Luận văn Thạc sĩ Sinh học thực nghiệm: Khảo sát ảnh hưởng của một số chế phẩm vi sinh vật đến chất lượng nước ao nuôi tôm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Trần Quang Vinh KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ CHẾ PHẨM VI SINH VẬT ĐẾN CHẤT LƯỢNG NƯỚC AO NUÔI TÔM LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THỰC NGHIỆM Thành phố Hồ Chí Minh 07- 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Trần Quang Vinh KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ CHẾ PHẨM VI SINH VẬT ĐẾN CHẤT LƯỢNG NƯỚC AO NUÔI TÔM Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THỰC NGHIỆM NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: Hướng dẫn: TS Nguyễn Hữu Phúc Thành phố Hồ Chí Minh 07- 2019 LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi hướng dẫn tận tình thầy TS Nguyễn Hữu Phúc Các số liệu kết nêu luận văn chưa công bố cơng trình khác Các số liệu trích dẫn Luận văn đảm bảo tính xác, tin cậy trung thực Tôi xin chân thành cảm ơn! TP Hồ Chí Minh, ngày … tháng năm 2019 Tác giả Trần Quang Vinh I LỜI CẢM ƠN Trong thời gian theo học Học Viện Khoa Học Công Nghệ, tạo điều kiện tốt học tập, nghiên cứu từ Học Viện Khoa Học Công Nghệ Viện Sinh Học Nhiệt Đới Tơi nhận tận tình dẫn Quý Thầy Cô Học Viện, chu đáo cán bộ, nhân viên đơn vị Học Viện Đây thời kỳ gắn bó giúp đỡ đầy thiện chí tập thể bạn bè tơi lớp Cao học Sinh học thực nghiệm 2017A, Học Viện Khoa Học Công Nghệ, Viện Hàn Lâm Khoa Học Cơng Nghệ Việt Nam Để có luận văn thạc sĩ này, vô biết ơn Thầy Tiến sĩ Nguyễn Hữu Phúc tận tâm, hết lòng nâng bước cho nhiều hệ học trò, người gắn bó khơng mệt mỏi với nghiệp trồng người, cho tơi nhiều ý kiến q báu q trình thực đề tài Tơi khơng qn lịng nhiệt tình, sâu sát, lo lắng, chia sẻ Ban lãnh đạo Viện Sinh Học Nhiệt Đới, đồng nghiệp quan tâm tạo điều kiện, giúp đỡ, tiếp sức chân tình hiệu từ gia đình nhỏ tơi Em xin chân thành cảm ơn ! Tp Hồ Chí Minh, ngày … tháng 07 năm 2019 Tác giả Trần Quang Vinh II Danh mục ký hiệu chữ viết tắt Từ viết tắt VPAHPND EMS FAO GSMC VASEP BOD COD TSA TCBS DO TOC FCR EDTA Tên tiếng anh Vibrio parahaemolyticus Acute hepatopancreatic necrosis disease Early Mortality Syndrome Food and Agriculture Organization Global Seafood Market Conference Vietnam Association of Seafood Exporters and Producers Biochemical oxygen demand Chemical Oxygen Demand Tryptic Soy Agar Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Dissolved oxygen Total organic carbon Feed Conversion Ratio Ethylene Diamine Tetraacetic Acid III Tên tiếng việt Bệnh hoại tử gan cấp tính V parahaemolyticus Bệnh hoại tử gan tụy cấp Tổ chức Nông lương Liên Hiệp Quốc Hội nghị Thị trường Thủy sản Toàn cầu Hiệp Hội chế biến Xuất thuỷ sản Việt Nam Nhu cầu oxy sinh học Nhu cầu oxy hóa học Môi trường ban đầu nuôi cấy khuẩn lạc Môi trường phân lập chọn lọc Vibrio sp oxygen hòa tan Tổng cacbon hữu Hệ số chuyển đổi thức ăn Acid hữu mạnh Danh mục bảng Bảng 1.1: Hiệu sử dụng Probiotic nuôi thủy sản: Bảng 2.1: Phương pháp phân tích chất lượng nước: 46 Bảng 3.1: Một số chủng vi sinh phân lập chọn lọc : 51 Bảng 3.2: Đặc điểm phát triển tạo acid lactic chủng vi khuẩn lactic: 63 Bảng 3.3 : Số lượng vi sinh EM: 73 Bảng 3.4: Ảnh hưởng chế phẩm probiotic đến tỷ lệ sống suất tôm: 75 Bảng 3.5: Báo cáo giai đoạn kết thử nghiệm chế phẩm ao nuôi tôm sú: 76 Bảng 3.6: Biến động yếu tố chất lượng nước ao ni tơm: 77 IV Danh mục hình Hình 1.1: Sơ đồ ảnh hưởng chế phẩm vi sinh sử dụng thủy sản: 10 Hình 2.1: máy đo DO, pH,… 49 Hình 2.2: Máy phá mẫu COD 50 Hình 2.3: Máy đo BOD 50 Hình 2.4: Máy đo tiêu Amonium, nitrate, nitrite, 51 Hình 3.1: Khả sinh tổng hợp amylase chủng Bacillus sp 53 Hình 3.2: Khả sinh tổng hợp protease chủng Bacillus sp 54 Hình 3.3: Ảnh hưởng pH đến khả sinh tổng hợp amylase 55 Hình 3.4 Hoạt lực enzym protease chủng Bacillus sp 56 Hình 3.5: Hoạt lực enzym amylase chủng Bacillus sp 57 Hình 3.6: Hoạt lực emzyme protease chủng Bacillus sp 58 Hình 3.7: Sự biến động số lượng Vibrio sp 59 Hình 3.8: Sự biến động Bacillus sp nước nuôi tôm 60 Hình 3.9: Sự biến động Vibrio sp tôm theo thời gian 61 Hình 3.10: Sự biến động số lượng Bacillus sp tơm 62 Hình 3.11: Lactobacillus sp Lac ; Lactobacillus acidophilus Lac 65 Hình 3.12: Lactobacillus sp Lac ; Lactobacllus acidophilus Lac 65 Hình 3.13: Lactobacillus sp Lac ; Lactobacillus sp Lac 66 Hình 3.14: Lactobacillus sp Lac ; Lactobacillus sp Lac 66 Hình 3.15: Streptococcus sp Lac ; Streptococcus sp Lac 10 67 Hình 3.16: Lactobacillus sp Lac 11 ; Lactobacillus sp Lac 12 67 Hình 3.17: Streptoccocus sp Lac 13; Streptococcus sp Lac 14 67 Hình 3.18: Lactobacillus sp Lac 16 ; Lactobacillus sp Lac 17 68 Hình 3.19: Lactobacillus sp Lac 18 ; Tế bào vi khuẩn Lactobacillus sp 68 V Hình 3.20: Sự biến động pH nuôi EM 72 Sơ đồ 3.1: Sơ đồ khối chế tạo EM gốc loại EM khác 71 VI MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU NGỒI NƯỚC: 1.2 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG NƯỚC: 1.3 ỨNG DỤNG CHẾ PHẨM SINH HỌC TRONG AO NUÔI TÔM: 1.3.1 Các chế phẩm vi sinh sản xuất từ loài vi khuẩn Bacillus sp vi khuẩn khác: 10 1.3.2 Chế phẩm EM: 10 1.3.3 Vi sinh quang tự dưỡng: 12 1.3.3.1 Giới thiệu chung vi khuẩn quang tự dưỡng: 12 1.3.3.2 Ảnh hưởng nhân tố lý hóa đến sinh trưởng vi khuẩn quang hợp tía khơng lưu huỳnh: 14 1.3.3.3 Ứng dụng VKQH tía ni trồng thuỷ sản: 15 1.4 DỊCH BỆNH TÔM: 19 1.4.1.Tình hình bệnh tơm giới: 19 1.4.2 Tình hình dịch bệnh tôm Việt Nam: 20 1.4.3 Vi khuẩn Vibrio sp: 23 1.5 CHẤT HỮU CƠ TRONG CÁC AO NUÔI TÔM: 24 1.5.1 Nguồn gốc chất hữu ao thủy sinh: 24 1.5.2 Chất hữu từ nguồn nước cấp: 24 1.5.3 Chất hữu từ thức ăn : 24 1.5.4 Chất hữu từ phân bón: 25 1.5.5 Chất hữu hình thành q trình ni tơm: 25 1.6 VAI TRÒ CỦA VI SINH VẬT TRONG CÁC QUÁ TRÌNH BIẾN ĐỔI VẬT CHẤT TRONG AO NUÔI THỦY SẢN: 28 1.6.1 Phân huỷ hợp chất carbon: 28 VII 1.6.2 Vai trò vi sinh vật việc chuyển hóa hợp chất chứa nitrogen: 30 1.6.2.1 Phân giải protein amon hóa : 30 1.6.2.2 Vi sinh vật tham gia vào trình nitrat hóa (Nitrification) : 30 1.6.3 Biến đổi sulfur: 34 1.7 CÁC YẾU TỐ HĨA LÝ TỚI MƠI TRƯỜNG NI TƠM: 35 1.7.1 Yếu tố vật lý: 35 1.7.2 Yếu tố hóa học: 36 1.7.3 Yếu tố sinh học: 37 CHƯƠNG 02: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 38 2.1 VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU: 38 2.1.1 Các chủng vi sinh vật dùng nghiên cứu có Viện Sinh học nhiệt đới 38 2.1.2 Thử nghiệm phịng thí nghiệm: 39 2.1.2.1 Đánh giá sơ khả sinh tổng hợp amylase, protease số chủng Bacillus sp 39 2.1.2.2 Xác định ảnh hưởng pH môi trường đến khả sinh tổng hợp enzym amylase chủng Bacillus sp: 39 2.1.2.3 Xác định ảnh hưởng pH môi trường đến khả sinh tổng hợp enzym protease chủng Bacillus: 40 2.1.2.4 Xác định hoạt tính emzyme amylase theo phương pháp Smith Roe (1946) 40 2.1.2.5 Xác định hoạt tính enzyme protease theo phương pháp Anson 41 2.1.3 Thử nghiệm chế phẩm sinh học vi sinh phịng thí nghiệm: 44 2.1.4 Thử nghiệm ao nuôi: 45 2.1.4.1 Phương pháp bố trí thí nghiệm: 45 2.1.4.2 Phương pháp quản lý chất lượng nước: 46 VIII 2.1.4.2.1 Phương pháp xác định tiêu hóa lý nước: 46 2.1.4.2.2 Phương pháp xác định mật độ vi khuẩn nước: 47 2.1.4.2.3 Phương pháp phân tích tăng trưởng suất tơm ni: 47 2.1.5 Phương pháp phân tích xử lý số liệu: 47 2 MỘT SỐ HÓA CHẤT, THIẾT BỊ DÙNG TRONG PHÂN TÍCH MẪU VI SINH, HĨA LÝ: 48 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 51 3.1 CHỌN LỌC CÁC CHỦNG BACILLUS SP SỬ DỤNG TRONG NUÔI TÔM 51 3.1.1 Chọn lọc chủng đối kháng với Vibrio 51 3.1.2 Xác định khả sinh tổng hợp emzyme chủng vi sinh: 53 3.1.2.1 Xác định khả sinh tổng hợp amylase chủng Bacillus sp: 53 3.1.2.2 Khả sinh tổng hợp emzym protease chủng Bacillus sp sử dụng nuôi tôm : 54 3.1.2.3 Ảnh hưởng pH môi trường đến khả sinh tổng hợp enzym amylase chủng Bacillus sp sử dụng nuôi tôm sú: 55 3.1.2.4 Ảnh hưởng pH môi trường đến khả sinh tổng hợp enzym protease chủng Bacillus sp: 56 3.1.2.5 Xác định hoạt tính amylase chủng Bacillus sp: 57 3.1.2.6 Hoạt tính enzym protease số chủng Bacillus sp: 58 3.1.3 Thử nghiệm tính đối kháng chủng với vi khuẩn Vibrio sp phịng thí nghiệm: 59 3.1.3.1 Sự biến động số lượng vi khuẩn Vibrio sp: 59 3.1.3.2 Sự biến động số lượng vi khuẩn Bacillus sp: 60 3.1.3.3 Sự biến động Vibrio sp tôm thử nghiệm: 61 3.1.3.4 Sự biến động Bacillus sp ruột tôm: 62 IX 3.2 NGHIÊN CỨU TẠO CHẾ PHẨM EM : 63 3.2.1 Chọn chủng vi khuẩn lactic: 63 3.2.2 Chọn chủng nấm men: 69 3.2.3 Chế tạo chế phẩm EM: 69 3.2.3.1.Nguyên liệu: 69 3.2.3.2 Sơ đồ khối tạo chế phẩm EM: 71 3.2.3.3 Sự biến đổi pH nuôi EM: 72 3.2.3.4 Kết kiểm tra vi sinh EM: 73 3.3 KẾT QUẢ SO SÁNH ẢNH HƯỞNG CỦA CHẾ PHẨM EM VÀ BACILLUS ĐẾN CHẤT LƯỢNG NƯỚC VÀ HIỆU QUẢ NUÔI TÔM: 74 3.3.1 Ảnh hưởng chế phẩm Bacillus sp đến chất lượng nước ao nuôi tôm Cần Giờ Nhà Bè: 74 3.3.1.1 Khảo nghiệm chế phẩm Cần Giờ: 74 3.3.1.2 Khảo nghiệm chế phẩm huyện Nhà Bè: 76 3.3.1.3 Một số tiêu hóa lý phân tích ao thử nghiệm: 77 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 78 4.1 KẾT LUẬN 78 4.2 KIẾN NGHỊ 78 TÀI LIỆU THAM KHẢO 79 PHỤ LỤC 83 X MỞ ĐẦU Ngành ni tơm nước lợ chiếm vị trí đặc biệt quan trọng chiến lược phát triển kinh tế ngành thủy sản Việt Nam 10 năm qua Cụ thể: theo báo cáo Tổng cục thủy sản năm 2018, giá trị sản xuất thủy sản năm 2018 đạt khoảng 228.139,8 tỷ đồng, tăng 7,7% so với năm 2017, tổng sản lượng đạt khoảng 7,74 triệu tấn, tăng 7,2%, sản lượng sản lượng khai thác đạt 3,59 triệu tấn, tăng 6,0%, nuôi trồng đạt 4,15 triệu tấn, tăng 8,3% Đối với tôm nước lợ: Từ cuối quý II/2018, giá tôm nguyên liệu tăng lên, người nuôi tiếp tục thả giống ni tơm, góp phần đưa sản lượng tơm loại đạt khoảng 800 nghìn năm 2018, tăng 10,5% so với năm 2017, theo dự báo Tổng cục thủy sản năm 2019, ngành thủy sản Việt Nam tiếp tục tăng trưởng xuất đạt mức 10 tỷ USD, xuất tơm phấn đấu đạt 4,2 tỷ USD tiến tới nhu cầu tiêu thụ nước xuất đạt 508 nghìn vào năm 2020 678 nghìn vào năm 2030 [1] Hiện nay, nhiều kẽ hở việc quản lý sản xuất tôm Quản lý môi trường, dịch bệnh ni tơm cịn nhiều hạn chế, dẫn tới lây lan dịch bệnh Thực tế người dân chưa áp dụng mà biết nuôi theo quy trình cơng ty bán giống, thức ăn, chế phẩm sinh học tổ chức tập huấn tận vùng nuôi Các quy trình hướng người ni đến sử dụng sản phẩm họ nhiều tốt nên tình trạng lạm dụng thuốc, hóa chất, chất kháng sinh phổ biến, làm ô nhiễm môi trường, lờn thuốc, khơng an tồn ảnh hưởng tới chất lượng khả cạnh tranh sản phẩm Trong nay, thị trường thức ăn nuôi tôm, thuốc hóa chất loại phụ thuộc 80% vào doanh nghiệp có vốn đầu tư trực tiếp nước ngồi Nghề nuôi trồng thủy sản đương đầu với nhiều loại bệnh khác nhau: bệnh phát sáng, bệnh đầu vàng, bệnh EMS nguyên nhân vi khuẩn Vibrio sp gây tôm, vi khuẩn Vibrio sp chịu nồng độ muối cao chúng sống mơi trường nước lợ nước mặn, Vibrio sp vi khuẩn phát sáng sống bám động vật giáp xác ruột động vật nước Theo báo cáo FAO khẳng định (Food and Agriculture Organization of the United Nations FAO, 2013) độc tính Vibrio sp phát động vật thủy sinh, đặc biệt họ penaeids Châu Á, vi khuẩn Vibrio sp nguyên nhân chủ yếu bệnh EMS báo cáo (Anuphap Prachumwat et al., 2018) công bố tạp chí thủy sản giới nguyên nhân Theo (Han et al., 2017) tác nhân gây bệnh báo cáo vào năm 2013 Vibrio parahaemolyticus (VPAHPND) mà sau mang plasmid (PVA) mã hóa Pir - gen độc tố nhị phân Pir VPA Pir VPB VPAHPND phân lập khuẩn lạc dày tôm giải phóng độc tố nhị phân gây bong tróc lớn tế bào biểu mơ ống hình ống tử vong, plasmid biến thể xảy nhiều loại huyết V parahaemolyticus loài Vibrio khác V harveyi, V campbellii, V owensii., dịch bệnh vi khuẩn Vibrio sp gây toàn giới, Việt Nam năm gần diện tích bị bệnh khơng ngừng gia tăng diện rộng, Ngày FAO xác định sử dụng probiotic biện pháp chủ yếu để cải thiện chất lượng mơi trường thủy sản Để phịng trị bệnh hoại tử gan tụy, biện pháp hàng đầu phịng trị bệnh cho tơm ni hiệu quả, cần thay thuốc kháng sinh nuôi trồng thủy sản, bổ sung chất khoáng sử dụng probiotic thức ăn (Gomez-Gil et al., 2000), xử lý nước thủy sản nuôi lựa chọn tốt xu Mặc dù ngày người nuôi tôm Việt nam sử dụng nhiều chế phẩm vi sinh, phần lớn sản phẩm nhập nội Các chế phẩm vi sinh nguyên liệu quan trọng thay phương pháp dùng kháng sinh, số lượng chế phẩm vi sinh phổ biến thị trường phần lớn nhập phần lại sản xuất nước Vì chương trình thực luận văn thạc sĩ chọn đề tài “Khảo sát ảnh hưởng số chế phẩm vi sinh vật đến chất lượng nước ao nuôi tôm” MỤC TIÊU: - Nghiên cứu sản xuất hai chế phẩm xử lý môi trường nước ao nuôi tôm phịng chống vi khuẩn gây bệnh cho tơm - Đánh giá hiệu hai loại chế phẩm vi sinh sử dụng nhiều nuôi tôm chế phẩm Bacillus nhiệt đới chế phẩm EM gốc nhiệt đới đến chất lượng nước ao ni tơm phịng chống Vibrio sp gây bệnh cho tơm ni phịng thí nghiệm NỘI DUNG NGHIÊN CỨU: - Chọn lọc số chủng vi khuẩn Bacillus sp để tạo chế phẩm Bacillus nhiệt đới kháng Vibrio sp dùng nuôi tôm - Phân lập chọn số chủng vi khuẩn Lactic để tạo chế phẩm EM gốc nhiệt đới - Nghiên cứu ảnh hưởng 02 chế phẩm vi sinh Bacillus nhiệt đới EM gốc nhiệt đới đến chất lượng nước hiệu tơm ni phịng thí nghiệm ngồi ao ni tơm thương phẩm CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU Theo nhóm nghiên cứu thị trường tôm Hội nghị Thị trường Thủy sản Toàn cầu (GSMC), tăng trưởng mạnh từ Ấn Độ Trung Quốc, phục hồi sản lượng từ nước Mỹ Latinh châu Á khác thúc đẩy sản lượng tôm giới vượt qua 3,5 triệu năm 2018 [1] Cùng với sản lượng tăng từ Ấn Độ Ecuador, sản lượng tôm Việt Nam dự báo tăng năm 2018 Trung Quốc, Thái Lan Indonesia dự kiến phục hồi sản lượng Ngành nuôi (tôm thẻ “Litopenaeus vannamei” tôm sú “Penaeus monodon”) gọi chung ni tơm nước lợ chiếm vị trí đặc biệt quan trọng chiến lược phát triển kinh tế ngành thủy sản Việt Nam 10 năm qua Cùng với trình chuyển đổi cấu trồng vật nuôi chuyển đổi đất nông nghiệp, đất làm muối suất thấp sang nuôi tôm tỉnh ven biển, nhờ mà ngành tơm có tăng trưởng vượt bậc diện tích, sản lượng giá trị xuất Việt Nam nước xuất thủy sản đứng thứ giới sau Trung Quốc Na Uy sản phẩm thủy sản có mặt 160 thị trường Theo báo cáo Tổng cục thủy sản năm 2018, giá trị sản xuất thủy sản năm 2018 đạt khoảng 228.139,8 tỷ đồng, tăng 7,7% so với năm 2017, tổng sản lượng đạt khoảng 7,74 triệu tấn, tăng 7,2%, sản lượng sản lượng khai thác đạt 3,59 triệu tấn, tăng 6,0%, nuôi trồng đạt 4,15 triệu tấn, tăng 8,3% (trong đó, cá tra đạt 1,251 triệu tấn, tơm loại 723,8 nghìn tấn: tơm nước lợ 683,4 nghìn gồm tơm sú 256,4 nghìn tấn, tơm chân trắng 427,0 nghìn tấn); giá trị xuất thủy sản đạt 8,317 tỷ USD Diện tích ni tơm nước lợ đạt 721,1 nghìn ha, tơm sú 622,4 nghìn ha, tơm chân trắng 98,7 nghìn [1] Việc nghiên cứu bệnh vi khuẩn tương tự gây quan trọng Ví dụ: vi khuẩn phát quang Vibrio có tên gọi “Vibrio harveyi” phá hủy ngành nuôi tôm Philippines vào đầu năm 1990 Một số học liên quan rút từ nghiên cứu Ví dụ, trại ương giống, người ta phát Vibrio harveyi công trứng tôm Người ta buộc phải rửa trứng để ấu trùng ươm, ấu trùng có tỉ lệ sống nhiều Điều có nghĩa việc kiểm sốt sở ương giống quan trọng việc ngăn ngừa EMS phát tán từ giống bố mẹ sang tôm post Cơ chế tác dụng chế phẩm vi sinh theo số chế sau thường nói đến [2]: - Sinh chất ức chế - Cạnh tranh chất dinh dưỡng - Cạnh tranh vị trí bám hệ thống đường ruột - Tăng cường đáp ứng miễn dịch - Đóng góp enzym đường ruột - Là nguồn chất dinh dưỡng đa lượng vi lượng - Cải thiện chất lượng nước - Quan hệ với phytoplanton 1.2 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU NGỒI NƯỚC: Việc sử dụng chủng Vibrio alginolyticus phân lập từ nước biển để thử ấu trùng tôm Litopenaeus vannamei Kết tôm không bị chết lô thử nghiệm có nhiễm vi khuẩn gây bệnh, đối chứng tôm chết 100% sau 96 cho nhiễm vi khuẩn V parahaemolyticus mật độ 103 tế bào/ml [3] Ngo, Hai & Fotedar, Ravi (2010) [4] Đã ba chủng vi khuẩn, Bacillus, Lactobacillus Pseudomonas, thường dùng làm men vi sinh nuôi tôm Việc bổ sung vào thức ăn có hiệu việc chuyển chế phẩm sinh học vào động vật so với việc áp dụng trực tiếp vào hệ thống nuôi Dùng liều sử dụng men vi sinh kéo dài gây ức chế miễn dịch Mật độ tế bào 10 đơn vị hình thành khuẩn lạc (CFU) ml khuyến nghị rộng rãi Một kết hợp chế phẩm sinh học mang lại kết tốt cho vật chủ so với chế phẩm sinh học riêng lẻ Probiotic cải thiện chất lượng nước giảm vi khuẩn gây bệnh Probiotic cho thấy tác dụng tích cực thơng qua cải thiện phản ứng sinh lý miễn dịch tôm Probiotic ngày trở nên quan trọng phổ biến nghề nuôi tơm hữu [5] Ở Châu Á có nhiều nghiên cứu sử dụng chế phẩm vi sinh nuôi tôm, đặc biệt Thái Lan, Trung Quốc, Đài Loan Jiravanichpaisal et al.(1997) sử dụng Lactobacillus sp nuôi tôm sú (P monodon Fabrius)[6] Ở Trung Quốc, nghiên cứu probiotic nuôi thủy sản tập trung vào vi khuẩn quang hợp QIAN Dayi et al (2005) nghiên cứu chủng vi khuẩn quang hợp sử dụng cho tôm (P chinensis) cách cho vào thức ăn cho nước ni tơm cho thấy có gia tăng khả phát triển tôm, loại trừ nhanh chóng NH3-N, H2S, acid hữu chất có hại, cải thiện chất lượng nước, cân độ pH [7] Một số nghiên cứu thực để nghiên cứu in vitro tác dụng đối kháng Lactobacillus sp, chống lại vi khuẩn Vibrio harveyi gây bệnh tơm Với mục đích này, mẫu tơm thu thập từ ba nơi khác Batiaghata upazilla, Khulna Mang ruột lấy từ mẫu để xác định đối kháng vi khuẩn Lactobacillus sp, Vibrio sp Kết cho thấy vi khuẩn Lactobacillus spp tìm thấy nhiều Vibrio sp mang ruột; mang tôm chứa vi khuẩn Vibrio sp cao ruột V harveyi tách khỏi Vibrio sp với loại xét nghiệm sinh hóa khác nhau: ( nhuộm Gram, xét nghiệm Motility, xét nghiệm Indole, xét nghiệm VP, xét nghiệm MR, Arginine dihydrolase, thử nghiệm dung nạp muối, tăng trưởng khoảng nhiệt độ khác màu khuẩn lạc môi trường thạch TCBS) Đã tuyển chọn V harveyi cấy giống Trong thử nghiệm ống nghiệm, tác dụng đối kháng tiềm tàng Lactobacillus sp chống lại V harveyi đạt vào 0, 4, 8, 12 thí nghiệm Phát thú vị là, với thời gian, tải trọng V harveyi giảm dần thấp đạt sau 12 thử nghiệm Nghiên cứu tiết lộ tác dụng sinh học đối kháng in vitro tuyệt vời Lactobacillus sp V harveyi [8] Qua kết cho thấy điều trị chế phẩm sinh học thay hiệu cho việc sử dụng kháng sinh điều trị bệnh vi khuẩn ni tơm 1.2 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG NƯỚC: Ở Việt nam nghiên cứu việc sử dụng chế phẩm vi sinh để cải thiện môi trường ni tơm, phịng trừ bệnh, xử lý mơi trường nhiễm cịn tương đối ít, ý năm gần Khác với động vật cạn, môi trường nước bao quanh động vật thủy sinh giúp cho vi sinh vật gây bệnh cho chúng sống độc lập với động vật chủ, kết vi sinh vật gây bệnh hội phát triển đạt đến mật độ cao xung quanh động vật thủy sinh, vi sinh vật gây bệnh cho động vật thủy sinh mơi trường ngồi vào thể động vật thủy sinh dễ dàng qua đường thức ăn, qua mang (hơ hấp) Việc kiểm sốt tốt hệ vi sinh vật môi trường nuôi giảm thiểu nhiều dịch bệnh cho động vật thủy sinh Năm 2013, Viện nghiện cứu nuôi trồng thủy sản 02 nghiên cứu đề tài “ Một số yếu tố nguy liên quan đến bệnh hoại tử gan tôm thẻ (Penaeus vannamei) nuôi công nghiệp quy mô nông hộ huyện Đầm Dơi, Cà Mau” kết cho thấy dịch bệnh xảy 54,8% số hộ theo dõi có liên quan đến mật độ vi khuẩn Vibrio sp [9] Báo cáo tạp chí thủy sản năm 2014, Viện nghiện cứu nuôi trồng thủy sản 02 nghiên cứu đề tài “ Các giải pháp kỹ thuật kiểm soát bệnh hoại tử gan tụy cấp tôm chân trắng (Litopenaeus vannamei) nuôi thâm canh quy mô trang trại Đồng Sơng cửu long” thí nghiệm tiến hành bổ sung chế phẩm vi sinh nhằm hạn chế mật độ vi khuẩn gây bệnh Vibrio parahaemolyticus kết cho thấy ao đối chứng đạt tỷ lệ sống 87,53% so với ao đối chứng 60,69 % kết luận việc bổ sung chế phẩm vi sinh kiểm soát bệnh Vibrio sp gây [9] Từ năm 2000 đến tỉnh thành nước ứng dụng thử nghiệm chế phẩm vi sinh địa phương ghi nhận có hiệu kinh tế, xã hội Các địa phương sử dụng chế phẩm vi sinh Hà Nội, thành phố Hồ Chí Minh, Bình Định, Qng Ngãi, Ninh Thuận, Bình Thuận, Bình Dương, Tiền Giang, An Giang, Bạc Liêu Các chế phẩm sử dụng nuôi thủy sản xử lý mơi trường chia làm loại [11]: Nhóm thứ 1: Các chế phẩm có tính chất probiotic gồm vi sinh vật sống vi khuẩn thuộc giống Bacillus sp, Lactobacillus sp, Saccharomyces sp, … người ta thường trộn vào thức ăn qua trung gian Artemia, Rotifer Nhóm thứ 2: Gồm vi sinh vật có tính đối kháng cạnh tranh với vi sinh vật gây bệnh vi khuẩn Bacillus licheniformis sp, Bacillus sp Vibrio alginolyticus,… Nhóm thứ 3: gồm vi sinh vật cải thiện chất lượng môi trường vi khuẩn Nitrosomonas sp, Nitrobacter sp, Actinomyces sp, loài Bacillus sp khác nhau, loại tảo, vi khuẩn tía khơng lưu huỳnh Rhodobacter sp Rhodospirillum sp, Rhodopseudomonas viridis, Rhodopseudomonas palutris, Rhodomicrobium vanniell, loại nấm Aspergillus oryzae, Aspergillus niger, Rhizopus sp,… 1.3 ỨNG DỤNG CHẾ PHẨM SINH HỌC TRONG AO NUÔI TÔM: Vi sinh vật chế phẩm enzym đưa vào ao nuôi ao xử lý sinh học thực chức khác nhau: probiotic (dành riêng cho chủng có giai đoạn ngắn tồn lâu dài ruột động vật), Biocontrol (áp dụng đối kháng với vi sinh vật gây bệnh cho tôm) cải thiện sinh học (bioremediation = phân hủy chất gây ô nhiễm môi trường biến chúng thành chất vô hại, không gây ô nhiễm Nhiều nghiên cứu sử dụng probiotic để phục vụ ngành thủy sản Probiotic xác định thức ăn vi sinh vật sống bổ sung để cải