Báo cáo thực tập kiểm nghiệm Đại học Dược Hà Nội gồm 7 bài (thuốc nhỏ mắt NaCl 0,9%; viên nén vitamin C 100mg; thuốc tiêm vitamin B6; nang Paracetamol; Indomethacin 25mg; viên sủi Paracetamol; thuốc kem Acyclovir) được tham khảo từ Dược điển Việt Nam V
KIỂM NGHIỆM Kiểm nghiệm thuốc nhỏ mắt NaCl 0,9% Thuốc nhỏ mắt natri clorid dung dịch vô khuẩn natri clorid nước Chế phẩm phải đạt yêu cầu chuyên luận “Thuốc nhỏ mắt” (Phụ lục 1.14) yêu cầu sau đây: a Chỉ tiêu thể tích - Số lượng: Lấy ngẫu nhiên đơn vị chế phẩm - Tiến hành: Xác định thể tích đơn vị bơm tiêm chuẩn ống đong chuẩn sạch, khơ, có độ xác phù hợp - Cách đánh giá: + Thể tích đơn vị phải khơng thể tích ghi nhãn lớn khơng q 10 % thể tích ghi nhãn + Nếu có đơn vị khơng đạt phải tiến hành kiểm tra lần thứ hai giống lần đầu + Chế phẩm đạt yêu cầu lần thử khơng có đơn vị tích thể tích ghi nhãn lớn khơng q 10 % thể tích ghi nhãn b Chỉ tiêu pH Từ 6,0 đến 8,0 (Phụ lục 6.2) Nhúng điện cực vào dung dịch cần khảo sát đo trị sô pH nhiệt độ đo dung dịch đệm chuẩn hiệu chuẩn máy c Định lượng * Nguyên tắc: - Natri clorid tác dụng với bạc nitrat: NaCl + AgNO3 → AgCl (kết tủa trắng) + NaNO3 (1) - Khi phản ứng (1) kết thúc, giọt thừa AgNO3 tác dụng với kali cromat (K2CrO4) tạo thành kết tủa Ag2CrO4 màu đỏ gạch * Cách tiến hành: Lấy xác 10ml chế phẩm, cho vào bình nón 100ml, thêm giọt dung dịch kali cromat làm thị Định lượng dung dịch bạc nitrat 0,1N đến có tủa hồng ml dung dịch bạc nitrat 0,1 N tương đương với 5,844 mg NaCl * Yêu cầu: Hàm lượng natri clorid, NaCl, từ 90,0 % đến 110,0 % so với lượng ghi nhãn * Cơng thức tính: mNaCl = 5,844/1000 x VAgNO3 CNaCl = mNaCl x 100 : Vchế phẩm = 10mNaCl = 0,05844 x VAgNO3 => % hàm lượng NaCl = 𝐶 𝑁𝑎𝐶𝑙 𝐶 𝑛ℎã𝑛 = 0,05844 x VAgNO3 0,9 x 100%= 5,844 x VAgNO3 90 x 100% Kiểm nghiệm viên nén vitamin C 100mg Là viên nén chứa acid ascorbic Chế phẩm phải đáp ứng yêu cầu chuyên luận ‘Thuốc viên nén” (Phụ lục 1.20) yêu cầu sau đây: a Chỉ tiêu định tính (phần A, B) A Phương pháp hóa học Cân lượng bột viên tương ứng với khoảng 0,10 g acid ascorbic, thêm 10 ml nước, lắc kỹ, lọc Dịch lọc có phản ứng acid với giấy quỳ => dựa vào tính acid Lấy ml dịch lọc thêm 0,5 ml dung dịch bạc nitrat %, xuất tủa xám đen => dựa vào tính khử B Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4) - Bản mỏng: Siỉica gel GF254 - Dung môi khai triển: Ethanol 96 % - nước (120 : 20) - Dung dịch thử: Cân lượng bột viên tương ứng với khoảng 0,05g acid ascorbic, thêm 10 ml nước, lắc kỹ lọc - Dung dịch đối chiếu: Dung dịch acid ascorbic chuẩn 0,5 % - Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng µ1 dung dịch Triển khai sắc ký đến dung môi khoảng 15 cm Lấy mỏng để khơ ngồi khơng khí nhiệt độ phịng Quan sát ánh sáng tử ngoại bước sóng 254 nm - Yêu cầu: Sắc ký đồ thu dung dịch thử phải có vết tương ứng vị trí màu sắc với vết sắc ký đồ thu dung dịch dối chiếu b Độ rã * Số lượng: viên * Cách tiến hành: - Cho vào ống thử viên nén vit C, cho đĩa vào ống - Treo giá đỡ ống thử cốc có chứa mơi trường (nước cất) trì 37 ± 2oC - Lấy giá đỡ ống thử khỏi chất lỏng quan sát chế phẩm thử * Yêu cầu: - Thời gian rã không 15’ - Nếu viên không đáp ứng u cầu viên bị dính vào đĩa thử lại với viên khác, không cho đĩa vào ống - Mẫu thử đạt yêu cầu tất viên rã - Nếu có đến – viên không rã, lặp lại phép thử với 12 viên khác - Mẫu thử đạt yêu cầu không 16/18 viên thử rã ➢ Thuốc coi rã đạt yêu cầu: + Khơng cịn cắn mặt lưới, trừ mảnh vỏ bao không tan viên nén mặt lưới; dính vào mặt đĩa, sử dụng đĩa + Nếu cịn cắn, khối mềm khơng có nhân khơ c Định lượng * Ngun tắc: Dựa vào tính khử acid ascorbic * Cách tiến hành: - Cân 20 viên, tính khối lượng trung bình nghiền thành bột mịn - Cân lượng bột viên tương ứng với khoảng 0,1 g acid ascorbic, thêm 30 ml hỗn hợp nước đun sôi để nguội dung dịch acid acetic M (10 : 1), lắc kỹ - Thêm ml dung dịch hồ tinh bột, định lượng dung dịch iod 0,1 N xuất màu xanh lam bền vững ml dung dịch iod 0,1 N tương đương với 8,806 mg C6H8O6 - Chuẩn độ lại dung dịch iod 0,1N dung dịch Na2S2O3 (để tính Khc) * Yêu cầu: Hàm lượng acid ascorbic, C6H8O6, từ 95,0 % đến 110,0 % so với lượng ghi nhãn * Cơng thức tính: Khc = 𝑉 𝑁𝑎2𝑆2𝑂3 HL% = 𝑉 𝑖𝑜𝑑 𝑉𝑖𝑜𝑑 × 8,806 × 𝐾 ℎ𝑐 × 𝑚𝑡𝑏 𝑚 𝑐â𝑛 𝑥 100 x 100% Kiểm nghiệm thuốc tiêm vitamin B6 Là dung dịch vô khuẩn cùa pyridoxin hydroclorid nước để pha thuốc tiêm Chế phẩm phải đáp ứng yêu cầu chuyên luận “Thuốc tiêm, thuồc tiêm truyền” (Phụ lục 1.19) yêu cầu sau đây: a Chỉ tiêu định tính (phần A, C) A Trong phần Định lượng, phổ hấp thụ tử ngoại (Phụ lục 4.1) dung dịch thử phải có hấp thụ cực đại khoảng 290 nm C Dung dịch A: Lấy thể tích chế phẩm tương ứng với khoảng 100 mg pyridoxin hydroclorid, pha loãng với nước thành 100 ml Lấy ml dung dịch A, thêm giọt dung dịch sắt (III) clorid %, xuất màu đỏ Thêm giọt dung dịch acid sulfuric 10 %, màu đỏ phai dần b Định lượng * Nguyên tắc: có cấu trúc nhân thơm * Cách tiến hành: - Chuẩn bị dung dịch thử: Lấy xác thể tích chế phẩm tương ứng với khoảng 0,1g pyridoxin hydroclorid, pha loãng với dung dịch acid hydrocloric 0,1 M thành 500,0 ml, lắc Lấy 5,0 ml dung dịch, pha loãng với dung dịch acid hydrocloric 0,1 M thành 100,0 ml, lắc - Chuẩn bị mẫu trắng dung dịch acid hydrocloric 0,1 M - Đo độ hấp thụ dung dịch thử bước sóng cực đại khoảng 290 nm, cốc đo dày cm, so với mẫu trắng dung dịch acid hydrocloric 0,1 M - Tính hàm lượng pyridoxin hydroclorid, C8H11NO3.HCl, thuốc tiêm theo A (1 %, cm) Lấy 430 giá trị A (1 %, cm) bước sóng 290 nm * Yêu cầu: Hàm lượng pyridoxin hydroclorid, C8H11NO3.HCl, từ 95,0% đến 110,0% so với lượng ghi nhãn * Cơng thức tính: A = E(1%, 1cm).C.l => C = A/E.l = A/430 mpyridoxin = C x 500/100 x 100/5= 10A/43 %HL = mpyri/0,1 x 100%= 10A/43 : 0,1 x 100% = 100A/43 x 100% Kiểm nghiệm nang Paracetamol Là nang cứng chứa paracetamol Chế phẩm phải đáp ứng yêu cầu chuyên luận “Thuốc nang” (Phụ lục 1.13) yêu cầu sau: a Chỉ tiêu đồng khối lượng * Nguyên tắc: Phép thử độ đồng khối lượng để xác định độ đồng phân liều chế phẩm * Cách tiến hành: - Cân khối lượng nang - Tháo rời hai nửa vỏ nang, dùng lau vỏ cân khối lượng vỏ - Khối lượng thuốc nang hiệu số khối lượng nang thuốc khối lượng vỏ nang Tiến hành tương tự với 19 đơn vị khác lấy ngẫu nhiên Tính khối lượng trung bình thuốc nang * Yêu cầu: - Với thuốc nang có: + KLTB < 300mg => % chênh lệch với KLTB 10% + KLTB ≥ 300mg => % chênh lệch với KLTB 7,5% - Khơng có q hai đơn vị có khối lượng nằm ngồi giới hạn chênh lệch so với khối lượng trung bình khơng có đơn vị có khối lượng vượt gấp đơi giới hạn b Định lượng * Nguyên tắc: Paracetamol có cấu trúc nhân thơm nên có khả hấp thụ UV có độ hấp thụ cực đại bước sóng 257 nm Đo độ hấp thụ paracetamol bước sóng 257 nm, từ độ hấp thụ riêng ta xác định hàm lượng paracetamol * Cách tiến hành: - Cân 20 nang, tính khối lượng trung bình bột thuốc nang nghiền thành bột mịn - Cân xác lượng bột thuốc tương ứng với khoảng 0,150 g paracetamol cho vào bình định mức 200 ml, thêm 50 ml dung dịch natri hydroxyd 0,1 M, thêm 100 ml nước lắc kỹ 15 phút Thêm nước đến định mức, lắc - Lọc, loại bỏ 20 ml dịch lọc đầu - Pha loãng 10,0 ml dịch lọc thành 100,0 ml với nước Lấy xác 10 ml dung dịch cho vào bình định mức dung tích 100 ml, thêm 10 ml dung dịch natri hydroxyd 0,1 M Pha loãng với nước đến định mức - Đo độ hấp thụ ánh sáng dung dịch thu bước sóng 257 nm, cốc đo dày cm Dùng dung dịch natri hydroxyd 0,01 M làm mẫu trắng - Tính hàm lượng paracetamol, C8H9NO2, theo A(1 %, cm) Lấy 715 giá trị A (1 %, lcm), bước sóng 257 nm * Yêu cầu: Hàm lượng paracetamol, C8H9NO2, từ 95,0 % đến 105,0 % so với lượng ghi nhãn * Công thức tính: A = A(1 %, cm).C.l => C = 𝐴 A(1 %,1 cm).l = 𝐴 715 mparacetamol/viên = C x 10 x 10 x 200/100 x mtb/mcân = 𝐴×200×𝑚 𝑡𝑏 715 × 𝑚 𝑐â𝑛 Hàm lượng % paracetamol = mparacetamol/viên / mparacetamol/nhãn x 100% = 𝐴 × 200 × 𝑚 𝑡𝑏 715 × 𝑚 𝑐â𝑛 × 𝑚 𝑝𝑎𝑟𝑎/𝑛ℎã𝑛 x 100% Kiểm nghiệm viên nén Indomethacin 25mg Là viên nén bao phim chứa indomethacin Chể phẩm phải đáp ứng yêu cầu chuyên luận “Thuốc viên nén” mục “Viên bao” (Phụ lục 1.20) yêu cầu sau đây: a Chỉ tiêu đồng khối lượng * Nguyên tắc: Phép thử độ đồng khối lượng để xác định độ đồng phân liều chế phẩm * Cách tiến hành: Cân riêng biệt 20 đơn vị lấy ngẫu nhiên, tính khối lượng trung bình * u cầu: - Với viên nén (viên nén bao phim) có: + KLTB ≤ 80mg giới hạn chênh lệch 10% + 80mg < KLTB < 250mg giới hạn chênh lệch 7,5% + KLTB ≥ 250mg giới hạn chênh lệch 5% - Khơng có q hai đơn vị có khối lượng nằm ngồi giới hạn chênh lệch so với khối lượng trung bình khơng có đơn vị có khối lượng vượt gấp đơi giới hạn b Độ hịa tan - Làm với đơn vị - Thiết bị: Kiểu cánh khuấy - Mơi trường hịa tan: 900 ml đệm phosphat chuẩn pH 7,2 - Tốc độ quay: 50 vòng/phút - Thời gian: 45 phút - Cách tiến hành: Lấy phần dung dịch mơi trường sau hịa tan, lọc, bỏ 20 ml dịch lọc đầu Pha loãng dịch lọc thu với mơi trường hịa tan cần Đo độ hấp thụ dung dịch thu bước sóng hấp thụ cực đại 320 nm, dùng mẫu trắng mơi trường hịa tan Tính hàm lượng inđomethacin, C19H16ClNO4, hòa tan theo A(1 %, cm) Lấy 196 giá trị A(1 %, cm) bước sóng 320 nm * u cầu: Khơng 70% (Q) lượng indomethacin so với lượng ghi nhãn hòa tan 45 phút * Nguyên tắc: Indomethacin hòa tan mơi trường định Độ hịa tan tỷ lệ với nồng độ indomethacin dung dịch Nồng độ lại tỷ lệ với độ hấp thụ dung dịch bước sóng 320nm (do có cấu trúc nhân thơm) => biết độ hấp thụ đánh giá độ hịa tan * Cơng thức tính: A = A(1 %, cm).C.l => C = 𝐴 A(1 %,1 cm).l = 𝐴 196 mindomethacin hòa tan = 𝐶 × 900 100 = 9𝐴 196 => Độ hòa tan = mindomethacin hòa tan / mindomethacin nhãn = 9𝐴 196×0,025 = 360A/196 Kiểm nghiệm viên sủi Paracetamol 500mg Là viên nén sủi chứa paracetamol Chế phẩm phải đáp ứng yêu cầu viên sủi chuyên luận “Thuốc viên nén” mục “Viên sủi bọt” (Phụ lục 1.20) yêu cầu sau đây: a Chỉ tiêu định tính * PP A: Trong nước ấm, viên hịa tan sủi bọt mạnh, tạo thành dung dịch đục * PP B: - Nguyên tắc: Paracetamol có cấu trúc nhân thơm nên có khả hấp thụ UV - Cách tiến hành: Đo phổ hấp thụ tử ngoại dung dịch phần Định lượng khoảng bước sóng từ 230 nm đến 350 nm - Yêu cầu: Phổ thu phải có cực đại hấp thụ bước sóng 257 nm ± 2𝑛𝑚 * PP C: Phương pháp sắc ký lớp mỏng - Bản mỏng: Silica gel GF254 - Dung môi khai triển: Toluen - aceton - cloroform (10:25:65) - Dung dịch thử: Lấy lượng bột viên tương ứng với 0,1 g paracetamol, hòa tan vừa đủ với 100 ml ethanol 96 % - Dung dịch đối chiếu: Dung dịch có chứa 0,1 % paracetamol chuẩn ethanol 96 % - Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng 40 µl dung dịch thử, dung dịch đối chiếu Cho dung mơi khai triển vào bình sắc ký khơng lót giấy đặt mỏng vừa chấm dung dịch vào bình Triển khai sắc ký đến dung môi 15 cm Lấy mỏng để khơ hồn tồn nhiệt độ phòng Quan sát ánh sáng tử ngoại bước sóng 254 nm Vết thu sắc ký đồ dung dịch thử phải tương ứng vị trí, kích thước, màu sắc với vết thu sắc ký đồ dung dịch đối chiếu b Định lượng * Nguyên tắc: Paracetamol có cấu trúc nhân thơm nên có khả hấp thụ UV có độ hấp thụ cực đại bước sóng 257 nm Đo độ hấp thụ paracetamol bước sóng 257 nm, từ độ hấp thụ riêng ta xác định hàm lượng paracetamol * Tiến hành: - Lấy viên sủi paracetamol cho vào cốc có mỏ 500 ml, thêm 100 ml NaOH 0,1M, đợi viên sủi bọt hết, khuấy kĩ phút chuyển vào bình định mức 500 ml, thêm nước vừa đủ đến vạch định mức, lắc - Lọc, bỏ 20 ml dịch lọc đầu - Lấy xác 25,00 ml dịch lọc cho vào bình định mức 200 ml (bình A), thêm 45 ml dung dịch NaOH 0,1M Thêm nước vừa đủ đến vạch định mức, lắc - Lấy xác 10,00 ml bình A, pha lỗng với nước bình định mức 100 ml (bình B), lắc - Tiếp tục lấy xác 10,00 ml bình B cho vào bình định mức 100 ml (bình C), thêm 10 ml NaOH 0,1M, định mức vừa đủ nước, lắc - Đo độ hấp thụ dung dịch bình C bước sóng 257 nm - Lặp lại quy trình phân tích lần - Tính % hàm lượng paracetamol so với lượng ghi nhãn, C8H9NO2, theo A (1 %, lcm) Lấy 715 giá trị A (1 %, lcm), bước sóng 257 nm * Yêu cầu: Hàm lượng paracetamol, C8H9NO2, từ 95,0 % đến 105,0 % so với lượng ghi nhãn * Công thức tính: A = A(1 %, cm).C.l => C = 𝐴 A(1 %,1 cm).l = 𝐴 715 Độ pha loãng f = 200/25 x 100/10 x 100/10 = 800 mparacetamol/viên = C x f x 500/100 x 1/5= 𝐴×800 715 Hàm lượng % paracetamol = mparacetamol/viên / mparacetamol/nhãn = 𝐴 × 800 715 × 0,5 x 100% Kiểm nghiệm thuốc kem Acyclovir Là thuốc kem dùng da có chứa aciclovir Chổ phẩm phải đáp ứng yêu cầu chuyên luận “Thuốc mềm dùng da niêm mạc” (Phụ lục 1.12) yêu cầu sau đây: a Chỉ tiêu độ đồng * Nguyên tắc: Thuốc mềm dùng da niêm mạc có độ đồng * Cách thử: Lấy đơn vị đóng gói, đơn vị khoảng 0,02 g đến 0,03 g, trải chế phẩm phiến kính Đậy phiến kính bẳng phiến kính thứ ép mạnh tạo thành vết có đường kính khoảng cm Quan sát vết thu mắt thường (cách mắt khoảng 30 cm) * Yêu cầu: - tiêu không nhận thấy tiểu phân - Nếu có tiểu phân nhìn thấy phần lớn số vết phải làm lại với đơn vị đóng gỏi - Trong số tiêu này, tiểu phân cho phép nhận thấy không vượt tiêu b Định lượng * Nguyên tắc: Acyclovir có cấu trúc nhân thơm… cực đại 255 nm * Cách tiến hành: - Lắc lượng kem trộn có chứa 7,5 mg aciclovir với 50 ml dung dịch acid sulfuric 0,5M Lắc mạnh với 50 ml ethyl acetat, để lắng cho tách lớp lấy lớp dung dịch nước bên - Rửa lớp dung môi hữu với 20 ml dung dịch acid sulfuric 0,5 M, gộp dịch rửa lớp nước bên dưới, pha loãng thành 100 ml với dung dịch acid sulfuric 0,5 M Lắc lọc (giấy lọc Whatman GF/T), bỏ 10 ml dịch lọc đầu, lấy xác 10 ml dịch lọc vào bình định mức 50 ml, thêm nước vừa đủ đến vạch - Đo độ hấp thụ ánh sáng dung dịch thu bước sóng hấp thụ cực đại 255 nm, cốc đo dày cm, dùng hỗn hợp dung dịch acid sulfuric 0,5 M nước (1 : 4) làm mẫu trắng - Tính hàm lượng aciclovir, C8H11N5O3 theo A (1 %, cm), lấy 562 lả giá trị A (1 %, cm) cực đại 255 nm * Yêu cầu: Hàm lượng acyclovir, C8H11N5O3, từ 95,0 % đến 105,0 % so với lượng ghi nhãn * Cơng thức tính: A = A(1 %, cm).C.l => C = 𝐴 A(1 %,1 cm).l = 𝐴 562 macyclovir cân = C x 50/10 x 100/100= 𝐴𝑥5 562 => macyclovir/5g thuốc kem = macyclovir x 5/mcân = Hàm lượng % acyclovir = = 100 𝑥 𝐴 562 × 𝑚 𝑐â𝑛 x 100% 𝑚 𝑎𝑐𝑦𝑐𝑙𝑜𝑣𝑖𝑟/ 5𝑔 𝑚 𝑛ℎã𝑛 25 𝑥 𝐴 562 × 𝑚 𝑐â𝑛 𝑥 100% = 𝐴 × 25 562 × 0,25× 𝑚 𝑐â𝑛 x 100%