Luận văn đánh giá tồn lưu tối thiểu bằng phương pháp đếm tế bào dòng chảy thế hệ mới trên người bệnh đa u tủy xương tại viện huyết học truyền máu trung ương (2021 2022)

ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Đối tượng nghiên cứu

Từ tháng 01/2021 đến tháng 03/2022, khoa bệnh máu tổng hợp Viện Huyết học - Truyền máu Trung ương đã tiến hành chẩn đoán và điều trị cho 193 bệnh nhân mắc đa u tuỷ xương, trong đó các bệnh nhân được chỉ định làm xét nghiệm phân loại miễn dịch.

Mục tiêu 2: 102 bệnh nhân được chẩn đoán xác định mắc bệnh đa u tuỷ xương đã trải qua 3 đợt điều trị và được theo dõi sau điều trị thông qua xét nghiệm phân loại miễn dịch.

Bệnh nhân được chẩn đoán xác định đa u tủy xương theo tiêu chuẩn IMWG cập nhật năm 2014 hoặc đã có chẩn đoán trước đó và tái phát Hồ sơ bệnh án của bệnh nhân đã trải qua 3 đợt điều trị tại Viện Huyết học – Truyền máu Trung ương.

- Bệnh án thiếu thông tin số lượng tương bào trong tuỷ đồ hoặc sinh thiết tuỷ xương

- Bệnh án không có kết quả xét nghiệm chẩn đoán đa u tuỷ xương bằng phương pháp đếm tế bảo dòng chảy trước điều trị

Bệnh án không cung cấp kết quả xét nghiệm chẩn đoán đa u tuỷ xương qua phương pháp đếm tế bào dòng chảy trước và sau 3 đợt điều trị.

Thời gian nghiên cứu và địa điểm nghiên cứu

Thời gian thu thập số liệu diễn ra từ tháng 02/2022 đến tháng 10/2022 tại Viện Huyết học – Truyền máu Trung ương, địa chỉ tại đường Phạm Văn Bạch, phường Yên Hoà, quận Cầu Giấy, thành phố Hà Nội.

Thiết kế nghiên cứu

Nghiên cứu cắt ngang, hồi cứu bệnh án

Sơ đồ 2.1: Sơ đồ nghiên cứu 2.4 Cỡ mẫu

Trong giai đoạn 2021-2022, tại Viện Huyết học – Truyền máu Trung ương, đã có 193 hồ sơ bệnh án mới chẩn đoán bệnh đa u tủy xương, trong đó 102 hồ sơ được theo dõi sau 3 đợt điều trị Bệnh đa u tủy xương là một bệnh lý hiếm gặp với tỷ lệ mắc bệnh chỉ 0,54 trường hợp trên 100.000 người tại Việt Nam.

Hồ sơ bệnh án bệnh nhân chẩn đoán xác định đa u tuỷ xương (n3)

Mục tiêu 1 là đánh giá đặc điểm và tổ hợp dấu ấn miễn dịch của tăng sinh đa dòng (n') và tăng sinh đơn dòng (n6) Quy trình điều trị được thực hiện qua 3 đợt tấn công, nhằm xác định tổn dư tối thiểu của bệnh bằng kỹ thuật Flow cytometry sau chu kỳ điều trị thứ 3.

Bệnh nhân không theo dõi sau điều trị bằng kỹ thuật Flow cytometry (nd)

Loại ra khỏi nghiên cứu

Phương pháp chọn mẫu

Chọn mẫu hồ sơ bệnh án của bệnh nhân mới được chẩn đoán đa u tủy xương, bao gồm toàn bộ thông tin và kết quả theo dõi sau 3 đợt điều trị tại khoa Bệnh máu tổng hợp, Viện Huyết học - Truyền máu Trung ương.

Phương pháp thu thập số liệu

Nghiên cứu viên chính sẽ thu thập số liệu từ hồ sơ bệnh án và tham gia vào quá trình xét nghiệm mẫu bệnh phẩm của bệnh nhân đa u tủy xương tại viện Huyết học – Truyền máu Trung ương.

Các bước thu thập thông tin gồm 2 giai đoạn:

Giai đoạn 1 của nghiên cứu tập trung vào việc thu thập số liệu hồi cứu từ bệnh án của bệnh nhân chẩn đoán đa u tủy xương, được thực hiện từ tháng 1/2021 đến tháng 3/2022 thông qua xét nghiệm tủy đồ và phân loại miễn dịch Giai đoạn 2 diễn ra từ tháng 6/2022 đến tháng 10/2022, trong đó nghiên cứu viên thu thập thông tin theo mẫu nghiên cứu, hoàn thiện phiếu thu thập thông tin và tiến hành xử lý số liệu để hoàn thành luận văn.

Các biến số nghiên cứu

STT Biến số Loại biến Định nghĩa biến

Lấy năm hiện tại trừ đi năm sinh

Thu thập liệu qua hồ sơ bệnh án

2 Giới tính Định tính Giới tính Nam hay nữ trong hồ sơ

3 Mức độ biểu hiện kháng nguyên CD45 Định tính âm tính, dương tính

11 Mức độ biểu hiện kháng nguyên CD

Kappa Định tính âm tính, dương tính

12 Mức độ biểu hiện kháng nguyên CD

Lambda Định tính âm tính, dương tính

Tỉ lệ phần trăm tế bào ác tính tồn tại trong tuỷ xương sau điều trị

Số lượng kháng nguyên tạo nên tổ hợp theo dõi tế bào ác tính

Quy trình kỹ thuật thực hiện

Máy đếm tế bào dòng chảy Navios 10 màu của Beckman Coulter là thiết bị thế hệ hai, hoạt động dựa trên nguyên tắc hấp phụ, tán xạ và phát huỳnh quang khi chùm tia laser chiếu vào tế bào đơn lẻ Máy tính thu nhận tín hiệu từ đặc điểm tán xạ hoặc hấp phụ ánh sáng để xác định kích thước và độ phức tạp nhân của tế bào Đồng thời, thiết bị cũng thu nhận tín hiệu phát huỳnh quang từ kháng thể, giúp phát hiện kháng nguyên có mặt trên tế bào.

Máy Navios 10 màu với 3 bộ nguồn lazer cho phép thu thập tín hiệu từ 10 màu huỳnh quang khác nhau, phân tích nhiều thông số của tế bào đơn lẻ trong quần thể tế bào hỗn tạp Máy có khả năng phân tích tán xạ nâng cao với 3 chế độ đo, sử dụng cảm biến tán xạ bên bằng diode quang hiệu năng cao, cho phép phân tích các hạt có kích cỡ đường kính 0,404 μm Thiết kế quang học ưu việt cùng phần mềm phân tích số liệu mạnh mẽ nâng cao độ nhạy, độ đặc hiệu và tính chính xác, mang lại tốc độ phân tích vượt trội so với các thế hệ máy đếm tế bào dòng chảy trước đây.

Thiết lập chương trình phân tích phân tích kết quả từ dữ liệu đã thu thập:

Bước 1: Đặt bộ tần số trên FS đủ thấp để đảm bảo có đủ các tế bào lympho

Bước 2: Tạo biểu đồ chấm FS INT so với FS TOF

Bước 3: Tạo biểu đồ chấm FSC so với SSC và loại trừ các mảnh vỡ tế bào (phân tán) cùng vùng bao gồm các tế bào lympho SSC thấp

Bước 4: Tạo biểu đồ chấm SSC so với CD45

Bước 5: Tạo biểu đồ chấm CD27 với CD81

Bước 6: Tạo biểu đồ CD138 với SSC, CD138 + với SSC

Bước 7: Tạo biểu đồ CD138 kết hợp với CD38 để xác định vùng dương tính chung giữa hai dấu ấn này Bước 8: Tiến hành tạo biểu đồ CD138 với các dấu ấn khác như CD27, CD81, CD200, CD56, CD45, CD19, Kappa và Lambda.

Bước 9: So sánh quần thể tế bào lympho bình thường với quần thể tế bào bất thường

Hình 2 1 Sơ đồ phân tích dữ liệu từ máy đếm tế bào dòng chảy

Bài viết trình bày cách phân tích mức độ biểu hiện kháng nguyên trên đồ thị của hai nhóm quần thể: lympho (màu xanh dương) và quần thể tương bào (màu hồng tím) Việc so sánh này giúp hiểu rõ hơn về sự khác biệt trong khả năng biểu hiện kháng nguyên của từng nhóm, từ đó hỗ trợ nghiên cứu về hệ miễn dịch và các bệnh liên quan.

Tiêu chuẩn xác định quần thể tế bào mang CD bao gồm sự đồng nhất về CD45 và SSC, với mật độ tế bào dương tính trên 10% và mức độ biểu hiện kháng nguyên từ mức độ yếu Quần thể tương bào được nhận diện qua CD38 và CD138, đồng thời cần đánh giá mức độ đồng nhất trên đồ thị CD45 và SSC Tiếp theo, quần thể tương bào sẽ được đánh giá mức độ biểu hiện của các CD khác để xác định kiểu hình miễn dịch.

Hình 2 2 Quần thể tương bào và mức độ biểu hiện kháng nguyên

Quần thể tế bào tương bào có đặc điểm dương tính với CD45, CD38, CD138, CD19, CD27, CD81 và âm tính với CD200, CD56 Ngoài ra, quần thể tế bào tương bào cũng thể hiện sự dương tính với CD38, CD138, CD200, CD56, trong khi các marker CD45, CD19, CD27, CD81 lại âm tính.

(nguồn: Viện Huyết học – Truyền máu Trung ương)

Mật độ tế bào dương tính: tỉ lệ tế bào dương tính với một CD trên tổng số tế bào trong quần thể phân tích

Mức độ biểu hiện kháng nguyên phản ánh số lượng kháng nguyên trên từng tế bào dựa vào mật độ huỳnh quang, với hai mức độ là âm tính và dương tính Nếu tỷ lệ biểu hiện kháng nguyên dưới 20% thì được coi là âm tính, trong khi tỷ lệ từ 20% trở lên được xem là dương tính Các dấu ấn CD sẽ xác định kiểu hình miễn dịch của bệnh nhân dựa vào mức độ biểu hiện huỳnh quang, từ đó phân loại thành CD âm tính hoặc CD dương tính.

(a) (b) Hình 2 3 Hình ảnh mức độ biểu hiện CD Kappa, CD Lambda

(a) Quần thể tương bào với CD Kappa và CD Lambda biểu hiện âm tính (b) Quần thể tương bào với biểu hiện dương tính với CD Kappa và CD Lambda

Giá trị MRD của bệnh nhân được xác định bằng tỷ lệ phần trăm tế bào plasma ác tính so với tổng số tế bào phân tích sau ba đợt điều trị Số lượng tế bào plasma ác tính còn lại sau ba đợt điều trị dựa trên đặc điểm biểu hiện kháng nguyên tại thời điểm chẩn đoán ban đầu Các kháng nguyên trên tế bào plasma có biểu hiện tương tự giữa thời điểm chẩn đoán và sau ba đợt điều trị được chọn để xác định tế bào plasma ác tính Số LAIP được sử dụng để theo dõi MRD là số kháng nguyên có biểu hiện giống hệt với tế bào ác tính ban đầu.

Hình 2 4 Hình ảnh tương bào đơn dòng trước và sau điều trị

Trước điều trị, quần thể tế bào tương bào đơn dòng có tỉ lệ tế bào ác tính lên đến 47,5% Sau khi điều trị, tỉ lệ tế bào tương bào giảm xuống dưới 0,6% (nguồn: Viện Huyết học – Truyền máu Trung ương).

Phương pháp phân tích số liệu

Dữ liệu sau khi được xử lý và làm sạch sẽ được nhập vào máy tính thông qua phần mềm Epidata 3.1, sử dụng các tệp QES, REC và CHK để giảm thiểu sai sót trong quá trình nhập liệu.

Phân tích số liệu bằng phần mềm thống kê SPSS 20

Thống kê mô tả cho biến định lượng bao gồm trung bình, trong khi biến định tính sử dụng tỷ lệ phần trăm Đối với thống kê suy luận biến định lượng, các phương pháp được áp dụng để so sánh sự khác biệt giữa các nhóm, bao gồm test Chi bình phương và phép kiểm chính xác Fisher Mức ý nghĩa thống kê thường được thiết lập là p < 0,05 trong các phân tích thống kê suy luận.

Vấn đề đạo đức của nghiên cứu

Nghiên cứu đã được sự cho phép của Lãnh đạo Viện Huyết học – Truyền máu Trung ương để thu thập dữ liệu Các xét nghiệm được thực hiện nhằm mục đích chẩn đoán và theo dõi quá trình điều trị cho bệnh nhân.

Nghiên cứu được sự đồng ý thông qua của hội đồng đạo đức của trường Đại học

Y tế công cộng Quyết định số 231/2022/YTCC- HD3 ngày 9/6/2022

Sai số và biện pháp khắc phục sai số

❖ Sai số trong thu thập và xử lý số liệu:

- Sai số do bỏ xót hồ sơ bệnh án

- Sai số trong quá trình nhập số liệu

❖ Các biện pháp khắc phục sai số :

- Tham gia tập huấn đào tạo thu thập số liệu Kiểm tra và làm sạch số liệu sau khi thu thập

Trong quá trình nhập số liệu, để hạn chế sai số tối đa, chúng tôi đã thực hiện việc kiểm tra thông tin bằng cách nhập lại 10% số phiếu Điều này giúp đảm bảo tính chính xác và độ tin cậy của bộ số liệu.

KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU

Đặc điểm dấu ấn miễn dịch và tổ hợp dấu ấn miễn dịch ở nhóm bệnh nhân đa u tuỷ xương và nhóm chứng trong nghiên cứu

u tuỷ xương và nhóm chứng trong nghiên cứu

3.1.1 Đặc điểm thông tin chung của bệnh nhân đa u tuỷ xương trong nghiên cứu

Bảng 3 1 Đặc điểm tuổi, giới tính của bệnh nhân đa u tuỷ xương trong nghiên cứu Đặc điểm Nam (n3) Nữ (n)

Tuổi trung bình trong nghiên cứu là 64,69 tuổi, với độ tuổi cao nhất là 89 và thấp nhất là 39 Nhóm tuổi phổ biến nhất là từ 60-69, chiếm 42,7% ở nam giới và 40,0% ở nữ giới Tỷ lệ giới tính nam/nữ là 1,14/1, tương ứng với 103 nam và 90 nữ.

Biểu đồ 3 1 Đặc điểm tuổi nhóm nghiên cứu

Nhận xét cho thấy rằng nhóm tuổi tăng sinh đa dòng có tỉ lệ thấp ở những người dưới 60 và trên 80 tuổi, trong khi nhóm tuổi 70 – 79 chiếm tỉ lệ cao nhất Đối với nhóm tuổi tăng sinh đơn dòng, tỉ lệ cũng thấp ở những người dưới 50 và trên 80 tuổi, với nhóm tuổi 60 - 69 là nhóm có tỉ lệ cao nhất.

3.1.2 Đặc điểm dấu ấn miễn dịch và tổ hợp dấu ấn miễn dịch ở bệnh nhân đa u tuỷ xương trong nghiên cứu

Bảng 3 2 Đặc điểm khác biệt CD45, CD38, CD138 ở nhóm đơn tăng sinh đơn dòng và tăng sinh đa dòng

Kết quả phân loại miễn dịch

CD45 CD 38 CD138 ÂM TÍNH

DƯƠNG TÍNH Đơn dòng 118 48 1 165 2 164 Đa dòng 0 27 0 27 0 27 p < 0,05 p > 0,05 p > 0,05

Dấu ấn CD45 thường âm tính ở bệnh nhân tăng sinh đơn dòng, trong khi dương tính ở bệnh nhân tăng sinh đa dòng Tất cả bệnh nhân tăng sinh đa dòng và đơn dòng đều biểu hiện dương tính với kháng nguyên CD38 và CD138 Sự khác biệt giữa CD45 và các kháng nguyên này có ý nghĩa thống kê với p < 0,05, trong khi không có sự khác biệt thống kê giữa CD38 và CD138.

Bảng 3 3 Đặc điểm khác biệt dấu ấn CD19, CD27, CD56, CD200 ở nhóm tăng sinh đơn dòng và nhóm tăng sinh đa dòng

Dấu ấn CD19 thường âm tính ở bệnh nhân tăng sinh đơn dòng nhưng dương tính ở bệnh nhân tăng sinh đa dòng CD27 và CD81 biểu hiện dương tính trên toàn bộ bệnh nhân tăng sinh đa dòng, trong khi ở bệnh nhân tăng sinh đơn dòng, chúng có cả biểu hiện âm tính và dương tính CD56 và CD200 dương tính ở bệnh nhân tăng sinh đơn dòng, nhưng CD200 âm tính ở một số bệnh nhân trong nhóm này Ngược lại, bệnh nhân tăng sinh đa dòng chủ yếu âm tính với CD200 và phần lớn âm tính với CD56 Sự khác biệt này có ý nghĩa thống kê với p < 0,05 đối với các dấu ấn CD19, CD27, CD81, CD200 và CD56.

Bảng 3 4 Đặc điểm khác biệt CD Kappa và CD Lambda ở nhóm tăng sinh đơn dòng và nhóm tăng sinh đa dòng

CD Kappa CD Lambda ÂM TÍNH DƯƠNG TÍNH ÂM TÍNH DƯƠNG TÍNH Đơn dòng 63 103 103 63 Đa dòng 27 0 27 0 p < 0,05 p < 0,05

CD19 CD 27 CD81 CD56 CD200 ÂM TÍNH DƯƠNG TÍNH ÂM TÍNH DƯƠNG TÍNH ÂM TÍNH DƯƠNG TÍNH ÂM TÍNH DƯƠNG TÍNH ÂM TÍNH DƯƠNG TÍNH Đơn dòng

Dấu ấn CD Kappa và CD Lambda cho thấy kết quả dương tính với một trong hai dấu ấn trong nhóm tăng sinh đơn dòng, trong khi đó lại âm tính với cả hai dấu ấn này ở nhóm tăng sinh đa dòng Sự khác biệt giữa hai nhóm là có ý nghĩa thống kê với P < 0,05 đối với CD Kappa và CD Lambda.

Bảng 3 5 Tỉ lệ biểu hiện các kháng nguyên CD trên hai nhóm

CD45 CD38 CD138 CD19 CD27 CD81 CD56 CD200 CD Lambda CD Kappa Đơn dòng (n6) Âm 71,1% 0,6% 1,2% 98,2% 55,4% 60,2% 12,0% 12,7% 62,1% 37,9%

Nhóm tăng sinh đơn dòng thể hiện kháng nguyên với tỉ lệ dương tính cao ở các CD như CD38, CD138, và CD56 (trên 80%), trong khi tỉ lệ dương tính với CD27, CD81, CD Lambda và CD Kappa thấp hơn (trên 30%) Đồng thời, nhóm này cũng có tỉ lệ biểu hiện âm tính cao với CD45 và CD19 (trên 70%), tiếp theo là CD27 và CD81 (trên 50%) Ngược lại, nhóm tăng sinh đa dòng cho thấy tỉ lệ biểu hiện dương tính cao với CD45, CD38, CD138, CD19, CD27 và CD81, nhưng lại có tỉ lệ âm tính cao với CD56, CD200, CD Lambda và CD Kappa.

Bảng 3 6 Các tổ hợp kiểu hình miễn dịch thu được từ nhóm tăng sinh đa dòng

CD45 CD38 CD138 CD19 CD27 CD81 CD56 CD200 Kappa Lambda TẦN SUẤT

Nhận xét: Kiểu hình đặc trưng nhất của nhóm tăng sinh đa dòng là: CD45+CD38+CD138+CD19+CD27+CD81+CD56-CD200-(85,2%)

Bảng 3 7 Các tổ hợp miễn dịch thu được từ nhóm tăng sinh đơn dòng

CD45 CD38 CD138 CD19 CD27 CD81 CD56 CD200 Kappa Lambda TẦN SUẤT

Kiểu hình miễn dịch của nhóm tăng sinh đơn dòng rất đa dạng và không có kiểu hình đặc trưng Kiểu hình thường gặp nhất trong nhóm tăng sinh đa dòng là CD45- CD38+ CD138+ CD19- CD27- CD81- CD56+ CD200+, chiếm tỷ lệ 22,3%.

Bảng 3 8 Tần suất phát hiện bất thường trong nhóm tăng sinh đơn dòng ở từng kháng nguyên

Bất thường CD Số mẫu phát hiện Tỉ lệ (%)

Tỉ lệ biểu hiện bất thường của các marker CD45, CD19, CD56 và CD200 cao nhất, vượt quá 70% Trong khi đó, các marker CD27, CD81, CD Kappa và CD Lambda có tỉ lệ biểu hiện bất thường thấp hơn Đặc biệt, CD38 và CD138, hai marker nhận diện tương bào, có tỉ lệ biểu hiện bất thường dưới 5% Nghiên cứu ghi nhận một trường hợp âm tính với CD138 nhưng vẫn dương tính với CD38, và không có trường hợp nào âm tính đồng thời với cả hai marker này.

Tồn lưu tối thiểu ở bệnh nhân đa u tuỷ xương trong nghiên cứu sau điều trị tấn công

3.2.1 Đặc điểm thông tin chung của bệnh nhân đa u tuỷ xương trong nghiên cứu sau điều trị tấn công

Bảng 3 9 Đặc điểm nhóm tuổi của bệnh nhân đa u tuỷ xương trong nghiên cứu sau điều trị tấn công Đặc điểm Nam (nY) Nữ (nC)

Nhận xét: Tuổi trung bình là 63,0 tuổi Nhỏ nhất là 39 tuổi Lớn nhất là 80 tuổi

Nhóm tuổi hay gặp nhất là 60-69 tuổi

Biểu đồ 3.2 Đặc điểm giới tính của bệnh nhân đa u tuỷ xương trong nghiên cứu sau điều trị tấn công

Nhận xét: Nam 57,8% Nữ 42,2% Tỷ lệ nam/nữ: 1,37/1 (59/43)

3.2.2 Đặc điểm dấu ấn miễn dịch và tổ hợp dấu ấn miễn dịch ở bệnh nhân đa u tuỷ xương trong nghiên cứu sau điều trị tấn công

Bảng 3 10 Đặc điểm tổ hợp kiểu hình miễn dịch của bệnh nhân đa u tuỷ xương trong nghiên cứu sau điều trị tấn công

Dấu ấn Tần suất nhóm kiểu hình

CD45 Âm Âm Âm Âm Âm

CD38 Dương Dương Dương Dương Dương

CD19 Âm Âm Âm Âm Âm

CD27 Âm Âm Dương Dương Âm

CD81 Âm Dương Dương Âm Âm

CD56 Dương Dương Dương Dương Âm

Nhận xét về kiểu hình miễn dịch trong nhóm tăng sinh đơn dòng cho thấy sự theo dõi sau ba đợt điều trị đa dạng Không có kiểu hình đặc trưng nào được xác định, trong khi kiểu hình phổ biến nhất ở nhóm tăng sinh đa dòng là CD45-CD38+CD138+CD19-CD27-CD81-CD56+CD200+ với tỷ lệ 23,5%.

Biểu đồ 3.3 Đặc điểm biểu hiện các dấu ấn miễn dịch ở bệnh nhân đa u tuỷ xương trong nghiên cứu sau điều trị tấn công

Nhận xét cho thấy nhóm bệnh nhân theo dõi sau điều trị có tỉ lệ dương tính cao với các CD như CD38, CD138, CD56, CD200 (trên 80%), trong khi tỉ lệ dương tính thấp hơn được ghi nhận ở CD27, CD81, CD45 (trên 30%) Đặc biệt, nhóm bệnh nhân này có tỉ lệ biểu hiện âm tính cao với CD19 (100%), tiếp theo là CD45, CD27 và CD81 (trên 50%).

3.2.3 Tồn lưu tối thiểu ở bệnh nhân đa u tuỷ xương trong nghiên cứu sau điều trị tấn công

Bảng 3 11 Phân nhóm MRD sau chu kỳ 3 điều trị bệnh nhân đa u tuỷ xương trong nghiên cứu

Trong nhóm đối tượng theo dõi MRD, 15,7% bệnh nhân đạt được sự lui bệnh hoàn toàn về mặt miễn dịch với MRD < 0,01% Trong khi đó, 84,3% bệnh nhân còn lại có tỷ lệ tế bào ác tính nhất định, với 41,3% thuộc nhóm nguy cơ tái phát thấp (0,01% ≤ MRD < 0,1%), 21,5% thuộc nhóm nguy cơ tái phát trung bình (0,1% ≤ MRD < 1%), và 21,5% bệnh nhân thuộc nhóm nguy cơ tái phát cao (MRD ≥ 1%).

Bảng 3 12 Số lượng các LAIP theo dõi MRD của bệnh nhân trong nghiên cứu

Trong nghiên cứu theo dõi tồn lưu tối thiểu cho 102 bệnh nhân đa u tủy xương, số lượng dấu ấn miễn dịch được sử dụng chủ yếu là 8 dấu ấn, chiếm 37,2% Tiếp theo là 7 dấu ấn miễn dịch với tỷ lệ 24,3%, 6 dấu ấn là 17,1%, 5 dấu ấn là 15,7%, và 4 dấu ấn miễn dịch chỉ chiếm 5,7% Đặc biệt, không có bệnh nhân nào được theo dõi với số lượng dấu ấn miễn dịch dưới 4.

Bảng 3 13 Bảng giá trị theo dõi MRD của bệnh nhân trong nghiên cứu sau 3 đợt điều trị

Nhận xét: Tỉ lệ MRD âm tính sau chu kì 3 đợt điều trị là 15,7% và dương tính là

BÀN LUẬN

Đặc điểm chung của nhóm đối tượng nghiên cứu

Từ tháng 1 năm 2021 đến tháng 3 năm 2022, Viện Huyết học – Truyền máu Trung ương đã ghi nhận 193 bệnh nhân mới được chẩn đoán mắc bệnh đa u tủy xương.

Viện Huyết học – Truyền máu Trung ương hiện đang áp dụng kỹ thuật đếm tế bào dòng chảy bằng hệ thống Navios 10 màu huỳnh quang của Beckman Coulter để phân tích dấu ấn miễn dịch và đánh giá sự tồn lưu tế bào ác tính ở bệnh nhân đa u tủy xương Nghiên cứu sử dụng mẫu tủy của bệnh nhân để thực hiện kỹ thuật này, nhằm xác định các kiểu hình dấu ấn miễn dịch bất thường dựa trên 5 phương thức chính đã được trình bày trong phần tổng quan tài liệu của chương 1.

4.1.1 Tuổi trung bình và giới tính

Trong nghiên cứu của chúng tôi, tuổi trung bình của bệnh nhân mới được chẩn đoán đa u tủy xương là 64,69 tuổi, với độ tuổi dao động từ 39 đến 89 Chỉ có 6,8% nam và 5,6% nữ bệnh nhân dưới 50 tuổi, phần lớn đều trên 50 tuổi Kết quả này tương đồng với các nghiên cứu trong nước và quốc tế về đặc điểm tiến triển của bệnh Theo nghiên cứu của Bạch Quốc Khánh năm 2014, 57,2% bệnh nhân đa u tủy xương được chẩn đoán ở độ tuổi trên 50 Nghiên cứu của Thái Minh Trung năm 2019 ghi nhận tuổi trung bình của 75 bệnh nhân là 58,1 tuổi, thấp hơn so với nghiên cứu của chúng tôi Nghiên cứu của Jun Lu và cộng sự năm 2020 cũng cho thấy tuổi trung bình là 65,1 tuổi, với khoảng tuổi từ 32 đến 96.

Nghiên cứu của tác giả Jun Ju chỉ ra rằng tuổi thấp nhất được chẩn đoán mắc bệnh đa u tủy xương thấp hơn, trong khi tuổi cao nhất lại cao hơn so với kết quả nghiên cứu của chúng tôi.

Tỉ lệ nam : nữ trong nhóm bệnh nhân chẩn đoán mới của nghiên cứu là 1,14 : 1, cho thấy tỉ lệ nam cao hơn nữ Nhiều nghiên cứu khác cũng ghi nhận tỉ lệ nam cao hơn, như nghiên cứu của Jun Ju với tỉ lệ 1,44 : 1, cao hơn so với nghiên cứu này Ngược lại, trong nghiên cứu của tác giả Thái Minh Trung, tỉ lệ nam : nữ chỉ là 0,9 : 1, thấp hơn so với kết quả của chúng tôi.

4.1.2 Đặc điểm dấu ấn miễn dịch và tổ hợp dấu ấn miễn dịch bệnh nhân đa u tủy xương trong nghiên cứu

Kháng nguyên CD45 là dấu hiệu chung của bạch cầu người, xuất hiện trên tất cả tế bào bạch cầu trưởng thành Tương bào bình thường, là giai đoạn biệt hóa tiếp theo của tế bào lympho trưởng thành, thể hiện CD45 dương tính và thực hiện chức năng miễn dịch Trong nghiên cứu, CD45 dương tính được ghi nhận trong các trường hợp tăng sinh tương bào đa dòng, trong khi hầu hết các trường hợp tăng sinh tương bào đơn dòng ác tính có CD45 âm tính hoặc dương tính yếu Điều này cho thấy sự khác biệt giữa tăng sinh tương bào bình thường và bệnh lý, với tế bào tương bào trong tăng sinh đơn dòng thường mất hoặc giảm biểu hiện CD45 Mức độ biểu hiện kháng nguyên CD45 là yếu tố quan trọng để phân biệt giữa tương bào bình thường và tương bào bệnh lý.

Kháng nguyên CD38 được biểu hiện cao hơn bình thường ở tế bào tương bào so với các loại tế bạch cầu khác, trong khi kháng thể CD38 chỉ được sử dụng để xác định tế bào tương bào mà không phân biệt giữa tương bào đa dòng và đơn dòng CD138 là dấu ấn đặc trưng của tế bào tương bào, bao gồm cả loại tăng sinh đa dòng và đơn dòng Nghiên cứu của Thái Minh Trung tại bệnh viện Chợ Rẫy năm 2019 cho thấy tỷ lệ CD38 và CD138 dương tính đạt 100% trong 75 bệnh nhân tăng sinh đơn dòng, trong khi tỷ lệ âm tính với CD45 là 82,7% Nghiên cứu của chúng tôi ghi nhận tỷ lệ dương tính với CD38, CD138 và tỷ lệ âm tính với CD45 lần lượt là 99,4%, 98,8% và 71,1% ở nhóm tương bào đơn dòng Tác giả Jun Ju năm 2020 cũng báo cáo tỷ lệ dương tính với CD38 và CD138 là 100% cùng tỷ lệ âm tính với CD45 là 97% Kết quả nghiên cứu của Pei Lin năm 2004 cho thấy tỷ lệ CD38, CD138 và CD45 lần lượt là 100%, 100% và 82,4% Không có trường hợp nào trong các nghiên cứu của Jun Ju, Thái Minh Trung và Pei Lin âm tính với cả CD38 và CD138, trong khi tỷ lệ CD45 âm tính cao hơn so với nghiên cứu của chúng tôi Chúng tôi ghi nhận một trường hợp âm tính với CD38 và hai trường hợp âm tính với CD138, nhưng không có trường hợp nào âm tính đồng thời với cả hai CD.

Nhóm tế bào tăng sinh đa dòng cho thấy 100% dương tính với các kháng nguyên CD38, CD138 và CD45, điều này phù hợp với đặc điểm biểu hiện của tế bào lympho B trong quá trình biệt hóa thành tế bào tương bào Nhiều nghiên cứu trên thế giới cũng xác nhận rằng CD45, CD38 và CD138 đều dương tính 100% trong các trường hợp tăng sinh đa dòng.

❖ Đặc điểm biểu hiện kháng nguyên CD19, CD27, CD81, CD56 và CD200 trong nghiên cứu

Kháng nguyên CD19, đặc hiệu cho dòng lympho B, được biểu hiện trong tất cả các giai đoạn phát triển của tế bào này, từ tiền lympho B đến tương bào Trong quá trình phát triển bình thường, CD19 luôn dương tính, đặc biệt trong các trường hợp tăng sinh tương bào thực hiện chức năng miễn dịch Việc mất biểu hiện CD19 trên tế bào tương bào là dấu hiệu quan trọng để đánh giá sự bất thường của chúng Nghiên cứu cho thấy CD19 dương tính 100% trong tăng sinh tương bào đa dòng, trong khi ở tăng sinh tương bào đơn dòng, CD19 có thể âm tính hoặc dương tính yếu, với một số ít trường hợp vẫn duy trì biểu hiện CD19 nhưng mất biểu hiện CD45.

Kháng nguyên CD19 kết hợp với CD56 giúp phân biệt giữa tương bào đa dòng và đơn dòng, với tương bào đa dòng có biểu hiện CD19+/CD56- và tương bào đơn dòng là CD19-/CD56+ Nghiên cứu của tác giả Quan Qui tại Đại học Bắc Kinh từ năm 2011 đến 2015 cho thấy 83% bệnh nhân tăng sinh đơn dòng không có biểu hiện kháng nguyên CD19 Tuy nhiên, trong nhóm bệnh nhân tăng sinh đơn dòng của chúng tôi, tỷ lệ âm tính với CD19 đạt 98%, cao hơn so với kết quả của Quan Qui vào năm 2016.

Kháng nguyên CD27 đóng vai trò quan trọng trong việc biệt hóa tế bào lympho B thành tế bào tương bào, thực hiện chức năng đáp ứng miễn dịch CD27 xuất hiện trên tế bào lympho B trưởng thành và biểu hiện dương tính đồng nhất trên tế bào tương bào trong tăng sinh đa dòng, nhưng không đồng nhất trong tăng sinh đơn dòng Sự hiện diện của CD27 được coi là yếu tố tiên lượng tốt trong điều trị bệnh đa u tủy xương, với 100% trường hợp tăng sinh đa dòng biểu hiện CD27 dương tính, trong khi chỉ 44,6% trường hợp tăng sinh đơn dòng có biểu hiện này Nghiên cứu của tác giả Hui Wang năm 2017 cho thấy mức độ biểu hiện CD27 lần lượt là 48% cho tăng sinh đơn dòng và 100% cho tăng sinh đa dòng, kết quả này tương đồng với nghiên cứu của chúng tôi.

Kháng nguyên CD81 thể hiện rõ ràng trên tế bào lympho và tế bào tương bào, đóng vai trò điều chỉnh mức độ biểu hiện của kháng nguyên CD19 trên tế bào lympho B Tuy nhiên, CD81 ít xuất hiện trên tế bào tương bào ác tính và sự hiện diện của nó thường liên quan đến tiên lượng xấu trong đa u tủy xương Nghiên cứu hiện tại không đánh giá giá trị tiên lượng của CD81 mà chỉ tập trung vào mức độ biểu hiện trong các trường hợp bệnh nhân tăng sinh tương bào đa dòng và đơn dòng do thời gian nghiên cứu hạn chế Kết quả cho thấy có sự khác biệt đáng kể khi CD81 dương tính 100% ở các trường hợp tăng sinh đa dòng, trong khi chỉ có 39,8% trường hợp tăng sinh đơn dòng có biểu hiện kháng nguyên này Nghiên cứu của B Paiva và cộng sự năm 2012 cho thấy 230 bệnh nhân tăng sinh đơn dòng có tỷ lệ dương tính với CD81.

45% (52) Trong nghiên cứu của chúng tôi CD81 được biểu hiện thấp hơn với tỉ lệ xấp xỉ 40%

Kháng nguyên CD56 là đặc điểm nhận diện tế bào Natural Killer (NK) và thường không có mặt trên các tế bào lympho Trong trường hợp tăng sinh đa dòng, CD56 thường không biểu hiện, trong khi ở bệnh nhân với tăng sinh đơn dòng, kháng nguyên này lại phổ biến Ngoài ra, CD56 cũng dương tính trên các tế bào tương bào bình thường khi chúng được kích thích và hoạt hóa.

Kháng nguyên CD56 được coi là yếu tố chẩn đoán quan trọng cho bệnh đa u tủy xương khi kết hợp với CD19 Tế bào tương bào bình thường có biểu hiện CD19+/CD56-, trong khi tế bào tương bào hoạt hóa có CD19+/CD56+ và tế bào tương bào bệnh lý có thể là CD19-/CD56+ hoặc CD19-/CD56- Trong nhóm tăng sinh tương bào đa dòng, có 14,8% trường hợp biểu hiện CD19+/CD56+ Nghiên cứu của Benjamin Van năm 1990 cho thấy 13% nhóm không tăng sinh đơn dòng có biểu hiện yếu với CD56, và 78% trong số 55 bệnh nhân tăng sinh tương bào đơn dòng có CD56 Nghiên cứu của chúng tôi cho thấy tỷ lệ dương tính với CD56 ở cả nhóm tăng sinh đơn dòng và đa dòng cao hơn so với nghiên cứu của Benjamin Van, có thể do quy mô nghiên cứu lớn hơn và chủng tộc khác nhau CD200, một kháng nguyên thuộc họ globulin miễn dịch, không có mặt trên tế bào tương bào tăng sinh đa dòng và được biết đến với biểu hiện mạnh trên tế bào tăng sinh mãn tính của dòng lympho B và tế bào tương bào ác tính Kết quả nghiên cứu cho thấy 100% trường hợp tăng sinh đa dòng không có biểu hiện CD200, trong khi phần lớn trường hợp tăng sinh đơn dòng có biểu hiện này, cho thấy CD200 là yếu tố phân biệt quan trọng giữa tương bào lành tính và ác tính CD200 không thay đổi sau điều trị, vì vậy có thể được coi là dấu ấn miễn dịch tiềm năng để theo dõi MRD ở bệnh nhân đa u tủy xương sau điều trị.

(54) Theo nghiên cứu Moreaux J năm 2006 và công sự tỉ lệ biểu hiện kháng nguyên CD200 trên 112 bệnh nhân tăng sinh đơn dòng là 78% (55) Tác giả Pooja Shah năm

Năm 2021, tỷ lệ có mặt kháng nguyên CD200 trong 120 bệnh nhân tăng sinh đơn dòng là 75% Nghiên cứu của chúng tôi cho thấy tỷ lệ biểu hiện CD200 trong các trường hợp tăng sinh đơn dòng đạt 87%, cao hơn so với tỷ lệ của hai tác giả trước đó.

❖ Đặc điểm biểu hiện kháng nguyên CD Kappa và CD Lambda trong nghiên cứu

Tồn lưu tối thiểu ở bệnh nhân tăng sinh tương bào đơn dòng trong nghiên cứu

4.2.1 Đặc điểm thông tin chung của bệnh nhân tăng sinh tương bào đơn dòng trong nghiên cứu sau 3 đợt điều trị

Nghiên cứu theo dõi sự tồn lưu tối thiểu của bệnh nhân tăng sinh tương bào đơn dòng sau 3 đợt điều trị tại Viện Huyết học – Truyền máu trung ương Mẫu được lấy để kiểm tra số lượng tương bào còn lại trong tủy xương sau điều trị, sử dụng kỹ thuật đếm tế bào dòng chảy.

Trong nghiên cứu tại Viện Huyết học – Truyền máu Trung ương, từ tháng 1 năm 2021 đến tháng 3 năm 2022, có 102 bệnh nhân được theo dõi tồn lưu tối thiểu bằng kỹ thuật đếm tế bào dòng chảy sau 3 đợt điều trị Kết quả cho thấy số lượng bệnh nhân giảm gần một nửa, đạt tỷ lệ 38,6% so với thời điểm mới chẩn đoán.

Trong nghiên cứu với 166 bệnh nhân, một số hạn chế đã xuất hiện trong việc thực hiện các bài kiểm tra thống kê, dẫn đến một số kết quả chỉ mang tính chất mô tả Sự giảm số lượng bệnh nhân có thể được giải thích bởi một số lý do nhất định.

- Bệnh nhân không có khả năng tham gia điều trị đặc hiệu do chi phí cao

- Tại thời điểm nghiên cứu bệnh nhân chưa đủ thời gian điều trị 3 đợt

Tuổi trung bình của nhóm bệnh nhân theo dõi sau 3 đợt điều trị là 63,0 tuổi, với độ tuổi nhỏ nhất là 39 và lớn nhất là 80 Nhóm tuổi phổ biến nhất trong nhóm theo dõi sau điều trị là từ 60-69 Bệnh nhân tham gia điều trị tấn công thường có tuổi thấp hơn so với bệnh nhân mới, do những người lớn tuổi thường không tham gia điều trị này Bệnh lý đa u tủy xương có thể thực hiện ghép tế bào gốc tự thân cho những bệnh nhân có sức khỏe tốt và tuổi dưới 70 Do đó, nhóm bệnh nhân theo dõi MRD sau điều trị chủ yếu nằm trong độ tuổi từ 50 đến dưới 70, đây cũng là nhóm tuổi phổ biến nhất ở bệnh nhân đa u tủy xương.

Tỉ lệ nam : nữ trong nhóm theo dõi sau ba đợt điều trị tăng lên so với nhóm bệnh nhân đa u tủy xương tại thời điểm chẩn đoán, điều này phù hợp với nhiều nghiên cứu quốc tế về bệnh lý này Cụ thể, nghiên cứu của Medina năm 2020 cho thấy tỉ lệ nam : nữ là 1,38 : 1 trong số 106 bệnh nhân, trong khi nghiên cứu của Sanoja – Flores L năm 2018 ghi nhận tỉ lệ nam cao hơn nữ với 264 bệnh nhân.

đợt điều trị

Đặc điểm thông tin chung của bệnh nhân tăng sinh tương bào đơn dòng trong nghiên cứu sau 3 đợt điều trị

Nghiên cứu theo dõi tình trạng tồn lưu tối thiểu của bệnh nhân tăng sinh tương bào đơn dòng sau 3 đợt điều trị theo hướng dẫn tại Viện Huyết học – Truyền máu Trung ương Mẫu được lấy để kiểm tra số lượng tương bào còn lại trong tủy xương sau quá trình điều trị, sử dụng kỹ thuật đếm tế bào dòng chảy.

Trong nghiên cứu tại Viện Huyết học – Truyền máu Trung ương, từ tháng 1 năm 2021 đến tháng 3 năm 2022, có 102 bệnh nhân được theo dõi tồn lưu tối thiểu bằng kỹ thuật đếm tế bào dòng chảy sau 3 đợt điều trị Kết quả cho thấy số lượng bệnh nhân đã giảm gần một nửa, đạt tỷ lệ 38,6% so với thời điểm mới chẩn đoán.

Trong nghiên cứu với 166 bệnh nhân, số lượng bệnh nhân giảm do một số lý do, dẫn đến hạn chế trong việc thực hiện các bài kiểm tra thống kê Do đó, một số kết quả chỉ có giá trị mô tả.

- Bệnh nhân không có khả năng tham gia điều trị đặc hiệu do chi phí cao

- Tại thời điểm nghiên cứu bệnh nhân chưa đủ thời gian điều trị 3 đợt

Tuổi trung bình của nhóm bệnh nhân theo dõi sau 3 đợt điều trị là 63,0 tuổi, với độ tuổi nhỏ nhất là 39 và lớn nhất là 80 Nhóm tuổi 60-69 chiếm tỷ lệ cao nhất trong số bệnh nhân theo dõi sau điều trị Bệnh nhân tham gia điều trị tấn công thường có tuổi trung bình thấp hơn do những người lớn tuổi thường không tham gia Đối với bệnh lý đa u tủy xương, việc ghép tế bào gốc tự thân có thể thực hiện nếu bệnh nhân có sức khỏe tốt và dưới 70 tuổi, dẫn đến nhóm bệnh nhân theo dõi MRD chủ yếu nằm trong độ tuổi từ 50 đến dưới 70, đây cũng là nhóm tuổi phổ biến nhất ở bệnh nhân đa u tủy xương.

Tỉ lệ nam : nữ trong nhóm theo dõi sau chu kỳ 3 đợt điều trị đã tăng lên so với nhóm bệnh nhân đa u tủy xương tại thời điểm chẩn đoán Kết quả này nhất quán với nhiều nghiên cứu quốc tế về bệnh lý đa u tủy xương Cụ thể, nghiên cứu của Medina năm 2020 cho thấy tỉ lệ nam : nữ là 1,38 : 1 trong số 106 bệnh nhân Tương tự, nghiên cứu của Sanoja – Flores L năm 2018 cũng ghi nhận tỉ lệ nam cao hơn nữ trong nhóm 264 bệnh nhân.

Đặc điểm dấu ấn miễn dịch và tổ hợp dấu ấn miễn dịch trong nghiên cứu sau 3 đợt điều trị

Khảo sát về kiểu hình miễn dịch trên 102 mẫu bệnh nhân đa u tủy xương theo dõi MRD sau 3 đợt điều trị cho thấy sự đa dạng trong kiểu hình của nhóm Trong số đó, kiểu hình có tần suất cao nhất là CD45- CD38+ CD138+ CD19- CD27- CD81- CD56+ CD200+ với tỉ lệ đạt 23,5% Tỉ lệ dương tính của CD38 và CD138 là 100%, trong khi CD56 đạt 99% và CD200 là 88,2%.

Tỉ lệ âm tính của CD45 là 65,7%, trong khi CD19 đạt 100% Không có bệnh nhân nào trong nhóm theo dõi MRD sau điều trị biểu hiện âm tính với CD38 và CD138 Biểu hiện kháng nguyên CD19 trên quần thể tương bào ác tính sau 3 đợt điều trị vẫn giữ nguyên âm tính như giai đoạn chẩn đoán ban đầu Tỉ lệ biểu hiện kháng nguyên CD45 âm tính đã giảm so với giai đoạn chẩn đoán, cho thấy sự thay đổi giữa trước và sau điều trị Mức độ biểu hiện của CD56 và CD200 đã tăng dương tính so với thời điểm chẩn đoán Ngoại trừ kháng nguyên CD19 giữ nguyên mức biểu hiện, các kháng nguyên khác trong bộ 8 kháng nguyên theo dõi MRD đều có sự thay đổi mức độ biểu hiện.

Chẩn đoán ban đầu và sau khi điều trị 3 đợt là hai thời điểm quan trọng trong việc theo dõi MRD bằng kỹ thuật đếm tế bào dòng chảy Kỹ thuật này xác định tồn lưu tối thiểu bệnh dựa trên biểu hiện bất thường của các kháng nguyên khi chẩn đoán Sau điều trị, số lượng tế bào ung thư với các đặc điểm kháng nguyên bất thường giảm nhanh và có thể thay đổi mức độ biểu hiện so với thời điểm chẩn đoán Máy đếm tế bào dòng chảy thế hệ trước, với số kênh màu hạn chế, yêu cầu nhiều ống và nhiều CD trùng lặp, dẫn đến chi phí xét nghiệm cao và độ chính xác không cao do sai số tế bào Hiện nay, máy Navios 10 màu có khả năng tăng độ chính xác của giá trị MRD khi theo dõi cùng số lượng kháng nguyên trong một ống xét nghiệm Giá trị MRD vẫn được đảm bảo nếu có 1, 2 hoặc 3 kháng nguyên có mức độ biểu hiện thay đổi giữa trước và sau điều trị.

Nghiên cứu của Nghiêm Lý Thanh Thảo năm 2020 tại bệnh viện Chợ Rẫy, TP Hồ Chí Minh với 54 trường hợp cho thấy kiểu hình miễn dịch CD45-CD38+CD138+CD19-CD56+ tương tự như kết quả nghiên cứu của chúng tôi Kiểu hình này được nhiều nghiên cứu đánh giá MRD lựa chọn để theo dõi sau các phác đồ điều trị khác nhau, bao gồm cả ghép tế bào gốc tự thân và đồng loài Tác giả Rupta R năm 2009 cũng ghi nhận kiểu hình miễn dịch CD45-CD38+CD138+CD19-CD56+ ở bệnh nhân đa u tủy xương sau điều trị, với 23 trường hợp có sự thay đổi kiểu hình trước và sau điều trị.

4.2.3 Tồn lưu tối thiểu ở bệnh nhân đa u tủy xương trong nghiên cứu sau 3 đợt điều trị tấn công

❖ Đặc điểm MRD sau 3 đợt điều trị

Trong nghiên cứu của chúng tôi, bệnh nhân được đánh giá MRD bằng kỹ thuật đếm tế bào dòng chảy sau 3 đợt điều trị tấn công, với phần lớn đạt lui bệnh hoàn toàn về mặt hình thái học Kết quả cho thấy giá trị MRD sau điều trị của bệnh nhân đa u tủy xương giảm mạnh so với thời điểm chẩn đoán, mặc dù tỷ lệ MRD ≥ 1% vẫn còn cao Thời điểm đánh giá MRD sau giai đoạn điều trị tấn công được chọn vì đây là yếu tố tiên lượng mạnh nhất trong bệnh lý huyết học, đặc biệt là đa u tủy xương Sau 3 đợt điều trị, có thể đánh giá khả năng đáp ứng của bệnh nhân với phác đồ điều trị; nếu đáp ứng tốt, bệnh nhân sẽ tiếp tục phác đồ hiện tại hoặc chuyển sang ghép tế bào gốc tự thân Ngược lại, nếu đáp ứng không tốt, bệnh nhân sẽ được đổi phác đồ nhằm nâng cao hiệu quả điều trị.

Theo nghiên cứu của tác giả Rawstron AC và cộng sự, thời gian sống không tái phát của bệnh nhân sau giai đoạn tấn công có mức MRD < 0,01% là 7,5 năm, trong khi MRD từ 0,01% đến 0,1% có thời gian sống không tái phát là 6,8 năm Bệnh nhân với MRD từ 0,1% đến 1% có thời gian sống không tái phát là 5,9 năm, và nếu MRD nằm trong khoảng từ 1% đến 10%, thời gian tái phát giảm xuống còn 4 năm Đối với những bệnh nhân có MRD trên 10%, thời gian tái phát chỉ còn 1 năm Điều này cho thấy MRD sau giai đoạn tấn công có ý nghĩa quan trọng trong việc tiên lượng thời gian sống còn của bệnh nhân.

Nghiên cứu của chúng tôi đã phân loại mức MRD thành 4 nhóm dựa trên giá trị MRD, với kết quả được trình bày trong Bảng 3.10 Cụ thể, 15,7% bệnh nhân đạt được lui bệnh hoàn toàn về mặt miễn dịch (MRD < 0,01%), trong khi hơn 84,3% bệnh nhân còn lại vẫn có một tỷ lệ tế bào ác tính nhất định dù đã lui bệnh hoàn toàn về mặt hình thái học Trong đó, 41,3% bệnh nhân thuộc nhóm nguy cơ tái phát thấp (0,01% ≤ MRD < 0,1%), 21,5% thuộc nhóm nguy cơ tái phát trung bình (0,1% ≤ MRD < 1%), và nhóm nguy cơ tái phát cao cũng chiếm 21,5% (MRD ≥ 1%) Kết quả này cho thấy tỷ lệ lui bệnh hoàn toàn về mặt miễn dịch còn thấp và tỷ lệ có nguy cơ tái phát ở mức cao.

Theo dõi tồn lưu tối thiểu (MRD) trong bệnh đa u tủy xương đóng vai trò quan trọng trong diễn tiến bệnh MRD âm tính liên quan mật thiết đến tiên lượng sống sót của bệnh nhân, cho thấy thời gian tiến triển khối u lâu hơn và thời gian sống thêm dài hơn so với bệnh nhân có MRD dương tính.

(60) Trong nghiên cứu của Joaquin Martinez-Lopez và cộng sự năm 2014 theo dõi

Trong một nghiên cứu trên 133 bệnh nhân, 92% bệnh nhân có MRD dương tính cho thấy tình trạng lui bệnh một phần, trong khi thời gian sống thêm của bệnh nhân MRD âm tính lên tới 131 tháng, so với 31 tháng ở bệnh nhân MRD dương tính Tỉ lệ bệnh nhân có MRD âm tính đạt 15,7%, trong khi 84,3% có MRD dương tính Nghiên cứu của Praveen Sharma năm 2021 trên 62 bệnh nhân sau ghép tế bào gốc tự thân 100 ngày cho thấy giá trị MRD âm tính là 55% Tương tự, nghiên cứu của Rawstron năm 2015 với 397 bệnh nhân đa u tủy xương cũng ghi nhận giá trị MRD âm tính là 62,2% Sự khác biệt về giá trị MRD giữa các nghiên cứu có thể do thời điểm đánh giá khác nhau Chỉ những bệnh nhân đáp ứng điều trị hoàn toàn hoặc một phần và có tình trạng sức khỏe tốt mới được chỉ định ghép tế bào gốc tự thân, dẫn đến giá trị MRD âm tính thường cao.

❖ Đặc điểm biểu hiện LAIP ở bệnh nhân đa u tủy xương theo dõi sau điều trị trong nghiên cứu

LAIP được xác định qua 5 phương thức trong bệnh lý huyết học, đặc biệt là đa u tủy xương: (1) Tế bào Blast biểu hiện CD45-; (2) Biểu hiện kháng nguyên không đồng bộ; (3) Biểu hiện kháng nguyên khác dòng; (4) Biểu hiện quá mức một kháng nguyên; (5) Vắng mặt kháng nguyên đặc hiệu Trong nghiên cứu theo dõi MRD sau 3 đợt điều trị cho bệnh nhân đa u tủy xương, kiểu LAIP được xác định qua sự kết hợp các phương thức như CD45-, mất biểu hiện CD19 hoặc CD27 và/hoặc CD81, cùng với biểu hiện quá mức của CD200 và/hoặc CD56 Quần thể tương bào ác tính sẽ được đánh giá mức độ biểu hiện bất thường với 6 kháng nguyên CD: CD45, CD19, CD56, CD200, CD27, và CD81.

❖ Số lượng LAIP ở bệnh nhân đa u tủy xương trong nghiên cứu

Theo nghiên cứu của chúng tôi, 100% bệnh nhân được theo dõi MRD sau điều trị có ít nhất 4 LAIP Số lượng LAIP cao nhất ghi nhận là 8, tiếp theo là 7, 6 và 5 LAIP.

Trong nghiên cứu về theo dõi MRD, nhóm bệnh nhân sử dụng 4 LAIP chỉ có 2 kháng nguyên biểu hiện bất thường, trong khi 4 kháng nguyên còn lại bình thường, thường theo dõi bằng CD38+, C138+, CD45- và CD19- Nhóm 5 LAIP có thêm 3 kháng nguyên bất thường, bao gồm CD56+, trong khi nhóm 6 LAIP thể hiện CD200 dương tính bất thường Nhóm 7 LAIP ghi nhận sự bất thường của CD27 hoặc CD81, và nhóm 8 LAIP có cả hai kháng nguyên CD27 và CD81 bất thường Việc theo dõi MRD với nhiều kháng nguyên bất thường giúp tăng độ chính xác trong đánh giá quần thể tương bào ác tính Một số bệnh nhân chỉ có thể theo dõi bằng 4 hoặc 5 LAIP do sự hạn chế ngay từ lúc chẩn đoán hoặc thay đổi sau điều trị, với một số trường hợp có kháng nguyên trở lại bình thường sau khi từng biểu hiện bất thường ở giai đoạn chẩn đoán.

Nghiên cứu cho thấy việc đánh giá MRD sau điều trị thường sử dụng 5 loại kháng nguyên CD38+, CD138+, CD45-, CD19-, CD56+ với 6 hoặc 8 màu huỳnh quang qua 2 ống xét nghiệm Để giảm sai số trong giá trị MRD, cần có sự trùng lặp của 3 hoặc 4 CD như CD45, CD19, CD38 và CD138 Sự trùng lặp này giúp tăng độ chính xác của MRD, đặc biệt quan trọng khi theo dõi sau điều trị khi số lượng tế bào ác tính rất thấp Tuy nhiên, sự khác biệt về kháng nguyên giữa 2 ống xét nghiệm có thể dẫn đến sai số tăng cao Hơn nữa, việc sử dụng nhiều ống xét nghiệm làm gia tăng chi phí mà hiệu quả không đáng kể Do đó, xu hướng hiện nay là theo dõi MRD chỉ bằng 1 ống xét nghiệm với nhiều màu huỳnh quang hơn, giúp giảm chi phí và tăng tính chính xác trong việc xác định tế bào ung thư còn sót lại sau điều trị.

Tế bào ác tính được xác định qua 8 CD tại thời điểm chẩn đoán, yêu cầu biểu hiện đầy đủ 8 đặc điểm kiểu hình trước khi điều trị Kiểu hình bệnh lý đa u tủy xương rất đa dạng, dẫn đến việc theo dõi MRD dưới 8 CD trong nhiều trường hợp Việc theo dõi MRD bằng 1 ống 8 CD giúp nhận diện sự thay đổi kháng nguyên sau điều trị Dù kháng nguyên bất thường có thay đổi, giá trị MRD vẫn đảm bảo độ chính xác.

Bàn luận về hạn chế của nghiên cứu

Để xác định mối liên hệ giữa giá trị MRD và thời gian tái phát ở bệnh nhân, cần thực hiện nghiên cứu dài hạn qua nhiều chu kỳ điều trị Hiện tại, nghiên cứu này chưa thể đánh giá sự liên quan giữa khả năng tái phát và giá trị MRD sau khi điều trị.

Nghiên cứu được thực hiện trong 15 tháng không thể đánh giá mối tương quan giữa MRD âm tính và MRD dương tính với thời gian sống thêm của các đối tượng tham gia.

Nghiên cứu hiện tại chưa xác định được mối liên hệ giữa phác đồ điều trị và giá trị MRD theo dõi, nhưng đã cung cấp thông tin quan trọng về mức độ lui bệnh, giúp bác sĩ lâm sàng điều chỉnh phác đồ điều trị phù hợp cho bệnh nhân.

Tiêu đề	Đánh Giá Tồn Lưu Tối Thiểu Bệnh Bằng Phương Pháp Đếm Tế Bào Dòng Chảy Thế Hệ Mới Trên Người Bệnh Đa U Tuỷ Xương Tại Viện Huyết Học - Truyền Máu Trung Ương
Tác giả	Lê Thị Hồng Nhung
Người hướng dẫn	PGS.TS. Lê Xuân Hải, Ths. Nguyễn Thị Thu Hà
Trường học	Đại học Y tế Công cộng
Chuyên ngành	Kỹ thuật xét nghiệm y học
Thể loại	luận văn thạc sĩ
Năm xuất bản	2023
Thành phố	Hà Nội

Định dạng
Số trang	87
Dung lượng	2,09 MB