung

cấp pro của chế độ ăn

- Chỉ số bthg: 3,3-8,3mmol/l

- tăng ure huyết:

 chế độ ăn giàu pro, tăng dị hoá pro do sốt, bỏng, suy dinh dưỡng, nhịn đói

 xuất huyết đường tiêu hoá

 suy thận

 nguyên nhân khác: do ngộ độc thuỷ ngân, nhiễm trùng nặng

- giảm nồng độ ure: suy gan, xơ gan, có thai, hội chúng thận hư

7 Định lượng acid uric trong huyết thanh

a, Đại cương và nguyên tắc

- là một chất có nguồn gốc từ quá trình dị hoá các base purin của acid nu

- nguồn tạo là do thức ăn chúa purin và tuqf acid nội sinh do thoái biến acid nu

- quá trình tổng hợp chủ yếu ở gan, và ít ở niêm mạc ruột

- cần xúc tác của enzymexanthioxydase Allopurinol ức chế enzym này và dùng điều trị tăng acif uric máu

- thải trừ qua nước tiểu và đường tiêu hoá

- acid uric + H2O +O2= allantoin + CO2 + H2O2

- H2O2 + 4-aminoantipyrin + dẫn xuất benzoate = phức hợp màu + H2O

b, tiến hành

ống trắng ống

mẫu

ống thử Thuốc

thử hh

1000µl 1000µl 1000µl Acid

uric mẫu

20µl

Huyết thanh

20µl

c ý ngĩa

- chẩn đoán các bệnh lý gây biến đổi nồng độ acid uric

- Theo dõi điều trị bệnh gout

- Theo dõi điều trị hoá chất chống ung thư

- Giá trị bthg:

 Nam: 200-420µmol/l

 Nữ: 140-340µmol/l

- Tăng

 Tăng sản xuất acid uric: do tiên phát (30% bệnh nhân gout thuộc loại vô căn), thức ăn chứa nhiều purin, phá huỷ tổ chức khi hoá trị, xạ trị, nhịn đói

 Giảm đào thải qua thận: do suy thận, dùng thuốc lợi tiểu, tổn thương các ống thận, dùng các thuốc aspirin, phenylbutazon…

 Nguyên nhân khác: xơ vữa mạch vành, tăng HA, tăng lipid máu

- Giảm do hoà loãng máu, dùng thuốc gây tăng thải acid uric qua nước tiểu ACTH, allopurinol, cortisol…

8 đo hoạt độ enzym AST (GOT), ALT (GPT) huyết tương

a, nguyên tắc

 AST

α-ceton glutarat + aspartat  glutamat + oxaloacetat

(xt: AST: aspartat transaminase)

Oxaloacetat + NADHH+  malat + NAD+

(xt: MDH: malat dehydrogenase)

 ALT

Pư làm giảm nồng độ NADH tạo thành NAD+ nên có thể đo bằng độ giảm độ hâop thụ quang của NADH ở 340nm