Sản xuất papain tái tổ hợp từ e coli

Trường Đại học Nơng Lâm-Đại học Huế Khoa Cơ khí công nghệ  Sản xuất papain tái tổ hợp từ E.coli Nhóm thực : Nhóm 10 GVHD : NGUYỄN ĐỨC CHUNG Trường Đại học Nông Lâm-Đại học Huế Khoa Cơ khí cơng nghệ  Thành viên: 1.Trần Bá Anh Vũ Ngơ Đình Chung Nguyễn Tú Quyên Nguyễn Đăng Anh Tiến Lê Thị Thu Hương Nội dung: I Sơ lược Enzyme papain II Sơ lược E.coli III Quy trình sản xuất papain tái tổ hợp E.coli IV Một số thách thức trình sản xuất papain tái tổ hợp I Sơ lược Enzyme papain • Papain enzyme protease tách từ nhựa đu đủ * Tính chất hoạt tính papain : 01 Khả phân giải protein Có khả phân giải liên kết peptide vị trí sâu so với protease khác 01 Hoạt động ổn định 02 03 Papain có khả chịu nhiệt độ cao điều kiện môi trường khác 02 03 Phạm vi pH hoạt động Có vùng pH tương đối rộng : 4.5-8.5 Thường bền mơi trường trung tính kiềm yếu ( 7-8.5) 05 04 * Tính chất hoạt tính papain : 04 05 Tương tác với thiols Điều cho phép tham gia vào phản ứng tạo liên kết disulfide trình tái tổ hợp protein Chất hoạt hóa papain Là chất khử : cystein, glutation, … Chất ức chế papain 06 Là chất có hoạt tính oxy hóa : ozon, hydro, iod acetat hợp chất disulfua khác 05 04 06 * Ứng dụng papain: • Làm mềm thịt • làm nước mắm • chưng cất bia xử lý sữa • Giúp tăng cường q trình chín, làm mềm tăng cường hương vị II Sơ lược E.coli: E.coli vi khuẩn gram âm, hình que Được tìm thấy chủ yếu đường ruột động vật E.coli có hai đầu trịn, kích thước từ O.5- micromet Di động tiên mao, không tạo bào tử, loại có độc lực có capsul * Lý sử dụng E.coli để sản xuất enzym: Conclusion 01 Dễ tiếp cận cận nhân giống Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit Nulla ullamcorper nulla et blandit ultrices Nulla aliquam congue enim Duis imperdiet bibendum Conclusion 01 Môi trường phát triển Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit Nulla ullamcorper nulla et blandit ultrices Nulla aliquam dễ kiếm chi phí congue enim Duis imperdiet bibendum thấp Conclusion 01 Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit Nulla ullamcorper nulla et blandit ultrices Nulla aliquam congue enim Duis imperdiet bibendum Nền tảng khoa học Dễ dàng biến đổi gen Conclusion 01 Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit Nulla ullamcorper nulla et blandit ultrices Nulla aliquam congue enim Duis imperdiet bibendum Hiệu sản xuất III Quy trình sản xuất papain tái tổ hợp E.coli: Quá trình sản xuất papain tái tổ hợp E.coli: 1.Lựa chọn gen papain 2.Chuẩn bị vecter tái tổ hợp 3.Xử lý vecter tái tổ hợp gen chọn 4.Di truyền gen papain E.coli 5.Thu hoạch tinh chế papain • Vi khuẩn E coli sử dụng dạng vi sinh • •• Sau Vectơ tái tổ trình hợp di truyền đoạn gen DNA hồn có kích tất, Đầu tiên, mã hóa papain Những mảnh gen papain chèn vào vật tự thụ phấn để sản xuất enzyme papain protein papain cho phép sẽvà cài đoạn thu hoạch DNA khác từ tế lựa chọn tách ra từ nguồn vectơ tái tổ hợp DNA qua q trình • thước E colinhỏ khuyếch đại đểthơng tạo số lượng • lớn bào Vector vi khuẩn chứa E.enzyme coli genpapaya mã hóatái papain tự (chứa ) Gen gắn liền (ligation) vinhiên khuẩn papain tổ hợp.cùng •• •các Gen papain chứa vectơ táivào tổpapain hợp sau di Quá yếu trình tố tái điều bao như: gồm promotor, giai đoạn vùng RBS sau đưa vectơ Vectơ tổ khiển hợp chứa gen tế bào E coli vàtruyền vùng cấy kỹ thuật lọc, chiết CRISPR-Cas9 xuất vi tinh chế sắc ký tái tổ hợp chuyển vào tế bào khuẩn E coli • Q trình di truyền gen bao gồm giai đoạn • transkripsion để Các táchyếu lấytố papain giúp từ đảm tế bào bảo gen papain thông qua phương pháp biến đổi gen (biến đổi gen thành mRNA), biểu sản protein papain electroporation chuyển tụcvà translation (chuyển đổi xuất mRNA thành protein), •• folding Có (gập thể sử dụng DNA plasmid để làm Quá trình nhằm vào vector tế lạinày thành dạngđưa chứcvectơ năng) =>tái Kết protein để papain đượcmột sản xuất tổquả hợp bào vilàkhuẩn tạo thành dòngtrong vi tế bào vikhuẩn khuẩn tái E coli tổ hợp papain IV Một số thách thức trình sản xuất papain tái tổ hợp: • Chọn nguồn gốc Enzyme vi khuẩn • Các điều kiện vật lý sinh học • Q trình chiết xuất tinh chế • Stabil hóa bảo • Thách thức kinh tế THANK YOU