Seminar môn thiết bị kỹ thuật cnsh nhóm 12 t4ca3

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC Báo cáo môn kỹ thuật thiết bị CNSH Chủ đề: Phát cụ thể tế bào dương tính với Cytokeratin-20 máu bệnh nhân ung thư đại trực tràng phương pháp High sensitivity real-time reverse transcription PCR GV hướng dẫn: TS Huỳnh Văn Biết Sinh viên thực hiện: Nhóm 12 ThS Trương Quang Toản 01/30/2024 Nội dung ĐẶT VẤN ĐỀ ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 01/30/2024 Đặt vấn đề Nguồn: gco.iarc.fr • Theo David K WYLD cộng sự, khoảng 80% bệnh nhân mắc bệnh phẫu thuật cắt bỏ khoảng nửa số bệnh nhân sau chết di 01/30/2024 Đặt vấn đề • Bên cạnh đó, 20–30% bệnh nhân khơng có di hạch chết vòng năm di xa tái phát cục bộ, rõ ràng cần có phương pháp nhạy để phát khối u nhỏ.(David K WYLD cộng sự) Nguồn: medpagetoday.com 01/30/2024 Đối tượng nghiên cứu • Theo Osborn Weber năm 1983, Cooper cộng năm 1985, Lane Alexander năm 1990, tế bào ác tính thường giữ lại sợi trung gian (IFs) loại tế bào tiền thân chúng CKs sử dụng để mô tả đặc điểm tế bào tân sinh có nguồn gốc biểu mơ Nguồn: M Barber, 1959 01/30/2024 Nguồn: cdc.gov Nguồn: Peiguo Chu cộng sự, 2000 Đối tượng nghiên cứu • CK 20 không phát máu ngoại vi bình CK8 thường, tủy xương hạch bạch huyết (Burchill cộng năm 1995, Gunn cộng năm 1996, Soeth cộng năm 1996) • Tất dòng tế bào ung thư ruột kết người biểu CK 20 mRNA, chứng minh cách khuếch đại CK19 phiên mã 370-bp CK 20 (David K WYLD cộng sự, 1998) CK20 01/30/2024 Nguồn: David K WYLD cộng sự, 1998 Nguồn: SA Burchill cộng sự, 1995 Phương pháp nghiên cứu Nguồn: Stankevicius cộng sự, 2016 • Nguồn: cls.shop Máu tĩnh mạch từ bệnh nhân ung thư đại trực tràng giai đoạn khác tình nguyện viên khỏe mạnh để làm đối chứng • Sử dụng tế bào khối u HT29 trì ni cấy liên tục môi trường McCoy’s 01/30/2024 Phương pháp nghiên cứu • Tất bệnh nhân đối chứng khơng bị ảnh hưởng tình trạng phản ứng viêm • ml máu loại bỏ để tránh nhiễm bẩn tế bào da • 10 ml máu thu thập ống chân khơng, có natri citrat sử dụng vòng Các mẫu máu pha loãng theo tỷ lệ 1:3 RPMI 1640 tế bào đơn nhân (MNCs) tách cách phân tách mật độ Ficoll Tham Khảo từ nghiên cứu Femke Vlems cộng sự, 2002 Nguồn: www.researchgate.net 01/30/2024 Phương pháp nghiên cứu • mRNA chiết xuất từ tế bào HT29 tế bào đơn nhân từ người hiến tặng bệnh nhân khỏe mạnh cách kết tủa dạng phenol-chloroform thu giữ RNA vi hạt • cDNA điều chế cách thêm mRNA chiết xuất vào oligo-dT enzyme phiên mã ngược virus gây bệnh bạch cầu Moloney-murine Nguồn: Masateru Takahashi cộng sự, 2021 01/30/2024 Phương pháp nghiên cứu Nguồn: Giuliana Giribaldi cộng sự, 2006 • RT-qPCR sử dụng Taqman Probe SYBR-Green tế bào HT29 • Single-round RT-qPCR (S-PCR) sử dụng SYBR-Green tế bào HT29 • Nested RT-qPCR (N-PCR) sử dụng SYBR-Green tế bào HT29 mẫu lâm sàng • Giải trình tự trực tiếp sản phẩm PCR từ tế bào HT29 tế bào CK20+ bệnh nhân ung thư đại trực tràng 01/30/2024 10 Tài liệu tham khảo https://gco.iarc.fr/today/home Vlems, F A., Diepstra, J H S., Cornelissen, I M H A., Ruers, T J M., Ligtenberg, M J L., Punt, C J A., & Van Muijen, G N P (2002) Limitations of cytokeratin 20 RT-PCR to detect disseminated tumour cells in blood and bone marrow of patients with colorectal cancer: expression in controls and downregulation in tumour tissue. Molecular Pathology, 55(3), 156 Moll, R., Franke, W W., Schiller, D L., Geiger, B., & Krepler, R (1982) The catalog of human cytokeratins: patterns of expression in normal epithelia, tumors and cultured cells. Cell, 31(1), 11-24 DA, A (1984) Clinical perspective of human colorectal cancer metastasis. Cancer Metastasis Rev, 3, 303-323 Dimmler, A., Gerhards, R., Betz, C., Günther, K., Reingruber, B., Horbach, T., & Papadopoulos, T (2001) Transcription of cytokeratins 8, 18, and 19 in bone marrow and limited expression of cytokeratins and 20 by carcinoma cells: inherent limitations for RT-PCR in the detection of isolated tumor cells. Laboratory investigation, 81(10), 1351-1361 Max, N., Willhauck, M., Wolf, K., Thilo, F., Reinhold, U., Pawlita, M., & Keilholz, U (2001) Reliability of PCR-based detection of occult tumour cells: lessons from real-time RT-PCR. Melanoma Research, 11(4), 371-378 Soeth, E., Röder, C., Juhl, H., Krüger, U., Kremer, B., & Kalthoff, H (1996) The detection of disseminated tumor cells in bone marrow from colorectal‐cancer patients by a cytokeratin‐20‐specific nested reverse‐transcriptase‐ polymerase‐chain reaction is related to the stage of disease. International Journal of Cancer, 69(4), 278-282 Effect of Blood Sample Handling and Reverse Transcriptase–Polymerase Chain Reaction Assay Sensitivity on Detection of CK20 Expression in Healthy Donor Blood Wyld, D K., Selby, P., Perren, T J., Jonas, S K., Allen‐Mersh, T G., Wheeldon, J., & Burchill, S A (1998) Detection of colorectal cancer cells in peripheral blood by reverse‐transcriptase polymerase chain reaction for cytokeratin 20. International journal of cancer, 79(3), 288-293 10 Giribaldi, G., Procida, S., Ulliers, D., Mannu, F., Volpatto, R., Mandili, G., & Turrini, F (2006) Specific detection of cytokeratin 20-positive cells in blood of colorectal and breast cancer patients by a high sensitivity real-time reverse transcriptase-polymerase chain reaction method. The Journal of Molecular Diagnostics, 8(1), 105-112 01/30/2024 11 01/30/2024 12