Nghiên cứu đột biến gen, lâm sàng và điều trị bệnh đái tháo đường sơ sinh

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI CẤN THỊ BÍCH NGỌC ận Lu án NGHIÊN CỨU ĐỘT BIẾN GEN, n tiế LÂM SÀNG VÀ ĐIỀU TRỊ BỆNH sĩ ĐÁI THÁO ĐƢỜNG SƠ SINH Y c họ LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI, 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI CẤN THỊ BÍCH NGỌC ận Lu NGHIÊN CỨU ĐỘT BIẾN GEN, LÂM SÀNG VÀ ĐIỀU TRỊ BỆNH án n tiế ĐÁI THÁO ĐƢỜNG SƠ SINH sĩ Y Chuyên ngành : Nhi khoa họ Mã số : 62720135 c LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Thị Hoàn HÀ NỘI, 2017 LỜI CẢM ƠN ận Lu Trước hết, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc Phó Giáo sư, Tiến sỹ Nguyễn Thị Hồn, người thầy tận tụy dạy dỗ, hướng dẫn, động viên thời gian học tập nghiên cứu để hồn thành luận án Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới Tiến sỹ, bác sỹ Vũ Chí Dũng, trưởng khoa Nội tiết – Chuyển hóa – Di truyền, người thầy, người lãnh đạo ln tận tình bảo, hướng dẫn, động viên tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành luận án Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn Ban Giám hiệu Trường Đại học Y Hà Nội, Thầy, Cô Bộ môn Nhi, Thầy, Cô cán nhân viên Phòng quản lý Đào tạo Sau Đại học Trường Đại học Y Hà Nội giúp đỡ tận tình dành cho tơi động viên q báu q trình làm luận án Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn Ban Giám đốc Bệnh viện Nhi Trung ương, Thầy, Cô, đồng nghiệp tồn thể nhân viên Khoa Nội tiết – Chuyển hóa – Di truyền, Khoa Di truyền Sinh học phân tử, Khoa Sinh hóa, Phịng Kế hoạch Tổng hợp đồng nghiệp Bệnh viện Nhi Trung ương giúp đỡ, tạo điều kiện cổ vũ tơi hồn thành luận án Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn Giáo sư Sian Ellard đồng nghiệp Phòng xét nghiệm Di truyền phân tử, Đại học Y Exeter, Giáo sư Karen Temple đồng nghiệp phòng xét nghiệm di truyền vùng Wessex, Đại học Southampton, vương quốc Anh truyền đạt kiến thức hỗ trợ xét nghiệm cho tơi q trình làm luận án Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới Giáo sư, Phó Giáo sư, Tiến sỹ, Thầy, Cơ thành viên hội đồng bảo vệ luận án cấp Bộ môn, cấp Trường, nhà khoa học tham gia phản biện độc lập ý kiến góp ý bảo q báu để tơi hồn thiện luận án Tôi xin trân trọng cảm ơn bệnh nhi gia đình bệnh nhi, người góp phần lớn cho thành công luận án Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới gia đình gồm bố mẹ, anh chị em chồng tơi hy sinh động viên tơi q trình làm việc, học tập nghiên cứu án n tiế sĩ Y c họ LỜI CAM ĐOAN Tơi CẤN THỊ BÍCH NGỌC, nghiên cứu sinh khóa 31, Trường Đại học Y Hà Nội, chuyên ngành Nhi khoa xin cam đoan: Đây luận án thân trực tiếp thực hướng dẫn Phó Giáo sư, Tiến sỹ Nguyễn Thị Hồn Cơng trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung nghiên cứu ận Lu thực khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơi án Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam kết tiế Hà Nội, ngày 15 tháng năm 2017 n sĩ Y họ Cấn Thị Bích Ngọc c MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ, SƠ ĐỒ ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN Lu 1.1 Thuật ngữ, danh pháp phân loại đái tháo đƣờng sơ sinh 1.2 Lịch sử nghiên cứu đái tháo đƣờng sơ sinh ận 1.2.1 Lịch sử nghiên cứu giới án 1.2.2 Lịch sử nghiên cứu đái tháo đường sơ sinh Việt Nam tiế 1.3 Các gen gây ĐTĐ sơ sinh chế bệnh sinh n 1.3.1 Các gen gây ĐTĐ sơ sinh tạm thời chế bệnh sinh sĩ 1.3.2 Các gen gây ĐTĐ sơ sinh vĩnh viễn chế bệnh sinh Y 1.3.3 Một số hội chứng kết hợp với ĐTĐ sơ sinh vĩnh viễn: 12 họ 1.4 Biểu lâm sàng liên quan đến đột biến gen 13 c 1.4.1 Lâm sàng đái tháo đường sơ sinh tạm thời 13 1.4.2 Đái tháo đường sơ sinh vĩnh viễn 17 1.5 Các phƣơng pháp điều trị ĐTĐ sơ sinh 24 1.5.1 Nguyên tắc điều trị 24 1.5.2 Các thuốc điều trị 24 1.5.3 Điều trị cụ thể 28 1.6 Kết điều trị 35 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 39 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 39 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 39 2.3 Các số nghiên cứu 41 2.3.1 Đặc điểm nhân học 41 2.3.2 Đặc điểm lâm sàng 41 2.3.3 Đặc điểm hoá sinh di truyền phân tử 41 2.3.4 Điều trị đánh giá kết điều trị 41 2.4 Phƣơng pháp thu thập số liệu 42 2.4.1 Phương pháp thu thập số liệu cho mục tiêu 42 2.4.2 Phương pháp thu thập số liệu cho mục tiêu 44 2.4.3 Phương pháp thu thập số liệu cho mục tiêu 47 2.5 Xử lý số liệu 52 Lu 2.5.1 Cách mã hóa 52 ận 2.5.2 Xử lý số liệu 52 án 2.6 Đạo đức nghiên cứu 53 tiế Chƣơng KẾT QUẢ 54 3.1 Phát đột biến số gen gây đái tháo đƣờng sơ sinh 54 n sĩ 3.1.1 Các thể ĐTĐ sơ sinh theo đột biến gen 55 Y 3.1.2 Đột biến gen ABCC8 56 họ 3.1.3 Đột biến gen KCNJ11 59 c 3.1.4 Đột biến gen INS 60 3.1.5 Bất thường 6q24 61 3.1.6 Các đột biến gen hội chứng gặp 66 3.2 Đối chiếu kiểu gen kiểu hình bệnh nhân ĐTĐ sơ sinh 67 3.2.1 Đặc điểm lâm sàng sinh hóa thể ĐTĐ sơ sinh 67 3.2.2 Mối liên quan kiểu gen, thể lâm sàng sinh hóa 67 3.3 Kết điều trị đái tháo đƣờng sơ sinh 74 3.3.1 Phương pháp điều trị 74 3.3.2 Kết kiểm soát glucose 77 3.3.3 Kết phát triển tâm thần vận động 80 3.3.4 Tác dụng không mong muốn điều trị 81 Chƣơng BÀN LUẬN 82 4.1 Xác định đột biến gen bệnh nhân ĐTĐ sơ sinh 82 4.1.1 Đột biến gen ABCC8 84 4.1.2 Đột biến gen KCNJ11 87 4.1.3 Đột biến gen INS 88 4.1.4 Đột biến nhiễm sắc thể số 89 4.1.5 Đột biến gen hội chứng gặp 92 4.2 Tƣơng quan kiểu gen kiểu hình ĐTĐ sơ sinh 94 4.2.1 Đột biến gen đặc điểm lâm sàng bệnh nhân chẩn đoán 94 4.2.2 Đột biến gen ABCC8 biểu lâm sàng 97 Lu 4.2.3 Đột biến gen KCNJ11 biểu lâm sàng 100 ận 4.2.4 Đột biến gen INS biểu lâm sàng 102 án 4.2.5 Đột biến NST số biểu lâm sàng 104 4.2.6 Biểu lâm sàng bệnh nhân đột biến gen hội chứng tiế gặp 107 n sĩ 4.3 Kết điều trị 110 Y 4.3.1 Phương pháp điều trị 112 họ 4.3.2 Kết kiểm soát glucose máu 115 c 4.3.3 Kết phát triển tâm thần, vận động 116 4.3.4 Tác dụng không mong muốn điều trị insulin sulfonylureas 117 KẾT LUẬN 119 KIẾN NGHỊ 121 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ VỀ NỘI DUNG LIÊN QUAN ĐẾN ĐỀ TÀI LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Đái tháo đường (ĐTĐ) sơ sinh tình trạng tăng glucose máu xuất tháng đầu sau đẻ Đây bệnh lý bẩm sinh gặp với tỷ lệ mắc 1/215000 - 1/500000 trẻ sơ sinh đẻ sống khoảng 50% biểu bệnh tuần đầu sau đẻ Diễn biến bệnh tạm thời đơi tái phát sau vĩnh viễn suốt đời Nguyên nhân ĐTĐ sơ sinh di truyền, đột biến gen dẫn đến chức tuyến tụy hay đảo tụy, giảm số lượng tế bào beta thứ phát, tăng phá huỷ tế bào beta rối loạn chức tế bào beta tụy nội tiết gây giảm tiết insulin [1] Lu ĐTĐ giai đoạn sơ sinh thường biểu triệu chứng kích thích, nơn, ận thở nhanh nước Các triệu chứng điển đái nhiều, uống nhiều án khó nhận biết Trẻ dễ chẩn đốn nhầm viêm dày, nhiễm khuẩn hô hấp nhiễm khuẩn huyết trước chẩn đoán nhiễm toan xê tơn Hơn tiế nữa, tăng glucose máu xuất sau co giật động kinh, bệnh lý n cấp tính gây sốt nhiễm khuẩn thần kinh trung ương Tương tự, xê tôn niệu sĩ Y xuất trẻ nơn nhiều nhịn đói kéo dài Trẻ mắc ĐTĐ sơ họ sinh thường chẩn đốn có biến chứng nhiễm toan xê tôn nặng c Bệnh ĐTĐ sơ sinh không chẩn đoán điều trị kịp thời tử vong di chứng tâm thần kinh [2] Nhờ tiến sinh học phân tử mà gen có đột biến gây ĐTĐ sơ sinh phát Nghiên cứu phân tử ĐTĐ sơ sinh có ý nghĩa quan trọng thực hành lâm sàng: giúp khẳng định chẩn đoán, định phương pháp điều trị, tiên lượng bệnh bệnh nhân thành viên khác gia đình tư vấn di truyền Đặc biệt, phát đột biến gen gây ĐTĐ sơ sinh làm thay đổi chiến lược điều trị [3] Những bệnh nhân có đột biến gen ABCC8/KCNJ11 điều trị thuốc uống sulfonylurea thay cho tiêm insulin Điều góp phần cải thiện chất lượng sống, giảm đau, giảm gánh nặng tâm lý giảm chi phí điều trị cho bệnh nhân gia đình ĐTĐ sơ sinh tạm thời cần phải theo dõi chặt chẽ, xác định thời điểm ngừng thuốc điều trị để tránh biến chứng hạ glucose máu, xác định thời điểm cần sử dụng thuốc điều trị bệnh tái phát Do đặc thù bệnh nên nghiên cứu giới tiến hành số lượng bệnh nhân đủ lớn theo dõi trung tâm Hơn nữa, điều trị bệnh nhân gặp nhiều khó khăn kiểm soát glucose máu đặc thù lứa tuổi nhỏ Ở Việt Nam, khoa Nội tiết - Chuyển hóa - Di truyền, Bệnh viện Nhi Trung ương, từ năm 2000 đến có 39 bệnh nhân Lu chẩn đoán ĐTĐ trước tháng tuổi, bệnh nhân chẩn đoán 12 ận tháng tuổi chiếm tỷ lệ 9% tổng số 447 bệnh nhân ĐTĐ chẩn đoán trước 15 tuổi Trong thực hành lâm sàng, kiểm soát glucose máu bệnh nhân án nhỏ tuổi vô phức tạp, xác định liều insulin phù hợp vơ tiế khó khăn Hơn nữa, chưa có nghiên cứu đầy đủ n nguyên nhân mức độ phân tử, kiểu gen, kiểu hình kết điều trị sĩ họ cứu tiến hành với mục tiêu: Y bệnh nhân Việt Nam mắc ĐTĐ sơ sinh Xuất phát từ lý đó, nghiên c Xác định đột biến gen bệnh nhân đái tháo đường sơ sinh Đối chiếu kiểu gen kiểu hình thể đái tháo đường sơ sinh Đánh giá kết điều trị bệnh đái tháo đường sơ sinh Chƣơng TỔNG QUAN 1.1 Thuật ngữ, danh pháp phân loại đái tháo đƣờng sơ sinh Đái tháo đường sơ sinh (đái tháo đường bẩm sinh): tình trạng tăng glucose máu khơng kiểm sốt xuất tháng đầu đời sau sinh [1] Những năm gần đây, khái niệm ĐTĐ sơ sinh mở rộng ĐTĐ xuất trước 12 tháng tuổi [4], [5], [6] ĐTĐ sơ sinh vĩnh viễn: ĐTĐ sơ sinh phải điều trị thuốc để kiểm soát glucose máu suốt đời [1] Đái tháo đường sơ sinh tạm thời tình trạng rối Lu loạn tiết insulin sau đẻ hồi phục thường tái phát sau đó, ận ĐTĐ sơ sinh tạm thời lại chia thành thể thể gặp [7]: i/ ĐTĐ sơ sinh tạm thời typ biểu mức gen vùng án imprinting PLAGL1 HYMAI NST số (6q24); ii/ ĐTĐ sơ sinh tiế tạm thời typ (OMIM 610374) đột biến gen ABCC8 mã hóa kênh KATP n [8]; iii/ ĐTĐ sơ sinh tạm thời typ (OMIM 610582) [8] đột biến gen sĩ KCNJ11 mã hóa kênh KATP; iv/ ĐTĐ sơ sinh tạm thời gặp đột biến Y insulin gặp đột biến gen HNF1β họ 1.2 Lịch sử nghiên cứu đái tháo đƣờng sơ sinh c 1.2.1 Lịch sử nghiên cứu giới Năm 1852, Kitsell lần đầu mô tả biểu lâm sàng bệnh ĐTĐ sơ sinh trai tác giả [1] Năm 1926, Ramsey báo cáo trường hợp trẻ sơ sinh đẻ đủ tháng, cân nặng thấp, chẩn đoán ĐTĐ tuần tuổi, cần phải điều trị insulin hồi phục (ngừng điều trị insulin) trẻ 10 tuần tuổi Bệnh nhân đánh giá lại tuổi hoàn toàn khỏe mạnh [9] Tuy nhiên thời kỳ này, tác giả chưa phân biệt ĐTĐ vĩnh viễn tạm thời Năm 1962, Hutchinson cs [10] lần phân biệt hai thể ĐTĐ vĩnh viễn thể ĐTĐ tạm thời hay tái phát, ĐTĐ sơ sinh tạm thời gọi “ĐTĐ thời bẩm sinh” PHỤ LỤC I QUY TRÌNH CHIẾT TÁCH DNA VỚI QIAamp DNA BLOOD MINIKIT Trang thiết bị cần thiết 1.1 Trang thiết bị  Box an toàn sinh học bậc 1,  Máy ly tâm cho ống eppendorf 1.5ml  Tủ lạnh -20C, -80C, 4C  Máy ổn nhiệt 56C  Pipettes, 20 uL, 200 uL mL  Ống PCR 0.2ml 0.5 mL Lu  Ống Eppendorf 1.5 mL ận  Filter tip 100ul, 100ul, 10ul án 1.2 Hóa chất tiế  QiaAmp DNA blood mini kit n 250 phản ứng/ kit QIAGEN (Đức) CAT NO 51106 sĩ Lưu trữ phòng Tách chiết DNA Bảo quản nhiệt độ phòng c họ 1000ml/ Chai Merck (Đức) Y  100% Ethanol Lưu trữ phòng Tách chiết DNA Bảo quản nhiệt độ phịng Quy trình:  Cho 20µl Protease QIAGEN vào ống ly tâm 1,5ml, sau cho tiếp 200µl mẫu máu vào ống  Thêm 200µl dung dịch đệm AL trộn hỗn hợp máy lắc 15 giây  Ủ hỗn hợp máy ổn nhiệt nhiệt độ 56ºC 10 phút, sau lấy ống khỏi máy ổn nhiệt  Ly tâm nhẹ hỗn hợp để tránh dung dịch đọng thành ống nắp ống  Thêm 200µl cồn Ethanol (96-100%), trộn ly tâm nhẹ  Chuyển toàn hỗn hợp vào cột lọc QIAamp, tránh để hỗn hợp dính vào thành ống nắp ống  Ly tâm cột lọc tốc độ 8000 vòng/phút phút, bỏ dịch chuyển cột lọc sang ống 2ml  Thêm 500µl dung dịch đệm AW1, ly tâm ống với tốc độ 8000 vịng/phút phút Sau bỏ dịch nổi, chuyển cột lọc sang ống 2ml khác  Thêm 500µl dung dịch đệm AW2, ly tâm ống với tốc độ 13000 vòng/phút phút Loại bỏ dịch nổi, chuyển cột lọc sang ống ly tâm 1,5ml vô trùng Lu  Thêm 200µl dung dịch AE vào cột lọc, ủ nhiệt độ phòng phút, sau ận ly tâm với tốc độ 8000 vịng/ phút phút thu DNA tổng số án  Nồng độ độ tinh DNA tổng số tiến hành điện di kiểm tra n tiế gel agarose 0,8% đo quang phổ bước sóng 260nm sĩ Y c họ PHỤ LỤC II: TRÌNH TỰ MỒI CHO CÁC GEN Gene: ABCC8 Số xác nhận: U63421 L78208 Exon Trình tự mồi xi ngược (M13 tailed) ABCC8ex1F_và_ABCC8ex1R AGCTGCAAGGGACAGAGG/ GAGTGAAGGGATGAGCTGG 11 ABCC8ex2F_và_ABCC8ex2R GAGGCAACAGAGCAAGACC/ ACCCTGGAGCAGATTCACTT 11 ABCC8ex3F_và_ABCC8ex3R GCCCTGCAGCCTATAAAGTG/ CTCCATGAAGGCAGGGATT 11 ABCC8ex4F_và_ABCC8ex4R AAATGTACACACCCAGGCAC/ GGGTAAAACAAGCTGATCCC 11 ABCC8ex5F_và_ABCC8ex5R GTGTTGGGGAATCCTTTTCC/ CCCTTTGAGGTCCCTCTCTG 11 ABCC8ex6F_và_ABCC8ex6R GTTTCCCCAGACAACAGGAG/ TGGTAGTGACGGTGAGAGGA 11 ABCC8ex7F_và_ABCC8ex7R CAGGGTGTAAGCAACCTTCC/ TGAGGATGAATAACACTCATGGAC 11 ABCC8ex8F_và_ABCC8ex8R AAGTTGGAACGGTGATACAG/ TGTGAAAGGTACAGGCAAGC 11 ABCC8ex9F_và_ABCC8ex9R GATAATTTGGAAACCTGGGC/ TGAAGTGGCCTACTCAAAGTC 11 ABCC8ex10F_và_ABCC8ex10R TCTGGGAAATGGAGTCAATG/ GAGTCGGATAATCTCAAGGC 11 ABCC8ex11F_và_ABCC8ex11R TGCCCCTAGCCTACTGGAG/ CTGGGCAGCCTGTCACTG 11 ABCC8ex12F_và_ABCC8ex12R ATGAAGGTGTCTCCAACTAAAAGAT/ ATCACTCGAGCAAGCCTTG 11 ABCC8ex13F_và_ABCC8ex13R TTCAGTGTGGGCTTTGTGG/ GGTGGTTTGGAGGTGAGGA 11 ABCC8ex14F_và_ABCC8ex14R GCTGTGTCGGACTTCTGCCTTT/ GCTCCCTCTGGGAGTTGGTG 11 ABCC8ex15F_và_ABCC8ex15R TTTTGGCTTTCATGGAGGAG/ TGCAGCTTTGTCTTTTTATCTCTATG 11 ABCC8ex16F_và_ABCC8ex16R GAGGATGTTGATTTCCAGAAGG/ TGAGGAGGATGGTTAAAAGGAG 11 ABCC8ex17F_và_ABCC8ex17R ACAGAGGCCATTTGGAAAC/ TCTGAAAATATGTAGGCTGCAC 11 ABCC8ex18F_và_ABCC8ex18R TCTCTATGCAGCATTTGTGG/ AATGGATGCACAGAAACAGC 11 ABCC8ex19F_và_ABCC8ex19R AGACCCAGACCTCTCAAACC/ GGTGCACCATATGGAGAGG 11 ABCC8ex20F_và_ABCC8ex20R GAGGCCTATTAAAGCCATTGC/ CATGTTTGACCTTACTGCAGGC 11 ABCC8ex21F_và_ABCC8ex21R AGGTGAGAAGCAGGCAAAGA/ GGTGGAGGTGGGCAGTTAG 11 ABCC8ex22F_và_ABCC8ex22R TCCAAAGCCACACAGCTAAC/ CCAGTGCTGGTCTCTTATGC 11 ABCC8ex23F_và_ABCC8ex23R AGGAGTATGTTGGTTGGGGTAG/ GGGCACTAAGGACAGGAAGA 11 ABCC8ex24F_và_ABCC8ex24R TGAATGTGTGTCTGTCTGCC/ CAGAGGGAAGCCATTTAATC 11 ABCC8ex25F_và_ABCC8ex25R CCCGTTGTCCCCTCAGTAAG/ CTCAGCCCTTCCCCCATC 11 ABCC8ex26F_và_ABCC8ex26R CTGCAGCCAGGAACTGCTC/ CCATTTTATAGATGGGAAGACTAAGG 11 ABCC8ex27F_và_ABCC8ex27R TGAATGACTCCAGAGACACTTA/ AGACAGGAGAAGCCCCCAG 11 ABCC8ex28F_và_ABCC8ex28R AGTCTGGGCAACAGTGAGAC/ TAGGGCGGTGGAATAAGATG 11 ABCC8ex29F_và_ABCC8ex29R TGGCATTGTCTTCCCCCTTC/ AAAGAAGGGCTTAGGGTGGC 11 ABCC8ex30F_và_ABCC8ex30R GACATTCCAGAGAGGGATAGC/ ACACTAGGAGGACCACCAGG 11 ABCC8ex31F_và_ABCC8ex31R CCCTTGTGTGTGTCTGGTG/ AACCTCCACCTGTCTGGG 11 ABCC8ex32F_và_ABCC8ex32R CCCTCTCCAGCCTTAAGAAGAG/ AGTTCTTTGGGATCAGCG 11 ABCC8ex33F_và_ABCC8ex33R GGGAAGAGTCCAAGGAGGAG/ ACGAGGTGACTGCGAAGC 11 ABCC8ex34F_và_ABCC8ex34R GAAACAAGCCCAAACCTGTG/ GGTGGCTGTGGGTACACG 11 ABCC8ex35F_và_ABCC8ex35R GTGTACCCACAGCCACCAG/ CAACCCCCTCCTCTTTGTG 11 ABCC8ex36F_và_ABCC8ex36R ACCACCTCGGTGCTTCTC/ TAGGACTAAATGGTCCTGCC 11 ABCC8ex37F_và_ABCC8ex37R CCATGCACACATTTTCCAAC/ ATCCCACTAAACCCTTTCCAA 11 ABCC8ex38F_và_ABCC8ex38R GGACTAGGATCGGGGTCAG/ CTGCTTCAGGGTTCTTTCTTG 11 ABCC8ex39F_và_ABCC8ex39R ACCCCAGGAAAGTGCAGTC/ TTTGCTCACACAGCTTCTGC 11 ABCC8_Cryptic_Donor_FvàR AGACACCGGCTCACAAGGT/ TCTTAGAGGCTGGGAAGTGG 11 n tiế sĩ Y c họ Q-Pulse Reference: MG/SOP/MON044; Revision No: 98 Page of án DNA Conc (ng/l) 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 ận Primer Conc (pmol/l) (80% MF) 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 Lu 10 11 12 13 14 15* 16 17 18H 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39* IVS8 Phương pháp PCR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR Kích thước (bp) 417 422 390 411 478 522 453 435 387 432 248 362 390 266 251 346 298 366 439 350 277 404 399 370 393 375 246 466 578 411 454 380 274 286 300 363 289 307 495 290 PHỤ LỤC II: TRÌNH TỰ MỒI CHO CÁC GEN Gen: EIF2AK3 Số xác nhận: AF110146.1 Exon EIF2AK3ex1F_và_EIF2AK3ex1R CCTAGCACGTCCTTGCCTTC/ CCCCTACACCGCATCCTC EIF2AK3ex1F_và_EIF2AK3ex1R CCTAGCACGTCCTTGCCTTC/ CCCCTACACCGCATCCTC EIF2AK3ex2F_và_EIF2AK3ex2R TGAGCATGTGGGATAAGTG/ TGCCCTAAAGGGACACAAAC EIF2AK3ex3F_và_EIF2AK3ex3R TCAGGATCAAGACTCCAGCTC/ TGACAACCTCAGGGGAAAAT EIF2AK3ex4F_và_EIF2AK3ex4R GTTGGTAATCTAACTGATGC/ CCAACAGCAACATTA EIF2AK3ex5F_và_EIF2AK3ex5R GCCCTCTTGTGGCATAAATC/ GGGAGAGGAAGAACCGTA EIF2AK3ex6F_và_EIF2AK3ex6R TACTTGGGGCTCTCAGCTTG/ CACTCCTGAAGTAGGAAGG EIF2AK3ex7F_và_EIF2AK3ex7R CCCTCCCTGTTTTTGTTGAA/ GGGCAAAGACAGTCAGGATT EIF2AK3ex8F_và_EIF2AK3ex8R CTGGGCCATTTGTTTAACTT/ TGAAATTGTCTCCCAAGATG EIF2AK3ex9F_và_EIF2AK3ex9R AAGAAGAGAGACAAAACTTAAAAGGAA/ GGAAGATCACTGAGAACTTTGG EIF2AK3ex10F_và_EIF2AK3ex10R AAGACTGGAGGGATAGCAGT/ AGATCTTAGGTCATTTCTTCTTTG EIF2AK3ex11F_và_EIF2AK3ex11R TGAACTGATTTTCACATTACCAC/ AATTGGCAGCACTTAGAACC EIF2AK3ex12F_và_EIF2AK3ex12R GCCTTCAGTGTTGTCTTACT/ CATTGTAATCACACAAGCAAA EIF2AK3ex13AF_và_EIF2AK3ex13AR ACAGAGGGTGCAGTTCAGGT/ GCTACTGGTGGGCTTGAAAG EIF2AK3ex13BF_và_EIF2AK3ex13BR GAGGGGCACTCCTTTGAAC/ GATGCTTTTACTCTCCCCAACTC EIF2AK3ex14F_và_EIF2AK3ex14R AGGGAATGTGCACCTCAAAG/ TGCTGCTGTGCTAGTAAGTAAAGG EIF2AK3ex15F_và_EIF2AK3ex15R CCTGGGCTTTCCTTCTGTAA/ TGAGCTTTAAATGGAAGCAAA EIF2AK3ex16F_và_EIF2AK3ex16R GATGTACAACCTCTTAGTCATTTTGTT GGGAGCAGGTCTCTTTCCTC EIF2AK3ex17F_và_EIF2AK3ex17R TTTTGCCAGCACTGATTTTA TTTCAAGTCTGCAATTTTGG n 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 tiế (5%DMSO) (5%DMSO) 2 2 2 2 2 2 2 2 Trình tự mồi xuôi ngược (M13 tailed) án DNA Conc (ng/l) ận Primer Conc (pmol/l) Lu 1F 1R* 2* 9* 10 11* 12 13A 13B 14 15 16* 17* Phương pháp PCR MMR MMR (5%dmso MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR MMR Kích thước (bp) 509 509 369 484 358 485 410 425 420 388 407 376 420 572 589 467 500 371 403 sĩ Primer Conc (pmol/l) DNA Conc (ng/l) 2 10 10 10 Trình tự mồi xi ngược (M13 tailed) c 3* Phương pháp PCR MMR MMR MMR họ Exon Y Gen: INS Số xác nhận: NM_000207.2 INSex1F_và_INSex1R CTGTGAGCAGGGACAGGTCT/ GCACAGGTGTTGGTTCACAA 11 INSex2F_và_INSex2R CTCTGCAGCAGGGAGGAC/ GGGAGCTGGTCACTTTTAGG 11 INSex3F_và_INSex3R CCCTGACTGTGTCCTCCTGT/ AGAGAGCGTGGAGAGAGCTG 11 Kích thước (bp) 627 522 423 Gen: KCNJ11 Số xác nhận: NM_000525.3 Exon 1B 1C 1D Phương pháp PCR MMR MMR MMR Primer Conc (pmol/l) DNA Conc (ng/l) 2 10 10 10 Trình tự mồi xi ngược (M13 tailed) KCNJ11ex1BF_và_KCNJ11ex1BR GTGCCCACCGAGAGGACT/ AGTGGGCACTCCTCAGTCAC 11 KCNJ11ex1CF_và_KCNJ11ex1CR CACCAGCATCCACTCCTTCT/ GTTTCCACCACGCCTTCC 11 KCNJ11ex1DF_và_KCNJ11ex1DR CTACCATGTCATTGATGC/ CCACATGGTCCGTGTGTA 11 Q-Pulse Reference: MG/SOP/MON044; Revision No: 98 Page of Kích thước (bp) 524 546 491 PHỤ LỤC III ĐÁNH GIÁ SỰ PHÁT TRIỂN TÂM THẦN Ở TRẺ DƯỚI TUỔI Sử dụng test Denver II: cấu trúc test gồm 125 mục chia thành khu vực: - Cá nhân – Xã hội: 25 mục - Vận động tinh tế thích ứng: 29 mục - Ngôn ngữ: 39 mục - Vận động thô: 32 mục Dụng cụ đánh giá: - Một túm len đỏ - Hạt nho, hạt lạc kẹo nhỏ Lu - Xúc sắc có cán ận - 10 khối gỗ vng có màu sắc, cạnh 2,5 cm án - lọ nhỏ nhựa trong, đường kính miệng cm - Chng nhỏ n sĩ - Bút chì tiế - Bóng tennis Y - Búp bê em bé, thìa bình sữa c - Giấy trắng họ - Cốc nhỏ có quai cầm Dụng cụ đánh giá test Denver II Cách tiến hành Tính tuổi: - Lấy ngày làm test – ngày sinh, tuổi tính theo số tháng ngày - Vẽ đường tuổi: đầu mép tờ test hiển thị đường tuổi phân chia khoảng tuổi, xác định tuổi vẽ đường tuổi Tiến hành làm test: - Phải có mẹ người chăm sóc trẻ có mặt - Để trẻ tư thoải mái điều kiện tự nhiên, tránh tác động từ bên ngồi - Có mục quan sát, có mục phải kiểm tra, có mục hỏi cha mẹ Tất hiển thị ký hiệu phiếu kiểm tra Người kiểm tra cần phải có quan sát linh hoạt kỹ giao tiếp với Trẻ lớn ngồi tư để tay dễ dàng với khắp bàn, trẻ nhỏ án - ận trẻ Lu - ngồi sàn nhà tiế Các tiết mục vận động làm trước (hầu hết theo thứ tự) - Các cố gắng trẻ cần động viên, kể trẻ không làm sĩ Các tiết mục sử dụng dụng cụ nên tiến hành phối hợp tránh Y - n - họ di chuyển nhiều lần Tránh đặt nhiều dụng cụ lên bàn, xa khỏi tầm mắt tay trẻ - Trẻ nhỏ mục tư nằm nên tiến hành - Không để ý đến tuổi trẻ làm test c - Thứ tự thực mục cần kiểm tra: Ở khu vực: - Kiểm tra mục liên tiếp nằm hoàn toàn bên trái gần đường tuổi nhất, có từ mục không làm tiếp tục lùi trái, đến mục liên tiếp làm thơi - Việc đánh giá thang hành vi điền sau làm test Chấm điểm cho mục: Ghi ký phía hình biểu diễn mục gần vạch 50%: chữ - Đ trẻ làm bố mẹ nhìn thấy trẻ làm Chữ K trẻ khơng làm bố mẹ trả lời không làm Chữ T trẻ từ chối làm bố mẹ khơng rõ Cách tính điểm dựa vào bách phân vị Điểm số khu vực tính dựa số tiết mục làm (tất - chữ Đ) 25% 50% 75% 90% - Tỷ lệ phần trăm khung tương ứng với tỷ lệ trẻ lứa tuổi Cách tính: ận Lu làm tiết mục án - Mỗi tiết mục đường tuổi trẻ làm tương đương với n 10 điểm (100-90) tiế bách phân vị 90 Do chữ Đ bên trái đường tuổi tính sĩ - Điểm số chữ Đ nằm đường tuổi tính dựa vào trị số Y c bách phân vị nơi đường tuổi qua họ bách phân vị nơi đường tuổi qua Trị số điểm 100 trừ trị số Ví dụ: Đường tuổi qua vị trí 25%, chữ Đ cho 75 điểm (100-25) Đường tuổi qua vị trí 50%,chữ Đ cho điểm 50 điểm (100-50) Đường tuổi qua vị trí 75%, chữ Đ cho 25 điểm (100-75) Đường tuổi qua vị trí 90%,chữ Đ cho điểm 10 điểm (100-90) Mỗi chữ Đ bên phải đường tuổi (tương đương với bách phân vị < 25%) nghĩa trẻ phát triển sớm tuổi, cho 75 điểm (100-25) Tổng điểm số chữ Đ khu vực = tổng điểm khu vực Ví dụ: khu vực ngơn ngữ có chữ Đ bên trái đường tuổi chữ Đ nằm đường tuổi với đường tuổi qua vị trí 50%, tổng điểm vực ngôn ngữ 10 + 10 + 50 =70 ận Lu án n tiế sĩ Y c họ PHỤ LỤC III ận Lu án n tiế sĩ Y c họ PHỤ LỤC IV Khóa chấm điểm test Raven đen trắng 1938 Bộ A B C D E 6 1 3 2 7 3 5 6 3 2 4 án 11 ận 10 Lu Item 12 tiế n Bảng điểm kỳ vọng test cá nhân (test Raven đen trắng 1938) 40 45 50 55 10 11 12 12 c A B C D E 35 họ Y thể đạt Tổng điểm sĩ Tổng điểm có 10 15 20 25 30 10 10 10 8 10 11 11 10 11 11 1 10 11 0 10 Bảng điểm kỳ vọng test tự ghi hay test nhóm (test Raven đen trắng 1938) B C D E A B C D E 15 30 10 16 31 10 7 17 32 10 18 33 11 19 34 11 20 35 21 22 23 24 25 10 26 10 41 27 10 1 42 28 10 29 10 điểm Tổng B C D E 45 12 10 9 46 12 10 10 5 47 12 10 10 48 12 11 10 49 12 11 10 10 11 7 50 12 11 10 10 36 11 8 51 12 11 11 10 37 11 52 12 11 11 10 38 11 8 53 12 11 11 11 39 11 8 54 12 12 11 11 40 11 10 8 55 12 12 11 11 56 12 12 12 11 11 10 9 57 12 12 12 11 10 43 12 10 9 58 12 12 12 12 10 44 12 10 họ A Tổng Lu Tổng 12 12 12 12 11 điểm ận án tiế 11 10 điểm n sĩ Y 59 A c Test cá nhân, điểm số trung bình 735 trẻ Colchester – Anh (test Raven trắng1938) Tuổi đời theo năm 6,5 7,5 8,5 9,5 10 10, 11 13 14 16 17 19 21 22 24 26 29 11, 12 31 35 12, 13 37 38 13, 40 41 Test tự ghi hay test nhóm, điểm sốt trung bình 1407 trẻ Anh (test Raven trắng 1938) Tuổi đời theo năm 8,5 9,5 10 10,5 11 11,5 12 12,5 13 13,5 14 18 21 24 28 30 33 35 37 39 41 43 44 44 Khóa chấm điểm Raven màu 1947 Bài 10 11 12 Tập A 6 Tập AB 6 Tập B 6 4 Thành phần tổng điểm chuẩn Raven màu 1947 10 11 12 A 5 6 7 AB 2 3 4 2 3 điểm 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 8 9 9 9 10 10 10 10 11 11 11 11 4 5 7 8 9 10 10 10 4 5 6 7 8 10 ận Lu Tổng Bộ án n tiế B sĩ Điểm số trung bình đạt 608 trẻ nhỏ từ 5,5 đến 11 tuổi Y trường Dumfries-Ecosse (Anh) 6,5 7,5 8,5 14 15 15 16 17 18 20 c 5,5 họ Tuổi đời 9,5 10 10,5 11 22 24 24 26 28 Bảng điểm kỳ vọng Raven màu 1947 Tổng điểm 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 Tập A Tập AB Tập B 5 7 7 8 8 9 10 10 10 10 10 11 11 11 11 3 4 6 7 8 9 10 10 10 10 10 10 11 3 4 4 5 5 6 11 12 12 2 3 11 11 12 2 10 11 11 11 7 8 10 MẪU BỆNH ÁN NGHIÊN CỨU BỆNH ĐTĐ SƠ SINH I Hành chính: Họ tên: ……………………………Giới: Nam/nữ Ngày sinh: … /… /…… Ngày vào viện: …./… /200 Địa chi: Điện thoại: Họ tên bố: …………………………… Tuổi: ………………… Họ tên mẹ: …………………………… Tuổi: ………………… II Lí vào viện: III Tiền sử: Lu Tiền sử sản khoa: ận án tiế Tiền sử bệnh tật: n sĩ Y Tiền sử gia đình: họ ……………………………………………………………………………………… c Phả hệ: IV Thăm khám: Toàn trạng: Cân nặng : …… kg Nhiệt độ : …… độ C Mạch : …… lần/phút Nhịp thở : …… Lần/phút Tuần hoàn: Tiêu hóa: Thận - tiết niệu - sinh dục: Thần kinh ận Cơ khớp Lu án tiế Mắt, tai mũi họng n sĩ Y Da liễu họ c V Xét nghiệm Xét nghiệm Glucose Insulin c-peptide HbA1C pH Tại thời điểm chẩn đoán Khám lại Khám lại Khám lại Khám lại Xét nghiệm Tại thời điểm chẩn đoán Khám lại Khám lại Khám lại Khám lại HCO3 BE Ceton niệu DQ Ure Creatinin Điện giải đồ AST Lu ALT ận Bil án T4 sĩ CT/MRI sọ não n tiế TSH Y c họ VI Chẩn đoán: ……………………………………………………… VII Điều trị: Insulin: liều……U/kg/ng Thời gian…….tháng Sulfonylurea: liều……mg/kg/ng Thời gian chuyển đổi………ngày Thời gian điều trị thuốc VIII Diễn biến kết điều trị: Sự phát triển thể chất: chiều cao….cm cân nặng……kg HbA1C: ……% DQ/IQ Ngày … tháng … năm …… Bác sỹ