Đang tải... (xem toàn văn)
Các loại gel 3.Các phương pháp diện di 4.Ứng dụng Trang 4 Các Phương pháp điện di và chuyển lên màng lai Trong Phân tích Trang 5 Điện di trên Gel Gel Electrophoresis - Tách các phân
Các Phương pháp điện di chuyển lên màng lai phân tích Electrophoresis and Blotting methods in Analysis of Biomolecules Đại học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh Mục đích Trang bị kiến thức điện di Kiến thức Blotting Các bạn hiểu được: Khái niệm điện di Các loại gel Các phương pháp diện di Ứng dụng Kiến thức Blotting Các Phương pháp điện di chuyển lên màng lai Trong Phân tích Khái niệm Điện di Gel Gel Electrophoresis - Tách phân tử sinh học (DNA, RNA, Protein) cách cho qua chất Gel điện trường Người ta thường sử dụng loại gel agarose hay polyacrylamide - DNA hay RNA thường tích điện âm Trong điện di gel, mẫu cho vào giếng nằm gần diện cực âm DNA hay RNA di chuyển phía cực dương Sự di chuyển tỉ lệ nghịch với kích thước phân tử, phân tử nhỏ di chuyển nhanh - Protein có nhiều điện tích bề mặt, chúng thường xử lý với SDS để chuyển sang dạng tích điện âm Điện di Gel Gel Electrophoresis Sự di chuyển phần tử mang điện điện trường gọi Điện di (Electrophoresis) Một phân tử có điện tích q điện trường E tạo lực F =q.E Điện di gel phương pháp phân tích hữu dụng phép phân tích sinh-hoá học Điện di Gel Gel Electrophoresis Tốc độ di chuyển protein điện trường: V = Ez/f V: tốc độ di chuyển E: Lực điện trường z: Điện tích protein f: Hệ số ma sát, tùy thuộc vào khối lượng hình dạng protein độ nhớt môi trường •GEL Điện di Gel Gel Electrophoresis Gel: Trạng thái trung gian hai pha rắn lỏng Các vật liệu dùng làm gel: Starch, Agarose, Acrylamide… Cấu trúc gel Agarose tương tự Acrylamid: Mạng lưới cấu trúc ba chiều Agarose: cầu nối hydrogen thành phần Polyacrylamide: nối chéo đồng hóa trị fiber acrylamide Điện di Gel Gel Electrophoresis Agarose: polysaccharide tự nhiên phân lập từ tảo biển, có kích thước lổ gel lớn, thích hợp cho phân tách phân tử có kích thước lớn điện di dựa độ tích điện Dùng để phân tách protein > 500kDa DNA có kích thước > 2000bp Các loại agarose khác dựa đặc tính lý hóa nhiệt độ đông đặc, độ dai, kích thước lổ gel, độ điện thẩm