Trang 1 TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI 2 KHOA SINH - KTNN VŨ THANH HÀ NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG GIẢI PHÓNG THUỐC CỦA VẬT LIỆU CELLULOSE NẠP DICLOFENAC NATRI TẠO RA TỪ GLUCONACETOBACTER XYLINUS
TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH - KTNN VŨ THANH HÀ NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG GIẢI PHÓNG THUỐC CỦA VẬT LIỆU CELLULOSE NẠP DICLOFENAC NATRI TẠO RA TỪ GLUCONACETOBACTER XYLINUS TRONG MÔI TRƯỜNG NƯỚC DỪA GIÀ Khóa luận tốt nghiệp đại học KHỐ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lý người động vật Hà Nội, tháng năm 2019 TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH - KTNN VŨ THANH HÀ NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG GIẢI PHÓNG THUỐC CỦA VẬT LIỆU CELLULOSE NẠP DICLOFENAC NATRI TẠO RA TỪ GLUCONACETOBACTER XYLINUS TRONG MƠI TRƯỜNG NƯỚC DỪA GIÀ Khóa luận tốt nghiệp đại học KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lý người động vật Người hướng dẫn khoa học ThS Ngô Thị Hải Yến Hà Nội, tháng năm 2019 LỜI CẢM ƠN Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới tồn thể thầy làm việc Viện nghiên cứu ứng dụng trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2, toàn thể thầy cô giáo khoa Sinh – KTNN bạn sinh viên tham gia làm đề tài môn Sinh lý người động vật quan tâm, giúp đỡ tạo điều kiện tốt để tơi hồn thành khóa luận với đề tài “Nghiên cứu khả giải phóng thuốc vật liệu Cellulose nạp Diclofenac Natri tạo từ Gluconacetobacter Xylinus môi trường nước dừa già” Đặc biệt, muốn gửi lời cảm ơn sâu sắc đến ThS Ngô Thị Hải Yến, người trực tiếp hướng dẫn, giúp đỡ động viên tơi suốt q trình tơi thực hồn thành khóa luận Do lần đầu tiếp xúc với nghiên cứu khoa học thân chưa có nhiều kinh nghiệm nên tơi cịn nhiều thiếu sót q trình thực Vì vậy, tơi mong nhận lời góp ý quý thầy bạn sinh viên để khóa luận hồn chỉnh Khóa luận tốt nghiệp đại học Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 20 tháng năm 2019 Sinh viên Vũ Thanh Hà LỜI CAM ĐOAN Tơi xin khẳng định kết khóa luận “Nghiên cứu khả giải phóng thuốc vật liệu Cellulose nạp Diclofenac Natri tạo từ Gluconacetobacter Xylinus môi trường nước dừa già” kết nghiên cứu cá nhân hướng dẫn ThS Ngô Thị Hải Yến, giảng viên trường Đại học Sư phạm Hà Nội Những số liệu kết khóa luận trung thực, khơng có chép đề tài khác Đề tài chưa cơng bố đâu hồn tồn khơng trùng với cơng trình nghiên cứu tác giả khác Trong đề tài, tơi có trích dẫn số liệu số tác giả, xin phép tác giả trích dẫn để bổ sung cho khóa luận Nếu sai tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm Hà Nội, ngày 20 tháng năm 2019 Khóa luận tốt nghiệp đại học Sinh viên Vũ Thanh Hà DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT STT KÍ KIỆU VIẾT TẮT NỘI DUNG BC Bacterial cellulose h MT Môi trường CVK Cellulose vi khuẩn OD Optical density UV-vis Giờ Ultraviolet visible Khóa luận tốt nghiệp đại học MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục đích nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn Tính đề tài (nếu có) NỘI DUNG CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.Giới thiệu cellulose vi khuẩn ( CVK) 1.1.1 Đặc điểm phân loại Gluconacetobacter Xylinus 1.1.2 Màng cellulose vi khuẩn Khóa luận tốt nghiệp đại học 1.2.Thuốc Diclofenac Natri 1.2.1.Cơng thức hóa học tên gọi 1.2.2.Tính chất 1.2.3.Công dụng chế tác động Diclofenac 1.2.4 Động học giải phóng thuốc 1.2.5.Dược lực học thuốc 1.2.6.Tác dụng không mong muốn thuốc 1.3.Tình hình giới Việt Nam 1.3.1 Trên giới 1.3.2 Ở Việt Nam CHƯƠNG 2.ĐỐI TƯỢNG, PHẠM VI, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 10 2.1 Đối tượng nghiên cứu 10 2.2 Phạm vị nghiên cứu, địa điểm thời gian 10 2.3 Phương pháp nghiên cứu 10 2.3.1 Vật liệu nghiên cứu 10 2.3.1.1 Chủng vi sinh 10 2.3.1.2 Nguyên liệu hóa chất 10 2.3.1.3 Thiết bị dụng cụ 10 2.3.2 Cách bố trí thí nghiệm 11 2.3.3 Phương pháp nghiên cứu 11 2.3.3.1.Chế tạo màng CVK từ môi trường nước dừa già 11 2.3.3.2 Xử lí vật liệu CVK 12 2.3.4 Phương pháp pha dung dịch đệm 14 2.3.5 Phương pháp dựng đường chuẩn thuốc Diclofenac 14 2.3.6 Xác định lượng thuốc hấp thụ vào vật liệu BC 18 2.3.7.Nghiên cứu khả giải phóng thuốc vào màng mơi trường nước dừa già 19 2.3.8 Phương pháp xử lý thống kê 20 Khóa luận tốt nghiệp đại học CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 21 3.1 Màng CVK nuôi cấy từ môi trường nước dừa già 21 3.2 Thu màng CVK thô từ môi trường 21 3.3 Tinh chế màng CVK 23 3.4 Xác định lượng thuốc Diclofenac giải phóng khỏi màng CVK 23 Chương 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 36 Kết Luận 36 Kiến nghị 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO 37 DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Thành phần môi trường lên men tạo màng Cellulose vi khuẩn 12 Bảng 2.2 Mật độ quang (OD) dung dịch Diclofenac nồng độ khác (n=3) bước sóng 276nm 15 Bảng 2.3 Mật độ quang (OD) dung dịch Diclofenac nồng độ khác (n=3) bước sóng 278nm 16 Bảng 2.4 Mật độ quang (OD) dung dịch Diclofenac nồng độ khác (n =3) bước sóng 281nm 17 Bảng 3.1 Mật độ quang tiến hành giải phóng thuốc thời điểm khác môi trường pH khác màng không ép 26 Bảng 3.2 Mật độ quang tiến hành giải phóng thuốc thời điểm khác môi trường pH khác màng ép 28 Bảng 3.3 Tỉ lệ giải phóng thuốc màng chưa ép môi trường pH khác khoảng thời gian khác (n=3) 30 Khóa luận tốt nghiệp đại học Bảng 3.4 Tỉ lệ giải phóng thuốc màng ép môi trường pH khác khoảng thời gian khác (n=3) 32 Bảng 3.5 Tỷ lệ thuốc Diclofenac giải phóng cực đại 24 màng môi trường pH khác 34 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo Diclofenac Hình 2.1 Sơ đồ xử lý CVK sau lên men 13 Hình 2.2 Phương trình đường chuẩn Diclofenac bước sóng 276nm 15 Hình 2.3 Phương trình đường chuẩn Diclofenac bước sóng 278nm 16 Hình 2.4 Phương trình đường chuẩn Diclofenac bước sóng 281nm 17 Hình 3.1 Màng CVK nuôi cấy môi trường nước dừa già 21 Hình 3.2 Màng thu sau q trình ni cấy 22 Hình 3.3 Màng CVK bảo quản tủ lạnh 22 Hình 3.4 Màng CVK xả vòi nước 23 Hình 3.5 Màng CVK thu sau trình hấp thụ 24 Hình 3.6 Màng cho vào máy giải phóng 24 Hình 3.7 Mẫu rút lọ nhỏ để đo quang phổ 25 Khóa luận tốt nghiệp đại học Hình 3.8 Biểu đồ so sánh mật độ quang lượng thuốc giải phóng màng 0,5cm 1cm chưa ép mơi trường pH khác (n=3) 27 Hình 3.9 Biểu đồ so sánh mật độ quang lượng thuốc giải phóng màng 0,5cm 1cm ép mơi trường pH khác (n=3) 29 Hình 3.10 Biểu đồ biểu diễn tỉ lệ giải phóng thuốc Diclofenac màng chưa ép pH thời gian khác 31 Hình 3.11 Biểu đồ biểu diễn tỉ lệ giải phóng thuốc Diclofenac màng ép pH thời gian khác 33 Hình 3.12 Khả giải phóng thuốc cực đại màng môi trường pH khác 24 34 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Ở nước ta năm gần đây, tỉ lệ phụ nữ mắc bệnh viêm khớp mãn tĩnh ngày tăng cao Đặc biệt độ tuổi từ 35- 55 tuổi, phụ nữ hay bị hành hạ đau viêm khớp dạng thấp gây nên [2] Theo nghiên cứu cho thấy Diclofenac–một dẫn chất acid phenylacetic thuốc chống viêm khơng steroid có tác dụng chống viêm giảm đau Vì vậy, người ta sử dụng Diclofenac để sản xuất thuốc dùng chữa bệnh viêm khớp Ngồi ra, Diclofenac cịn chất ức chế mạnh hoạt tính cyclooxygenase làm giảm tạo thành chất trung gian trình viêm prostacyclin, thromboxan prostaglandin Bên cạnh đó, Diclofenac cịn ức chế tạo thành mucin gây tổn hại cho đường tiêu hóa dẫn Khóa luận tốt nghiệp đại học đến làm giảm tổng hợp prostaglandin [3] Các nghiên cứu gần phát hiên có số lồi vi khuẩn tự nhiên có khả tạo màng cellulose Khi ni cấy mơi trường thích hợp vi khuẩn có khả hình thành lớp màng cellulose sinh học khiết gọi màng cellulose vi khuẩn (CVK) [5] Màng CVK nguồn vật liệu quan tâm, thu hút ý nhà nghiên cứu nhờ đặc tính ưu việt mà đem lại như: Màng CVK có độ tinh khiết cao, độ dẻo dai học lớn đặc biệt có khả hút nước giữ nước tốt Hiện màng CVK áp dụng nhiều lĩnh vực khác Điển hình, lĩnh vực y học, điều trị bỏng màng CVK ứng dụng làm da nhân tạo thay tạm thời Ngồi màng CVK cịn tác nhân chuyển thuốc chất làm co mạch [12,21] Ở Việt Nam, màng CVK có nhu cầu sử dụng cao giá thành nhập từ nước lớn việc nghiên cứu màng CVK mức hạn chế.Tuy nhiên, phương pháp lên men tĩnh vi khuẩn