Nghiên cứu thiết kế tạo dòng và biểu hiện protein tái tổ hợp osmc2 từ vi khuẩn cổ thermococcus kodakarensis KOD1 để đánh giá khả năng bảo vệ tế bào khỏi gốc oxy hóa

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM LÊ NGỌC ÁNH Tên đề tài: NGHIÊN CỨU THIẾT KẾ TẠO DÒNG VÀ BIỂU HIỆN PROTEIN TÁI TỔ HỢP OSMC2 TỪ VI KHUẨN CỔ Thermococcus kodakarensis KOD1 ĐỂ ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG BẢO VỆ TẾ BÀO KHỎI GỐC OXY HÓA KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Khoa : CNSH & CNTP Khóa học : 2017 - 2021 Thái Nguyên, năm 2021 download by : skknchat@gmail.com ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM LÊ NGỌC ÁNH Tên đề tài: NGHIÊN CỨU THIẾT KẾ TẠO DÒNG VÀ BIỂU HIỆN PROTEIN TÁI TỔ HỢP OSMC2 TỪ VI KHUẨN CỔ Thermococcus kodakarensis KOD1 ĐỂ ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG BẢO VỆ TẾ BÀO KHỎI GỐC OXY HÓA KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Lớp : K49 - CNSH Khoa : CNSH & CNTP Khóa học : 2017 - 2021 Họ tên người hướng dẫn : TS Phạm Bằng Phương Thái Nguyên, năm 2021 download by : skknchat@gmail.com i LỜI CẢM ƠN Thực tập tốt nghiệp một khâu rất quan trọng quá trình học tập của mỗi sinh viên nhằm hệ thớng lại tồn bợ lượng kiến thức đã học, vận dụng lý thuyết vào thực tiễn.Qua đó sinh viên trường sẽ hoàn thiện về liến thức lý luận, phương pháp làm việc, lực công tác nhằm đáp ứng nhu cầu thực tiễn của công việc sau Trước tiên, em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban giám hiệu nhà trường, ban Chủ nhiệm khoa Công nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm cùng các thầy, cô Khoa đã giảng dạy hướng dẫn tạo điều kiện thuận lợi cho em quá trình học tập rèn luyện trường, thời gian vừa qua các thầy, cô đã tạo điều kiện cho em được thực đề tài: “Nghiên cứu thiết kế tạo dòng và biểu hiện protein tái tổ hợp OsmC2 từ vi khuẩn cổ Thermococcus kodakarensis KOD1 để đánh giá khả bảo vệ tế bào khỏi gốc oxy hóa” Đặc biệt em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy giáo TS.Phạm Bằng Phương giảng viên Khoa Công nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm đã trực tiếp hướng dẫn, giúp đỡ em thời gian em thực đề tài Em cũng xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè đã động viên, tạo điều kiện cả về vật chất lẫn tinh thần cho em suốt thời gian thực tập Do trình độ có hạn mặc dù đã rất cố gắng song khóa luận tốt nghiệp của em không thể tránh khỏi những thiếu sót Em rất mong nhận được những ý kiến chỉ bảo của thầy cô, đóng góp của bạn bè để khóa ḷn tớt nghiệp của em được hồn thiện Lời cuối em xin được gửi tới thầy ,cô giáo, cùng với gia đình, bạn bè lời cảm ơn lời chúc sức khỏe thành đạt hạnh phúc Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, ngày tháng năm 2021 Sinh viên Lê Ngọc Ánh download by : skknchat@gmail.com ii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH vi DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT vii Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu của đề tài 1.2.1 Mục tiêu tổng quát 1.2.2 Mục tiêu cụ thể 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn 1.3.1 Ý nghĩa khoa học của đề tài 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn của đề tài .2 Phần TỔNG QUAN TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU 2.1 Tổng quan về vi khuẩn Thermococcus kodakarensis KOD1 2.1.1 Nguồn gốc phân loại 2.2 Đặc điểm của vi khuẩn Thermococcus 2.3 Đặc điểm di truyền Thermococcus kodakerensis KDO1 2.4 Đặc điểm protein OsmC2 2.4.1 Giới thiệu 2.4.2 Đặc điểm của protein OsmC2 10 2.5 Đặc điểm chủng vi khuẩn E coli sử dụng tạo dòng biểu 11 2.5.1 E coli DH5α JM109 .12 2.5.2 E coli BL21 12 2.5.3 E coli BL21 (DE3) pLysS 12 2.5.4 E coli M15 (pREP4) .14 2.6 Tình hình nghiên cứu nước thế giới 14 2.6.1 Tình hình nghiên cứu nước 14 download by : skknchat@gmail.com Nghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.ha Nghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.ha iii 2.6.2 Tỡnh hình nghiên cứu thế giới 14 Phần ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 3.1 Đối tượng, hóa chất thiết bị nghiên cứu .17 3.1.1 Đối tượng, vật liệu nghiên cứu: 17 3.1.2 Hóa chất sử dụng nghiên cứu 17 3.1.3 Thiết bị , dụng cụ nghiên cứu 18 3.2 Phạm vi, địa điểm thời gian nghiên cứu .19 3.2.1 Địa điểm nghiên cứu .19 3.2.2 Thời gian nghiên cứu 19 3.3 Phương pháp nghiên cứu 19 3.3.1 Phương pháp tách chiết DNA tổng số 19 3.3.2 Phương pháp khuếch đại gen PCR 21 3.3.3 Phương pháp chuẩn bị tế bào khả biến 22 3.3.4 Phương pháp gắn nối gen vào vecter 22 3.3.5 Phương pháp tách chiết plasmid .23 3.3.6 Phương pháp biến nạp .24 3.3.7 Phương pháp kiểm tra gắn nối gen 24 3.3.8 Phương pháp cảm ứng biểu protein bằng IPTG .24 3.3.9 Phương pháp tinh protein 25 3.3.10 Phương pháp điện di gel SDS-PAGE 25 3.3.11 Tinh protein tái tổ hợp bằng phương pháp Sắc ký ái lực .27 Phần KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 28 4.1 Nghiên cứu khuếch đại OsmC2 từ vi khuẩn T.kodakarensis KDO1 .28 4.1.1 Tách chiết DNA hệ gen của T.kodakarensis KOD1 28 4.1.2 Khuếch đại gen mã hóa OsmC2 bằng phương pháp PCR 29 4.2 Nghiên cứu tạo dịng gen mã hóa protein OsmC2 từ T kodakarensis KOD1 31 4.2.1 Gắn nối đoạn gen OsmC2 vào vector tạo dòng pGEM T-easy .31 4.2.2 Kiểm tra gắn nối bằng enzyme giới hạn 32 download by : skknchat@gmail.com Nghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.ha Nghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.ha iv 4.3 Thiờt kờ tạo vector biểu protein OsmC2 từ Thermococcus kodakarensis KDO1 32 4.4 Nghiên cứu đánh giá khả biểu protein OsmC2 vi khuẩn E coli 35 4.5 Tinh protein chịu nhiệt OsmC2 36 Phần KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 37 5.1 Kết luận 37 5.2 Kiến nghị 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO 38 Phu luc download by : skknchat@gmail.com Nghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.ha Nghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.ha v DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Hóa chất sử dụng đề tài 18 Bảng 3.2 Thiết bị nghiên cứu 19 Bảng 3.3 Thành phần phản ứng PCR khuếch đại gen OsmC2 21 Bảng 3.4 Thành phần phản ứng gắn gen vào vector tách dòng .22 Bảng 3.5 Thành phần phản ứng cắt plasmid bằng NdeI XhoI 24 Bảng 4.1 Kết quả đo độ tinh nồng độ ADN 29 download by : skknchat@gmail.com Nghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.ha 35 Hình 4.8 cho thấy, sau cắt kiểm tra với enzyme giới hạn, plasmid nghi ngờ mang gen đều cho băng đúng với kích thước lý thuyết tương ứng với 5369 bp của pET21b 1038 bp của gen OsmC2 Như vậy, đã gắn nối thành cơng đoạn gen OsmC2 vào đúng vị trí vector pET21b 4.4 Nghiên cứu đánh giá khả biểu protein OsmC2 vi khuẩn E coli Sau chuyển vector biểu pET21b-OsmC2 vào tế bào khả biến E coli BL21(DE3) pLysS cấy trải đĩa thạch LB nuôi 37 oC qua đêm cảm ứng biểu gen bằng việc bổ sung IPTG nồng độ 1mM ni 4h Qua kết quả điện di SDS-PAGE (Hình 4.9) cho thấy, những phân đoạn protein tương ứng với mẫu đối chứng không cảm ứng bằng IPTG (giếng – Hình 4.9) các mẫu protein từ giếng đến xuất thêm băng đậm có kích thước ~20 kDa Kết quả cho thấy phân đoạn protein thu được điều kiện thích hợp từ mơi trường ni E.coli có kích thước ~20 kDa Hình 4.9 OsmC2 biểu tế vào E.coli BL21 Giếng M: Marker protein M3913 Sigma (Giếng M: Protein marker low range M3913 Sigma; Giếng 1: Đối chứng dương OsmC2 E.coli BL21 DE3 không bổ sung IPTG; Giếng 2-4: Cảm ứng biểu OsmC2 ở E.coli BL21 IPTG) download by : skknchat@gmail.com Nghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.ha Nghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.ha 36 4.5 Tinh sch protein chiu nhiệt OsmC2 Tế bào OsmC2 E coli BL21 có chứa gen OsmC2 được nuôi cấy 37oC môi trường LB lỏng, tốc độ lắc 200v/p đến OD600 nm đạt 1,0 Bổ sung IPTG đạt nồng độ mM tiếp tục nuôi tiếng để cảm ứng biểu protein Thu dịch protein tổng số đun điều kiện 70oC 20 phút cho nạp vào cột Ni-NTA để tinh Các phân đoạn rửa với nồng độ imidazol khác được sử dụng để thu protein kiểm tra điện di SDS-PAGE Kết quả thu được thể (hình 4.10) cho thấy, protein thu được phân đoạn 30 mM imidazol có mợt băng nhất tương ứng với kích thước khoảng 32 kDa, tương đương kích thước protein OsmC2, các phân đoạn khác nhiều các băng protein khác Như vậy, sử dụng cột Ni-NTA để tinh protein OsmC2 sẽ cho protein có độ tinh cao phân đoạn 30 mM imidazol, đáp ứng cho yêu cầu nghiên cứu hoạt tính, tính chất về sau Hình ảnh 4.10 Tinh sạch protein OsmC2 cột sắc kí Ni-NTA (Giếng M: Marker protein tầm thấp M3913 Sigma; Giếng U: Protein thô từ dịch phá vỡ tế bào; 30, 50, 100, 250: Phân đoạn protein rửa dung dịch Imidazol nồng độ 30 mM, 50 mM, 100 mM, 250 mM.) download by : skknchat@gmail.com Nghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.ha Nghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.ha 37 Phn KT LUN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Chúng đã thiết kế khuếch đại thành công đoạn gen OsmC2 từ chủng Thermococcus kodakarensis KOD1 Đã tạo dịng thành cơng vector tạo dòng pGEM-OsmC2 vetor biểu pET28-OsmC2 Nghiên cứu đã biểu thành công protein chịu nhiệt OsmC2 tế bào E.coli BL21 DE3 Trong nghiên cứu này, chúng tơi đã tinh OsmC2 bằng cợt sắc kí Ni-NTA 5.2 Kiến nghị - Tiến hành biểu với lượng lớn tinh protein nghiên cứu phân tích các hot tớnh download by : skknchat@gmail.com Nghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.ha Nghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.ha 38 TI LIỆU THAM KHẢO Tiếng việt Nguyễn Văn Cách, (2005) Giáo trình tin sinh, Nhà xuất bản Khoa học Kỹ tḥt Hà Nợi Ngũn Hồng Lợc, Triệu Thị Lệ, Hà Thị Minh,(2007) Giáo trình sinh học phân tử, nhà xuất bản khoa học kỹ thuật Hồ Thị Tuyết Mai, Bài giảng Công nghệ Enzyme, (2006) Trường CĐ Lương Thực Thực Phẩm Đà Nẵng Trần Xuân Ngạch, Công Nghệ Enzyme, (2007) Nhà xuất bản Đại Học Bách Khoa Đà Nẵng Lương Đức Phẩm, Công nghệ vi sinh vật, (2004) Nhà xuất Nông Nghiệp Hà Nội Tiếng Anh Pham, B.P, Jia, B, Lee, S, Ying, S, Kwak, J.M, Cheong, G.-W, Chaperone-like activity of a bacterioferritin comigratory protein from Thermococcus kodakaraensis KOD1 (2015), Protein and Peptide Letters 22 (5), Pages 443-448 Cui, Z., Wang, Y., Pham, B.P., Ping, F., Pan, H., Cheong, G.-W., Zhang, S., Jia, B High level lysophospholipase expression from and characterization Thermococcus of kodakarensis a thermostable KOD1 (2012) Extremophiles, 16 (4), pp 619-625 C Schiraldi, M Giuliano, M De Rosa, Perspectives on biotechnological applications of archaea, Archaea (2002), tr 75–86 C Gutierrez, J.C Devedjian, “Osmotic induction of gene osmC expression in Escherichia coli K12”, J Mol Biol 20 (1991) 959–973 10 U Völker, K.K Andersen, H Antelmann, K.M Devine, M Hecker, “One of two OsmC homologs in Bacillus subtilis is part of the σB-dependent general stress regulon”, J Bacteriol 180 (1998) 42124218 download by : skknchat@gmail.com Nghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.ha Nghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.ha 39 11 Atomi, H., et al., “Description of Thermococcus kodakaraensis sp nov., a well studied hyperthermophilic archaeon previously reported as Pyrococcus sp KOD1” Archaea, 2004 1(4): p 263-7 12 Fukui, T., et al (2011), “Complete genome sequence of the hyperthermophilic archaeon Thermococcus kodakaraensis KOD1 and comparison with Pyrococcus genomes” Genome Res115(3): p 352-63 13 Jia, B., Lee, S., Pham, B.P., Kwack, J.M., Jin, H., Li, J., Wang, Y., Cheong, G.W “Biochemical characterization of deblocking aminopeptidases from the hyperthermophilic archaeon Thermococcus kodakarensis KOD1”, Bioscience, Biotechnology and Biochemistry, 75 (6), pp 1160-1166 14 Ruan, J., “Bergey's Manual of Systematic Bacteriology (second edition) Volume and the study of Actinomycetes systematic in China” Wei Sheng Wu Xue Bao, 53(6): p 521-30 15 Macalady, J.L., et al.(2004), “Tetraether-linked membrane monolayers in Ferroplasma spp: a key to survival in acid Extremophiles, 8(5): p 411-9 16 Fiala, J., “The Scientific Council of the Czech Ministry of Health and its function” Cesk Pediatr, 1986 41(7): p 418-9 17 Li, J.F., “ A fast neighbor joining method Genet Mol Res”, 2015 14(3): p 8733-43 18 Escriva, H., et al.(1995), “Rat mammary-gland transferrin: nucleotide sequence, phylogenetic analysis and glycan structure” Biochem J, 307 (Pt 1): p 47-55 19 Miroshnichenko, V.P., et al.(1989), “Characteristics of the diagnosis and treatment of severe forms of late pregnancy toxemia” Akush Ginekol (Mosk), (5): p 43-8 20 Zheng, X., et al.(2014), “Phylogeny and evolutionary histories of Pyrus L revealed by phylogenetic trees and networks based on data from multiple DNA sequences” Mol Phylogenet Evol, 80: p 54-65 21 Ishino, Y and I.K Cann(1998), “The euryarchaeotes, a subdomain of Archaea, survive on a single DNA polymerase: fact or farce”, Genes Genet Syst, 73(6): p 323-36 download by : skknchat@gmail.com Nghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.ha Nghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.ha 40 22 Woese, C.R and R Gupta (1981), “Are archaebacteria merely derived 'prokaryotes” Nature, 289(5793): p 95-6 23 Gupta, R.S.(2002), “The natural evolutionary relationships among prokaryotes” Crit Rev Microbiol, 26(2): p 111-31 24 Gribaldo, S and C Brochier-Armanet(2006), “The origin and evolution of Archaea: a state of the ar”t Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci, 2006 361(1470): p 1007-22 25 Vannier, P., et al.(2015), “Genome expression of Thermococcus barophilus and Thermococcus kodakarensis in response to different hydrostatic pressure conditions” Res Microbiol, 166(9): p 717-25 26 Lamosa, P., et al.(1998), “Effects of temperature, salinity, and medium composition on compatible solute accumulation by thermococcus spp” Appl Environ Microbiol, 64(10): p 3591-8 27 Baneyx, F (1999) "Recombinant protein expression in Escherichia coli" Curr Opin Biotechnol, 10(5), 411-421 28 Maniatis T, Fritsch EF, Sambrook J (1989), “Molecular Cloning-A Laboratory Manual”, Cold Spring Habor Laboratory, USA 29 Mbuyi, J M., J Dequeker, F Bloemmen, E Stevens (1982) "Plasma proteins in human cortical bone: enrichment of alpha HS-glycoprotein, alpha acidglycoprotein, and IgE", Calcif Tissue Int, 34(3), pg 229-231 30 Novagen (2006) "pET System Manual" TB055 11th Edition, Rev.B, 0403, USA 31 Sugantha priya S, Gowri Shankar J, Thirumalaisamy R, K P (2010) "Over Expression of IPTG inducible GST protein in E coli BL21.", Journal of Biomedical Sciences and Research, 2(1), pg 54-59 32 The QIAexpressionistTM (2003), “A handbook for high-level expression and purification of 6xHis-tagged proteins”, Fifth edition, QIAGEN, Germany 33 Zhang, J., et al (2015), “Analysis of chromosome 22q11 copy number variations by multiplex ligation-dependent probe amplification for prenatal diagnosis of congenital heart defect” Mol Cytogenet, (8): p 100 download by : skknchat@gmail.com Nghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.ha Nghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.ha 41 34 Fukui T, Atomi H, Kanai T, Matsumi R, Fujiwara S, Imanaka T Complete genome sequence of the hyperthermophilic archaeon Thermococcus kodakaraensis KOD1 and comparison with Pyrococcus genomes Genome Res 2005 Mar;15(3):352-63 35 T de Miguel Bouzas, J Barros-Velazquez, T.G Villa, Industrial appli-cations of hyperthermophilic enzymes: a review, Protein Pept Lett 13 (2006) 645–651 36 D.A Cowan, Enzymes from thermophilic archaebacteria: current and future applications in biotechnology, Biochem Soc Symp 58 (1992) 149–169 37 C Schiraldi, M Giuliano, M De Rosa, Perspectives on biotechnological applications of archaea, Archaea (2002) 75–86 38 C Gutierrez, J.C Devedjian, Osmotic induction of gene osmC expression in Escherichia coli K12, J Mol Biol 20 (1991) 959–973 39 U Völker, K.K Andersen, H Antelmann, K.M Devine, M Hecker, One of two OsmC homologs in Bacillus subtilis is part of the σB-dependent general stress regulon, J Bacteriol 180 (1998) 4212–4218 40 M Davalos-Garcia, A Conter, I Toesca, C Gutierrez, K Cam, Regulation of osmC gene expression by the two-component system rcsB–rcsC in Escherichia coli, J.Bacteriol 183 (2001) 5870-5876 download by : skknchat@gmail.com Nghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.ha Nghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.haNghiên.cỏằâu.thiỏt.kỏ.tỏĂo.dng.v.biỏằu.hiỏằn.protein.tĂi.tỏằã.hỏằÊp.osmc2.tỏằô.vi.khuỏân.cỏằã.thermococcus.kodakarensis.KOD1.ỏằ.Ănh.giĂ.khỏÊ.nng.bỏÊo.vỏằ.tỏ.bo.khỏằãi.gỏằc.oxy.ha