Luận văn thạc sĩ đánh giá độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng chống đông máu của “trân châu ngưu hoàng hoàn” trên động vật thực nghiệm

TỔNG QUAN

NHỒI MÁU NÃO

Nhồi máu não xảy ra khi lưu lượng tuần hoàn não giảm đột ngột, do tắc nghẽn một phần hoặc toàn bộ động mạch não hoặc động mạch cảnh, và đôi khi do tắc một tĩnh mạch não Triệu chứng lâm sàng của nhồi máu não thường biểu hiện đột ngột với các dấu hiệu thần kinh khu trú, phổ biến nhất là liệt nửa người.

1.1.2 Nguyên nhân, cơ chế bệnh sinh nhồi máu não

Nhồi máu não bao gồm các thể: huyết khối, tắc mạch, nhồi máu não ổ khuyết và nhồi máu não chảy máu

1.2.2.1 Huyết khối động mạch não

Nguyên nhân: Tăng huyết áp, vữa xơ động mạch, dị sản xơ cơ, viêm động mạch và các nguyên nhân khác [9]

Cơ chế bệnh sinh: Quá trình bệnh lý xảy ra từ từ, liên tục trong thời gian dài hai mươi đến ba mươi năm với hai giai đoạn:

Giai đoạn đầu của rối loạn mạch máu và huyết động bắt đầu với những thay đổi bệnh lý ở thành mạch, dẫn đến hẹp lòng mạch và giảm lưu lượng máu đến não Quá trình này tiếp theo gây ra rối loạn đông máu, hình thành huyết khối và tắc mạch, làm gián đoạn nguồn cung cấp máu cho tế bào não.

Giai đoạn tiếp theo của quá trình thiếu máu gây ra biến đổi hóa học trong tế bào não, dẫn đến hoại tử và cái chết của các tế bào thần kinh, tế bào thần kinh đệm cùng với các mô khác trong não.

Cục máu đông di chuyển từ tim hoặc từ các mạch lớn khác lên não có thể gây bít tắc toàn bộ hoặc một phần, dẫn đến tổn thương vùng não được nuôi dưỡng bởi động mạch bị tắc.

Cơ chế bệnh sinh: Lớp áo trong của thành mạch bị tổn thương vữa xơ tạo điều kiện kết dính tiểu cầu

- Giai đoạn đầu: Cục máu đông cấu tạo chủ yếu là tiểu cầu kết dính, không bền vững, có thể bị tan đi khi dùng thuốc chống đông [9], [11]

Giai đoạn sau, khi hồng cầu và sợi tơ huyết kết hợp, cấu trúc của cục tắc trở nên vững chắc hơn Khi cục tắc này bong ra khỏi lòng mạch, nó có thể di chuyển lên não và gây tắc nghẽn các động mạch não có đường kính nhỏ.

Tắc động mạch nhánh xiên nhỏ của động mạch não lớn là nguyên nhân chính dẫn đến các vấn đề liên quan đến não, bao gồm tắc nghẽn các nhánh nuôi của hạch nền, đồi thị và bao trong Ổ khuyết có thể hình thành do vữa xơ động mạch ngoài sọ, vữa xơ các mạch máu trong sọ, hoặc do huyết khối từ tim gây tắc nghẽn.

Cơ chế bệnh sinh của nhồi máu ổ khuyết liên quan đến sự tắc nghẽn mạch máu do cục máu đông nhỏ, gây tắc các mạch có đường kính từ 200 đến 400 µm và tổn thương các vùng có đường kính dưới 5 mm.

1.1.2.4 Nhồi máu não chảy máu

Nguyên nhân nhồi máu não chảy máu là do sự tồn tại của vùng chảy máu trong tổ chức não đã bị hoại tử Việc chẩn đoán sớm nhồi máu não chảy máu do tắc mạch não và phân biệt với xuất huyết não nguyên phát là rất quan trọng để có phương pháp xử trí phù hợp.

Cơ chế bệnh sinh: Đến nay cơ chế bệnh sinh của nhồi máu não chảy máu chưa biết rõ ràng, một số giả thiết được đề cập như:

- Tái lập tuần hoàn: Cơ chế ly giải cục huyết khối hoặc tăng tính thấm thành mạch, tăng tuần hoàn máu hoặc sự tái lập tuần hoàn bàng hệ

- Vỡ mạch: Liên quan đến động mạch não trong ổ nhồi máu bị tổn thương bởi các yếu tố thành mạch, lớp cơ trơn thành mạch

Giả thuyết của A Zivin và các cộng sự cho rằng sự tăng sinh bạch cầu cùng với việc sản sinh gốc tự do trong ổ nhồi máu não là những yếu tố góp phần vào cơ chế chảy máu não sau khi xảy ra tắc mạch.

1.1.3 Đặc điểm lâm sàng nhồi máu não

1.1.3.1 Huyết khối động mạch não

* Đặc điểm lâm sàng chung

Dấu hiệu tiền triệu: Tùy theo vị trí mạch bị nguy cơ huyết khối mà có dấu hiệu tiền triệu khác nhau

Huyết khối động mạch cảnh, động mạch não giữa: Mù một mắt, rối loạn cảm giác, rối loạn ngôn ngữ, mất trí nhớ

Huyết khối động mạch sống - nền: song thị, nhìn mờ, mất thăng bằng, rối loạn nuốt [9]

Thường xảy ra vào ban đêm hoặc sáng sớm

Tiến triển nặng dần hoặc tăng nặng từng nấc

Các triệu chứng thường gặp bao gồm đau đầu, nôn mửa, co giật và ý thức thường tỉnh Ngoài ra, các triệu chứng thần kinh khu trú sẽ phụ thuộc vào động mạch bị tổn thương, dẫn đến những biểu hiện lâm sàng tương ứng.

* Đặc điểm lâm sàng theo vị trí động mạch tổn thương:

Hội chứng động mạch cảnh trong (hội chứng mắt - tháp): Mất thị lực cùng bên, liệt nửa người bên đối diện, giảm áp lực võng mạc trung tâm [9],

Hội chứng động mạch não giữa thường gây ra liệt nửa người bên đối diện, với ưu thế ở chân, dẫn đến mất khả năng vận động của nửa người do tổn thương ở thể chai Ngoài ra, bệnh nhân cũng có thể gặp rối loạn cơ tròn.

Tổn thương gốc có thể gây ra liệt và mất cảm giác ở nửa người bên đối diện, bán manh ở cùng bên, rối loạn ngôn ngữ và rối loạn ý thức Bên cạnh đó, bệnh nhân thường có xu hướng quay đầu và mắt về phía bên tổn thương.

Tổn thương nhánh nông: Liệt không đồng đều và rối loạn cảm giác nửa người bên đối diện, ưu thế mặt và tay

Tổn thương nhánh sâu: Liệt đồng đều và không rối loạn cảm giác nửa người bên đối diện

Tổn thương bên bán cầu trội: Rối loạn ngôn ngữ, mất khả năng tính toán, viết và mất nhận thức cơ thể

Hội chứng động mạch màng mạch trước gây ra liệt đồng đều nửa người, mất cảm giác nửa người kiểu đồi thị, tăng trương lực cơ và rối loạn thần kinh thực vật ở nửa người bên đối diện.

Hội chứng động mạch đốt sống - thân nền:

* Động mạch não sau: Bán manh bên đối diện, mất ngôn ngữ giác quan, liệt nhẹ nửa người, hội chứng ngoại tháp bên đối diện

Động mạch hố bên hành não có thể gây ra nhiều triệu chứng nghiêm trọng, bao gồm mất cảm giác quanh mắt cùng bên, rối loạn phát âm và nuốt nghẹn Người bệnh có thể gặp tình trạng sặc, liệt dây thanh một bên, chóng mặt, nôn mửa, và rung giật nhãn cầu.

Tắc hoàn toàn động mạch sống có thể dẫn đến các triệu chứng nghiêm trọng như rối loạn tri giác, hôn mê, rối loạn trương lực cơ, và liệt nửa người hoặc tứ chi Ngoài ra, tình trạng này cũng có thể gây liệt dây thần kinh VII và IX, ảnh hưởng đến chức năng vận động và cảm giác.

X, XI, rối loạn tim mạch, thân nhiệt, hô hấp thậm chí tử vong

Kích thước ổ khuyết nhỏ, đường kính dưới 5mm, có nhiều ổ, hay gặp vùng chất trắng [12], [15]

Tương tự như cơn thiếu máu não thoáng qua như hoa mắt, yếu chân tay, nói chậm, có khi khó nói

Triệu chứng thần kinh khu trú có khi xuất hiện đột ngột hoặc từ từ, rất ít khi thấy nhức đầu, buồn nôn và co giật

* Các thể lâm sàng nhồi máu não ổ khuyết:

Liệt vận động đơn thuần: Do tổn thương đường tháp ở vùng vành tia, cánh sau bao trong, cầu não

Liệt điều phối nửa người, rối loạn ngôn ngữ, bàn tay vụng về: Biểu hiện liệt điều phối nửa người, liệt nửa người, rối loạn điều phối cùng bên

NHỒI MÁU NÃO THEO Y HỌC CỔ TRUYỀN

1.2.1 Đặc điểm lâm sàng Trúng phong

Trong y học cổ truyền, thuật ngữ "Trúng phong" được ghi nhận bởi Trương Trọng Cảnh trong sách "Kim quỹ yếu lược" và vẫn được sử dụng cho đến nay Ngoài "Trúng phong", sách còn đề cập đến nhiều thuật ngữ khác như Bộc kích, Thiên khô, Thiên phong và Thiên thân bất dạng Đặc biệt, Vương Thanh Nhiệm thời nhà Thanh cũng đã ghi chép về thuật ngữ "Bán thân bất toại".

Hiện nay, trong y học cổ truyền, các thầy thuốc lâm sàng thường sử dụng các thuật ngữ "trúng phong" và "bán thân bất toại" để mô tả tình trạng bệnh Hai thể loại chính được phân biệt là "trúng phong kinh lạc" và "trúng phong tạng phủ".

Phân loại trúng phong đã có từ lâu nhằm nâng cao hiệu quả điều trị và phòng bệnh, tùy thuộc vào mức độ bệnh và tình trạng của bệnh nhân để đề ra phương pháp điều trị phù hợp Theo "Y kinh tố hồi tập" của Vương Lữ, trúng phong được chia thành hai loại: chân trúng phong và loại trúng phong Sách Kim quỹ yếu lược của Trương Trọng Cảnh cũng ghi nhận hai khái niệm "trúng phong" và "phi phong" Dương Trang Tử phân loại trúng phong thành hai loại: "chứng bế" và "chứng thoát".

Ngày nay trong các sách y học cổ truyền và y văn hiện đại, chứng trúng phong được chia làm hai loại: Trúng phong kinh lạc và trúng phong tạng phủ

Trúng phong kinh lạc là tình trạng biểu hiện triệu chứng nhẹ, không gây hôn mê Tà khí xâm nhập vào kinh mạch và lạc mạch, dẫn đến hiện tượng méo miệng, tê bại nửa người, kèm theo rêu lưỡi trắng.

Trúng phong tạng phủ: Biểu hiện triệu chứng nặng do tà khí trực trúng vào tạng phủ biểu hiện hai mức độ:

+ Chứng bế: Hôn mê nông, liệt nửa người, ú ớ, thở khò khè, miệng méo, mắt lệch, chân tay còn ấm, mạch hoạt [36], [37]

+ Chứng thoát: Hôn mê sâu, thở khò khè, ra nhiều mồ hôi, chân tay lạnh,đại tiện không tự chủ, lưỡi rụt, mạch huyền tế vô lực [36], [37]

1.2.1.3 Nguyên nhân, cơ chế bệnh sinh Trúng phong

Theo y học cổ truyền, nguyên nhân gây bệnh được phân thành ba loại chính: ngoại nhân (lục dâm), nội nhân (thất tình) và bất nội ngoại nhân Việc xác định nguyên nhân chính yếu hay thứ yếu thường không rõ ràng, vì chúng thường đan xen và kết hợp với nhau Tuy nhiên, ba nhóm nguyên nhân chủ yếu gây bệnh vẫn là phong, hỏa và đàm.

Phong là một yếu tố khí chủ đạo vào mùa xuân, mang tính dương và có xu hướng di chuyển lên trên và ra ngoài Khi tác động bên ngoài, phong có thể gây ra các bệnh lý như cảm mạo, viêm dây thần kinh ngoại vi, và ảnh hưởng đến cơ khớp Bên trong cơ thể, phong thường liên quan đến các tình trạng nghiêm trọng như tăng huyết áp, bán thân bất toại, bại liệt, mê man bất tỉnh, và làm cho miệng lưỡi bị méo cứng.

Ngoại phong là nguyên nhân gây bệnh do nội tại hư yếu, lạc mạch hư rỗng, bắt đầu từ biểu dẫn vào lý Theo sách Nội kinh, "Thiên khô" được ghi nhận là một chứng bệnh liên quan.

Chính khí hư và tà khí lưu lại là vấn đề quan trọng trong y học cổ truyền Theo sách Kim quỹ yếu lược, khi mạch thốn khẩu bị phù khẩn, tức là tình trạng hàn và hư, cơ thể không được bảo vệ, tạo điều kiện cho ngoại tà xâm nhập Hậu quả của tình trạng này có thể dẫn đến các triệu chứng như méo miệng và tê bại nửa người.

Diệp Thiên Sĩ cho rằng trúng phong liên quan trực tiếp đến nội phong và Can mộc, trong đó Can huyết hư không thể chế ngự phần dương, dẫn đến bệnh tật Trúng phong cũng có thể xuất phát từ sự mất cân bằng giữa Can và Thận, đặc biệt là khi Thận âm hư, ảnh hưởng đến mối quan hệ ngũ tạng: Thận tàng tinh, tinh sinh huyết, huyết sinh tinh Khi Can âm được nuôi dưỡng đúng cách sẽ giúp chế ngự Can dương, tuy nhiên, nếu thận thủy suy yếu, không đủ để dưỡng Can mộc, sẽ dẫn đến Can âm suy và Can dương vượng, từ đó gây ra tình trạng Thận âm hư.

Nguyên nhân do Hỏa có thể gây ra nhiều triệu chứng khác nhau, bao gồm phong nhiệt, thấp nhiệt và thử nhiệt Hỏa và nhiệt thuộc dương tà, có xu hướng đi lên và kết hợp với phong, thấp, thử từ bên ngoài Bên trong, Hỏa có thể gây ra chứng Tâm hỏa và Can hỏa, dẫn đến hao tổn tân dịch ở mức nhẹ Ở mức nặng, nó có thể gây ra động huyết, bức huyết vong hành, và tình trạng sốt cao kèm mê sảng.

Khi can khí uất kết lâu ngày, có thể dẫn đến tình trạng hóa hỏa, gây ra chứng huyễn vựng Nếu không được điều trị kịp thời, tình trạng này có thể tiến triển thành Can phong nội động, dẫn đến nguy cơ bị trúng phong.

Đàm sinh ra do sự suy giảm chức năng của Tỳ, Phế và Thận, dẫn đến tình trạng đình trệ không vận hóa, từ đó tạo ra các loại đàm như Phong đàm, Nhiệt đàm, Hàn đàm và Thấp đàm Đàm ở Phế làm giảm khả năng tuyên phát và túc giáng, gây hen suyễn và tổn thương Phế âm nếu kéo dài Đàm tích tụ ở Tâm gây ra cảm giác bứt rứt, phiền muộn, mất ngủ, lâu dần có thể dẫn đến rối loạn tâm thần Ngoài ra, đàm uất ở Can, ngưng ở Thận và lưu lại trong kinh lạc cũng gây ra các chứng bệnh liên quan đến Can, Thận và kinh lạc.

* Cơ chế bệnh sinh của trúng phong

Trúng phong có hai cơ chế chính: trúng ngoại tà và nội thương Qua từng thời kỳ, quan điểm và thiên hướng về trúng phong có sự thay đổi Hiện nay, để nâng cao khả năng chẩn đoán và điều trị, các tác giả đang tập trung vào việc biện chứng cơ chế bệnh sinh của trúng phong theo từng thể loại trong y học cổ truyền.

Nội phong gây "trúng phong" thể Can dương thượng cang xuất phát từ sự mất cân bằng giữa Can dương và Can âm (Can huyết) Khi Can huyết hư không đủ để nuôi dưỡng Can dương, phần dương của Can trở nên vượng mạnh, dẫn đến phong động Sự kết hợp với nhiệt thúc đẩy phong đi lên gây ra bệnh lý.

Nội phong gây ra tình trạng "trúng phong" do tâm hỏa thịnh Theo Lưu Hà Gian, khi thận thủy hư suy và thận âm không kiểm soát được hỏa, tâm hỏa sẽ trở nên thượng nghịch, dẫn đến bệnh tật.

CÁC NGHIÊN CỨU ĐIỀU TRỊ TRÚNG PHONG BẰNG Y HỌC CỔ TRUYỀN

Nghiên cứu của Hồng Đông Mai, sử dụng dịch truyền "Đan sâm" trên bệnh nhân nhồi máu não, kết quả đạt loại tốt (90%) [48]

Nghiên cứu của Dương Lập Vân cho thấy, trong số 75 bệnh nhân nhồi máu não, nhóm sử dụng thuốc y học cổ truyền kết hợp với y học hiện đại đạt kết quả tốt lên đến 89%, cao hơn đáng kể so với nhóm chỉ điều trị bằng y học hiện đại với tỷ lệ 67%.

Nghiên cứu của Vương Tiến Học trên 160 bệnh nhân TBMN sau giai đoạn cấp bằng bài thuốc Hóa ứ thang kết hợp thuốc nền y học hiện đại (nhóm

I) và châm cứu kết hợp thuốc nền (nhóm II), kết quả nhóm I loại tốt (95%) so với nhóm II (76,2%) [50]

Nghiên cứu của Lý Hân Ngọc trên 80 bệnh nhân nhồi máu não đã chia thành hai nhóm: nhóm I sử dụng phương pháp "Thông tâm lạc" kết hợp với dịch tiêm "Huyết tắc thông" và thuốc nền y học hiện đại, trong khi nhóm II chỉ dùng thuốc nền đơn độc Kết quả cho thấy nhóm I đạt tỷ lệ thành công 90%, cao hơn đáng kể so với nhóm II với 77,5%.

Nghiên cứu của Lâm Anh Kiệt và Hồ Kim Minh trên 200 bệnh nhân di chứng thất ngôn cho thấy nhóm I, điều trị bằng châm cứu và bài Bổ dương hoàn ngũ kết hợp với thuốc nền y học hiện đại, đạt hiệu quả 92%, cao hơn so với nhóm II chỉ sử dụng y học hiện đại đơn thuần với tỷ lệ 77%.

Trần Ngọc Minh đã thực hiện một nghiên cứu so sánh giữa 47 bệnh nhân bị di chứng nhồi máu não được điều trị bằng bài thuốc "Trấn can tức phong thang gia vị" kết hợp với thuốc nền (Aspirin, Atorvastatin) và 47 bệnh nhân chỉ sử dụng thuốc nền Kết quả cho thấy nhóm bệnh nhân sử dụng phương pháp kết hợp y học cổ truyền với y học hiện đại đạt hiệu quả điều trị lên tới 93,6%, cao hơn đáng kể so với nhóm chỉ điều trị bằng thuốc nền đơn thuần, đạt 83%.

Nghiên cứu của Phạm Thị Vân Anh, Nguyễn Thị Loan và Mai Phương Thanh nhằm đánh giá tác dụng của chế phẩm TD.HK01 đối với quá trình đông máu và tiêu fibrin trên mô hình thực nghiệm Các nhà nghiên cứu đã tiêm lipopolysaccharid vào tĩnh mạch đuôi chuột cống trắng và thrombin vào tĩnh mạch tai thỏ để gây đông máu Kết quả cho thấy TD.HK01 với liều 0,8 g/kg/ngày và 2,4 g/kg/ngày có tác dụng tiêu fibrin trên mô hình đông máu bằng thrombin, trong khi không có tác dụng chống đông trên mô hình đông máu bằng lipopolysaccharid ở chuột cống trắng.

Nghiên cứu của Trần Quốc Bình và Phạm Vân Anh cùng cộng sự nhằm đánh giá độc tính cấp và tác dụng chống đông máu của viên nang.

Nghiên cứu về Viên nang Hoạt huyết an não cho thấy không gây độc tính cấp tính ở liều 64,66 gam/kg, gấp 44,66 lần liều lâm sàng, và chưa xác định được LD50 Ngoài ra, sản phẩm này cũng không gây độc tính bán trường diễn khi sử dụng liều 0,36 gam/kg/ngày (tương đương lâm sàng) và liều 1,08 gam/kg/ngày (gấp 3 lần lâm sàng) trong suốt 8 tuần.

TỔNG QUAN VỀ BÀI THUỐC NGHIÊN CỨU

1.4.1 Nguồn gốc, xuất xứ bài thuốc

Trân châu ngưu hoàng hoàn là chế phẩm y học cổ truyền có nguồn gốc từ phương “Viên Bổ Trân Châu Hoàn” thuộc Công thức bào chế kinh điển của

Y học Tây Tạng, phát triển vào thế kỷ thứ 8 sau Công nguyên, được ghi chép lần đầu trong tác phẩm "Tứ Bộ Y Điển", một kiệt tác y học cổ điển Nhiều vị thuốc trong y học này đã được kiểm định và đạt tiêu chuẩn dược điển Việt Nam V, cùng với các tiêu chuẩn cơ sở khác.

Bài thuốc gồm 12 vị thuốc:

Thiên Trúc Hoàng Ngưu Hoàng Đông Trùng Hạ Thảo Đan Sâm

Thủy ngưu giác Trầm hương

Mật ong vừa đủ một viên

Công năng: Bài thuốc có tác dụng chính giúp lưu thông khí huyết, khai khiếu, tỉnh thần

Điều trị dự phòng tai biến mạch máu não thể nhồi máu não bằng cách hỗ trợ hoạt huyết và tăng cường lưu thông máu Sản phẩm giúp giảm nguy cơ tai biến mạch não do tình trạng ngẽn mạch, mang lại lợi ích cho sức khỏe tim mạch.

Người lớn sau tai biến, hội chứng tiền đình: Mỗi ngày uống 1 viên, uống liên tục trong 6 ngày

Uống duy trì: Mỗi tháng uống 1 viên

Người dưới 18 tuổi, người có hội chứng máu chậm đông, đang chảy máu, chuẩn bị phẫu thuật, cơn tăng huyết áp cấp, người xuất huyết não, phụ nữ trong kỳ kinh nguyệt, có thai, đang cho con bú và người có mẫn cảm với bất kỳ thành phần nào của thuốc không nên sử dụng sản phẩm này.

Trong bài thuốc Ngưu hoàng, Thiên trúc hoàng, Thủy ngưu giác có tác dụng trừ đàm, thanh nhiệt, khai khiếu và trừ nội phong Trân châu giúp an thần, điều trị chứng mất ngủ và hồi hộp Đan sâm và Hồng hoa có tác dụng hoạt huyết thông kinh, tán ứ giảm đau.

Trầm hương có tác dụng điều khí và giảm đau, hỗ trợ hiệu quả khi kết hợp với đan sâm và hồng hoa Đông trùng hạ thảo giúp ích cho tinh tủy và cầm máu, rất hữu ích trong các trường hợp suy nhược thần kinh Ngưu tất không chỉ hoạt huyết thông kinh mà còn giúp mạnh gân cốt, bổ can thận Thạch hộc có tác dụng tư âm thanh nhiệt, ích vị sinh tân, mang lại nhiều lợi ích cho sức khỏe.

Cam thảo và mật ong là những vị thuốc quan trọng giúp điều hòa và dẫn thuốc vào các kinh lạc Bài thuốc này có tác dụng thông kinh hoạt lạc, khai thông khiếu, tỉnh thần, tán ứ huyết, và bổ sung chức năng gan thận.

TỔNG QUAN VỀ CÁC PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH VÀ Ý NGHĨA VỀ VIỆC NGHIÊN CỨU TÍNH AN TOÀN CỦA THUỐC

VÀ Ý NGHĨA VỀ VIỆC NGHIÊN CỨU TÍNH AN TOÀN CỦA THUỐC YHCT

1.5.1 Thuốc y học cổ truyền và nguyên nhân tiến hành thử độc tính

Thuốc y học cổ truyền Việt Nam có nguồn gốc lâu đời, gắn liền với lịch sử phát triển của dân tộc, với những danh y như Tuệ Tĩnh và Hải Thượng Lãn Ông đã đặt nền móng vững chắc cho nền y học này Để nâng cao chất lượng thuốc, việc nghiên cứu tác dụng dược lý và ứng dụng lâm sàng là rất quan trọng Tuy nhiên, thị trường thuốc cổ truyền hiện nay đang gặp khó khăn do sự xuất hiện của nhiều chế phẩm không qua thử nghiệm hoặc thử nghiệm không đầy đủ, dẫn đến sự đa dạng về tên gọi, thành phần và giá cả Do đó, việc nghiên cứu độc tính của thuốc y học cổ truyền là cần thiết để đánh giá tính xác thực và chất lượng thuốc, xác định hàm lượng tạp chất, hoạt chất, hiệu quả quy trình bào chế và tác dụng điều trị của thuốc.

Các đánh giá khác tùy theo mục tiêu nghiên cứu

1.5.2 Các phương pháp thử nghiệm độc tính cấp

Thử độc tính cấp là cần thiết để đánh giá mức độ độc hại của thuốc, hỗ trợ điều trị ngộ độc cấp và xác định liều lượng cho các thử nghiệm độc tính tiếp theo Việc xác định các phép thử độc tính cấp giúp cung cấp thông tin quan trọng trong quá trình này.

Liều dung nạp tối đa;

Liều gây ra độc tính có thể quan sát được;

Liều thấp nhất có thể gây chết động vật thí nghiệm (nếu có);

Liều LD50 gần đúng (nếu có thể xác định được);

Những triệu chứng ngộ độc điển hình có thể quan sát được trên động vật và khả năng hồi phục (nếu có)

1.5.2.2 Mô hình thử a) Nguyên tắc lựa chọn:

Tùy thuộc vào mục đích nghiên cứu và loại mẫu thử, việc lựa chọn mô hình thử nghiệm phù hợp là rất quan trọng Đối với nghiên cứu, động vật gặm nhấm như chuột nhắt và chuột cống thường được sử dụng, trong khi các loài không gặm nhấm như chó hoặc khỉ cũng có thể được lựa chọn Số lượng nhóm và số lượng cá thể trong mỗi nhóm sẽ thay đổi theo mô hình thử nghiệm được áp dụng.

Thử sơ bộ là giai đoạn quan trọng trong hầu hết các mô hình thử nghiệm, giúp lựa chọn và bố trí thử nghiệm chính thức dựa trên kết quả thu được Đối với các mẫu thử hoặc chất có thông tin cho thấy ít độc hoặc không độc, có thể tiến hành thử nghiệm trên một loài động vật gặm nhấm Tuy nhiên, đối với các chế phẩm có độc tính cao hoặc yêu cầu đặc biệt, cần thử nghiệm trên hai loài động vật, bao gồm cả gặm nhấm và không gặm nhấm Để bảo vệ động vật, ưu tiên lựa chọn các mô hình sử dụng số lượng ít động vật thí nghiệm.

Mô hình thử liều cố định đã được các quốc gia thuộc Tổ chức Hợp tác và Phát triển Kinh tế (OECD) chính thức áp dụng từ năm 2001 (OECD 420) Thử nghiệm này được thực hiện với các mức liều cụ thể là 5, 50 và 300.

2000, 5000mg/kg hay 1,0/kg động vật thực nghiệm [57]

Lựa chọn liều thử đầu tiên được thực hiện trên một nhóm 5 động vật thực nghiệm Thử nghiệm sẽ tiếp tục cho đến khi xác định được mức độ độc, dựa trên phản ứng của động vật, bao gồm số lượng chết, các triệu chứng ngộ độc và khả năng hồi phục được quan sát.

Xác định giá trị LD50 gần đúng (nếu có).Phép thử phù hợp với tất cả trường hợp cần xác định độc tính cấp c) Mô hình Tăng- Giảm:

Nguyên tắc: Mô hình thử Tăng- Giảm được các nước thuộc Tổ chức hợp tác và phát triển kinh tế áp dụng và ban hành chính thức năm 2001 (OECD

Thử nghiệm được thực hiện trên các mức liều khác nhau, theo hệ số bươc nhảy, trên từng động vật thực nghiệm, với quy trình tăng hoặc giảm liều cho đến khi đạt điều kiện dừng Kết quả được đánh giá qua các triệu chứng ngộ độc và tính giá trị LD50 gần đúng, phù hợp cho các chất gây chết nhanh trong 1-2 ngày, nhưng không áp dụng cho các chất gây chết từ từ trong 5 ngày hoặc hơn Phương pháp này cũng có thể dùng cho loài động vật không gặm nhấm.

Nguyên tắc: Mô hình được Behrens đề xuất từ năm 1929 với lập luận

Những động vật đã tồn tại ở một mức độ liều nhất định sẽ sống sót ở tất cả các mức liều thấp hơn, trong khi những động vật đã tử vong ở một mức liều cụ thể sẽ không sống sót ở tất cả các mức liều cao hơn Mô hình này được gọi là mô hình Litchfield – Wilcoxon.

Mô hình Litchfield-Wilcoxon, được đề xuất vào năm 1949, đã cải tiến và khắc phục những hạn chế của các phương pháp trước đó trong việc tính toán giá trị LD50 cho các chất độc Kết quả của mô hình này được ghi đồ thị trên giấy log-probit và tính toán bằng phương pháp toán đồ có hiệu chỉnh, giúp đạt được độ chính xác cao hơn trong các nghiên cứu độc tính.

Trong nghiên cứu này, chúng tôi sử dụng phương pháp Litchfield – Wilcoxon do có tính chính xác cao nhất [57]

1.5.3 Các phương pháp thử nghiệm độc tính bán trường diễn

Thử nghiệm độc tính dài ngày chỉ được thực hiện sau khi đã có dữ liệu về độc tính cấp tính trên động vật và mẫu thử dự kiến sẽ được sử dụng hoặc tiếp xúc lâu dài trên người.

Thử nghiệm độc tính dài ngày được thực hiện để xác định khả năng dung nạp của động vật thí nghiệm khi tiếp xúc với mẫu thử nhiều lần Mục tiêu là phát hiện các biểu hiện độc tính có thể xảy ra sau thời gian sử dụng kéo dài.

Mức liều không hoặc có thể gây ra những thay đổi đáng kể trong chức năng và hoạt động của cơ quan, cũng như các biểu hiện sống có thể quan sát được trên động vật thí nghiệm.

Những độc tính có thể quan sát được trên động vất và khả năng hồi phục nếu có

1.5.3.2 Lựa chọn mô hình thử:

Căn cứ vào các thông tin của mẫu thử và kết quả thử độc tính cấp để thiết kế mô hình, mức liều thử [57]

Trường hợp mẫu thử không thể hiện độc tính cấp hoặc rất ít độc, có thể thử trên 1 loài động vật (gặm nhấm)

Khi mẫu thử cho thấy độc tính cấp cao, và liều gây độc gần với liều có tác dụng dược lý, việc thử nghiệm trên hai loài động vật khác nhau, bao gồm cả gặm nhấm và không gặm nhấm, là cần thiết.

Thời gian thử nghiệm trên động vật được xác định dựa vào thời gian dự kiến sử dụng trên người và các khoảng thời gian cụ thể Thời gian thử còn phụ thuộc vào mục đích cung cấp thông tin cho các giai đoạn thử lâm sàng Đối với thử lâm sàng giai đoạn 1 hoặc 2, thời gian có thể ngắn hơn (14-28 ngày), trong khi giai đoạn 3 yêu cầu thời gian dài hơn (28-90 ngày) Tài liệu hướng dẫn của các nước tham gia Hội nghị quốc tế về hài hòa các thủ tục đăng ký dược phẩm cho con người (ICH) đã giới thiệu hai phương pháp tính thời gian thử độc tính.

Thời gian thử nghiệm thuốc thường gấp 3-4 lần thời gian dự kiến sử dụng trên người, với các khoảng thời gian xác định là 14 ngày, 28 ngày hoặc 90 ngày Việc lựa chọn khoảng thời gian thử nghiệm phụ thuộc vào yêu cầu của từng mẫu và điều kiện thử nghiệm cụ thể Mức độ độc hại của thuốc sẽ được đánh giá dựa trên báo cáo kết quả tương ứng với từng khoảng thời gian thử nghiệm đã thực hiện.

CHẤT LIỆU, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

CHẤT LIỆU NGHIÊN CỨU

Viên hoàn Trân châu ngưu hoàng hoàn được sản xuất bởi Công ty TNHH sản xuất và XNK Thực phẩm chức năng Asean và được phân phối bởi Công ty Đông dược Việt Y Đường.

Hình 2.1: Sản phẩm Trân châu ngưu hoàng hoàn

Lô sản xuất: 01062019 Ngày sản xuất: 28/06/2019 Hạn sử dụng 27/06/2022

Mỗi viên 1g chứa: Cao hỗn hợp 55mg tương đương:

STT Tên vị thuốc Tên khoa học Hàm lượng

1 Thiên trúc hoàng Concrctio Silicae Banthusa 75mg DĐVN V

2 Trầm hương Aquilaria agallocha 75mg DĐVN V

3 Hồng hoa Flos Carthami tinctorii 75mg DĐVN V

4 Ngưu hoàng Calculus Bovis artificialis 71.06mg DĐVN V

5 Đan sâm Radix et Rhizoma Salviae mitiorrhzae 47.09mg DĐVN V

6 Giáng hương Pterocarpus indicus 47.09mg DĐVN V

7 Trân châu Avicula martensii 37.67mg DĐVN V

8 Thủy ngưu giác Cornu bubali 32.53mg DĐVN V

9 Cam thảo Radix et Rhioma Glycyrrhiea 25mg DĐVN V

10 Thạch hộc Herba Dendrobii 20mg DĐVN V

11 Đông trùng hạ thảo Cordyceps sinensis 15.41mg DĐVN V

12 Ngưu tất Radix Achyranthis bidentatae 9,42mg DĐVN V

Mật ong Vừa đủ 1 viên

Bảng 2.1: Thành phần sản phẩm

Các vị thuốc được kiểm định đạt tiêu chuẩn dược liệu theo dược điển Việt nam

V [58] và đạt tiêu chuẩn cơ sở Liều dự kiến sử dụng trên người là 01 viên/ngày

"Trân châu ngưu hoàng hoàn" được pha loãng trong nước cất để tạo ra các dung dịch có nồng độ khác nhau, tùy thuộc vào liều lượng sử dụng cho chuột Những dung dịch này được sử dụng để đánh giá độc tính cấp, độc tính bán trường diễn và tác dụng chống đông trên động vật thực nghiệm.

*Hoá chất và máy móc sử dụng trong nghiên cứu:

Rivaroxaban 20 mg, biệt dược Xarelto® của Công ty Bayer Health Care Pharmaceuticals

Lipopolysaccharides from Escherichia coli 055 :B5 L2880-25MG của Sigma-Aldrich

Thromborel® S (bao gồm thromboplastin và calci) của hãng Siemens, Đức được nhập khẩu bởi Công ty TNHH Sysmex Việt Nam;

Dade® Actin® FSL Activated PTT Reagent (bao gồm phospholipid) của hãng Siemens, Đức được nhập khẩu bởi Công ty TNHH Sysmex Việt Nam;

Dung dịch calci clorid nồng độ 0,025 mol/L của hãng Siemens, Đức được nhập khẩu bởi Công ty TNHH Sysmex Việt Nam

Máy xét nghiệm đông máu bán tự động Sysmex CA-50 sản xuất tại Nhật Bản;

Dung dịch xét nghiệm máu ABX Minidil LMG của hãng ABX - Diagnostics, định lượng trên máy Vet abcTM Animal Blood Counter

Máy xét nghiệm sinh hóa bán tự động Erba Chem 5 V3 của Đức

Máy xét nghiệm huyết học ABX Micros ES 60 của Pháp

Kít định lượng các enzym và chất chuyển hóa trong máu: ALT (alanin aminotransferase), AST (aspartat aminotransferase), bilirubin toàn phần, albumin, cholesterol toàn phần, creatinin của hãng Erba (Đức)

Các hóa chất xét nghiệm và làm tiêu bản mô bệnh học

Cân điện tử của Nhật, độ chính xác 0,001 gam

Kim đầu tù cho chuột uống Cốc chia vạch, bơm kim tiêm 1ml.

ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

Chuột nhắt trắng chủng Swiss, cả 2 giống, khoẻ mạnh, trọng lượng 18 – 22g do Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương cung cấp

Chuột cống trắng chủng Wistar, cả hai giống, khỏe mạnh, cân nặng 180

- 220g do Cơ sở động vật thí nghiệm Đan Phượng – Hà Nội cung cấp

Chuột được nuôi trong phòng thí nghiệm của Bộ môn Dược lý, Đại Học

Y Hà Nội đã tiến hành nghiên cứu trong khoảng thời gian 5-10 ngày, trong đó chuột được cung cấp thức ăn chuẩn từ Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương và Công ty liên doanh Guyomarc’h-VCN, cùng với nước uống tự do.

PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Nghiên cứu thực nghiệm, có đối chiếu với nhóm chứng

2.3.1 Nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn của Trân châu ngưu hoàng hoàn

2.3.1.1 Nghiên cứu độc tính cấp của Trân châu ngưu hoàng hoàn

Nghiên cứu độc tính cấp và xác định LD50 của viên hoàn Trân châu ngưu hoàng hoàn trên chuột nhắt trắng theo đường uống [65], [66]

Trước khi tiến hành thí nghiệm, chuột được nhịn ăn qua đêm và chia thành các lô 10 con Các lô chuột được cho uống viên hoàn Trân châu ngưu hoàng hoàn với liều tăng dần để xác định liều thấp nhất gây chết 100% và liều cao nhất không gây chết Quá trình theo dõi tình trạng chung của chuột diễn ra trong 72 giờ, ghi nhận các dấu hiệu nhiễm độc như nôn, co giật, kích động và số lượng chuột chết Tất cả chuột chết được mổ để đánh giá tổn thương đại thể và từ đó xây dựng đồ thị xác định LD50 của thuốc Cuối cùng, tình trạng của chuột được theo dõi đến ngày thứ 7 sau khi uống viên hoàn.

2.3.1.2 Nghiên cứu độc tính bán trường diễn của Trân châu ngưu hoàng hoàn

Nghiên cứu độc tính bán trường diễn của thuốc có nguồn gốc dược liệu được thực hiện trên chuột cống trắng, tuân thủ hướng dẫn của Tổ chức Y tế Thế giới.

Chuột cống trắng được chia làm 3 lô, mỗi lô 10 con ngẫu nhiên

- Lô 1 (chứng sinh học) (n = 10): Uống dung môi pha thuốc 10mL/kg/ngày

- Lô trị 1 (n = 10): Uống Trân châu ngưu hoàng hoàn liều 0,12 viên/kg/ngày

(liều có tác dụng tương đương liều dự kiến trên người, tính theo hệ số 6) [68]

- Lô trị 2 (n = 10): Uống Trân châu ngưu hoàng hoàn liều 0,36 viên /kg /ngày (gấp 3 lần lô trị 1)

- Chuột được uống nước hoặc thuốc thử trong 12 tuần liên tục, mỗi ngày một lần vào buổi sáng

* C ác chỉ tiêu theo dõi trước và trong quá trình nghiên cứu:

- Tình trạng chung, thể trọng của chuột cống trắng

Đánh giá chức năng tạo máu có thể thực hiện thông qua các chỉ số như số lượng hồng cầu, thể tích trung bình hồng cầu, hàm lượng hemoglobin, hematocrit, số lượng bạch cầu, công thức bạch cầu và số lượng tiểu cầu.

- Đánh giá chức năng gan thông qua định lượng một số chất chuyển hoá trong máu: bilirubin toàn phần, albumin và cholesterol toàn phần

- Đánh giá mức độ tổn thương tế bào gan thông qua định lượng hoạt độ enzy trong máu: AST, ALT

- Đánh giá chức năng thận thông qua định lượng nồng độ creatinin huyết thanh

- Các thông số theo dõi được kiểm tra vào trước lúc uống thuốc, sau 4 tuần,8 tuần và sau 12 tuần uống thuốc

Sau 12 tuần điều trị bằng thuốc, chuột cống trắng đã được mổ để quan sát đại thể toàn bộ các cơ quan Trong nghiên cứu, 30% số chuột ở mỗi lô đã được kiểm tra ngẫu nhiên cấu trúc vi thể của gan và thận Các xét nghiệm vi thể này được thực hiện tại Trung tâm Nghiên cứu và Phát hiện sớm Ung thư, dưới sự hướng dẫn của PGS.TS Lê Đình Roanh.

2.3.2 Nghiên cứu tác dụng chống đông máu của “Trân châu ngưu hoàng hoàn” trên mô hình gây đông bằng Lipopolysaccharid trên chuột cống trắng

Nghiên cứu của Wang B và cộng sự [58] đã sử dụng mô hình gây đông máu bằng lipopolysaccharid trên chuột cống trắng Trong nghiên cứu, tình trạng đông máu được kích thích thông qua việc tiêm tĩnh mạch đuôi chuột dung dịch lipopolysaccharid với liều 3 mg/kg, thực hiện tiêm chậm trong vòng 3 phút.

Chuột thí nghiệm được chia thành 5 lô, mỗi lô 10 con ngẫu nhiên

- Lô 1 (chứng sinh học): uống nước cất + tiêm tĩnh mạch đuôi chuột nước muối sinh lý

- Lô 2 (mô hình): uống nước cất + tiêm tĩnh mạch đuôi chuột lipopolysaccharid

- Lô 3: uống Rivaroxaban liều 3 mg/kg/lần/ ngày trong 7 ngày + tiêm tĩnh mạch đuôi chuột lipopolysaccharid

Lô 4: Uống Trân châu ngưu hoàng hoàn với liều 0,12 viên/kg/ngày trong 7 ngày, tương đương với liều dự kiến sử dụng cho người (tính theo hệ số 6), kết hợp với tiêm tĩnh mạch lipopolysaccharid vào đuôi chuột.

Lô 5: Sử dụng Trân châu ngưu hoàng hoàn với liều 0,36 viên/kg/ngày, gấp 3 lần liều dự kiến cho người, theo hệ số 6, trong 7 ngày, kết hợp với tiêm tĩnh mạch lipopolysaccharid ở đuôi chuột.

- Chuột cống trắng được uống Trân châu ngưu hoàng hoàn liên tục trong 7 ngày trước khi tiêm lipopolysaccharid để gây tình trạng đông máu

* Tại ngày thứ 7 của nghiên cứu:

- Lô 1: hai giờ sau khi uống nước cất lần cuối, chuột cống được tiêm tĩnh mạch đuôi nước muối sinh lý

Hai giờ sau khi chuột cống uống nước cất hoặc thuốc thử lần cuối, chúng được tiêm tĩnh mạch đuôi dung dịch lipopolysaccharid với liều 3 mg/kg Việc tiêm này được thực hiện chậm trong vòng 3 phút nhằm gây đông máu.

* Chuột cống ở tất cả các lô nghiên cứu được lấy máu vào thời điểm 4 giờ sau khi tiêm lipopolysaccharid để đánh giá các chỉ số nghiên cứu gồm:

- Thời gian prothrombin (PTs), tỷ lệ prothrombin (PT%), PT-INR;

- Thời gian thromboplastin từng phần hoạt hóa (aPTTs), aPTTbệnh-chứng;

Các chỉ số nghiên cứu được so sánh giữa các lô.

Địa điểm và thời gian nghiên cứu

- Địa điểm: Bộ môn Dược lý - Đại học Y Hà Nội

- Thời gian: Từ tháng 5/2021 đến tháng 9/2021

Sơ đồ nghiên cứu

Sơ đồ 2.1 Mô hình nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn và tác dụng chống đông máu trên mô hình thực nghiệm của “Trân châu ngưu hoàng hoàn”

Nghiên cứu thực nghiệm trên động vật

- Độc tính bán trường diễn

Tác dụng chống đông: Nghiên cứu trên mô hình gây đông máu bằng Lipopolysaccharid (LPS)

K ế t lu ậ n v ề độ c tính và tác d ụ ng ch ống đông củ a “ Trân châu ngưu hoàng hoàn ”

“Trân châu ngưu hoàng hoàn”

Xử lý số liệu

Các số liệu được xử lý thống kê theo thuật toán thống kê T-test Student bằng phần mềm Microsoft Excel

* Độc tính bán trường diễn

Các số liệu nghiên cứu được thu thập và xử lý bằng phương pháp thống kê y sinh học, sử dụng t-test (Student) và kiểm tra trước sau (Avant-après) Kết quả được biểu diễn dưới dạng X̅ ± SD, với sự khác biệt có ý nghĩa thống kê khi p < 0,05.

Các số liệu nghiên cứu được xử lý thống kê theo phương pháp t-test Student và test trước - sau (Avant-après) Sự khác biệt có ý nghĩa khi p < 0,05 Quy ước:

Khác biệt so với lô chứng sinh học: ∆ p< 0,05; ∆∆ p< 0,01; ∆∆∆ p< 0,001 Khác biệt so với lô mô hình: * p 0,05 > 0,05 > 0,05

Sau 8 tuần uống thuốc 9,87 ± 0,95 9,20 ± 0,37 9,91 ± 1,16 > 0,05 p (trước - sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05

Kết quả từ bảng 3.3 cho thấy rằng sau 4, 8 và 12 tuần sử dụng thuốc thử, chức năng tạo máu được đánh giá qua số lượng hồng cầu ở lô trị 1, trong đó bệnh nhân uống Trân châu ngưu hoàng hoàn với liều tương đương liều dự kiến sử dụng trong lâm sàng.

Liều 0,12 viên/kg/ngày và liều 0,36 viên/kg/ngày của Trân châu ngưu hoàng hoàn không cho thấy sự khác biệt có ý nghĩa so với nhóm chứng, cũng như không có sự khác biệt giữa các thời điểm trước và sau khi uống thuốc thử (p > 0,05).

Bảng 3.4 Ảnh hưởng của Trân châu ngưu hoàng hoàn đến hàm lượng huyết sắc tố trong máu chuột

Hàm lượng huyết sắc tố (g/dl)

Lô chứng Lô trị 1 Lô trị 2

Kết quả từ bảng 3.4 cho thấy rằng sau 8 và 12 tuần uống mẫu thử, hàm lượng huyết sắc tố ở cả lô trị 1 (uống Trân châu ngưu hoàng hoàn liều 0,12 viên/kg/ngày) và lô trị 2 (uống Trân châu ngưu hoàng hoàn liều 0,36 viên/kg/ngày) không có sự khác biệt so với lô chứng, cũng như không có sự khác biệt giữa các thời điểm trước và sau khi uống thuốc thử (p > 0,05).

Bảng 3.5 Ảnh hưởng của Trân châu ngưu hoàng hoàn đến hematocrit trong máu chuột

Kết quả từ bảng 3.5 cho thấy rằng sau 4, 8 và 12 tuần sử dụng thuốc thử, các xét nghiệm đánh giá hematocrit ở lô trị 1 (uống Trân châu ngưu hoàng hoàn liều 0,12 viên/kg/ngày) và lô trị 2 (uống Trân châu ngưu hoàng hoàn liều 0,36 viên/kg/ngày) không có sự khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng, cũng như không có sự khác biệt giữa các thời điểm trước và sau khi uống thuốc thử (p > 0,05).

Bảng 3.6 Ảnh hưởng của Trân châu ngưu hoàng hoàn đến thể tích trung bình hồng cầu trong máu chuột

Thể tích trung bình hồng cầu ( fl )

Kết quả từ bảng 3.6 cho thấy, sau 12 tuần sử dụng mẫu thử, các xét nghiệm về thể tích trung bình hồng cầu ở cả lô trị 1 (uống Trân châu ngưu hoàng hoàn liều 0,12 viên/kg/ngày) và lô trị 2 (uống Trân châu ngưu hoàng hoàn liều 0,36 viên/kg/ngày) không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng ở các thời điểm trước và sau khi uống thuốc thử (p > 0,05).

Bảng 3.7 Ảnh hưởng của Trân châu ngưu hoàng hoàn đến số lượng bạch cầu trong máu chuột

Kết quả nghiên cứu cho thấy, sau 12 tuần sử dụng Trân châu ngưu hoàng hoàn, không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê về số lượng bạch cầu giữa nhóm điều trị 1 (0,12 viên/kg/ngày) và nhóm điều trị 2 (0,36 viên/kg/ngày) so với nhóm chứng, cũng như giữa các thời điểm trước và sau khi điều trị (p > 0,05).

Bảng 3.8 Ảnh hưởng của Trân châu ngưu hoàng hoàn đến công thức bạch cầu trong máu chuột

Công thức bạch cầu (X̅ ± SD) P

Trung tính (%) Trước uống thuốc

Kết quả từ bảng 3.8 cho thấy rằng sau 4, 8 và 12 tuần sử dụng Trân châu ngưu hoàng hoàn với liều lượng 0,12 viên/kg/ngày ở lô trị 1 và 0,36 viên/kg/ngày ở lô trị 2, không có sự khác biệt có ý nghĩa về công thức bạch cầu so với lô chứng, cũng như không có sự khác biệt giữa các thời điểm trước và sau khi sử dụng thuốc thử (p > 0,05).

Bảng 3.9 Ảnh hưởng của Trân châu ngưu hoàng hoàn đến số lượng tiểu cầu trong máu chuột

Kết quả nghiên cứu cho thấy sau 12 tuần sử dụng Trân châu ngưu hoàng hoàn, số lượng tiểu cầu ở cả hai nhóm điều trị 1 và 2 không có sự khác biệt có ý nghĩa so với nhóm chứng, cũng như không có sự khác biệt giữa các thời điểm trước và sau khi uống thuốc (p > 0,05).

Bảng 3.10 Ảnh hưởng của Trân châu ngưu hoàng hoàn đến hoạt độ AST

Hoạt độ AST (UI/l) (X̅ ± SD) p (t-test)

Kết quả từ bảng 3.10 cho thấy rằng sau 4, 8 và 12 tuần sử dụng Trân châu ngưu hoàng hoàn, mức độ tổn thương tế bào gan được đánh giá qua hoạt độ AST trong máu chuột ở cả hai lô điều trị (lô 1: 0,12 viên/kg/ngày và lô 2: 0,36 viên/kg/ngày) không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng, cũng như giữa hai thời điểm trước và sau khi uống thuốc (p > 0,05).

Bảng 3.11 Ảnh hưởng của Trân châu ngưu hoàng hoàn đến hoạt độ ALT

Hoạt độ ALT (UI/l) (X̅ ± SD) p (t-test)

Kết quả nghiên cứu cho thấy sau 4, 8 và 12 tuần sử dụng Trân châu ngưu hoàng hoàn với liều 0,12 viên/kg/ngày và 0,36 viên/kg/ngày, mức độ tổn thương tế bào gan (hoạt độ ALT trong máu chuột) không có sự khác biệt đáng kể so với lô chứng, cũng như không có sự khác biệt giữa các thời điểm trước và sau khi điều trị (p> 0,05).

Bảng 3.12.Ảnh hưởng của Trân châu ngưu hoàng hoàn đến nồng độ bilirubin toàn phần trong máu chuột

Kết quả đánh giá tác dụng chống đông máu của Trân châu ngưu hoàng hoàn trên mô hình gây đông bằng lipopolysaccharid trên động vật thực nghiệm

Biểu đồ 3.16 Ảnh hưởng của Trân châu ngưu hoàng hoàn đến số lượng tiểu cầu

Lô 2: Mô hình Lô 3: Rivaroxaban liều 3 mg/kg/lần/ngày

Lô 4: Trân châu ngưu hoàng hoàn liều 0,12 viên/kg/ngày

Lô 5: Trân châu ngưu hoàng hoàn liều 0,36 viên/kg/ngày số lô chuột nghiên cứu ảnh hưởng của Trân Châu Ngưu Hoàng Hoàn đến số lượng tiểu cầu n Số lượng tiểu cầu

Khác biệt so với lô chứng sinh học: ∆ p< 0,05; ∆∆ p< 0,01; ∆∆∆ p< 0,001

Khác biệt so với lô mô hình: * p 0,05).

- Lô uống Trân châu ngưu hoàng hoàn liều 0,36 viên/kg/ngày: aPTTs kéo dài và aPTTbệnh-chứng tăng có ý nghĩa thống kê so với lô mô hình (p 0,05) sau khi sử dụng Trân châu ngưu hoàng hoàn so với trước đó và so với lô chứng Điều này cho thấy Trân châu ngưu hoàng hoàn không ảnh hưởng đến chức phận tạo máu của chuột nghiên cứu.

Gan là cơ quan quan trọng trong cơ thể, đảm nhận nhiều chức năng thiết yếu Việc sử dụng thuốc có thể gây độc cho gan, ảnh hưởng đến chức năng của nó Do đó, nghiên cứu tác động của thuốc đối với gan là cần thiết để đánh giá độc tính Để xác định mức độ tổn thương tế bào gan, người ta thường đo hoạt độ các enzym gan trong huyết thanh Sự gia tăng nồng độ enzym này thường liên quan đến độc tính của thuốc do sự phá hủy tế bào gan.

ALT là enzym chủ yếu có mặt ở gan, tập trung trong bào tương của tế bào nhu mô gan Khi tế bào gan bị tổn thương hoặc thay đổi tính thấm màng tế bào, nồng độ ALT sẽ gia tăng Ngược lại, AST chủ yếu nằm trong ty thể, với chỉ 1/3 lượng AST ở bào tương Khi tổn thương gan diễn ra ở mức độ tế bào, AST từ ty thể được giải phóng ra ngoài, dẫn đến việc nồng độ ALT thường cao hơn AST trong trường hợp viêm gan.

Kết quả từ bảng 3.10 và 3.11 cho thấy nồng độ của hai enzym này không tăng trong huyết thanh của các chuột ở hai lô điều trị sau 4, 8 và 12 tuần uống thuốc liên tục, so với lô chứng và trước khi uống thuốc Điều này chứng tỏ rằng Trân châu ngưu hoàng hoàn không gây tổn thương tế bào gan của chuột.

Chức năng tiết mật là một trong những nhiệm vụ quan trọng của gan, giúp tạo ra và bài tiết mật vào tá tràng, góp phần vào quá trình tiêu hóa Để đánh giá chức năng bài tiết và chuyển hóa mật của gan, xét nghiệm bilirubin trong máu là phương pháp chính xác và dễ thực hiện.

Kết quả từ bảng 3.12 cho thấy, sau 12 tuần sử dụng Trân châu ngưu hoàng hoàn, nồng độ bilirubin toàn phần trong máu chuột ở cả lô trị 1 (0,12 viên/kg/ngày) và lô trị 2 (0,36 viên/kg/ngày) không có sự khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng, cũng như không có sự thay đổi đáng kể giữa hai thời điểm trước và sau khi uống Điều này chứng tỏ rằng Trân châu ngưu hoàng hoàn không ảnh hưởng đến chức năng bài tiết và chuyển hóa mật của gan ở liều tương đương lâm sàng trên người và liều gấp ba.

Tiêu đề	Đánh Giá Độc Tính Cấp, Bán Trường Diễn Và Tác Dụng Chống Đông Máu Của “Trân Châu Ngưu Hoàng Hoàn” Trên Động Vật Thực Nghiệm
Tác giả	Đào Xuân Tỉnh
Người hướng dẫn	TS. Trần Thái Hà
Trường học	Học viện Y Dược Học Cổ Truyền Việt Nam
Chuyên ngành	Y học cổ truyền
Thể loại	luận văn thạc sĩ
Năm xuất bản	2022
Thành phố	Hà Nội

Định dạng
Số trang	102
Dung lượng	2,21 MB