Phân lập, xác định vai trò gây bệnh của salmonella typhimurium và salmonella enteritidis trên đàn vịt tại một số huyện thuộc tỉnh hưng yên và biện pháp phòng tr

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TRẦN VĂN THÀNH PHÂN LẬP, XÁC ĐỊNH VAI TRÒ GÂY BỆNH CỦA SALMONELLA TYPHIMURIUM VÀ SALMONELLA ENTERITIDIS TRÊN ĐÀN VỊT TẠI MỘT SỐ HUYỆN THUỘC TỈNH HƯNG YÊN VÀ BIỆN PHÁP PHỊNG TRỊ LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NƠNG NGHIỆP THÁI NGUYÊN - 2010 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Tai ngay!!! Ban co the xoa dong chu nay!!! http://www.lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TRẦN VĂN THÀNH PHÂN LẬP, XÁC ĐỊNH VAI TRÒ GÂY BỆNH CỦA SALMONELLA TYPHIMURIUM VÀ SALMONELLA ENTERITIDIS TRÊN ĐÀN VỊT TẠI MỘT SỐ HUYỆN THUỘC TỈNH HƯNG YÊN VÀ BIỆN PHÁP PHÒNG TRỊ Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60.62.50 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP Người hướng dẫn khoa học: GS.TS NGUYỄN QUANG TUYÊN PGS.TS TRẦN THỊ HẠNH THÁI NGUYÊN - 2010 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Nền kinh tế nước ta phát triển hội nhập kinh tế toàn cầu, mức sống ngày nâng cao Do vậy, ngành chăn ni nước ta chiếm vị trí quan trọng sản xuất nơng nghiệp nói riêng cấu kinh tế nói chung Chăn ni với nhiều phương thức góp phần giải cơng ăn việc làm, nâng cao thu nhập cho người dân, tạo sản phẩm có giá trị xuất khẩu, góp phần tăng trưởng kinh tế, xã hội, nước ta vừa gia nhập tổ chức thương mại giới (WTO) việc nâng cao chất lượng đàn gia súc, gia cầm cần đầu tư, trọng Mục tiêu chủ yếu kế hoạch phát triển chăn nuôi Việt Nam đến năm 2010 cần đạt: đàn lợn 32,8 triệu con, sản lượng thịt lợn 3,2 triệu tấn; đàn bò thịt 7,1 triệu con, sản lượng thịt bò 210 ngàn tấn; đàn bò sữa 200 ngàn con, sản lượng sữa 350 ngàn tấn; đàn gia cầm 283 triệu con, sản lượng thịt 1427 ngàn 7,95 tỷ trứng gà, vịt (Cục chăn nuôi, 2006)[3] Để đạt mục tiêu cần phải đầu tư cho công tác giống, quan tâm đến vấn đề thức ăn, chương trình quản lý, đồng thời phải trọng công tác thú y, tăng cường áp dụng biện pháp khoa học kỹ thuật chẩn đốn làm sở cho cơng tác phịng, chống dịch bệnh vật ni có hiệu Vịt lồi thuỷ cầm có tính thích nghi cao với điều kiện sinh thái, thích hợp cho việc chăn thả nơi có nguồn nước để tìm kiếm thuỷ động vật thóc lúa rơi vãi sau thu hoạch Những năm gần đây, chăn nuôi vịt thịt phát triển mạnh, nhiên, điều kiện ni vịt cần có nước môi trường thuận lợi cho việc phát triển bệnh vi khuẩn gây ra, Salmonella có vai trị quan trọng dịch tễ, hạn chế đáng kể việc phát triển Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn mạnh giống gia cầm Hầu hết sản phẩm chăn nuôi vịt bị vấy nhiễm Salmonella mức độ khác Nhiều kết nghiên cứu nước kết luận Salmonellosis bệnh chung nhiều lồi vật ni gây bệnh cho người Nhằm đảm bảo an toàn cho người tiêu dùng, tiêu chuẩn qui định Salmonella khơng có type Salmonella 25 gam sản phẩm thực hầu hết quốc gia giới Ở Việt Nam, tiêu chuẩn quy định TCVN 7046-2002[49] Đặc biệt giai đoạn nước ta gia nhập tổ chức thương mại giới (WTO) vấn đề an tồn vệ sinh thực phẩm, có gia cầm thịt gia cầm bệnh Salmonella yêu cầu cấp thiết Vi khuẩn Salmonella nghiên cứu từ nhiều năm nay, năm gần chúng nhà nghiên cứu quan tâm nhiều gia tăng bệnh ngộ độc thực phẩm người mà nguyên nhân chủ yếu độc tố chúng gây Việc nghiên cứu vi khuẩn Salmonella, tỷ lệ nhiễm, vai trò gây bệnh chúng… đàn gia cầm tỉnh Hưng Yên việc làm cần thiết, để từ có sở xây dựng biện pháp phịng, chống bệnh đạt hiệu cao, góp phần thúc đẩy chăn ni gia cầm nói chung, chăn ni vịt nói riêng phát triển bền vững, tạo sản phẩm an tồn vệ sinh thực phẩm, có sức cạnh tranh cao thị trường Ở nước ta nghiên cứu Salmonella nói chung đặc biệt loài Salmonella typhimurium (S typhimurium) Salmonella enteritidis (S enteritidis) gây ngộ độc thực phẩm chủ yếu người cịn quan tâm Tại Hưng n chăn ni vịt năm gần trì phát triển hộ gia đình trang trại góp phần tăng thu nhập kinh tế cho nơng hộ Tuy nhiên, ngồi số bệnh truyền nhiễm nguy hiểm cúm gia cầm, viêm gan đàn thủy cầm ni Hưng n cịn bị tổn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn thất nhiều nhiễm bệnh Salmonellosis Để có sở việc nghiên cứu xây dựng biện pháp phòng trị Salmonellosis đàn vịt cho hiệu cao Hưng Yên, phân lập, xác định Serotype kiểm tra động lực chủng vi khuẩn Salmonella gây bệnh phân lập Xuất phát từ vấn đề trên, đồng ý tập thể thầy cô giáo hướng dẫn sở nghiên cứu tiến hành nghiên cứu đề tài: “Phân lập, xác định vai trò gây bệnh Salmonella typhimurium Salmonella enteritidis đàn vịt số huyện thuộc tỉnh Hưng Yên biện pháp phòng trị” Mục tiêu nghiên cứu đề tài Xác định đặc tính sinh vật, hố học đặc tính gây bệnh vi khuẩn S typhimurium S enteritidis vịt số huyện thuộc tỉnh Hưng Yên Xác định số yếu tố gây bệnh vi khuẩn Salmonella phân lập Kiểm tra độc lực, độc tố, khả bám dính… chủng Salmonella phân lập Đề xuất biện pháp phòng trị thích hợp Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Đây cơng trình nghiên cứu tập trung chủng Salmonella đàn vịt số huyện thuộc tỉnh Hưng Yên Bước đầu xác định số đặc tính Salmonella Xác định nhóm kháng nguyên, định type vi khuẩn phân lập xây dựng biện pháp phòng chống bệnh Salmonella gây vịt Kết nghiên cứu đề tài bổ sung thêm nguồn tư liệu cho nghiên cứu Salmonella vịt nói riêng Salmonella gia cầm nói chung Việt Nam giới Kết nghiên cứu sở để xây dựng chương trình phịng bệnh tổng hợp để bước giám sát khống chế bệnh Salmonella gây vịt góp phần bảo vệ sức khoẻ vật ni cộng đồng Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình nghiên cứu hội chứng tiêu chảy vịt vi khuẩn Salmonella 1.1.1 Tình hình nghiên cứu vai trị gây bệnh S typhimurium S enteritidis vịt Salmonella thành viên họ vi khuẩn đường ruột Enterobacteriaceae, giống vi khuẩn gọi tên bác sỹ Thú y Daniel E Salmon Smith, để kỉ niệm người tìm Kể từ năm 1985 sau Daniel E Salmon Smith phân lập vi khuẩn Salmonella đến người ta tìm thấy 2100 chủng (serova) khác loài vi khuẩn Vi khuẩn Salmonella trực khuẩn Gram âm,hai đầu trịn, khơng hình thành nha bào S typhimurium S enteritidis gây bệnh cho gia cầm Nghiên cứu thực học viện Metnhicốp (1956 - 1958) cho thấy 156 mẫu Salmonella phân lập từ gia cầm (trong có vịt) có 96/156 (52,9%) S typhimurium (Trần Xuân Hạnh cs, 1998)[18] Ở Long An, Thành phố Hồ Chí Minh tỉnh lân cận, cho thấy: 8,8% vịt đẻ, 24,7% vịt con, 31,7% phôi trứng bị chết 64,8% cứt xu bị nhiễm Salmonella (Trần Xuân Hạnh cs, 1998[18]) Ở Inđônêsia, năm 1992 - 1993, xác định 26 mẫu huyết vịt, S tyhimurium 24%, S amsterdam 10,5%, S virchov 7,5% S thompson 6,8% (Trần Thị Hạnh cs, 2002)[15] Đối với tất loài gia cầm, Salmonellosis thể thể bệnh nhiễm trùng, nhiễm trùng không xuất triệu chứng, không bệnh tích trở thành vật khoẻ mang trùng, chúng suốt đời tiết thường xuyên gián đoạn Salmonella môi trường thể bệnh với triệu chứng nở chết nở Các vịt bị xù lơng, sợ rét, Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn cuộn chụp sưởi, khát nước chết nước Đôi biểu viêm khớp, viêm rốn, đặc biệt nhiễm S typhimurium Trong số trường hợp biểu triệu chứng tiêu hoá ỉa lỏng nước trắng xanh, có vết máu, tỷ lệ chết tới 70% Trong thể cấp tính, bệnh kéo dài ngày khơng có triệu chứng điển hình Ở vịt đẻ, thể cấp tính đặc trưng triệu chứng ủ rũ, sốt, manh tràng xanh sẫm Thể mãn tính trước hết biểu triệu chứng sinh sản chậm đẻ, giảm tỷ lệ đẻ, viêm buồng trứng - vòi trứng trứng khơng có vỏ Ở vịt con, tổn thương viêm ống tiêu hố, gan màng ngồi tim thể rõ hội chứng phó thương hàn (PTH) Tuy nhiên, vịt đẻ thể tổn thương rõ ràng Vịt nơi cư trú type Salmonalla khác phân bố rộng rãi, đặc biệt S enteritidis, S saintpaul, S typhimurium, S montevideo, S panama… Ở Pháp, vào năm 1994-1995 thấy 27 type huyết khác vịt Tại Việt Nam, 14 type huyết xác định cứt su phân vịt tỉnh thành phố Hồ Chí Minh, Đồng Tháp, Long An Trong type huyết chiếm ưu S typhimurium, S senftenberg, S amsterdam, S takssony… (Trần Xuân Hạnh cs, 1998[18]) 1.1.2 Tình hình nghiên cứu vi khuẩn Salmonella 1.1.2.1 Nghiên cứu giới Nghiên cứu, phát Salmonella bệnh chúng gây ra, với bệnh dịch tả, lao, nhiệt thán, thương hàn thuộc dịch bệnh bắt đầu nghiên cứu cách 120 năm lĩnh vực vi sinh vật y học Năm 1880 E berth lần quan sát thấy vi khuẩn kính hiển vi Sau năm, năm 1884 Gaffky ni cấy thành cơng vi khuẩn Lồi vi khuẩn S typhi lúc đầu gọi với tên Bacillus typhous, Bacterium typhi Eberthella typhy typhosa Còn tên giống Salmonella Lignires sử dụng Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn đặt cho trực khuẩn gây bệnh dịch tả “Hog-cholera bacillus” vào năm 1900 (Selbitz cs, 1995)[74] Tên loài vi khuẩn quen thuộc ngày S cholerae suis, lần đầu xuất báo cáo năm phòng Chăn ni Cơng nghiệp Mỹ năm 1885 với nhìn nhận nhầm lẫn cho tác nhân gây bệnh dịch tả lợn (Barnes D.M Sorensen K.D, 1975)[51] D.E Salmon lúc trưởng phịng nghiên cứu, mà tên ông lấy để đặt tên cho vi khuẩn Song người thức phát loài vi khuẩn Salmonella lại T Smith, cộng ông Những năm tiếp theo, nhà khoa học tiếp tục phân lập vi khuẩn gây bệnh người, tìm thấy vi khuẩn thịt bị, chuột bạch… Năm 1988, A.Gartner Jena (Đức) xác định nguyên nhân gây viêm ruột người ăn phải thịt bò chết Frankenhausen (Đức) vi khuẩn, lúc gọi Bacillus enteritidis (nay S.enteritidis); vào tên người phát vi khuẩn, nơi mà vi khuẩn gây bệnh; khoảng thời gian dài loài vi khuẩn S enteritidis gọi trực khuẩn Gartner với tên khác Gartner - bacillus Typus Gartner Jena Năm 1889 1890 Viện vệ sinh trường Đại học Greiswald (Đức) F.Loeffler phụ trách xảy dịch bệnh gây thiệt hại nghiêm trọng chuột thí nghiệm Ngun nhân lồi vi khuẩn lúc gọi tên Bacillus typhimurium Năm 1891, C.O Jensen tách S dublin từ bệnh phẩm bê bị bệnh tiêu chảy Cùng năm lồi S typhimurium phát Greiswald Breslau Năm 1900, tên giống Salmonella Lignieres sử dụng đặt cho trực khuẩn gây bệnh dịch tả “Hogcholera bacillus” Lúc đầu tất bệnh gia súc Salmonella gây gọi chung tên bệnh PTH “Paratyphus” Cho đến năm 1914 có tổng cộng 12 lồi vi khuẩn mơ tả xếp vào giống Salmonella Trong năm 30 (thế kỷ XX) Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn số lượng loài Salmonella tăng lên nhanh chóng Năm 1926, White có cơng trình nghiên cứu cấu trúc kháng nguyên Salmonella, bắt đầu thời kỳ khoa học giống vi khuẩn F.Kauffmann tiếp tục thành cơng nghiên cứu sau thiết lập bảng kháng nguyên vào năm 1934, làm tảng cho việc tra cứu Bảng kháng nguyên vi khuẩn Salmonella gọi tên bảng phân loại Kauffmann White thường xuyên Trung tâm hợp tác WHO nghiên cứu Salmonella Viện Pasteur - Pari bổ sung cơng nhận Cùng năm đó, hai nhà bác học thiết lập bảng cấu trúc kháng nguyên đặt tên bảng phân loại Kauffmann-White Từ đến nay, bảng cấu trúc kháng nguyên Salmonella luôn bổ sung Năm 1993 có 2375 type Salmonella định danh Đến năm 1997 số type Salmonella lên đến 3000 Năm 1998 lại có thêm type khác bổ sung Như giống Salmonella luôn thu hút ý nhà chuyên môn lĩnh vực Vi sinh vật Y học (Selbitz cs, 1995)[74] Năm 1934, theo đề nghị hội nghị nhà sinh vật học quốc tế, để kỷ niệm người tìm vi khuẩn Salmon, tên thức lồi vi khuẩn đặt Salmonella (Nguyễn Như Thanh, 2001)[42] Vi khuẩn Salmonella tìm thấy tất nước khắp giới động vật khoẻ động vật ốm Năm 1972, nước Anh tìm thấy vi khuẩn Salmonella có phân lợn 9,9% số mẫu kiểm tra; năm 1973, tiếp tục phát Salmonella hạch ruột lợn ốm 7,3% Tại Mỹ, năm 1984 xét nghiệm thấy Salmonella máu lợn chết 4,3% Năm 1989, Hungari công bố tỷ lệ mẫu phân lợn có Salmonella tới 48% (Wilcock Schwartz, 1992) [80] Việc nghiên cứu chi tiết lồi Salmonella gây bệnh cho loại vật ni nhiều tác giả thơng báo Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Barnes Sorensen (1975)[51]; Wilcock Schwartz (1992)[80]; Selbitz cs, (1995)[74]; Laval A (2000)[23] cho biết bệnh Phó thương hàn cấp tính lợn S cholerae suis var kunzendorf gây ra; bệnh viêm ruột mãn tính S typhimurium Gây bệnh chủ yếu trâu, bị S dublin, S enteritidis Các lồi S abortus ovis, S montevideo, S dublin, S anatum gây bệnh cừu S abortus equi tác nhân gây bệnh cho ngựa Còn gia cầm chim chủ yếu S pullorum-.gallinarum, S typhimurium, S enteritidis gây Tại Mỹ nhiều cơng trình nghiên cứu chủng Salmonella gây bệnh cho gia cầm công bố Williams cs, (1976)[82] nghiên cứu biện pháp chẩn đoán phát S typhimurium gia cầm Tại nước Đông Nam Á, Bela Toth (1985)[47] chuyên gia thú y FAO dành nhiều năm nghiên cứu bệnh vịt cho biết bệnh Salmonella gây vịt xảy hầu khắp giới tỷ lệ thay đổi từ 60% Trong ổ dịch thường thấy vịt chết từ ngày đầu sau đưa khỏi lò ấp, vịt lứa tuổi mẫn cảm với bệnh, nhiên triệu chứng lâm sàng thường thấy vịt Đã có nghiên cứu chủng Salmonella gây bệnh vịt, số tác giả phân lập S typhimurium từ số ổ dịch tự nhiên xảy vịt vịt đẻ Tuy nhiên, tác giả nhận thấy vịt có sức đề kháng với Salmonella cao so với gà S typhimurium S enteritidis đựơc coi nguyên nhân chủ yếu gây bệnh cho vịt Tại Thái Lan, phân lập S typhimurium từ ổ dịch tự nhiên xảy vịt Vai trò gây bệnh Salmonella gia cầm đề cập từ đầu kỷ XX, nhiên triệu chứng bệnh mô tả sớm nhiều Vào năm 1888 vụ dịch xảy Anh sở chăn nuôi gà công nghiệp gây chết 400 Lúc người ta nghi bệnh dịch tả gà, Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 97 79 Weinstein D L, Carsiotis M., Lissner C H R, Osrien A D (1984), “Flagella help Samonella typhimurium survive within murine macrophages”, Infection and Immuniti 46 pp 819 - 825 80 Wilcock B.P, Schwartz K.J (1992), Salmonellosis Diseaes of Swine, 7th Edition, pp 570 - 583 81 Wilcock B.P (1995), Salmonellois Diseases of Swine -Sixth Edition, Iowa state University Press - U.S.A pp 508 - 518 82 William, J E and C D Gordon: The hat chability of chicken eggs fumigated with increasing level of formaldehyde gas before incubation Ponlt Sci, 1976.pp 560 - 564 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 98 PHỤ LỤC Sơ đồ nuôi cấy phân lập vi khuẩn Salmonella (theo tiêu chuẩn ISO 6579-2003) Mẫu (lách, manh tràng, trứng, nước môi trường) 25g Môi trường Buffered Pepton Water (225ml) 37oC/16-18h giọt 1ml Môi trường thạch MRSV Môi trường Muler Kaufman 41,5oC/24-48h 37oC/18-24h Ria cấy thạch Rambach 37oC/24h Ria cấy thạch XLT4 37oC/24h Khuẩn lạc màu đen, bóng, rìa gọn Khuẩn lạc màu đỏ, rìa gọn Chọn khuẩn lạc đặc trưng Ria cấy cấy chích sâu thạch nghiêng Kligler Phản ứng sinh hố Lysine (+) Định type Ureaza (-) Simoncitrat (+) Lactoza (-) Glucoza (+) H2S (+) Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 99 MỘT SỐ HÌNH ẢNH MINH HỌA Phân lập vi khuẩn Vi khuẩn Salmonella di động Vi khuẩn Salmonella di động MSRV MSRV Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 100 Khuẩn lạc Salmonella Khuẩn lạc Salmonella trên XLT4 Rambach Kiểm tra Kligler Simon citrate dƣơng tính (ống bên trái) Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 101 Lysine âm tính (2 ống bên), ure âm tính Bộ kháng huyết dùng định type Salmonella Khay có giếng dùng định type Salmonella Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 102 Tiêm truyển động vât thí nghiệm Mổ khám kiểm tra bệnh tích chuột thí nghiệm Tiêm truyền động vật cảm thụ Mổ khám kiểm tra bệnh tích động vật cảm thụ Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 103 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan rằng, cơng trình nghiên cứu riêng tôi, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa sử dụng để bảo vệ học vị Tôi xin cam đoan, giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Thái Nguyên, tháng năm 2010 Tác giả luận văn Trần Văn Thành Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 104 LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ Thầy GS.TS Nguyễn Quang Tuyên, cô PGS.TS Trần Thị Hạnh, người trực tiếp hướng dẫn q trình nghiên cứu hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ thầy cô giáo khoa Sau Đại học khoa Chăn nuôi Thú y - Trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên giành nhiều thời gian, công sức giúp đỡ tơi q trình học tập thực đề tài Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn Ban lãnh đạo Viện Thú y thành viên mơn Vệ sinh gia súc tận tình giúp đỡ, hướng dẫn tơi q trình thực hoàn thành luận văn Xin chân thành cảm ơn chủ chăn nuôi trang trại vịt địa bàn nghiên cứu tạo điều kiện giúp đỡ trình thực đề tài Tơi xin gửi lời cám ơn tới người thân gia đình, bạn bè, đồng nghiệp ln động viên giúp đỡ tơi hồn thành luận văn Thái Nguyên, tháng năm 2010 Tác giả luận văn Trần Văn Thành Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn i MỤC LỤC MỞ ĐẦU Error! Bookmark not defined Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu nghiên cứu đề tài 3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình nghiên cứu hội chứng tiêu chảy vịt vi khuẩn Salmonella 1.1.1 Tình hình nghiên cứu vai trị gây bệnh S typhimurium S enteritidis vịt 1.1.2 Tình hình nghiên cứu vi khuẩn Salmonella 1.1.2.1 Nghiên cứu giới 1.1.2.2 Tình hình nghiên cứu vi khuẩn Salmonella nước 1.2 Vi khuẩn Salmonella 13 1.2.1 Đặc điểm hình thái 13 1.2.2 Đặc điểm tính chất ni cấy 14 1.2.3 Đặc tính sinh hóa 16 1.2.4 Đặc điểm dịch tễ học Salmonella 17 1.2.5 Cấu trúc kháng nguyên 19 1.2.5.1 Kháng nguyên O 20 1.2.5.2 Kháng nguyên H 21 1.2.5.3 Kháng nguyên vỏ (KN - K) 21 1.2.5.4 Kháng nguyên màng vỏ bọc (Outer Membrame Protein - OMP) (KN - OMP) 22 1.2.5.5 Kháng nguyên pili (KN - Pili) - Fimbriae antigen 22 1.2.6 Các yếu tố gây bệnh Salmonella 23 1.2.6.1 Các yếu tố độc tố 23 1.2.6.2 Các yếu tố độc tố vi khuẩn Salmonella 26 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ii 1.2.7 Vai trò gây bệnh đường tiêu hoá Salmonella 29 1.3 Bệnh phó thương hàn vịt 30 1.3.1 Căn bệnh 30 1.3.2 Yếu tố truyền bệnh 31 1.3.3 Đặc điểm dịch tễ học 32 1.3.4 Quá trình gây bệnh 32 1.3.5 Triệu chứng 34 1.3.6 Bệnh tích 35 1.3.7 Chẩn đoán 35 1.3.7.1 Chẩn đoán dịch tễ học 36 1.3.7.2 Chẩn đoán lâm sàng 36 1.3.7.3 Chẩn đoán phịng thí nghiệm 36 1.3.8 Phòng bệnh 38 1.3.9 Điều trị 38 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 40 2.1 Đối tượng, vật liệu địa điểm nghiên cứu 40 2.1.1 Đối tượng 40 2.1.2 Vật liệu dùng nghiên cứu 40 2.1.2.1 Mẫu bệnh phẩm 40 2.1.2.2 Vật liệu khác 40 2.1.3 Địa điểm nghiên cứu 41 2.1.4 Thời gian thực đề tài 41 2.2 Nội dung nghiên cứu 41 2.3 Phương pháp nghiên cứu 42 2.3.1 Phương pháp lấy mẫu 42 2.3.2 Phương pháp phân lập vi khuẩn theo ISO 6579 42 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn iii 2.3.3 Phương pháp giám định đặc tính sinh hố 45 2.3.3.1 Phản ứng chuyển hố đường: mơi trường pepton 45 2.3.3.2 Phản ứng Indole (dùng thuốc thử Kavac) 45 2.3.3.3 Phản ứng sinh H2S 46 2.3.3.4 Phản ứng Catalase Oxidase 46 2.3.4 Xác định type chủng vi khuẩn Salmonella phân lập 46 2.3.5 Xác định khả sản sinh độc tố 48 2.3.5.1 Phương pháp xác định kháng nguyên bám dính vi khuẩn 48 2.3.5.2 Xác định độc tố chủng vi khuẩn Salmonella phân lập phương pháp khuếch tán da thỏ 50 2.3.6 Xác định độc lực chủng vi khuẩn Salmonella phân lập 51 2.3.6.1 Tiêm truyền động vật thí nghiệm 51 2.3.6.2 Phương pháp xác định LD50 vi khuẩn S typhimurium S enteritidis phân lập từ vịt 51 2.3.6.3 Gây bệnh thực nghiệm vịt 52 2.3.7 Xác định tính mẫn cảm với số kháng sinh chủng Salmonella phân lập 53 2.3.7.1 Chuẩn bị 53 2.3.7.2 Tiến hành 53 2.3.7.3 Đọc kết 54 2.3.8 Xây dựng phác đồ điều trị bệnh Phó thương hàn vịt 54 2.4 Phương pháp xử lý số liệu 56 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 57 3.1 Kết xác định tỷ lệ nhiễm Salmonella vịt Hưng Yên 57 3.2 Kết xác định tỷ lệ nhiễm Salmonella vịt theo mùa vụ 60 3.3 Kết xác định số đặc tính ni cấy đặc tính sinh hố chủng vi khuẩn Salmonella phân lập 61 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn iv 3.4 Kết giám định Salmonella phân lập từ kháng huyết O đơn đa giá 65 3.5 Kết xác định type vi khuẩn Salmonella phân lập từ vịt 66 3.6 Kết xác định kháng nguyên bám dính vi khuẩn Salmonella phân lập 69 3.7 Kết xác định khả sản sinh độc tố chủng vi khuẩn S typhimurium S enteritidis phân lập 71 3.8 Kết thử độc lực chủng Salmonella phân lập 73 3.9 Kết xác định LD50 vi khuẩn Salmonella phân lập 75 3.10 Kết gây bệnh thực nghiệm vịt vi khuẩn Salmonella phân lập 79 3.11 Kết xác định khả mẫn cảm kháng sinh hai chủng S typhimurium S enteritidis phân lập 81 3.12 Kết điều trị bệnh Salmonella vit 84 KẾT LUẬN, TỒN TẠI VÀ ĐỀ NGHỊ 87 4.1 Kết luận 87 4.2 Tồn 88 4.3 Đề nghị 88 TÀI LIỆU THAM KHẢO 89 PHỤ LỤC 98 MỘT SỐ HÌNH ẢNH MINH HỌA 99 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn v DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU - CÁC CHỮ VIẾT TẮT BGA Brilliant Green Agar BPW Bytfered Pêpt Water BSA Bismuth Sulfite Agar CHO Chinese Hansten Ovary DPF Delayd Permeability Factor S enteritidis Salmonella enteritidis KN Kháng nguyên KĐ Kim động LD50 50 percent Lethal Dose LPS Lypopolysaccharide LT Heat Lable Toxin MSRV Modified Semisolid Rappaport Vassiliadis R Rough RPF Rapit Permeability Factor S Smooth ST Heat Stable Toxin S typhimurium Salmonella typhimurium TL Tiên Lữ TSI Tryple Sugar Iron XLT4 Xylose Lysine Tetrathionate AT Ân Thi Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn vi DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1: Bảng định type huyết học vi khuẩn Salmonella theo Kauffmann-White (1972) [59] 48 Bảng 2.2: Bảng đánh giá mức độ mẫn cảm vi khuẩn với số loại kháng sinh 54 Bảng 1: Kết xác định tỷ lệ nhiễm Salmonella vịt 57 Bảng 3.2: Tỷ lệ nhiễm Salmonella theo mùa vụ năm 60 Bảng 3.3: Kết kiểm tra số đặc tính ni cấy vi khuẩn Salmonella phân lập 62 Bảng 3.4: Kết xác định số đặc tính sinh hố vi khuẩn Salmonella phân lập 63 Bảng 3.5: Kết giám định khả lên men số loại đường chủng Salmonella phân lập 64 Bảng 3.6: Kết giám định vi khuẩn Salmonella từ vịt kháng huyết O đơn đa giá 65 Bảng 3.7: Kết xác định type vi khuẩn Salmonella phân lập 67 Bảng 3.8: Kết xác định S typhimurium S enteritidis phân lập địa bàn nghiên cứu 68 Bảng 3.9: Kết phản ứng ngưng kết trực tiếp hồng cầu chủng vi khuẩn Salmonella phân lập 70 Bảng 10: Kết xác định độc tố chủng vi khuẩn Salmonella phân lâp 72 Bảng 3.11: Kết thử độc lực chủng Salmonella phân lập 74 Bảng 3.12: Kết theo dõi chuột thí nghiệm gây nhiễm chủng S enteritidis phân lập 76 Bảng 3.13: Kết theo dõi chuột thí nghiệm gây nhiễm chủng S typhimurium phân lập từ vịt 77 Bảng 3.14: Kết gây bệnh thực nghiệm vịt số chủng Salmonella phân lập từ vịt 79 Bảng 3.16: Kết kiểm tra kháng sinh đồ chủng S typhimurium S enteritidis phân lập 82 Bảng 3.17: Hiệu số phác đồ điều trị bệnh Phó thương hàn vịt 85 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn vii DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1: Tỷ lệ nhiễm Salmonella vịt địa bàn nghiên cứu 60 Biểu đồ 3.2 Tỷ lệ nhiễm S enteritidis S typhimurium địa bàn nghiên cứu 69 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn