Đây là một loại nấm dược liệu quý, có công dụng trong việc bồi bổ vàhồi phục sức khỏe.Cao chiết là sản phẩm của tiến trình sử dụng các phương pháp ly trích, cô đặcnhằm tách chiết các hợp
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC BÁO CÁO THỰC HÀNH THỬ NGHIỆM ĐÁNH GIÁ ĐỘ ĐỘC CẤP TÍNH Ở CHUỘT NHẮT TRẮNG SWISS BIO QUA ĐƯỜNG MIỆNG Ngành học : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành : CƠNG NGHỆ SINH HỌC Nhóm thực : NHĨM Niên khố : 2021 – 2025 TP Thủ Đức, 11/2023 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC BÁO CÁO THỰC HÀNH THỬ NGHIỆM ĐÁNH GIÁ ĐỘ ĐỘC CẤP TÍNH Ở CHUỘT NHẮT TRẮNG SWISS BIO QUA ĐƯỜNG MIỆNG Giảng viên hướng dẫn Sinh viên thực TS LÊ THỊ DIỆU TRANG NGUYỄN LAN ANH 21126009 NGUYỄN THỊ LAN ANH 21126014 ĐỖ NGỌC BẢO CHÂN 21126287 PHẠM THỊ MỸ HẠNH 21126054 LÊ HOÀNG PHÚC 21126162 TP Thủ Đức, 11/2023 MSSV MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH SÁCH CÁC HÌNH .iii DANH SÁCH CÁC BẢNG iv Chương MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Nội dung thực Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan cao chiết Đông trùng hạ thảo 2.1.1 Khái niệm 2.1.2 Công dụng 2.2 Định nghĩa độc tính .4 2.3 Định nghĩa LC50 LD50 .5 2.3.1 Định nghĩa LC50 2.3.2 Định nghĩa LD50 2.4 Phương pháp xác định độc tính qua đường miệng (LD50 LC50) .6 2.5 Tổng quan chuột thí nghiệm Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 3.1 Thời gian thực .7 3.2 Mục tiêu 3.3 Vật liệu đối tượng i 3.3.1 Đối tượng nghiên cứu .7 3.3.2 Vật liệu nghiên cứu 3.3.3 Dụng cụ thiết bị 3.4 Phương pháp nghiên cứu .7 3.4.1 Cách bố trí thí nghiệm 3.4.2 Các bước thực Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 10 4.1 Kết thảo luận 10 4.1.1 Kết 10 4.1.2 Thảo luận 11 Chương KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 13 5.1 Kết luận .13 5.2 Kiến nghị 13 TÀI LIỆU THAM KHẢO 14 ii DANH SÁCH CÁC HÌNH Hình 2.1 Cordyceps militaris Hình 2.2 Đơng trùng hạ thảo Hình 2.3 Chuột nhắt thí nghiệm Hình 3.1 Cân khối lượng chuột Hình 3.2 Pha liều lượng thuốc Hình 3.3 Cho chuột uống thuốc Hình 4.1 Sau uống thuốc theo dõi vòng 15 phút .10 Hình 4.2 Kết uống thuốc thử sau 24 10 Hình 4.3 Kết uống thuốc thử sau 48 11 Hình 4.4 Kết uống thuốc thử sau 72 11 DANH SÁCH CÁC BẢNG Bảng 4.1 Theo dõi tình trạng bất thường chuột sau uống cao chiết Đông trùng hạ thảo .12 Chương MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Đông trùng hạ thảo hay tên tiếng Anh Cordyceps loại dược liệu quý có chất dạng ký sinh lồi nấm Ophiocordyceps sinensis thuộc nhóm nấm Ascomycetes thể ấu trùng vài loài bướm thuộc chi Thitarodes) Đông trùng hạ thảo sử dụng từ lâu y học cổ truyền Trung Quốc Ngày thị trường có nhiều thực phẩm chức chiết xuất từ Đơng trùng hạ thảo Có 400 lồi Đơng trùng hạ thảo, hầu hết có nguồn gốc từ Bhutan, Trung Quốc, Hàn Quốc, Nepal, Thái Lan Việt Nam Lồi dược liệu biết đến nhiều có tên khoa học Cordyceps sinensis, họ Ophiocordycipitaceae Nấm có thân dài ngón tay thường có màu nâu nâu nâu Đông trùng hạ thảo xem dược liệu quý hiếm, mang đến nhiều công dụng tăng cường sức khoẻ, nâng cao thể trạng, phòng tránh ung thư, tốt cho đường huyết, tim mạch, huyết áp, chống oxy hóa chống viêm Tuy nhiên, việc sử dụng hàm lượng Đông trùng hạ thảo cao hay thấp, cách sử dụng ảnh hưởng đến cơng dụng Do cần tiến hành thử nghiệm đánh giá độ độc cấp tính chuột nhắt trắng Swiss Bio qua đường miệng 1.2 Mục tiêu nghiên cứu Khảo sát, đánh giá độ an tồn dung dịch cao chiết Đơng trùng hạ thơng qua đường miệng chuộ,t xem xét có phản ứng dị ứng hay tượng phản vệ xảy sau hay khơng 1.3 Nội dung thực Khảo sát lượng độc cấp tính từ dung dịch cao chiết Đông trùng hạ thảo chuột qua đường miệng Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan cao chiết Đông trùng hạ thảo 2.1.1 Khái niệmm Nấm đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris thuộc chi Cordyceps, bộ: Hypocreales Đây loại nấm dược liệu q, có cơng dụng việc bồi bổ hồi phục sức khỏe Cao chiết sản phẩm tiến trình sử dụng phương pháp ly trích, đặc nhằm tách chiết hợp chất quý từ C militaris, dược liệu tự nhiên Sau đó, thành phần sử dụng để tổng hợp thành thuốc, thực phẩm sức khỏe… Nhờ đó, người có sản phẩm bổ dưỡng để bổ sung, nâng cao cải thiện tình hình bệnh tật…Chiết xuất Đơng trùng hạ thảo nhằm tạo chế phẩm an toàn, đảm bảo tiêu chuẩn cụ thể Thơng thường, sau q trình thu dạng dung dịch dạng cao dược liệu có tác dụng mạnh hơn, hạn chế tác dụng phụ không mong muốn Thực chiết xuất cách để loại bỏ hỗn hợp tạp chất ẩm mốc, nấm vi khuẩn nhiều loại côn trùng phát triển q trình phơi khơ, sấy khơ chứa đơng trùng hạ thảo Hình 2.1 Cordyceps militaris Nguồn: www.dreamstime.com 2.1.2 Cơng dụngng Các cơng trình nghiên cứu ứng dụng thực tế hợp chất adenosine có cao chiết Đơng trùng hạ thảo có tác dụng đây: Ổn định huyết áp, hỗ trợ điều trị phòng tránh bệnh tim mạch: theo chuyên gia Adenosine có mặt tế bào thể người đồng thời tham gia vào hoạt động sống Hoạt chất tham gia vào q trình điều hịa nhịp tim, khắc phục tượng loạn chậm nhịp tim, cải thiện hệ tuần hoàn ngoại biên tim mạch, tăng lượng oxy máu Bên cạnh đó, adenosine cịn ghi nhận với khả ức chế hoạt động ngưng trệ tiểu cầu mức, đồng thời hạn chế tình trạng mắc phòng chống bệnh mạch máu như: nhồi máu tim, tắc mạch máu não, máu lưu thơng Duy trì q trình tuần hồn, tăng cường oxy máu: Adenosin có Đơng trùng hạ thảo giúp gia tăng lượng oxy máu, hỗ trợ giãn nở mạch máu, cung cấp dưỡng khí cho tuần hồn máu thể Cải thiện sức khỏe: Adenosine thành phần khác đơng trùng hạ thảo có khả cung cấp lượng chất dinh dinh dưỡng cần thiết giúp trì hoạt động sống thể đồng thời hồi phục sức khỏe người ốm dậy, thể suy nhược Cải thiện khả sinh lí: Adenosine có tác dụng tích cực việc cải thiện tuần hoàn vi lưu lượng máu cục thận, bên cạnh đó, hoạt chất điều tiết hàm lượng prostaglandin thận nội tiết tố, tổ chức thần kinh chức sinh dục Ổn định thần kinh: hoạt chất giúp ổn định tinh thần, giải tỏa căng thẳng mệt mỏi, giảm bớt tình trạng đau đầu, chóng mặt, hỗ trợ hoạt động hệ thần kinh Bên cạnh đó, Adenosine giúp điều tiết q trình sinh hóa giấc ngủ, giúp có giấc ngủ sâu, ổn định thông qua tác dụng ổn định chống thiếu dưỡng khí Theo số kết nghiên cứu giới, Adenosine ghi nhận với tác dụng giảm kích thích thần kinh, hoạt chất có nồng độ thấp bất thường bệnh nhân bị động kinh đồng thời làm giảm co giật bệnh thí nghiệm chuột Hoạt chất adenosine đông trùng hạ thảo ghi nhận với hàm lượng cao Bởi vậy, việc sử dụng đông trùng hạ thảo giúp thể hấp thụ dưỡng chất đồng thời thu nhận giá trị tích cực adenosine với sức khỏe người 2.2 Định nghĩa độc tính Hình 2.2 Đơng trùng hạ thảo Nguồn: nhatnamyvien.com Độ độc cấp tính định nghĩa độ độc thể sau phơi nhiễm thời gian ngắn với chất độc Độ độc cấp tính khả hóa chất gây tác động xấu tương đối sớm sau uống sau tiếp xúc liên tục với hóa chất "tương đối sớm" thường định nghĩa khoảng thời gian phút, (lên đến 24) ngày (khoảng tuần) dài Mục đích thử nghiệm độ độc cấp tính thu thập thơng tin hoạt động sinh học hóa chất hiểu biết sâu sắc chế hoạt động Các nghiên cứu dài hạn thường bắt đầu việc thực tìm kiếm liều lượng sử dụng điều kiện cấp tính Hơn nữa, thơng tin độc tính hệ thống cấp tính tạo thử nghiệm sử dụng nhận dạng nguy hiểm quản lý rủi ro bối cảnh sản xuất, xử lý sử dụng hóa chất Giá trị LD 50 (preciseorapproximate) sở cho việc phân loại chất độc hóa học yêu cầu quan phủ tình cụ thể Các động vật định lượng quan sát chặt chẽ 24 sau ngày khoảng thời gian tuần thay đổi ngoại hình hành vi ghi nhận Việc sử dụng đánh giá bệnh lý rộng rãi phần nghiên cứu cấp tính Tuy nhiên, tổng số ca mổ yêu cầu tối thiểu hầu hết quan quản lý phủ, xác định trọng lượng trước dùng thuốc sau tuần Xác định giá trị LD50 xác nghiên cứu độc tính cấp tính thúc đẩy chủ yếu yêu cầu khác quyền việc phân loại hóa chất Trước LD 50 sử dụng cho hóa chất cơng nghiệp làm sở cho hệ thống phân loại độc tính khác hoạt động 2.3 Định nghĩa LC50 LD50 2.3.1 Định nghĩa LCnh nghĩa LC50 Giá trị LC50 (Median lethal concentration): nồng độ chất độc làm chết 50% số động vật thí nghiệm, đơn vị tính thường mg/L dung dịch hóa chất LC50 thường dùng để đánh giá độc tính chất độc dạng lỏng chất độc tan dung dịch nước 2.3.2 Định nghĩa LCnh nghĩa LD LD50 Giá trị LD50 (Median lethal dose), định nghĩa liều lượng chất độc làm chết 50% số động vật thí nghiệm khoảng thời gian định, đơn vị tính thường mg/kg động vật Giá trọ LD 50 sở để phân loại độc tính hóa chất Đối với nghiên cứu LD50 cổ điển, chuột bạch chuột cống lồi thường chọn Thơng thường hai giới tính chuột phải sử dụng cho nghiên cứu Khi dùng đường uống kết hợp với đường tiêm, thu thông tin sinh khả dụng hợp chất thử nghiệm Kết thảo luận rộng rãi tầm quan trọng giá trị LD 50 phát triển đồng thời quy trình thay quan chức ngày thường không yêu cầu xét nghiệm LD 50 cổ điển liên quan đến số lượng lớn động vật Thử nghiệm giới hạn, quy trình liều cố định, phương pháp phân loại chất độc phương pháp tăng giảm thể phương án thay đơn giản hóa sử dụng số động vật Những nỗ lực thực để phát triển hệ thống in vitro; ví dụ, người ta gợi ý độc tính tồn thân cấp tính chia thành số yếu tố sinh học, tế bào phân tử, yếu tố xác định định lượng mơ hình thích hợp Sau đó, yếu tố khác sử dụng kết hợp khác để mơ hình hóa số lượng lớn tượng độc hại nhằm dự đoán mối nguy hiểm phân loại hợp chất Hiện tại, việc dán nhãn hóa chất phân loại độc tính hệ thống cấp tính dựa đường miệng giá trị LD 50 khuyến nghị Tổ chức Hợp tác Phát triển Kinh tế (OECD) sau: độc hại gây chết với liều lượng 550500