Trang 1 Ôn bài cũqPCR a Nguyên lí: PCR + phát huỳnh quang 1 Chất phát huỳnh quang: SYBR Green – cứ DNA mạch đôi là gắn vào 2 Probes: + oligonucleotide + phát tính hiệu hiệu quả + chuyê
Ôn cũ qPCR a) Nguyên lí: PCR + phát huỳnh quang (1) Chất phát huỳnh quang: SYBR Green – DNA mạch đôi gắn vào (2) Probes: + oligonucleotide + phát tính hiệu ( hiệu quả) + chuyên biệt cao - Phân cắt Taqman - Tách rời MB, FRET - Gắn với primer: Ampliflour b) Thiết bị: Máy luân nhiệt Phát ánh sáng & nhận tính hiệu Hệ thống máy vi tính c) Ứng dụng: Định lượng: dựa theo tính hiệu quỳnh quang + Tuyệt đối – Q0 - Mẫu chuẩn: Cùng loại với mẫu xét Cùng tiêu mẫu xét Biết nồng độ ban đầu Xuất phát thể kết phân tích thơng qua mẫu chuẩn + Tương đối Notes: Realtime PCR định lượng cịn PCR bình thường khơng định lượng được? Semi qualityfication PCR” bán định lượng DNA/RNA mẫu + VSV -> bệnh học Vi sinh vật Thực vật Thực phẩm Môi trường GMOs: xác định hàm lượng gen chuyển 100% GMO Bắp -> 10 ml GMO bắp 5% 0,5 ml dung dịch GMO bắp chuyển gen 9,5 ml dung dịch DNA bắp ko chuyển gen GMO chuyển gene: tồn gene chuyển Chuyển gene/ Biểu gene DNA xác nhận có gen chuyên ko Đối tượng RNA xác nhận biểu gene Tổng hợp mRNA ly trích tong hớp thành cDNA 4.SNP: single nucleotide po… a Tính hiệu huỳnh quang thu nhận từ mẫu Theo thứ tứ đường ứng 107 ………………………7 ứng 101 Càng nhìu DNA mẫu ban đầu cần thời gian Qo >< Ct Note: Ngưỡng phát hiện: lượng tính hiệu huỳnh quang cần thiết để nhận biết Chu kỳ ngưỡng: chu kỳ mà lượng tín hiệu huỳnh quang đạt qua lượng ngưỡng Lượng ngưỡng: đường thẳng ngang mức Tính hiệu tốt: Ct lần thử giống ko lệch chu kỳ Nguyên nhân sai sót: thao tác kĩ thuật viên chưa đảm bảo tình đồng DNA phân chia Phương trình đồ thị: y = -ax + b y Ct x log DNA