Tính chất của màng chitosan biến tính bằng một số anhydride và aldehyde

Nhiệm vụ của khóa luận: Thực hiện biến tính màng chitosan bằng anhydride acetic, anhydride benzoic, cinnamaldehyde và vanillin, thay đổi các yếu tố như nồng độ các chất biến tính, thời g

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGÀNH CƠNG NGHỆ KỸ THUẬT HĨA HỌC TÍNH CHẤT CỦA MÀNG CHITOSAN BIẾN TÍNH BẰNG MỘT SỐ ANHYDRIDE VÀ ALDEHYDE GVHD: PGS.TS NGUYỄN VINH TIẾN SVTH: LƯƠNG TUẤN TÙNG SKL008848 Tp Hồ Chí Minh, tháng 8/2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠMGKỸ THUẬT TP HỒ CHÍ MINH KHOA CƠNG NGHỆ HĨA HỌC VÀ THỰC PHẨM BỘ MƠN CƠNG NGHỆ KỸ THUẬT HĨA HỌC  KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP TÍNH CHẤT CỦA MÀNG CHITOSAN BIẾN TÍNH BẰNG MỘT SỐ ANHYDRIDE VÀ ALDEHYDE SVTH: LƯƠNG TUẤN TÙNG MSSV: GVHD: PGS.TS NGUYỄN VINH TIẾN TP Hồ Chí Minh, tháng năm 2022 18128074 TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA CƠNG NGHỆ HĨA HỌC VÀ THỰC PHẨM BỘ MƠN CƠNG NGHỆ HÓA HỌC NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Lương Tuấn Tùng MSSV: 18128074 Ngành: Cơng nghệ Kỹ thuật Hóa học Chun ngành: Cơng nghệ Kỹ thuật Hố Hữu Tên khóa luận: TÍNH CHẤT CỦA MÀNG CHITOSAN BIẾN TÍNH BẰNG MỘT SỐ ANHYDRIDE VÀ ALDEHYDE Nhiệm vụ khóa luận: Thực biến tính màng chitosan anhydride acetic, anhydride benzoic, cinnamaldehyde vanillin, thay đổi yếu tố nồng độ chất biến tính, thời gian phản ứng Khảo sát, so sánh tính chất thay đổi nồng độ thời gian phản ứng như: Cơ tính, góc tiếp xúc, độ ẩm, độ hấp thụ nước, độ tan nước, thay đổi mặt hố học thơng qua phổ FTIR, khả giải phóng acid acetic/ acid benzoic/ cinnamaldehyde/ vanillin khỏi màng Ngày giao nhiệm vụ khóa luận: 01/3/2022 Ngày hồn thành khóa luận: 05/8/2022 Họ tên người hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Vinh Tiến Nội dung hướng dẫn: Tồn khố luận Nội dung yêu cầu khóa luận tốt nghiệp thơng qua Trưởng Bộ mơn Cơng nghệ Hóa học Tp Hồ Chí Minh, ngày 05 tháng năm 2022 TRƯỞNG BỘ MƠN NGƯỜI HƯỚNG DẪN TĨM TẮT Chitosan polymer tái tạo, sử dụng rộng rãi để tăng tính đa dạng sản phẩm từ chitosan, thực biến tính chitosan với anhydride acetic, anhydride benzoic, cinnamaldehyde, vanillin Các chất cố định vào chất phản ứng N – acyl hoá, schiff base với nồng độ chất thời gian phản ứng thay đổi Màng thu được bảo quản điều kiện độ ẩm cao Màng sau biến tính khảo sát phổ FTIR, khả tương tác với nước (độ ẩm, độ tan, độ hấp thụ nước, góc tiếp xúc) Khả khuếch tán acid (từ anhydride) aldehyde lại mơi trường Các màng biến tính cải thiện độ tan nước, khả kéo dãn màng giảm lực kéo lại tăng Khi ngâm màng vào dung dịch ethanol 50 % có giải phóng acid (được biến đổi từ anhydride sau biến tính) aldehyde theo thời gian lại môi trường Nồng độ chất dùng để biến tính ban đầu cao nồng độ acid aldehyde giải phóng lớn Màng có độ ẩm, khả hấp thụ nước, độ tan giảm dần, góc tiếp xúc tăng dần tăng nồng độ chất dùng để biến tính Tuy nhiên màng biến tính với anhydride acetic lại có độ ẩm, độ hấp thụ nước, độ tan tăng dần tăng nồng độ anhydride acetic góc tiếp xúc giảm dần Tất chất cấp phép sử dụng công nghiệp thực phẩm sử dụng với nồng độ thấp an tồn với sức khoẻ người sử dụng lĩnh vực liên quan đến bao bì Vì màng có khả phân huỷ sinh học nên vật liệu thay cho polymer có nguồn gốc từ hoá thạch sau i LỜI CẢM ƠN Cuốn khố luận hồn thành khơng có nỗ lực thân mà cịn có động viên, hỗ trợ lớn từ Thầy cô, gia đình bạn bè, quan tâm cấp lãnh đạo, em xin gửi lời cảm ơn đến Bộ mơn Cơng nghệ Kỹ thuật Hố học tổ chức kỳ khoá luận Em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến người thầy kính yêu, thầy PGS.TS Nguyễn Vinh Tiến giảng viên hướng dẫn trực tiếp em có định hướng xun suốt q trình thực đề tài, tạo điều kiện tốt hướng dẫn bảo tận tình khơng khố luận mà năm đại học, để hơm em hồn thành khố luận Em xin đồng cảm ơn đến Thầy, Cô môn Cơng nghệ Kỹ thuật Hố học, Khoa Cơng nghệ Hố học Thực phẩm giảng dạy em năm đại học mình, đưa góp ý trình thực nghiên cứu Em xin gửi lời cảm ơn đến Thầy, Cô hội đồng chấm khoá luận tốt nghiệp dành thời gian để đưa góp ý, kiến thức để em hồn thiện với khố luận Mặc dù cố gắng tìm tịi học hỏi, nghiên cứu tài liệu để hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp này, nhiên có hạn chế mặt kiến thức nên tránh khỏi sai sót Em kính mong nhận đóng góp q thầy để em hoàn thiện đề tài Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn đến bạn bè gia đình chỗ dựa tinh thần vững chắc, an ủi quan tâm mặt thể xác tinh thần để em hồn thiện khố luận Em xin chân thành cảm ơn! ii LỜI CAM ĐOAN Em xin cam đoan tồn nội dung trình bày khố luận tốt nghiệp thân em thực tư vấn thầy PGS.TS Nguyễn Vinh Tiến Những tài liệu tham khảo thích đầy đủ, nội dung báo cáo trung thực TP Hồ Chí Minh, ngày 05 tháng năm 2022 Sinh viên thực Lương Tuấn Tùng iii 3.5 Cơ tính Khi định hướng vào lĩnh vực bao bì tính lĩnh vực quan trọng, chúng đo độ dãn dài lực kéo cực đại đứt màng, từ lực kéo cực đại thu độ bền kéo đươc trình bày Phụ lục 2, Hình 3.35 Hình 3.36 So với màng Cs ban đầu lực kéo cực đại so với màng biến tính có thay đổi, đọ dãn dài gia tăng lên gấp từ 17 lần Khi đánh giá thay đổi biến tính Ac độ dãn dài tăng từ 11,9 lần, mẫu biến tính be độ giãn dài tăng từ 11,7 lần, bên cạnh mẫu biến tính Cin cho kết thấp tăng từ 9,6 lần mẫu biến tính Va độ dãn dài tăng từ 4,91 11,02 lần Độ bền kéo màng biến tính bốn chất cải thiện Mẫu biến tính Ac độ bền kéo tăng từ 1,06 đến 1,23 lần, mẫu biến tính Be tăng từ 1,05 đến 1,34 lần, mẫu biến tính hai aldehyde Cin Va có tăng 1,21 đến 1,54 lần từ 1,13 1.33 lần Xem xét yếu tố nồng độ chất dùng để biến tính thêm vào Cs có kết chung lại tăng dần nồng độ chất lên độ bền kéo tăng, độ giãn dài giảm độ bền kéo tăng lên Vì màng Cs có tính giịn, độ dãn dài thấp, sau biến tính, độ bền kéo màng cải thiện chất giống môt chất liên kết ngang giúp cho cấu trúc màng Cs hình thành mạng lưới dày đặc Ở màng biến tính anhydride acetic có giảm độ giãn dài khơng q nhiều so với so với chất lại, điều cấu trúc độ ẩm, lượng nước màng Vì nước chất hố dẻo giúp cho màng khơng bị khơ, mền dẻo phân tử polymer dễ trượt lên nhau, kéo dễ dãn ra, dễ trượt nên lực liên phân tử màng yếu nên màng ưa nước màng giãn dài độ bền kéo lại Trong ba chất anhydride benzoic, cinnamaldehyde, vanillin kỵ nước khối lượng phân tử lớn nên làm màng dày màng chưa biến tính, nên khiến cho màng biến tính chất cần 79 lực lớn để kéo đứt Zhang cộng [35] nghiên cứu Tomadoni cộng [32] tìm thấy kết tương tự nghiên cứu tính chất học màng Cs với Vanilin 80 Hình 3.35: Ảnh hưởng nồng độ loại chất biến tính đến độ giãn dài (bên trái), độ bền kéo (bên phải) màng Cs sau 6h Hình 3.36: Ảnh hưởng thời gian phản ứng đến độ giãn dài (bên trái), độ bền kéo (bên phải) màng Cs sau 6h 81 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Qua trình thực đề tài đúc kết số yếu tố đưa đề xuất để có cải tiến sau Màng biến tính anhydride acetic: Màng biến tính có độ ẩm cao màng ban đầu, dễ hấp thụ nước nên độ hấp tan nước cao Khả kéo dãn màng giảm nhiên lực kéo lại tăng Phổ FTIR cho thấy nhóm 2-amineoglucose biến thành – acetamidoglucose thơng quan phản ứng N-acetyl hố biến -NH2 thành liên kết amide -CO=NH- Nồng độ anhydride acetic tăng lượng acid acetic sau khuếch tán nhiều Màng biến tính anhydride benzoic: Nhìn chung tính chất tính khả kéo dãn màng giảm lực kéo tăng Tuy nhiên tăng dần nồng độ anhydride benzoic độ ẩm độ hấp thu nước lại giảm Đồng thời tăng dần nồng độ chất khả khuếch tán lại tăng Qua phân tích phổ FTIR màng có suy giảm dần nhóm 2amineoglucose Có diện thêm vịng thơm hình thành liên lết -CO=NHMàng biến tính cinnamaldehyde vanillin: Cả loại màng biến tính có tính chất tương đồng Khi tăng dần nồng độ chất độ ẩm khả hấp thụ nước, độ tan giảm dần khả giải 82 phóng chất lại môi trường tăng Khả kéo dãn màng giảm lực kéo tăng Qua phân tích phổ FTIR nhìn chung có biến đổi tương đương suy giảm nhóm -NH2 mà thay vào hình thành nhóm imine -C=N-, có mặt vịng thơm giải thích cho lại kỵ nước Dựa vào đặc tính sau nghiên cứu màng Cs chất sử dụng sử dụng với liều lượng vừa phải an toàn với sức khoẻ người Từ giúp pháp triển lĩnh vực bao bì, bảo quản thực phẩm chống giá trị dinh dưỡng thực phẩm bảo quản Vì màng Cs có khả phân huỷ sinh học nên vật liệu tiềm thay cho nhựa có nguồn gốc từ hố thạch tương lai Các chất dùng để biến tính có khả kháng lại vi sinh vật nên ứng dụng vào bảo quản thực phẩm tươi sống Qua trình thực em có số kiến nghị để hồn thành đề tài tương tự sau này: - Khảo sát thêm khả kháng vi sinh vật anhydride acetic, anhydride benzoic, cinnamaldehyde - Tìm hiểu xem phản ứng O – acyl hay phản ứng N – acyl, phản ứng diễn phân tích phổ NMR - Đánh giá xác thay đổi cấu trúc thực hiên biến tính phương pháp chuẩn độ - Xác định thêm cấu trúc bên màng nhờ phương pháp XRD - Phân tích thêm bề mặt màng phương pháp SEM - Phân tích nhiệt phân hủy màng phương pháp DSC TGA 83 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] S Thomas, A Pius, and S Gopi, Eds., Handbook of Chitin and Chitosan Amsterdam, Netherlands: Elsevier, 2020 [2] M Aider, “Chitosan application for active bio-based films production and potential in the food industry: Review,” LWT - Food Sci Technol., vol 43, no 6, pp 837–842, Jul 2010, doi: 10.1016/j.lwt.2010.01.021 [3] K T Hwang, S T Jung, G D Lee, M S Chinnan, Y S Park, and H J Park, “Controlling molecular weight and degree of deacetylation of chitosan by response surface methodology,” J Agric Food Chem., vol 50, no 7, pp 1876–1882, Mar 2002, doi: 10.1021/jf011167u [4] M Rinaudo and A Domard, “Solution properties of chitosan Chitin and Chitosan,” pp 71–79, Jan 1989 [5] M FRIEDMAN and V K JUNEJA, “Review of Antimicrobial and Antioxidative Activities of Chitosans in Food,” J Food Prot., vol 73, no 9, pp 1737– 1761, Sep 2010, doi: 10.4315/0362-028X-73.9.1737 [6] H Wang, J Qian, and F Ding, “Emerging Chitosan-Based Films for Food Packaging Applications,” J Agric Food Chem., vol 66, no 2, pp 395–413, Jan 2018, doi: 10.1021/acs.jafc.7b04528 [7] M Nishiyama et al., “Biodegradable Plastics Derived from Cellulose Fiber and Chitosan,” in Hydrophilic Polymers, vol 248, vols., American Chemical Society, 1996, pp 113–123 doi: 10.1021/ba-1996-0248.ch007 [8] Z Moridi mahdieh, V Mottaghitalab, and H A.K., “A detailed review of recent progress in carbon nanotube/chitosan nanocomposites,” Cellul Chem Technol., vol 45, pp 549–563, Feb 2011 84 [9] K Li et al., “Selective Adsorption of Gd3+ on a Magnetically Retrievable Imprinted Chitosan/Carbon Nanotube Composite with High Capacity,” ACS Appl Mater Interfaces, vol 7, no 38, pp 21047–21055, Sep 2015, doi: 10.1021/acsami.5b07560 [10] X Liu, Q Hu, Z Fang, X Zhang, and B Zhang, “Magnetic Chitosan Nanocomposites: A Useful Recyclable Tool for Heavy Metal Ion Removal,” Langmuir, vol 25, no 1, pp 3–8, Jan 2009, doi: 10.1021/la802754t [11] M Gällstedt, A Mattozzi, E Johansson, and M S Hedenqvist, “Transport and Tensile Properties of Compression-Molded Wheat Gluten Films,” Biomacromolecules, vol 5, no 5, pp 2020–2028, Sep 2004, doi: 10.1021/bm040044q [12] H Chen et al., “Preparation, characterization, and properties of chitosan films with cinnamaldehyde nanoemulsions,” Food Hydrocoll., vol 61, pp 662–671, Dec 2016, doi: 10.1016/j.foodhyd.2016.06.034 [13] T Tanabe, N Okitsu, A Tachibana, and K Yamauchi, “Preparation and characterization of keratin–chitosan composite film,” Biomaterials, vol 23, no 3, pp 817–825, Feb 2002, doi: 10.1016/S0142-9612(01)00187-9 [14] V Thomas, M M Yallapu, B Sreedhar, and S K Bajpai, “Fabrication, Characterization of Chitosan/Nanosilver Film and Its Potential Antibacterial Application,” J Biomater Sci Polym Ed., vol 20, no 14, pp 2129–2144, Jan 2009, doi: 10.1163/156856209X410102 [15] U Siemann, “Solvent cast technology – a versatile tool for thin film production,” in Scattering Methods and the Properties of Polymer Materials, N Stribeck and B Smarsly, Eds Berlin, Heidelberg: Springer, 2005, pp 1–14 doi: 10.1007/b107336 [16] P M Amin, A B Gangurde, and P V Alai, “Oral Film Technology: Challenges and Future Scope for Pharmaceutical Industry,” vol 3, p 21 85 [17] G P Bierwagen, “Film coating technologies and adhesion,” Electrochimica Acta, vol 37, no 9, pp 1471–1478, Jan 1992, doi: 10.1016/0013-4686(92)80092-Z [18] T Sakai, “Screw extrusion technology — past, present and future,” Polimery, vol 58, no 11/12, p 847, 2013 [19] R W Seidel, R Goddard, N Nöthling, and C W Lehmann, “Acetic anhydride at 100 K: the first crystal structure determination,” Acta Crystallogr Sect C Struct Chem., vol 72, no 10, Art no 10, Oct 2016, doi: 10.1107/S2053229616015047 [20] J R Zoeller, V H Agreda, S L Cook, N L Lafferty, S W Polichnowski, and D M Pond, “Eastman chemical company acetic anhydride process,” Catal Today, vol 13, no 1, pp 73–91, Mar 1992, doi: 10.1016/0920-5861(92)80188-S [21] “BENZOIC ANHYDRIDE,” Org Synth., vol 3, p 21, 1923, doi: 10.15227/orgsyn.003.0021 [22] D Havkin-Frenkel and F C Belanger, Eds., Handbook of Vanilla Science and Technology, 2nd edition Hoboken, NJ, USA: Wiley-Blackwell, 2018 [23] H O Gutzeit and J Ludwig-M¿ller, Plant Natural Products: Synthesis, Biological Functions and Practical Applications, 1st edition Weinheim: WileyBlackwell, 2014 [24] L Chiozza, “Sur la production artificielle de l’essence de cannelle,” Comptes Rendus, vol 42, pp 222–227, 1856 [25] N G Vasconcelos, J Croda, and S Simionatto, “Antibacterial mechanisms of cinnamon and its constituents: A review,” Microb Pathog., vol 120, pp 198–203, Jul 2018, doi: 10.1016/j.micpath.2018.04.036 86 [26] T L Cao and K B Song, “Effects of gum karaya addition on the characteristics of loquat seed starch films containing oregano essential oil,” Food Hydrocoll., vol 97, p 105198, Dec 2019, doi: 10.1016/j.foodhyd.2019.105198 [27] O Orliac, A Rouilly, F Silvestre, and L Rigal, “Effects of various plasticizers on the mechanical properties, water resistance and aging of thermo-moulded films made from sunflower proteins,” Ind Crops Prod., vol 18, no 2, pp 91–100, Sep 2003, doi: 10.1016/S0926-6690(03)00015-3 [28] L Higueras, G López-Carballo, R Gavara, and P Hernández-Moz, “Reversible Covalent Immobilization of Cinnamaldehyde on Chitosan Films via Schiff Base Formation and Their Application in Active Food Packaging,” Food Bioprocess Technol., vol 8, no 3, pp 526–538, Mar 2015, doi: 10.1007/s11947-014-1421-8 [29] “IR Spectrum Table.” https://www.sigmaaldrich.com/VN/en/technical- documents/technical-article/analytical-chemistry/photometry-and-reflectometry/irspectrumtable?fbclid=IwAR0v4ZfrqtCaRTzU_BVIoAqYtPN4j5Uc87Qo6HAnZ4FUlt0uB2l_z RyFxXs (accessed Aug 29, 2022) [30] J Singh and P K Dutta, “Preparation, circular dichroism induced helical conformation and optical property of chitosan acid salt complexes for biomedical applications,” Int J Biol Macromol., vol 45, no 4, pp 384–392, Nov 2009, doi: 10.1016/j.ijbiomac.2009.07.004 [31] M Fernandes Queiroz, K R T Melo, D A Sabry, G L Sassaki, and H A O Rocha, “Does the Use of Chitosan Contribute to Oxalate Kidney Stone Formation?,” Mar Drugs, vol 13, no 1, Art no 1, Jan 2015, doi: 10.3390/md13010141 [32] J Xu, S P McCarthy, R A Gross, and D L Kaplan, “Chitosan Film Acylation and Effects on Biodegradability,” Macromolecules, vol 29, no 10, pp 3436–3440, Jan 1996, doi: 10.1021/ma951638b 87 [33] J Sangsuwan, N Rattanapanone, R A Auras, B R Harte, and P Rachtanapun, “Factors affecting migration of vanillin from chitosan/methyl cellulose films,” J Food Sci., vol 74, no 7, pp C549-555, Sep 2009, doi: 10.1111/j.1750-3841.2009.01266.x [34] M Stroescu, A Stoica-Guzun, and I M Jipa, “Vanillin release from poly(vinyl alcohol)-bacterial cellulose mono and multilayer films,” J Food Eng., vol 114, no 2, pp 153–157, Jan 2013, doi: 10.1016/j.jfoodeng.2012.08.023 [35] Z.-H Zhang, Z Han, X.-A Zeng, X.-Y Xiong, and Y.-J Liu, “Enhancing mechanical properties of chitosan films via modification with vanillin,” Int J Biol Macromol., vol 81, pp 638–643, Nov 2015, doi: 10.1016/j.ijbiomac.2015.08.042 88 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Đường chuẩn acid acetic, acid benzoic, cinnamaldehyde, vanillin 89 Phụ lục 2: Kết thông số màng Cs biến tính Mẫu Lực kéo cực đại Độ dãn trước Độ dãn dài (%) Độ bền kéo Độ dày (mm) F (N) đứt (mm) Cs 20,67 ± 0,58 1,04 ± 0.10 4,84 ± 0,50 44,58 ± 1,18 0,050 ± 0,001 Ac:Cs 1:4 19,67 ± 1,14 10.50 ± 1.51 57,72 ± 4,71 47, 22 ± 1,16 0,042 ± 0,001 Ac:Cs 1:2 21,58 ± 0,94 11,33 ±2,58 53.60 ± 1,22 52,23 ± 1,95 0,041 ± 0,001 Ac:Cs 1:1 22,58 ± 1, 38 12,33 ± 1,15 43.25 ± 2,75 49,81 ± 2,32 0,045 ± 0,001 Ac:Cs 2:1 26,00 ±1,43 15,14 ± 1,73 32.22 ± 5,55 57,02 ± 2,93 0,046 ± 0,002 Ac:Cs 1h 19,33 ± 1,14 11,00 ± 1.11 55,09 ± 1,22 43, 63 ± 1,03 0,044 ± 0,001 Ac:Cs 3h 20,17 ± 1,44 12,67 ± 2,58 45.76 ± 2,52 40,63 ± 1.53 0,050 ± 0,001 Ac:Cs 6h 22,58 ± 1,48 12,33 ± 1,15 43.25 ± 7,75 49,81 ± 2,32 0,045 ± 0,001 Ac:Cs 24h 25,75 ± 2,50 14,33 ± 2,58 37.22 ± 2,44 54,84 ± 2,31 0,046 ± 0,002 Be:Cs 1:4 17,67 ± 4.29 6,33 ± 2,08 56,67 ± 2,09 40,78 ± 1,05 0,043 ± 0,001 90 (N/mm2) Be:Cs 1:2 23,92 ± 2,38 7,33 ± 158 43,33 ± 5,79 55,21 ± 1,58 0,043 ± 0,001 Be:Cs 1:1 30,00 ± 2,09 10,67 ± 1.51 35,70 ± 3,99 55,03 ± 2,69 0,055 ± 0,005 Be:Cs 2:1 31,92 ± 1,29 11,33 ± 1,41 23,33 ± 2,89 59,85 ± 1,03 0,056 ± 0,001 Be:Cs 1h 26,00 ± 1,73 9,33 ± 1,68 51,67 ± 2,89 47,02 ± 1,15 0,053 ± 0,002 Be:Cs 3h 27,83 ± 1,48 9,00 ± 1,85 40,56 ± 5,59 50,66 ± 1,71 0,055 ± 0,003 Be:Cs 6h 30,00 ± 1,19 10,67 ± 2.58 35,70 ± 3,99 55,03 ± 2,69 0,055 ± 0,005 Be:Cs 24h 31,83 ± 2,52 15,67 ± 4,18 26,67 ± 2,89 59,85± 2,03 0,056 ± 0,002 Cin:Cs 1:4 24,42 ± 2,14 8,67 ± 1,58 43,33 ± 2,89 54,26 ± 1,32 0,045 ± 0,001 Cin:Cs 1:2 26,42 ± 1,95 9,00 ± 4,54 38,33 ± 5,12 57,85 ± 1,90 0,046 ± 0,001 Cin:Cs 1:1 39,17 ± 2,01 11,67 ± 4,58 24,68 ± 2,51 66,06 ± 2,11 0,059 ± 0,002 Cin:Cs 2:1 42,17 ± 2,14 11,89 ± 2,42 5,09 ± 4,11 68,78 ± 1,53 0,061 ± 0,002 Cin:Cs 1h 25,98 ± 1,73 10,33 ± 1,58 46,67 ± 2,89 54,92 ± 1,04 0,047 ±0,002 91 Cin:Cs 3h 27,92 ±2,09 9,33 ± 0,54 43,33 ± 2,14 59,51 ± 3,13 0,047 ±0,003 Cin:Cs 6h 39,17 ± 1,54 11,67 ± 1,58 24,68 ± 2,51 66,06 ± 2,11 0,059 ± 0,002 Cin:Cs 24h 41,67 ± 1,04 11,33 ± 1,74 13,33 ± 2,84 68,67 ± 1,10 0,061 ± 0,001 Va:Cs 1:4 25,92 ± 3,38 9,67 ±0,58 48,33 ± 2,89 50,16 ± 2,28 0,052 ± 0,001 Va:Cs 1:2 27,58 ± 5,14 10,67 ± 0,58 43,33 ± 3,09 52,71 ± 4,30 0,052 ± 0,001 Va:Cs 1:1 29,58 ± 3,34 15,33 ± 0,58 36,67 ± 3,52 56,90 ± 4,87 0,052 ± 0,001 Va:Cs 2:1 32,42 ± 2,38 15,67 ± 1,15 11,67 ± 5,77 59,16 ± 2,49 0,055 ± 0,001 Va:Cs 1h 27,33 ± 1,29 11,67 ± 2,28 53,33 ± 2,89 51,91 ± 2,98 0,053 ± 0,001 Va:Cs 3h 29,08 ± 3,24 15,02 ± 3,18 41,67 ± 2,41 54,53 ± 3,32 0,053 ± 0,001 Va:Cs 6h 29,58 ± 4.14 15,33 ± 1.58 36,67 ± 2.89 56,90 ± 5,87 0,052 ± 0,001 Va:Cs 24h 31,75 ± 3,50 16,67 ± 1,53 16,67 ± 7,64 59,12 ± 5,49 0,054 ± 0,001 92