Giáo trình thực tập vi sinh vật phần 1 pgs ts nguyễn xuân thành

BỘ GIÁO DỤC VA DAO TAO _TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆ NGUYỄN XUÂN THÀNH- VŨ THỊ HOÀN NGUYỄN THỊ MINH - HỒNG HẢI Chủ biên hiệu dính: PGS.TS S.Ng Kuan ÔNG NGHIỆP | 66609 | BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP I HÀ NỘI 51 — NGUYÊN XUÂN THÀNH - VŨ THỊ HOÀN NGUYÊN THỊ MINH - HỒNG HẢI Chủ biên hiệu đính: PGS.TS Nguyễn Xuân Thành GIÁO TRÌNH THỰC TẬP VI SINH VẬT NHÀ XUẤT BẢN NÔNG NGHIỆP Hà Nội - 2005 63 - 630 NN - 2005 - 64/1561 - 05 LỜI NÓI ĐẦU Theo định Bộ Giáo dục Đào tạo, từ khoá học 2004 - 2005 khung chương trình đào tạo mơn học khối Nơng - Lâm - Ngư cho bac dai hoc va cao dang điều chỉnh Số trình thực hành mơn học bổ sung để nâng cao tay nghề, đáp ứng nhu cầu xã hội sau sinh viên trường Giáo trình thực tập vi sinh vật biên soạn dùng làm tài liệu học thực tập cho sinh viên khối Nông - Lâm - Ngư, ngành Nông học, Bảo vệ thực vật, Khoa học Môi trường, Khoa học đất, Nơng hố Thổ nhưỡng, Lâm nghiệp, Di truyền, Chọn giống, Công nghệ lên men, Thuỷ nông cải tạo đất Trong trình biên soạn, cố gắng viết ngắn gọn, dễ hiểu có tính khoa học đại, điều kiện học thực hành chưa cho phép, thực hành phải có tính khả thi cao, cịn chưa hồn hảo chưa tiếp cận thành tựu khoa học, nên giáo trình khơng tránh khỏi thiếu sót, mong góp ý bạn đọc để giáo trình hồn thiện TÁC GIÁ Bài I TRANG THIẾT BỊ CẦN THIẾT NGHIÊN CỨU VI SINH VẬT VÀ QUAN SÁT HÌNH THÁI VI SINH VẬT Mục đích, yêu cầu: + Biết trang thiết bị, máy móc dụng cụ cần thiết phòng nghiên cứu vi sinh vật + Biết sử dụng vận hành số máy móc thơng dụng phòng nghiên cứu vi sinh vat + Thấy rõ tầm quan trọng công tác tiêu độc, khử trùng + Nắm vững phương pháp sử dụng kính hiển vi để quan sát hình thái vi sinh vật + Phân biệt dạng hình thái vị sinh vật Nội dung thực hành: + Giới thiệu trang thiết bị cần thiết để nghiên cứu vi sinh vat + Giới thiệu dụng cụ nguyên liệu cần thiết để nghiên cứu vi sinh vậi: duis cụ lọc, khử trùng, dụng cụ quang học, dụng cụ đo lường + Thực hành sử dụng kính hiển vi dé quan sát hình thái nhuộm màu loại vị sinh vật I MAY MOC Máy móc phịng thí nghiệm dùng để nghiên cứu vi sinh vật có nhiều loại, có số loại cần thiết, phải dùng thường xuyên, cần hiểu biết va nam vững nguyên lý cách sử dụng loại máy Tủ nudi cay vi sinh vat Tủ ấm thiết bị quan trọng dùng công tác nghiên cứu vị sinh vật, nhiệt độ tủ thay đổi từ 0°- 80”C tuỳ theo ý muốn người nghiên cứu nhiệt độ tủ sau xác định ln ln trạng thái ổn định suốt thời gian nuôi cấy : 1.1 Cấu tạo: Cấu tao vỏ tủ ấm có lớp, lớp kim loại dẫn nhiệt để giữ nhiệt độ bên tủ, tầng lớp kim loại dày bọc chất cách nhiệt (amiant) Giữa tầng tầng ngồi thường có khoảng trống để giữ cho nhiệt độ tủ bị biến đổi Trong tủ có mắc phận cảm nhiệt để báo nhiệt độ lên xuống cho ro-le hoat dong Phần ngồi tủ ni có lắp hệ thống máy tự động điều chỉnh nhiệt độ Ngoài tủ có núm điều chỉnh nhiệt độ: núm diều chỉnh nhiệt độ lớn núm điều chỉnh nhiệt độ nhỏ, có cơng tắc đóng mở mạch điện nhiệt kế theo dõi nhiệt độ cắm tủ ấm 1.2 Cách sử dụng: Sau đóng mạch điện, xoay núm điều chỉnh nhiệt độ lớn cho kim tới nhiệt độ cần thiết, thí dụ để 28C, sau phải điều chỉnh kim núm điều chỉnh nhiệt độ nhỏ số Nhiệt độ tủ ấm tăng dần đạt tới nhiệt độ phạm vi xác định Nếu nhiệt độ tủ tăng cao thấp nhiệt độ xác định vài độ phải dùng núm điều chỉnh nhiệt độ nhỏ để điều chỉnh giảm hay tăng vài độ bảng chia độ Theo dõi nhiệt kế cắm tủ ấm, thấy có tăng giảm lại điều chỉnh lần đạt yêu cầu Khi có điện đốt nóng đèn đỏ bật sáng, nhiệt độ đạt yẻu cầu phận cảm nhiệt làm việc báo cho role điều chỉnh hoạt động, mạch bị ngắt, đèn xanh bật sáng, đèn đỏ tắt Quá trình tiếp diễn liên tục suốt thời gian tủ làm việc để trì nhiệt độ 1.3 Khi sử dụng máy cần ý điểm sau đây: + Phải nối tủ với dây đất kiểm tra điện máy với điện nơi đặt máy xem có giống khơng, trường hợp không giống phải dùng biến + Khi sử dụng tủ ấm lần phải kiểm tra phận điều chỉnh nhiệt độ xem có xác khơng, nhiệt độ tủ có khơng? + Thường xuyên theo dõi thay đổi đèn đỏ, đèn xanh, bình thường đèn thay đổi - lần phút có bất thường phải tắt điện kiểm tra lại + Theo dõi nhiệt độ biến đối nhiệt kế để điều chỉnh cho thích hợp với yêu cảu Nếu nhiệt độ chênh lệch điều chỉnh núm bên trái (núm điều chỉnh nhỏ), nhiệt độ chênh lệch nhiều (theo đơn vị độ) điều chỉnh núm bên phải (núm điều chỉnh lớn) + Cửa tủ ln ln phải đóng kín, trừ lấy cho nguyên liệu vào nuôi cấy không mở cửa tủ rộng lâu + Luôn luên phải đảm bảo cho tủ ấm khô ráo, sẽ, phải cho tủ hoạt động thường xuyên, hôm trời ẩm Khi làm đổ chất dịch nuôi cấy làm bẩn tủ, phải lau chùi sát trùng + Khi không dùng tủ ấm, tắt công tắc điện rút phích cắm điện Tủ sấy khơ 2.I Công dụng: Dùng tủ sấy khô để tiêu khử trùng dụng cụ thủy tỉnh, đồ sứ như: ống nghiệm, ống tiêm, ống hút, hộp lồng, cốc, phễu, cối chây sứ đồ kim khí dao, kéo, cặp sắt, cịn cao su mơi trường ni cấy không dùng tủ sấy khô để ' khử trùng Nguyên lý cấu tạo tủ sấy khô gần giống tủ ấm, khác nhiệt độ sử dụng tương đối cao, tủ sấy khơ dùng nguồn sinh nhiệt từ điện, than, đốt 2.2 Cách sử dụng tủ sấy khô: Các dụng cụ phải rửa sạch, để khơ, bao gói cẩn thận trước cho vào tủ, sau xếp dụng cụ vào tủ đóng kín cửa Đóng mạch điện đốt nhiên liệu, nhiệt độ tủ từ từ lên cao, ý theo đõi nhiệt kế cắm tủ nhiệt độ đạt tới mức u cầu 170°C - 18§0°C điều chỉnh việc cung cấp nguồn nhiệt để trì nhiệt độ 30 phút Sau cắt mạch điện hay cắt nguồn nhiệt, chờ nhiệt độ hạ dần xuống 50 - 60°C mùa hè 30 - 40°C mùa đông mở cửa tủ để lấy đồ hấp sấy Dụng cụ hấp sấy lấy phải để giá gõ giấy vải, không để gạch men, sàn gạch sàn xi măng dụng cụ nóng gặp lạnh dễ vỡ Nôi hấp nước cao áp 3.1 Nguyên lý: Nồi hấp nước cao áp (autoclave) làm kim loại chịu nhiệt độ cao (ít 135") dùng điện, dùng củi dùng than đun cho nước sôi, nước nén đần lại nồi tiếp tục nước sơi áp lực nồi tăng dần, áp lực tăng nhiệt độ nước nồi cao, nhiệt độ t' nước áp lực P có liên quan với nhau, theo tỷ lệ đường thắng (xem bảng ]) Khi áp lực kế số có nghĩa là: áp lực P nồi hấp = áp lực P khơng khí, áp lực kế ¡kg/cm” hiệu số áp lực bên với áp lực khơng khí tồn nồi ˆ Ikpg/cm = P (rong nồi) - P (khơng khí nồi) Do áp lực P nồi không phù hợp với P áp lực kế hay nói cách khác, nhiệt độ nồi không tương ứng với nhiệt độ áp lực kế Vì muốn cho nhiệt độ nồi phù hợp với áp lực kế phải xả hết khơng khí nồi (Ikg/cm” = | Atm = | phoud) Bảng So sánh mối liên quan áp lực ghi áp kế nồi hấp biểu thị atmosphere nhiệt độ nồi loại hết khơng khí Áp lực | Nhiệt độ | Áplực | Nhiệt độ | Áplực | Nhiệt độ | Áplực | Nhiệt độ (atm) CC) (atm) CC) (atm) CC) (atm) CC) 0,0 100,0 0,5 112,5 1,0 121,0 1,5 127,0 0,1 102,5 0,6 114,5 1,1 129,9 1,6 128,0 0,2 105,0 0,7 116, 1,2 124,0 1,7 129,0 0,3 0,4 107,5 110,0 0,8 0,9 117,0 119,0 1,3 1,4 125,0 126,0 1,8 1,9 2,0 130,0 131,0 132,0 Để loại bỏ hết khơng khí nồi ra, có cách: a) Đóng khóa để tăng áp lực nồi lên đến khoảng 0,3 atm, xả cho hết ra, sau khóa lại cho tăng áp lực b) Mở khóa đun nước bắt đầu thoát thành luồng trắng mạnh, đóng lại cho tăng áp lực Lỗ thông Đường xả Đường ống vận chuyển nước Đồng hồ đo áp suất Van điều khiến Bộ phận lọc ~» Nơi ngưng tụ 10 Van cung cấp nước Cơ chế tác dụng H;SO, Diphénylamine + NO; —————_* Sulfonylin diphénylamine (Mau xanh) Vi khuan phan nitrat sinh vat Là trình khử NO’, dén nito phan tử (N,) tác dụng vi a) Dụng cụ nguyên liệu: Dung dich đất 10" 10” ống hút ; sứ Thuốc thử griess I, griessII Thuốc thử Nesler Diphenylamin b) Môi trường: KNO,= 2g; K,HPO,=1g; MgSO,.7H,O = 2g; FeSO,= vét 1000ml Xitrat kali 5g; Nước cất Điều chỉnh pH môi trường đến cho vào ống nghiệm, ống 3ml, đem tiệt trùng 121°C 30phút c) Phương pháp tiến hành: Cho vào ống nghiệm có mơi trường 0,5ml dung dịch đất Để phòng ấm 28 - 30°C - ngày: Kiểm tra kết Tiến hành kiểm tra sau: Nếu q trình ni cấy khơng ngừng sinh bọt khí mặt mơi trường có lớp bọt khí Như tức q trình chuyển hóa NO; có sinh N, + Lấy dung dịch nuôi cấy vi khuẩn, cho vào sứ cho dung dịch griess I, griess II vào Nếu có mầu hồng đỏ xuất hiện, nghĩa có phản Nitat hóa, sinh NO’, sinh NO, + Lấy dung dịch vi khuẩn cho vào sứ Cho I vài giọt Nessler vào Nếu có mầu vàng xuất tức có NH,* để tiếp tục chuyển thành N Cách tính số lượng vi sinh vát theo phương pháp định tính (theo bảng Mac redy) Ví dụ: Ta có dãy pha lỗng từ 10' đến 10” Số lần cấy lặp lại = 3, nghĩa có đĩa mơi trường làm thí nghiệm nồng độ pha lỗng (có thể cấy nồng độ liên tiếp) Sau nuôi ta đọc kết sau: 10! 10° 10° 10° 10° 10 16’ 10° 10° +++ +++ +++ +++ ++ ++ + - - 3 3 2 l 0 68 Nguyên tắc chọn số để tra bảng Mac.Crady Chọn số có chữ số, số số nhỏ dãy số, mà chữ số đầu có số đứng đằng trước giống Kết thí nghiệm ta phải chọn số 210 Tra số 210 theo cột dọc đầu bảng Mac.Crady, chiếu theo hàng ngang có số (số lần nhắc lại) ta số = 1,5 Tính theo cơng thức: N= AxnxK N - số tế bào/ g đất khơ, Iml mẫu phân tích A - hệ số tra bảng Mac rady (= 1,5) n - số nghịch đảo nồng độ pha loãng (10) K - hệ số khô kiệt (quy đổi từ độ ẩm mẫu phân tích Ví dụ: K = 1,2) Vậy số lượng tế bào VSV = 1,5 x 10°x 1,2 = 1,8 10° té bao/ g dat khô 69 Bài 10 VI SINH VAT PHAN GIAI LAN (PHOSPHO) Muc dich, yéu cau: + Phương pháp phân lập, tuyển chọn giống VSV phân huỷ chuyển hóa lân + Thấy tác dụng vi sinh vật trình phân giải phospho khó tan + Nhận biết cường độ phân giải lân tác dụng VSV Nội dung thực hành: + Phân lập chủng giống VSV phân giải lân + Phương pháp bố trí thí nghiệm Vi khuẩn phân giải lân hữu Lân hữu phân giải nhiều loại vi sinh vật Có thể dùng mơi trường có thành phần sau để phân lập a) Môi trường phân lập: Loxitin 0,05g MgSO, 0,3g (NH,);SO, 0,3g FeSO, vét CaCO; 5g Glucô 10g 0,3g Nước 1000ml vệt Thạch 15 - 18g NaCl MnSO, Lân hữu dùng Lơxitin axit nucleic b) Dụng cụ ngun liệu: - Ong nghiệm có 9ml nước vơ trùng - Ong hut Iml va 10ml - Hộp lồng tiệt trùng - Ong nghiệm có thạch nghiêng c) Các bước thực hiện: Cân đất 10g Cho vao binh tam gidc cé 90 ml nudc vo tring Lac 10 phut Pha lỗng 107 - 10” Trong điều kiện khơng có axit nuclêic lơxitin dùng lịng đỏ trứng gà Dùng dung dịch HẹC]; 0,1% tiệt trùng trứng Dùng nước cất nước vô trùng rửa 70 HgC]; Luộc trứng Lấy lòng đỏ nghiền nhỏ Ngâm cồn gạn nước cồn Làm nhiều lần Lọc Dùng axêton kết tủa Dùng rượu axêtơn để hồ tan kết tủa Cuối dùng rượu hồ tan dùng Cho môi trường vào ống nghiệm 1,8 X I8§cm ống 15ml Tiệt trùng 120”C/15 phút Nấu chảy môi trường, để nguội 50°C Đổ vào hộp lồng hộp 15ml Chờ môi trường đông lại Dùng ống hút tiệt trùng lấy 0,1ml dung dịch đất nồng độ 10 10 Cấy lên mặt môi trường Dùng que thuỷ tinh dàn khắp môi trường Để 28 - 30°C - ngày d) Kiểm tra kết quả: Trên mặt môi trường xuất khuẩn lạc màu trắng đục có hình trịn, có nếp nhăn Đấy khuẩn lạc vi khuẩn phân giải lân hữu Dùng que cấy lấy vi khuẩn làm tiêu - nhuộm đơn Xem kính Vi khuẩn hình que, hai đầu trịn, đứng riêng rẽ liên lại thành chuỗi Lấy vi khuẩn tiếp tục hố Chú ý: Có thể dùng lịng đỏ trứng trực tiếp, không qua rửa rượu kết tủa bảng axêtôn Cách làm sau: - Rửa vỏ trứng HgCIl, 0,1% cồn 95% Dùng nước cất nước vô trùng rửa HgCl; cồn Cho lịng đỏ trứng vào bình tam giác tiệt trùng Cho vào 50ml nước vô trùng đánh vào cho Cho vào hộp lồng 1ml nước lòng đỏ trứng Đổ môi trường vào Lắc nhẹ trộn để đông lại Lấy ống hút cho dung dịch cần phân lập vào Mỗi hộp lồng cấy 0,5ml dung dịch đất Để - hộp làm đối chứng Để 28 - 30°C 24 Thời gian nuôi cấy khơng q lâu dé tạp vi khuẩn Khuẩn lạc mọc Lấy vi khuẩn làm tiêu bản, xem kính Nếu vi khuẩn phân giải - lân miêu tả tiếp tục cấy vào thạch nghiêng nhiều lần để hoá Vi sinh vật phân giải lân vơ khó tan a) Mơi trường: MnSO, 0.03g 0.5g Fe,(SO,), H,O 0.03g NaCl 0.3g Ca,(PO,), 10g KC 03g Thach 20g 10g Saccarô (NH,)SO, MgsO, — Nước cất 0,3g 1000ml b) Dụng cụ nguyên liệu: Bình tam giác Hộp lồng Wi Ống nghiệm HCI dam đặc va 0,1N - Dung dịch đất pha loãng (NH,),Mo;O;„.2H;O dung dich Binh định mức 50cc Bèo dâu c) Các bước: Đổ môi trường vào hộp lồng tiệt trùng Dùng dung dịch đất 0,1m] đổ vào san bề mặt môi trường Để 28 - 30C : d) Đánh giá kết quả: Sau - ngày quan sát khuẩn lạc hình thái vi khuẩn Khuẩn lạc nhờ, lồi, đường biên thẳng Xung quanh khuẩn lạc có vịng phân giải suốt Vịng lớn hay bé tùy vi khuẩn Thường vịng phân giải bé muốn xem phải lật ngược dia petri Muốn đánh giá chắn nên kết hợp chặt chế quan sát mắt thường dùng dung dịch Molybdatamon để kiểm tra kết có lân dễ tiêu khơng Nếu có lân kết hợp với Molybdatamon thành hợp chất photpho molybdatamon màu vàng kết tủa Quan sat vi khuẩn Từ khuẩn lạc có vịng phân giải, lấy vi khuẩn Làm tiêu quan sát kính hiển vi Vi khuẩn phân giải hợp chất lân khó tan thành dễ tan hình que Đầu trịn có vỏ nhầy bé, có bào tử, Gram dương Muốn khiết cấy vào thạch nghiêng nhiều lần Mỗi lần cấy kiểm tra kính hiển vi Để phân lập vi khuẩn phân giải hợp chất lân vô khó tan thành dễ tan dùng bèo dâu Ở cánh bèo dâu rễ điền có nhiều vi khuẩn phân giải lân khó tan thành dễ tan Lấy cánh bèo dâu Rửa qua nước máy cho sạch, nghiền nhỏ nước vơ trùng để thành dung dịch Lấy dịch bèo dâu cấy môi trường thạch phẳng Để 28 - 30C - ngày, quan sát khuẩn lạc tế bào vi khuẩn kính hiển vi Chú ý: - Nghiền bèo dâu thành dịch dễ cấy vào môi trường - Để xác định cường độ phân giải vi khuẩn ta định lượng lân dễ tiêu máy so màu 72 Bài 11 PHÂN TÍCH SỐ LƯỢNG VI SINH VẬT TRONG MỘT CƠ CHẤT Mục đích, yêu cầu: + Giới thiệu phương pháp lấy mẫu phân tích vi sinh vật chất + Giới thiệu phương pháp tính số lượng vi sinh vật chất + Nắm phương pháp thường dùng để tính số lượng vi sinh vật mẫu vật cần nghiên cứu Nội dung thực hành: + Các bước tiến hành lấy mẫu, phân tích vi sinh vật + Bảo quản mẫu + Phân tích mẫu + Tính số lượng vi sinh vật môi trường rắn, bán rắn lỏng I CAC BUGC PHAN TICH Lấy mẫu nghiên cứu - Nguyên tắc: Mẫu phải đại diện đạt yêu cầu nghiên cứu - Tất dụng cụ phải tiệt trùng: + Dụng cụ thuỷ tinh phải hấp nhiệt độ cao + Dung cu nhựa, ni lông phải tiệt trùng HgC], 0,2% cồn + Các dụng cụ khác khay men, cuốc, khoan rửa dùng cồn đốt trực tIếp Bảo quản mẫu : - Mẫu lấy cần phân tích - Trường hợp lấy mẫu xong chưa có điều kiện phân tích phải để vào tủ lạnh nhiét -5 °C Tién hanh phan tich - Phải tiến hành phan tích điều kiện vơ trùng: buồng cấy hay phịng vơ trùng 73 Buồng cấy hay phịng vơ trùng phải tiệt trùng đèn tia tử ngoại 20 phút Có thể dùng fooc môn 10% HgCI, 0,2% đốt phun để tiệt trùng a) Tính độ ẩm hệ số khơ kiệt: khơ Do Kết phân tích thường tính theo số lượng vi sinh vật Ì gam chất phải tính độ ẩm hệ số khơ kiệt * Cách xác định độ ẩm [C] - Dùng hộp nhôm rửa sạch, sấy khô 105” C Cân khối lượng hộp - Cho vào hộp lượng chất định, sấy khô Tuỳ đối tượng nghiên cứu mà nhiệt độ sấy khô khác Nếu loại bột thực phẩm thường sấy nhiệt độ 80 - 85° C Nếu đất sấy 105 -110” C Độ ẩmx%=_ - x 100 x: Độ ẩm % A: Khối lượng hộp + chất ướt B: Khối lượng hộp + chất sấy khô C: Khối lượng hộp Tính hệ số khơ kiệt k: b) Dáy pha loãng: Muốn đếm số lượng vi sinh vật dễ dàng, phân tích cần pha lỗng chất đến độ định - Xếp dãy ống nghiệm, ống nghiệm đựng m] nước vô trùng - Cân 1g chất cho vào ống nghiệm thứ nhất, lắc 20 -30 phút, có dung dịch pha lỗng 10” chất - Dùng pipet Iml hút ml dung dịch nồng độ 10' cho vào ml nước ống nghiệm thứ 2, lắc đều, có nồng độ pha loãng 107 - Tiếp tục làm ống nghiệm thứ 3, đến có dãy pha lỗng cần thiết, ni cấy tính số lượng vi sinh vật 74 c) Ni cấy: Cùng dung dịch chất phân tích nhiều mặt nấm, xạ khuẩn loại vi khuẩn cách cấy vào mơi trường thích hợp Mơi trường dịch thể cố thể từ khuẩn lạc mọc môi trường cố thể đặc trưng mơi trường dịch thể, tính số lượng cua vi sinh vat II TÍNH SỐ LƯỢNG VI SINH VẬT Phương pháp thạch (trên môi trường thạch) - Mỗi vi sinh vật mơi trường thích hợp phát triển cho khuẩn lạc Do số lượng khuẩn lạc cho ta biết số lượng vi sinh vật gam chất S=TxI0xN xK S: Số lượng vi sinh vật gam chất T: Số khuẩn lạc trung bình hộp petri 10: Số khuẩn lạc quy I ml (vì lúc ni cấy hộp lồng chung ta dung 0,1 ml dung dich co chat ) N: Số nghịch đảo nồng độ pha loãng K: hệ số khơ kiệt Tính số lượng vi sinh vật mơi trường lỏng (phương pháp dịch thể) Có loại vi khuẩn dùng mắt thường quan sát khuẩn lạc sản phẩm sinh khơng có màu đặc biệt để đánh giá vi khuẩn hoạt động Trong trường hợp phải dùng phản ứng màu để xác định Cứ ống nghiệm có phản ứng màu gọi ống ( + ) Dựa vào ống dương tính, vào bảng Mc.Crady tính số lượng vi sinh vật Ví dụ: Độ pha loãng 104 105 — 10° 107 105 10” Số ống dương 3° „ ớt ? - Tìm số tiêu: 321 Số tiêu số có hàng số Hàng số đầu số biểu nồng độ loãng ống nghiệm dương Hai số số ống dương nồng độ sau 75 - Dem số tiêu tra bảng Mac.Crady ta có số lượng vi khuẩn tương ứng: L5 - Từ số ta tính số lượng vi khuẩn gam chất theo công thức: S=Tx10xN S: Số lượng vị sinh vật T: Số lượng vi khuẩn tra bảng 10: Số lượng vi khuẩn qui I ml N: Số nghịch đảo nồng độ pha loãng K: Hệ số khô kiệt 76 xK Bài 12 THĂM QUAN KIẾN TẬP MƠN HỌC Mục đích, u cầu: + Nhằm trang thiết bị kiến thức thực tế cho sinh viên ứng dụng công nghệ VSV nông nghiệp xử lý ô nhiễm môi trường + Yêu cầu sinh viên tham gia đầy đủ buổi học ngoại khóa theo chương trình mơn học + Sau học xong sinh viên phải viết tiểu luận học ngoại khóa Nội dung địa điểm học ngoại khóa: + Các phịng thí nghiệm VSV đại chun phục vụ giảng dạy & nghiên cứu lĩnh vực nông nghiệp + Các loại chế phẩm, phân VSV sản xuất áp dụng nông nghiệp + Trung tâm VSV ứng dụng Trường Đại học Khoa học Tự nhiên + Phịng nghiên cứu VSV nơng nghiệp Trường đại học Nông nghiệp I + Viện Sinh học (Viện khoa học Việt Nam) + Nhà máy (phân xưởng) phân hữu vi sinh vật (Tiến Nơng tỉnh Thanh Hóa, Văn Điển Hà Nội, Việt Trì tỉnh Phú Thọ tỉnh tồn quốc) + Phịng vi sinh vật (viện Khoa học kỹ thuật Nông nghiệp Việt Nam) + Xí nghiệp xử lý phế thải thị thành phố tỉnh Tỉ PHỤ LỤC Bang Pha dung dịch đệm sorensen I va dung dich Na,HPO, 1/15 M KH;PO, 1/15M - Số lượng dung dịch (ml) pH Na;HPO, 1/15 M KH,PO, 1/15 M 4,53 0,00 10,00 4,48 0,10 9,90 3,29 0,25 9.75 5,59 0,50 9,50 S91 1,00 9,00 6,24 2,00 8,00 6,47 3,00 7,00 6,64 4,00 6,00 6,81 5,00 5,00 6,98 6,00 4,00 7,17 7,00 3,00 7,38 8,00 2,00 7,73 9,00 1,00 8,04 9,50 0,50 8,34 9,75 0,25 8,67 9,90 0,10 9,18 10,00 0,00 Bảng Tính số lượng vi sinh vật theo Mac Crady Số lượng VSYV có xác suất lớn Chi | cấy lặp lại ởcácống | số nghiệm 000 0,0 0,0 0,0 0,0 001 0,5 0,3 0,2 002 - - 003 - 010 Chị SỐ Số lượng VSYV có xác suất lớn cấy lặp lại ống nghiệm 132 - - 1,6 - 0,2 140 - - 1,4 1,1] 0,5 0,4 141 - - 1,7 - - 0,7 - 200 2,5 0,9 0,6 0,5 0,5 0,3 0,2 0,2 201 5,0 1,4 0,9 0,7 011 0,9 0,6 0,5 0,4 202 - 2,0 12 0,9 012 - - 0,7 0,6 203 - - 1,6 1,2 013 - - 0,9 - 210 6,0 1,5 0,9 0,7 020 0,9 0,6 0,5 0,4 211 13,0 2,0 1,3 0,9 021 - - 0,7 0,6 212 20,0 3,0 1,6 1,2 022 - - 0,9 - 213 - - 2,0 - 030 - - 0,7 0,6 220 25,0 2,0 1,3 0,9 031 - - 0,9 - 221 17,0 3,0 1,6 1.2 040 - - 0,9 - 222 110,0 3.5 2,0 1,4 041 - - 1,2 - 223 - 4,5 - - 100 0,6 0,4 0,3 0,2 230 - 3,0 1,7 1,2 101 1,2 0,7 0,5 0,4 34 - 3,5 20 1,4 102 - i,t 0,8 0,6 oon - 4,0 - - 103 - - 1,0 0,8 240 - - 2,0 1,4 110 1,3 0,7 0,5 0,4 241 - - 3,0 - 111 2,0 1,1 0,8 0,8 300 - Dl 1,1] 0,8 I2 - - 1,0 0,8 301 - 4,0 1,6 1,1 113 - - 0,5 - 302 - 6,5 2,0 1,4 120 2,0 1,1 0,8 0,6 303 - - 2a - 121 3,0 1,5 1,1 0,3 310 - 4,5 1,6 1,1 122 - - 1,3 1,1 311 - 1,5 2,0 1,4 123 - - 1,6 - 312 - 11,5 3,0 130 - 1,6 Li 0,8 313 - 16,0 3,5 20 131 - - 1,4 1,0 320 - 9,5 2,0 1,4 79 Số lượng VSY có xác suất lớn cấy lặp lại cácống | Chỉ số Chỉ Số lượng VSV có xác suất lớn cấy lặp lại ông nghiệm nghiệm số vã a 451 - : = 2,0 500 - - - 5,0 25 3,0 1,7 501 - - = 3,0 45,0 2,0 502 - - - 4,0 - 110,0 | 4,0 - 503 - - ` 6,0 333 - 140,0 5,0 - 504 - È = 7,5 340 - - a3 2,0 510 - = == 27 341 - - 4,5 2,5 511 - - z 4,5 350 - - - S12 - - - 6,0 400 - - a 1,3 513 - ˆ - 8,5 401 - - 3,5 Pe 520 - - = 5,0 402 - - 5,0 2,0 S21 - - - 7,0 403 - - 7,0 2,3 322 - - - 410 - - 3,5 1,7 320 - “ - 12,0 411 - - 5.0 2,0 524 - - - 15 413 - - 11,0 - 530 - - - 8,0 414 - - 11,0 - 531 - - - 11,0 420 - - 6,0 2,0 532 - - - 14,0 421 - - a3 oa 533 - - - 17,0 422 - - 13,0 3) 534 - - - 20,0 423 424 : - 17,0 - 535 - - - 25,0 20.0 - 540 - - - 13,0 432 : - | 200 | 40 | 543 : - - a 15,0 321 - 3,0 Lt 322 - 20,0 3,5 330 - 25,0 Aol - 332 : 412 434 440 441 450 B0 | 25 | - | 115 | 2⁄5 | - | - | 165 | 30 | 430 | 431 | 433 = | | | | 80 30,0 - -_ | 350 | - | 250 | 3,5 | - | 400 | 40 | - | 14 | - 525 541 542 544 545 550 551 555 : : 17,5 - : : - 17.0 _ | 250 30,0 : - _ 35,0 : “ : ` - : - — — | | | | 450 25.0 35.0 1804 TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Đường cộng sự, hực tập vi sinh vật trồng trọi, NXB NN, 1986 Nguyễn Đường, Nguyễn Xuân Thành, Thực tập sinh vật đại cương, Trường Đại học Nơng nghiệp I, 1992 Nguyễn Lân Dũng cộng sự, Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học, NXB Khoa học kỹ thuật, 1978 (tập [, II, II) Nguyễn Xuân Thành, V¿ sinh vật học Nông nghiệp, NXB Sư phạm, 2004 Phương pháp kiểm tra chế phẩm vi sinh vật, Nhà xuất Nông nghiệp 2004 81 MỤC LỤC Trang Bài Trang thiết bị cần thiết nghiên cứu vi sinh vật quan sát hình thái vi sinh vật - - 19 Bài Phương pháp Nhuộm, đo kích thước đếm tế bào vi sinh vật -Bài Quan sát hình thái quan sinh sản nấm, xạ khuẩn tảo lam 30 -¿- ¿5-5 2+2 ‡vttrttttetrtrererrrerrre 36 Bài Chuẩn bị môi trường nuôi cấy vi sinh VẬT .- - HH cacaeaiieniaandbeioadboeiepoorinneresegrsesrsreeisbA8a006080/83/10007u80036488/893)/8/ 48 BÃI LÊN Trieli TƯỢN 6ÍV Bài Q trình lên men lactic trình lên men butyrIC . -++ +->- 51 Bài Phân lập giống vi sinh vật Khi€t csssesecerencenensennconerereesnevecesonneonees 55 Bài § Phương pháp lấy mẫu phân lập tuyển chọn vi khuan not san - Rhizobium (2.3.5 s5 61 Bài Quá trình chuyển hóa nitơ tác dụng VSV (Chuyển hóa: amơn hóa; đitorat hỗa; phần nit Tất HĨA) se-s cazecga2 12x c6 ãnggg Goïn g0800053280/95.0388005ã00209802783008650009g:g0p00000gmi 65 Bài 10 Vị sinh vật phân giải lân (PhosphoO) - 5c 2522222222322 *2+zsveerrrersrrerreree 70 Bài 11 Phân tích số lượng vi sinh vật chấtt - ¿+5 5-++++