Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.Nghiên cứu biểu hiện của TILs và PDL1 trong carcinôm vú xâm lấn.
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Đối tượng nghiên cứu
Bệnh nhân nữ mắc bệnh carcinôm vú xâm lấn, đáp ứng các tiêu chuẩn bao gồm tiêu chuẩn nhận vào và tiêu chuẩn loại trừ.
2.2.1 Tiêu chuẩn chọn đối tượng nghiên cứu
Có ghi nhận đầy đủ các dữ kiện lâm sàng, chẩn đoán lâm sàng.
Có bệnh phẩm là mô u của phẫu thuật cắt vú và kết quả giải phẫu bệnh là carcinôm vú xâm lấn.
Có tiêu bản để có thể đọc, phân tích và xác nhận lại các dữ kiện trên tiêu bản H&E, ER, PR, HER2 và Ki-67.
Khối mô còn nguyên vẹn đủ mô để có thể nhuộm HMMD PD-L1 hoặc các dấu ấn ER, PR, HER2, Ki-67 khi cần.
Bệnh nhân đã hóa, xạ trị vào khối u carcinôm vú xâm lấn trước đó.
Thời gian và địa điểm nghiên cứu
Nghiên cứu được thực hiện tại Khoa Giải phẫu bệnh của Bệnh viện Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh, Bộ môn Mô phôi - Giải phẫu bệnh thuộc Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh, và Khoa Giải phẫu bệnh – Tế bào tại Bệnh viện Hùng Vương, Thành phố Hồ Chí Minh.
Dữ liệu nghiên cứu được thu thập trong khoảng thời gian ngày 15 tháng 01 năm
2022 đến 30 tháng 11 năm 2022, các bệnh nhân đủ tiêu chuẩn nhận vào có thời gian chẩn đoán bệnh từ năm 2014 đến năm 2021.
Cỡ mẫu nghiên cứu
Cỡ mẫu được áp dụng theo công thức tính cỡ mẫu mô tả định tính như sau:
n: số lượng đối tượng tối thiểu cần phải nghiên cứu.
α: mức ý nghĩa thống kê (chúng tôi chọn 0,05).
Z: hệ số giới độ hạn tin cậy (Z = 1,96 tương ứng α = 0,05).
d: sai số tuyệt đối cho phép (chúng tôi chọn d = 0,1 - 0,05) (tức là mức chênh giữa mẫu nghiên cứu và quần thể).
P 1 = 0,27 (27%) là tỷ lệ biểu hiện TILs trong nghiên cứu của tác giả Guo H và cs (2020) 132 Thay vào công thức trên ta có:
Bảng 2.1 Cỡ mẫu ước tính khi giá trị d thay đổi, p 1 = 0,27
Alpha P 1 ước tính d KTC 95% ước tính n 1
P 2 = 0,25 (25%) là tỷ lệ biểu hiện của PD-L1 trong 01 nghiên cứu tổng quan của tác giả Matikas A và cs (2019) 15 Thay vào công thức trên ta có:
Bảng 2.2 Cỡ mẫu ước tính khi giá trị d thay đổi, p 2 = 0,25
Alpha P 2 ước tính d KTC 95% ước tính n 2
Chúng tôi chọn số đối tượng nghiên cứu tối thiểu phải là n = 211 trường hợp
(với α = 0,05, d = 0,06 và z = 1,96) carcinôm vú xâm lấn, phù hợp với điều kiện thực tế về thời gian và năng lực nghiên cứu của chúng tôi (Bảng 2.1 và Bảng 2.2).
2.5 Xác định các biến số độc lập và phụ thuộc
Biểu hiện lymphô bào thấm nhập trong u (TILs).
Biểu hiện của PD-L1: kết cục quan trọng nhất.
Kết cục bất lợi của bệnh nhân: kết cục phụ trong nghiên cứu trong nghiên cứu chúng tôi.
Các biến số độc lập liên quan đến đặc điểm lâm sàng của bệnh nhân:
Tuổi bệnh nhân tại thời điểm mắc bệnh.
Tình trạng mãn kinh tại thời điểm mắc bệnh.
Chỉ số khối cơ thể (BMI) tại thời điểm mắc bệnh.
Tiền căn bệnh đái tháo đường.
Tiền căn bệnh lý tuyến vú lành tính.
Tình huống phát hiện bệnh.
Các biến số độc lập liên quan đến đặc điểm giải phẫu bệnh của bệnh nhân:
Số lượng hạch di căn.
Tình trạng xâm lấn mạch máu.
Các biến số độc lập liên quan đến đặc điểm các dấu ấn sinh học của bệnh nhân:
Trong phần tiếp theo (Mục 2.6), chúng tôi sẽ trình bày chi tiết về cách thu thập dữ liệu, các công cụ đo lường và phương pháp đánh giá các biến đã đề cập.
2.6 Phương pháp và công cụ đo lường, thu thập số liệu
2.6.1.1 Biểu hiện của lymphô bào thâm nhập khối u - TILs
TILs (tế bào lympho xâm nhập) được đánh giá trong mô đệm của carcinôm vú xâm lấn bằng cách tính phần trăm (%) diện tích mô đệm bị tế bào viêm đơn nhân chiếm chỗ, so với tổng diện tích mô đệm trong carcinôm vú xâm lấn.
Nhóm chuyên gia TILs Thế giới năm 2014 khuyến nghị nên chia thành 3 nhóm: 126
TILs có biểu hiện thấp: TILs ≤10%.
TILs có biểu hiện trung bình: 10%< TIL 10%.
Bảng 2.3 Đánh giá TILs theo Nhóm chuyên gia TILs thế giới năm 2014 Đánh giá TILs trong carcinôm vú xâm lấn theo Nhóm chuyên gia TILs thế giới năm 2014 21,126
Đánh giá TILs (tế bào lympho xâm nhập) trong mô đệm của carcinôm vú xâm lấn là rất quan trọng Tỷ lệ phần trăm (%) diện tích mô đệm bị tế bào viêm đơn nhân chiếm chỗ được tính bằng cách chia diện tích mô đệm bị ảnh hưởng cho tổng diện tích mô đệm trong carcinôm vú xâm lấn.
2 Chỉ đánh giá TILs giới hạn trong diện tích của carcinôm vú xâm lấn.
3 Không đánh giá TILs ngoài u, quanh vùng DCIS và tiểu thùy vú bình thường.
4 Không đánh giá TILs trong vùng gấp nếp do lỗi kỹ thuật, vùng hoại tử, vùng bị thoái hóa hyalin và vùng sinh thiết lõi trước đó.
5 Tất cả các tế bào viêm đơn nhân (lymphô bào, tương bào) sẽ được đánh giá, không đánh giá tế bào viêm đa nhân.
6 Mỗi bệnh nhõn chỉ cần 01 tiờu bản H&E (4-5àm, độ phúng đại x200-400).
7 Mẫu sinh thiết lõi vẫn có thể được dùng để đánh giá TILs, tuy nhiên mẫu cắt u vẫn được ưu tiên lựa chọn hơn.
8 Đánh giá toàn bộ diện tích của khối u, không nên chỉ đánh giá vùng hiện diện nhiều TILs.
9 Kết quả đánh giá nên được trình bày chi tiết bằng phần trăm (%).
10 TILs nên được coi như là thông số liên tục.
Hiện tại, chưa có ngưỡng cắt thống nhất được áp dụng trong lâm sàng Tuy nhiên, hầu hết các chuyên gia đồng thuận rằng ngưỡng cắt từ 50-60% trở lên cho thấy sự hiện diện mạnh mẽ của TILs.
Việc đánh giá tế bào lympho xâm nhập (TILs) được tiến hành dưới kính hiển vi quang học, do nghiên cứu sinh và một bác sĩ giải phẫu bệnh có kinh nghiệm thực hiện độc lập Kết quả sẽ được đối chiếu; nếu không đồng thuận, sẽ được thảo luận cùng người hướng dẫn để đưa ra kết luận cuối cùng.
Hình 2.1 Cách xác định giới hạn đánh giá TILs
Hình 2.2 Các bước tiếp cận chuẩn để đánh giá TILs
Chúng tôi đánh giá biểu hiện của PD-L1 bằng hệ thống thang điểm dương tính kết hợp (CPS) CPS có hai giá trị, trong đó trị số 1 là ngưỡng cắt của CPS, được xác định là 132.
Hướng dẫn đánh giá kết quả HMMD PD-L1 IHC 22C3 pharmDx yêu cầu bác sĩ giải phẫu bệnh có kinh nghiệm và được đào tạo đầy đủ trong việc sử dụng kính hiển vi quang học để thực hiện quy trình này.
Trong nghiên cứu này, việc đánh giá PD-L1 được thực hiện độc lập bởi nghiên cứu sinh và một bác sĩ giải phẫu bệnh có kinh nghiệm Kết quả được đối chiếu và nếu không đồng thuận, sẽ được thảo luận cùng người hướng dẫn Kết luận cuối cùng của người hướng dẫn sẽ được sử dụng trong nghiên cứu.
Trước khi tiến hành đánh giá kết quả nhuộm PD-L1, cần thiết phải kiểm tra chứng âm và chứng dương nhằm đảm bảo chất lượng nhuộm Để có đánh giá chính xác, cần đảm bảo rằng mẫu được đánh giá có ít nhất 100 tế bào u đạt tiêu chuẩn.
Tiêu bản nhuộm hematoxylin và eosin (H&E) của mẫu mô được đánh giá trước tiên nhằm xác định chất lượng mô học và chất lượng bảo quản mô Định nghĩa thang điểm dương tính kết hợp giúp đánh giá một cách chính xác hơn về tình trạng của mẫu mô.
Biểu hiện PD-L1 được xác định thông qua thang điểm dương tính kết hợp (CPS), bằng cách tính số lượng tế bào bắt màu PD-L1, bao gồm tế bào khối u, lymphô bào, đại thực bào và mô bào, sau đó chia cho tổng số tế bào khối u sống và nhân với 100.
Số lượng tế bào bắt màu PD-L1 (Tế bào khối u, lymphô bào, đại thực bào, mô bào) x 100
Tổng số tế bào ung thư đạt chất lượng
Chú ý: Mặc dù kết quả của phép tính có thể vượt quá 100, điểm tối đa của CPS được xác định vẫn là 100.
Bảng 2.4 Cách xác định tiêu chuẩn cho tử số trong công thức CPS
Thành phần Tiêu chuẩn nhận Tiêu chuẩn loại trừ
Tế bào u Bắt màu một phần hoặc toàn bộ màng tế bào của các tế bào khối u xâm lấn (ở bất kỳ cường độ nào)
Tế bào u không bắt màu
Tế bào u chỉ bắt màu ở bào tương
Bắt màu tế bào u của DCIS
Nhuộm màng hoặc tế bào chất (ở bất kỳ cường độ nào) của tế bào viêm đơn nhân (MIC) trong mô u xâm lấn và mô đệm lân cận:
- Tế bào bạch huyết (bao gồm cả tập hợp lymphô bào)
- Đại thực bào: Chỉ MICs liên quan trực tiếp đến phản ứng với khối u mới được tính điểm
Tế bào MICs không bắt màu.
Tế bào MICs liên quan DCIS.
Tế bào MICs liên quan vùng lành tính.
Tế bào MICs không liên quan đến vùng u xâm lấn.
Bạch cầu trung tính, bạch cầu ái toan và tương bào.
Không đưa vào Tế bào biểu mô lành tính
Các tế bào mô đệm (kể cả nguyên bào sợi)
Để đánh giá diện tích khối u một cách hiệu quả, cần xem xét các tế bào hoại tử hoặc mảnh vỡ tế bào ở độ phóng đại thấp Việc đánh giá tổng thể các vùng tế bào khối u nhuộm PD-L1 và không nhuộm là rất quan trọng, đặc biệt lưu ý rằng việc quan sát các vùng nhuộm màng một phần hoặc nhuộm màng 1+ có thể gặp khó khăn ở độ phóng đại thấp Đảm bảo rằng mẫu có ít nhất 100 tế bào khối u còn tồn tại là điều cần thiết để có kết quả chính xác.
Bảng 2.5 Cách xác định tiêu chuẩn cho mẫu số trong công thức CPS
Các thành phần mô Tiêu chuẩn nhận Tiêu chuẩn loại trừ
Bắt màu một phần hoặc toàn bộ màng tế bào của các tế bào khối u xâm lấn (ở bất kỳ cường độ nào)
Tế bào miễn dịch Không đưa vào Tất cả tế bào miễn dịch
Tế bào khác Không đưa vào
Tế bào biểu mô lành tính Các tế bào mô đệm (kể cả nguyên bào sợi)
Các tế bào hoại tử hoặc mảnh vỡ tế bào
Để tiêu bản nhuộm PD-L1 (sinh thiết và phẫu thuật) được xem là đủ tiêu chuẩn để đánh giá, cần có tối thiểu 100 tế bào khối u đạt chuẩn trong mẫu.
Các bước chuẩn bị để nhuộm HMMD và đánh giá biểu hiện PD-L1:
Giới thiệu sơ lược về bộ kít 22C3 và quy trình nhuộm PD-L1:
Phương pháp và công cụ đo lường, thu thập số liệu
2.6.1.1 Biểu hiện của lymphô bào thâm nhập khối u - TILs
TILs được xác định trong mô đệm của carcinôm vú xâm lấn bằng cách tính tỷ lệ phần trăm (%) diện tích mô đệm bị tế bào viêm đơn nhân chiếm chỗ so với tổng diện tích mô đệm.
Nhóm chuyên gia TILs Thế giới năm 2014 khuyến nghị nên chia thành 3 nhóm: 126
TILs có biểu hiện thấp: TILs ≤10%.
TILs có biểu hiện trung bình: 10%< TIL 10%.
Bảng 2.3 Đánh giá TILs theo Nhóm chuyên gia TILs thế giới năm 2014 Đánh giá TILs trong carcinôm vú xâm lấn theo Nhóm chuyên gia TILs thế giới năm 2014 21,126
Chỉ số TILs được đánh giá trong mô đệm của carcinôm vú xâm lấn Tỷ lệ phần trăm (%) diện tích mô đệm bị tế bào viêm đơn nhân chiếm chỗ được tính bằng cách chia diện tích mô đệm bị chiếm chỗ cho tổng diện tích mô đệm trong carcinôm vú xâm lấn.
2 Chỉ đánh giá TILs giới hạn trong diện tích của carcinôm vú xâm lấn.
3 Không đánh giá TILs ngoài u, quanh vùng DCIS và tiểu thùy vú bình thường.
4 Không đánh giá TILs trong vùng gấp nếp do lỗi kỹ thuật, vùng hoại tử, vùng bị thoái hóa hyalin và vùng sinh thiết lõi trước đó.
5 Tất cả các tế bào viêm đơn nhân (lymphô bào, tương bào) sẽ được đánh giá, không đánh giá tế bào viêm đa nhân.
6 Mỗi bệnh nhõn chỉ cần 01 tiờu bản H&E (4-5àm, độ phúng đại x200-400).
7 Mẫu sinh thiết lõi vẫn có thể được dùng để đánh giá TILs, tuy nhiên mẫu cắt u vẫn được ưu tiên lựa chọn hơn.
8 Đánh giá toàn bộ diện tích của khối u, không nên chỉ đánh giá vùng hiện diện nhiều TILs.
9 Kết quả đánh giá nên được trình bày chi tiết bằng phần trăm (%).
10 TILs nên được coi như là thông số liên tục.
Hiện tại, chưa có ngưỡng cắt thống nhất cho ứng dụng lâm sàng Tuy nhiên, hầu hết các chuyên gia đồng thuận rằng ngưỡng cắt từ 50-60% trở lên được coi là biểu hiện của TILs mạnh.
Việc đánh giá TILs được thực hiện độc lập dưới kính hiển vi quang học bởi nghiên cứu sinh và một bác sĩ giải phẫu bệnh có kinh nghiệm Kết quả đánh giá sẽ được so sánh, và nếu không đạt được sự đồng thuận, sẽ được thảo luận với người hướng dẫn của nghiên cứu sinh Kết luận cuối cùng sẽ do người hướng dẫn đưa ra.
Hình 2.1 Cách xác định giới hạn đánh giá TILs
Hình 2.2 Các bước tiếp cận chuẩn để đánh giá TILs
Chúng tôi đánh giá biểu hiện của PD-L1 bằng hệ thống thang điểm dương tính kết hợp (CPS), với trị số 1 là ngưỡng cắt của CPS Biến phân nhóm này có 2 giá trị, trong đó trị số 135 được xác định là quan trọng.
Hướng dẫn đánh giá kết quả HMMD PD-L1 IHC 22C3 pharmDx yêu cầu bác sĩ giải phẫu bệnh có đầy đủ đào tạo và kinh nghiệm trong việc sử dụng kính hiển vi quang học.
Trong nghiên cứu này, việc đánh giá PD-L1 được thực hiện độc lập bởi nghiên cứu sinh và một bác sĩ giải phẫu bệnh có kinh nghiệm Kết quả được đối chiếu và nếu không đồng thuận, sẽ được thảo luận với người hướng dẫn Kết luận cuối cùng của người hướng dẫn sẽ được sử dụng trong nghiên cứu.
Trước khi tiến hành đánh giá kết quả nhuộm PD-L1, việc kiểm tra chứng âm và chứng dương để đảm bảo chất lượng nhuộm là rất quan trọng Để có kết quả chính xác, cần đánh giá đủ mẫu với ít nhất 100 tế bào u đạt tiêu chuẩn.
Tiêu bản nhuộm hematoxylin và eosin (H&E) của mẫu mô được đánh giá đầu tiên để xác định chất lượng mô học và chất lượng bảo quản mô, từ đó giúp đưa ra những nhận định chính xác về tình trạng mẫu Định nghĩa thang điểm dương tính kết hợp là một yếu tố quan trọng trong việc đánh giá này.
Biểu hiện PD-L1 được xác định thông qua chỉ số CPS, được tính bằng cách chia số lượng tế bào bắt màu PD-L1, bao gồm tế bào khối u, lymphô bào, đại thực bào và mô bào, cho tổng số tế bào khối u sống, sau đó nhân với 100.
Số lượng tế bào bắt màu PD-L1 (Tế bào khối u, lymphô bào, đại thực bào, mô bào) x 100
Tổng số tế bào ung thư đạt chất lượng
Chú ý: Mặc dù kết quả của phép tính có thể vượt quá 100, điểm tối đa của CPS được xác định vẫn là 100.
Bảng 2.4 Cách xác định tiêu chuẩn cho tử số trong công thức CPS
Thành phần Tiêu chuẩn nhận Tiêu chuẩn loại trừ
Tế bào u Bắt màu một phần hoặc toàn bộ màng tế bào của các tế bào khối u xâm lấn (ở bất kỳ cường độ nào)
Tế bào u không bắt màu
Tế bào u chỉ bắt màu ở bào tương
Bắt màu tế bào u của DCIS
Nhuộm màng hoặc tế bào chất (ở bất kỳ cường độ nào) của tế bào viêm đơn nhân (MIC) trong mô u xâm lấn và mô đệm lân cận:
- Tế bào bạch huyết (bao gồm cả tập hợp lymphô bào)
- Đại thực bào: Chỉ MICs liên quan trực tiếp đến phản ứng với khối u mới được tính điểm
Tế bào MICs không bắt màu.
Tế bào MICs liên quan DCIS.
Tế bào MICs liên quan vùng lành tính.
Tế bào MICs không liên quan đến vùng u xâm lấn.
Bạch cầu trung tính, bạch cầu ái toan và tương bào.
Không đưa vào Tế bào biểu mô lành tính
Các tế bào mô đệm (kể cả nguyên bào sợi)
Các tế bào hoại tử hoặc mảnh vỡ tế bào cần được đánh giá ở độ phóng đại thấp để xác định diện tích khối u được bảo quản tốt Cần xem xét tổng thể các vùng tế bào khối u đã nhuộm PD-L1 và chưa nhuộm, lưu ý rằng việc nhận diện nhuộm màng một phần hoặc nhuộm màng 1+ có thể gặp khó khăn ở độ phóng đại thấp Đảm bảo rằng mẫu có ít nhất 100 tế bào khối u còn tồn tại.
Bảng 2.5 Cách xác định tiêu chuẩn cho mẫu số trong công thức CPS
Các thành phần mô Tiêu chuẩn nhận Tiêu chuẩn loại trừ
Bắt màu một phần hoặc toàn bộ màng tế bào của các tế bào khối u xâm lấn (ở bất kỳ cường độ nào)
Tế bào miễn dịch Không đưa vào Tất cả tế bào miễn dịch
Tế bào khác Không đưa vào
Tế bào biểu mô lành tính Các tế bào mô đệm (kể cả nguyên bào sợi)
Các tế bào hoại tử hoặc mảnh vỡ tế bào
Để tiêu bản nhuộm PD-L1 (bao gồm sinh thiết và phẫu thuật) được coi là đủ tiêu chuẩn đánh giá, cần có tối thiểu 100 tế bào khối u đạt chuẩn trong mẫu.
Các bước chuẩn bị để nhuộm HMMD và đánh giá biểu hiện PD-L1:
Giới thiệu sơ lược về bộ kít 22C3 và quy trình nhuộm PD-L1:
Xét nghiệm PD-L1 IHC 22C3 (mã số SK006) là một phương pháp HMMD sử dụng kháng thể đơn dòng kháng PD-L1 chuột để phát hiện protein PD-L1 trên mẫu mô của bệnh nhân mắc carcinôm vú xâm lấn.
Quy trình nghiên cứu
Dựa trên hệ thống quản lý thông tin của các cơ sở nghiên cứu, chúng tôi đã thu thập được mã số bệnh nhân và xác định danh sách những bệnh nhân được chẩn đoán mắc carcinôm vú xâm lấn.
Chúng tôi tiến hành mượn hồ sơ giấy hoặc hồ sơ điện tử để thu thập thông tin lâm sàng và bệnh học ban đầu dựa trên phiếu thu thập số liệu (phụ lục 1) Danh sách nghiên cứu ban đầu sẽ bao gồm những bệnh nhân đủ tiêu chuẩn tại các cơ sở nghiên cứu, cụ thể là Bệnh viện Hùng Vương, Bệnh viện Đại học Y dược và Bộ môn Mô phôi – Giải phẫu bệnh Đại học Y dược Thành phố Hồ Chí Minh.
Bước tiếp theo, chúng tôi sẽ tìm kiếm lam H&E và lam HMMD từ danh sách nghiên cứu để đánh giá các biến liên quan đến giai đoạn bệnh, biến HMMD và biến TILs, đồng thời bổ sung thông tin cần thiết vào phiếu thu thập số liệu của bệnh nhân Chúng tôi sẽ chọn khối nến chứa mô với đủ số lượng tế bào và đạt chất lượng tiêu chuẩn để tiến hành nhuộm HMMD, nhằm đánh giá PD-L1 hoặc các dấu ấn HMMD khác còn thiếu.
Ban đầu chúng tôi đọc tất cả các lam H&E của khối u, chọn lam đại diện để thực hiện đánh giá TILs và nhuộm HMMD để đánh giá PD-L1.
Chúng tôi đã chọn khối nến và thực hiện kỹ thuật TMA với đường kính 5 mm Tiến hành đọc lam HMMD để đánh giá PD-L1 và các dấu ấn khác, đồng thời bổ sung các dữ liệu liên quan vào phiếu thu thập số liệu tương ứng.
Nhập liệu vào phần mềm trực tuyến REDCAP để quản lý thông tin và kiểm tra,theo dõi mức độ hoàn thiện của dữ liệu nghiên cứu.
Phương pháp phân tích dữ liệu
2.8.1 Quản lý thông tin và phân tích dữ liệu
Sau khi thu thập, phiếu dữ liệu sẽ được nhóm nghiên cứu kiểm tra tính hoàn thiện Những thông tin thiếu sót hoặc nghi ngờ về độ chính xác sẽ được liệt kê và đối chiếu với hồ sơ bệnh án gốc Các trường hợp nghiên cứu sẽ được ghi nhận đầy đủ thông tin và mã hóa dữ liệu.
Dữ liệu được nhập bằng phần mềm EpiData phiên bản 4.6.0.4, một công cụ miễn phí có tính năng kiểm tra trong quá trình nhập liệu, bởi nhóm nhập liệu đã qua đào tạo Để đảm bảo độ chính xác, nghiên cứu viên chính đã chọn ngẫu nhiên khoảng 10% tổng số mẫu (n = 22) và thực hiện nhập lại một lần nữa Nếu phát hiện hơn 1% số liệu dạng số bị nhập sai, chúng tôi sẽ tiến hành kiểm tra toàn bộ dữ liệu đã nhập (n = 216).
Sau khi hoàn tất việc nhập dữ liệu, mức độ hợp lý của dữ liệu sẽ được kiểm tra dựa trên phạm vi dữ liệu cho biến định lượng, phân phối tần suất cho biến định tính, và kiểm tra chéo giữa các biến Những bất hợp lý phát hiện trên số liệu sẽ được xem xét lại và đối chiếu với phiếu thu thập dữ liệu Các trường hợp không hợp lệ sẽ được đánh dấu để phân tích riêng hoặc loại bỏ trong quá trình phân tích Cuối cùng, dữ liệu sẽ được chuyển đổi sang định dạng phù hợp để sử dụng trong phần mềm phân tích số liệu Stata phiên bản 16.
2.8.2 Lập bảng thống kê về tần suất, tỷ lệ và liên quan giữa các biến số
Trong nghiên cứu về biến định lượng như tuổi và kích thước khối u, trung bình và độ lệch chuẩn là những chỉ số quan trọng Khi dữ liệu có phân phối không bình thường, trung vị và khoảng tứ phân vị sẽ được sử dụng để báo cáo, ví dụ như số lượng hạch di căn Đối với dữ liệu định tính như phân nhóm phân tử carcinôm vú, biểu hiện TILs và PD-L1, tần số và tỷ lệ phần trăm là những chỉ số thích hợp Để ước tính tỷ lệ biểu hiện TILs và PD-L1 trong nhóm bệnh nhân nghiên cứu, chúng tôi tính khoảng tin cậy 95% của tỷ lệ.
2.8.2.2 Thống kê phân tích Để xác định mối liên quan giữa tỷ lệ biểu hiện của TILs và PD-L1 (có/không) với các đặc điểm của lâm sàng và giải phẫu bệnh của các đối tượng nghiên cứu dạng định tính (nhóm tuổi, phân nhóm phân tử, độ mô học) thì kiểm định Chi bình phương được sử dụng Khi có 25% vọng trị 2 đến ≤5 cm giảm 19% so với nhóm có u ≤2 cm (OR = 0,81, khoảng tin cậy 95% là 0,44 – 1,49) Đối với bệnh nhân có u >5 cm, biểu hiện của TILs chỉ giảm 10% so với nhóm u ≤2 cm (OR = 0.90, khoảng tin cậy 95% là 0,24 – 3,38) Nghiên cứu của chúng tôi không phát hiện mối liên quan có ý nghĩa thống kê giữa biểu hiện TILs và kích thước u, điều này cũng được xác nhận trong các nghiên cứu trước đó của tác giả Feng J trên 826 đối tượng người Trung Quốc.
Bảng 4.7 So sánh đặc điểm kích thước u, TILs với nghiên cứu trước Đặc điểm kích thước u Cỡ mẫu
Tỷ lệ TILs (%) Quốc gia Bệnh phẩm Ngưỡng cắt P
Denkert C 127 3.771 Đức ST ≥11% 50% 0,02 cT1-2 102 - 30.4 - - cT3-4 146 - 17,8 - -
Chúng tôi 216 Việt Nam TMA >10% -
ST: viết tắt của Sinh thiết; PT: viết tắt của Phẫu thuật; TMA: viết tắt của Tissue Microarray