Tác dụng sinh học c a cao chiết và một s hợp chất phân l ược từ các loài thuộc chi Leea .... Nhằm tạo c sở khoa học cho vi c giải thích công dụng của cây Gối hạc trong y học cổ truyền cũ
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ Ư N họ NT ượ c N c VIỆN DƯỢC LIỆU D NGHIÊN CỨU T ÀN n sĩ N CC C C ẠC án tiế VÀ T C DỤN N ) Lu ận (Leea rubra LUẬN ÁN TIẾN Ĩ DƯỢC H C HÀ NỘI - 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ (Leea rubra c C sĩ CC ẠC n N C VÀ ) tiế T C DỤN N D NGHIÊN CỨ T ÀN Ư N họ NT ượ N c VIỆN DƯỢC LIỆU Lu ận án LUẬN ÁN TIẾN Ĩ DƯỢC H C Chuyên ngành: Dược h c cổ truyền Mã số: 62 72 04 06 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TSKH Nguyễn Minh Khởi PGS.TS HÀ NỘI - 2017 T T LỜ C M ĐO N Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi hướng dẫn khoa học PGS.TSKH Nguyễn Minh Khởi PGS.T hư ng Thi n Thư ng Các số li u, kết nêu luận án trung thực chưa công bố cơng trình khác c họ c Tơi xin chịu trách nhi m nghiên cứu Lu ận án tiế n sĩ D ượ Tác giả N ễ T N LỜI CẢM Luận án tiến sĩ thực hi n Vi n Dược li u hướng dẫn khoa học PGS.TSKH Nguyễn Minh Khởi T hư ng Thi n Thư ng Tôi xin bày tỏ lòng biết n sâu sắc tới thầy định hướng nghiên cứu, tận tình hỗ trợ, bảo, giúp đỡ, tạo điều ki n thuận lợi cho tơi hồn thành luận án Tơi xin trân trọng cảm n nhà khoa học, tác giả cơng trình khoa học trích dẫn luận án cung cấp nguồn tư li u quý báu, kiến thức liên họ c quan q trình nghiên cứu hồn thành luận án Tơi xin trân trọng cảm n Ban lãnh đạo, Khoa, hòng đồng nghi p ượ c Vi n Dược li u, Trường Đại học Dược Hà Nội, Vi n Hàn lâm Khoa học Công ngh D Vi t Nam, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên-Đại học Quốc gia Hà Nội nhi t tình sĩ giúp đỡ, tạo điều ki n cộng tác để giúp tơi hồn thành cơng trình Nguyễn Thị Bích Thu, TS Nguyễn Thùy n Tơi xin bày tỏ lịng cảm n tới G T tiế Dư ng, Ths Vũ Văn Tuấn có ý kiến đóng góp quý báu giúp tơi hồn thi n luận án án Cuối xin cảm n người thân yêu gia đình, cảm n bạn bè Lu ận thân thiết dành cho tơi tình cảm, động viên chí tình suốt thời gian qua N ễ T MỤC LỤC Mục lục Danh mục ký hi u, chữ viết tắt Danh mục hình, bảng Trang TÀI LIỆU THAM KHẢO Đ T V N Đ T N N c C Ư N Leea Royen ex L ượ c họ 1.1 TH C V T HỌC Vị trí phân loại chi Leea D Đ c điểm thực vật chi Leea sĩ hân bố chi Leea tiế n ác loài thuộc chi Leea phân bố Vi t Nam 10 m th c v t, phân b sinh thái c án 1.1.2 V trí phân lo rubra Blume ex Spreng 12 Lu ận 1.1.2.1 Vị trí phân loại Gối hạc 12 Đ c điểm thực vật Gối hạc 12 1.1.2.3 Phân bố sinh thái Gối hạc 13 1.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC 13 1.2.1 Thành phần hóa học c a chi Leea 13 1.2.1.1 Các hợp chất triterpenoid 14 1.2.1.2 Các hợp chất flavonoid 17 1.2.1.3 Các acid phenolic 20 1.2.1.4 Tinh dầu 22 1.2.1.5 Các nhóm hợp chất khác 23 1.3 CÔNG DỤNG VÀ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA MỘT SỐ LOÀI THUỘC CHI LEEA 24 1.3.1 Cơng dụng c a lồi thuộc chi Leea y học cổ truyền 24 1.3.2 Tác dụng sinh học c a cao chiết s hợp chất phân l ược từ loài thuộc chi Leea 26 1.3.2.1 Tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm, trừ giun sán 26 1.3.2.2 Tác dụng chống oxy hóa 27 1.3.2.3 Tác dụng độc tế bào chống ung thư 28 c 1.3.2.4 Tác dụng chống tạo sỏi 29 họ 1.3.2.5 Tác dụng chống viêm, giảm đau 29 ượ c 1.3.3 Một s công dụng tác dụng sinh học c a G i h c Leea rubra Blume ex Spreng 30 D 1.3.3.1 Tính vị, tác dụng 30 sĩ 1.3.3.2 Công dụng 30 C Ư N Đ tiế n 1.3.3.3 Tác dụng sinh học 31 TƯỢN VÀ N N CỨ 33 ộ Lu ận án 2.1 ĐỐI TƯ NG NGHIÊN Ư N U 33 33 33 ấ , dung môi 33 2.2 HƯƠNG H P NGHIÊN 2.2.1 Nghiên c U 34 ề ọ 34 ề ọ 34 hư ng pháp định tính 34 hư ng pháp phân lập hợp chất 35 hư ng pháp xác định cấu trúc hóa học hợp chất 35 Định lượng số hợp chất phân lập từ Gối hạc 36 ụ ượ 38 2.2.3.1 Mẫu nghiên cứu 38 Thiết bị s dụng nghiên cứu tác dụng sinh học 39 Đánh giá tác dụng chống oxy hóa 39 Đánh giá tác dụng ức chế hoạt động enzym xanthin oxidase 41 Đánh giá tác dụng chống viêm 41 Đánh giá tác dụng giảm đau 46 Th hoạt tính ức chế n ym prot as HIV- cao chiết số c hợp chất trit rp n phân lập từ dược li u Gối hạc 48 họ ẾT ẢN N CỨ 50 c CHƯ N 49 ượ 3.1 TH C V T HỌC 50 D ọ 3.1.1 Thẩ 50 sĩ 50 tiế n ọ 53 Đ c điểm vi phẫu thân 53 Đ c điểm vi phẫu 54 án 3.1 Lu ận Đ c điểm giải phẫu rễ 55 m ược li u 56 3.1.4.1 Đ c điểm bột thân 56 3.1.4.2 Đ c điểm bột 57 Đ c điểm bột rễ 58 3.2 TH NH HẦN H A HỌC 58 nh tính nhóm chất hữ 58 3.2.2 Chiết xuất phân l p hợp chất 60 3.2.2.1 Chiết xuất phân lập hợp chất từ Gối hạc 60 3.2.2.2 Chiết xuất phân lập hợp chất từ thân Gối hạc 64 X nh cấu trúc hóa học c a hợp chất phân l p từ G i h c 65 ượng hợp chất phân l ược từ ược li u G i h c 106 3.2.4.1 Khoảng tuyến tính phư ng trình đường chuẩn 106 Đánh giá phư ng pháp phân tích 107 Định lượng acid gallic europetin-3-O-α-L-rhamnopyranosid mẫu dược li u Gối hạc 108 3.3 T C DỤNG SINH HỌC 110 3.3.1 Tác dụng ch ng oxy hóa 110 ộng c a enzym xanthin oxidase 111 c 3.3.2 Tác dụng c chế ho họ 3.3.3 Tác dụng ch ng viêm 111 ượ c 3.3.3.1 Tác dụng chống viêm in vitro 111 3.3.3.2 Tác dụng chống viêm in vivo 113 a cao G i h c 116 D 3.3.4 Tác dụng giả sĩ 3.3.4.1 Tác dụng giảm đau trung ng cao Gối hạc mơ hình mâm nóng tiế n 116 án 3.3.4.2 Tác dụng giảm đau ngoại vi cao Gối hạc mơ hình gây đau qu n acid acetic 117 ế Lu ận ụ - ế ột s hợp chấ ượ ược li u G i h c 119 C Ư N ÀN ẬN 121 4.1 VỀ TH C V T HỌC 121 4.2 VỀ HÓA HỌC 122 4.2.1 Kết nh tính 123 4.2.2 Kết phân l 4.2.3 Kết nh cấu trúc c a hợp chất 123 ượng hợp chất phân l ược từ ược li u G i h c 134 4.3 VỀ TÁC DỤNG SINH HỌC 134 4.3.1 Về tác dụng ch ng oxy hóa 135 4.3.2 Về ho t tính c chế ho ộng enzym xanthine oxidase 136 4.3.3 Về ho t tính c chế ho ộng enzym 5-lipoxygenase 137 4.3.4 Về ho t tính c chế ho ộng COX 138 4.3.5 Về tác dụng giả 140 4.3.6 Về tác dụng ch ng viêm in vivo 142 4.3.7 Về ho t tính c chế protease HIV-1 146 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGH 149 KẾT LU N 149 c Về th c v t học 149 họ Về hóa học 149 ượ c Về tác dụng sinh học 150 D KIẾN NGHỊ 151 M ẢO sĩ Ệ T n TÀ tiế CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG B Lu ận án PHỤ LỤC N N ĐẾN LUẬN ÁN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, TỪ VIẾT TẮT ARV: Anti retroviral drug therapy ABTS: 2,2’- azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) APCI-MS: Atmospheric Pressure Chemical Ionization Mas Spectrometry (Phổ khối lượng ion hóa hóa học áp suất khí quyển) BuOH: Butanol CD: Circular Dichroism (Phổ lưỡng sắc tròn) họ c COSY: Correlation Spectroscopy COX: Cyclooxygenase (COX-1; COX-2) ượ c DEPT: Distortionless Enhancement by Polarization Transfer D DMSO: Dimethylsulfoxid DPPH: 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl n sĩ ESI-MS: Electron Spray Ionization Mass Spectrometry (Phổ khối lượng ion hóa phun tiế n t ) EtOH: Ethanol án EtOAc: Ethyl acetat Lu ận GHL: Cao ethanol chiết từ Gối hạc GHR: Cao ethanol chiết từ rễ Gối hạc GHT: Cao ethanol chiết từ thân Gối hạc HIV: Human Immunodeficiency Virus HMBC: Heteronuclear Multiple Bond Correlation HPLC: High Perfomance Liquid Chromatography (Sắc ký lỏng hi u cao) HSQC: Heteronuclear Single Quantum Coherence Hx: n-Hexan IC50: Inhibitory Concentration 50% (Nồng độ ức chế 50%) IL: Interleukin 72 Lu ận án n tiế sĩ c ượ D c họ Lu ận án n tiế PH COSY 73 sĩ c ượ D c họ 74 Lu ận án n tiế sĩ c ượ D c họ Lu ận án n tiế sĩ c ượ D PH MS 75 c họ C A CH T S tiế n sĩ D ượ c họ c PHỤ LỤC 11 CÁC PH Lu ận án ông thức cấu tạo chất số 20 (stigmast-4-en-3,6-dion) 76 20 Lu ận án n tiế sĩ PH c ượ D c họ PH IR H-NMR 77 Lu ận án n tiế sĩ PH 13 C-NMR 78 c ượ D c họ Lu ận án n tiế PH DEPT 79 sĩ c ượ D c họ Lu ận án n tiế sĩ PH MS 80 c ượ D c họ c họ C A CH T S án tiế n sĩ D ượ c PHỤ LỤC 12 CÁC PH Lu ận ông thức cấu tạo chất số 21 (goniothalamin) 81 21 Lu ận án n tiế sĩ c ượ D c họ PH IR PH CD 82 Lu ận án n tiế sĩ c ượ D c họ PH H-NMR 83 Lu ận án n tiế sĩ c ượ D c họ PH 13 C-NMR 84 Lu ận án n tiế sĩ c ượ D c họ PH DEPT 85 Lu ận án n tiế sĩ c ượ D c họ PH MS 86