Luận văn thạc sĩ sinh học đánh giá trữ lượng và hoạt tính sinh học của cây xạ đen (ehretia asperula xoll moritzi) tại tỉnh hòa bình

VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT - NGUYỄN THỊ HẰNG ĐÁNH GIÁ TRỮ LƯỢNG VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CÂY XẠ ĐEN (Ehretia asperula Zoll & Moritzi) TẠI TỈNH HỊA BÌNH LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC Hà Nội, 2018 Luận văn thạc sỹ Sinh học VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT - NGUYỄN THỊ HẰNG ĐÁNH GIÁ TRỮ LƯỢNG VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CÂY XẠ ĐEN (Ehretia asperula Zoll & Moritzi) TẠI TỈNH HÒA BÌNH Chuyên ngành: SINH HỌC THỰC NGHIỆM Mã số: 42 01 14 LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS TRẦN THỊ HỒNG HÀ Hà Nội, 2018 Luận văn thạc sỹ Sinh học LỜI CẢM ƠN Trước hết, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Trần Thị Hồng Hà, phòng Sinh học thực nghiệm – Viện Hóa học Hợp chất thiên nhiên,Viện Hàn lâm Khoa Học Công nghệ Việt Nam ln tận tình bảo, thúc giục hướng dẫn suốt trình học tập thực nghiên cứu Tôi xin cảm ơn Lãnh đạo Viện Di truyền Nông Nghiệp – Trung tâm Nghiên cứu Phát triển Nấm bạn đồng nghiệp, phòng Chọn tạo giống Công nghệ sản xuất Nấm tạo điều kiện giúp đỡ tơi suốt q trình thực hiện, bảo vệ luận văn Tôi xin cảm ơn Lãnh đạo, anh chị đồng nghiệp Bộ môn Vi Sinh vật – Viện Nơng Hóa Thổ Nhưỡng tạo điều kiện giúp đỡ tơi suốt q trình học tập Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Lãnh đạo, thầy cô giáo Viện Sinh thái Tài nguyên Sinh vật, cán nghiên cứu phịng Hoạt tính Sinh học - Viện Hóa sinh biển, phịng Sinh học thực nghiệm – Viện Hóa học Hợp chất thiên nhiên, Viện Hàn lâm khoa học Công nghệ Việt Nam nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành luận văn Tơi xin cảm ơn chị Vũ Thị Nguyệt – Phịng Thủy sinh học môi trường, Viện Công nghệ môi trường, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam tận tình hướng dẫn, bảo tơi suốt trình làm luận văn Luận văn tiến hành hỗ trợ đề tài: “Nghiên cứu thành phần hóa học, đánh giá hoạt tính sinh học số hợp chất phân lập từ xạ đen tỉnh Hồ Bình Thử nghiệm tạo chế phẩm làm thực phẩm chức từ cao chiết tiềm năng”, GS TS Đặng Đình Kim, Viện Cơng nghệ môi trường, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam làm chủ nhiệm Cuối xin cảm ơn gia đình thân yêu, bạn bè – người ln bên tơi, ln động viên, khích lệ chỗ dựa vững cho suốt trình học tập nghiên cứu Hà Nội, ngày 01 tháng 09 năm 2018 Học viên Nguyễn Thị Hằng i Luận văn thạc sỹ Sinh học MỤC LỤC Lời cảm ơn I Ký hiệu viết tắt VI Mở đầu I.TỔNG QUAN 1.1.Đặc điểm phân loại 1.1.1.Chi Cườm rụng (Ehretia P Browne) 1.1.2.Cây xạ đen Ehretia asperula Zoll & Moritzi 1.2.Tình hình nghiên cứu xạ đen Việt Nam giới 13 1.2.1.Tình hình nghiên cứu xạ đen Việt Nam 13 1.2.2.Tình hình nghiên cứu xạ đen giới 17 II.VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1.Vật liệu nghiên cứu 21 2.2.Thiết bị máy móc 22 2.3 Phương pháp nghiên cứu 23 2.3.1 Phương pháp điều tra 23 2.3.2 Phương pháp nghiên cứu thực vật 23 2.3.3 Phương pháp xử lý mẫu 24 2.3.4 Phương pháp thử nghiệm hoạt tính sinh học 26 III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32 3.1 Giám định lồi xạ đen Hịa Bình 32 3.2 Đánh giá phân bố trữ lượng loài xạ đen Hịa Bình 34 3.2.1 Đặc điểm phân bố địa lý 34 3.2.2 Trữ lượng xạ đen Hịa Bình 35 3.3 Kết trình chiết tách 39 3.3.1 Điều chế loại cao 39 3.3.2 Phân lập chất từ cặn etyl axetat phận thân xạ đen 39 3.4 Hoạt tính sinh học xạ đen 43 3.4.1 Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định 43 3.4.2 Hoạt tính chống oxy hóa 46 ii Luận văn thạc sỹ Sinh học 3.4.3 Hoạt tính gây độc dịng tế bào ung thư 49 IV KẾT LUẬN 58 V KIẾN NGHỊ 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO 60 PHỤ LỤC 68 KHĨA PHÂN LOẠI TỚI LỒI 70 PHIẾU ĐIỀU TRA THỰC TRẠNG CÂY XẠ ĐEN TẠI TỈNH HỊA BÌNH 72 iii Luận văn thạc sỹ Sinh học DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Kết phân bố xạ đen khu vực điều tra Bảng 1.2 Hoạt tính sinh học cao chiết xạ đen vi khuẩn 16 Bảng 3.1 Trữ lượng xạ đen tai tỉnh Hòa Bình năm 2016 35 Bảng 3.2 Khối lượng cao chiết tổng, cao chiết phân đoạn phận xạ đen Hịa Bình 39 bảng 3.3 Cấu trúc hóa học hợp ET1-ET6 42 bảng 3.4 Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định cặn chiết tổng chiết tách từ phận xạ đen 44 Bảng 3.5 Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định cao chiết phân đoạn chiết tách từ phận xạ đen……………………………………… 45 bảng 3.6 Hoạt tính chống ơxy hố cao chiết tổng xạ đen 47 bảng 3.8 Hoạt tính gây độc tế bào cao chiết tổng xạ đen 50 bảng 3.9 Kết xác định giá trị ic50 cao chiết tổng xạ đen 50 bảng 10 Hoạt tính gây độc tế bào cao chiết phân đoạn xạ đen 52 bảng 11 Kết xác định giá trị ic50 cao chiết phân đoạn xạ đen 53 bảng 3.12 Hoạt tính gây độc tế bào chất tinh khiết phân lập 55 bảng 3.13 Hoạt tính gây độc tế bào chất tinh khiết 55 iv Luận văn thạc sỹ Sinh học DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc số hợp chất 17 Hình 1.2 Cấu trúc 2D acid rosmarinic 19 Hình 1.3 Cấu trúc 3D acid rosmarinic 19 Hình 1.4 cấu trúc 2D phân tử amyrin 20 Hình 2.4: Sơ đồ tạo cao chiết tổng quát 25 Hình 2.5: Sơ đồ phân lập chất từ cao etoac thân xạ đen 26 Hình 3.1 Tiêu khơ lá, cành xạ đen 34 Hình 3.2 Tiêu khơ hoa xạ đen 34 Hình 3.3 Hoa xạ đen 34 Hình 3.4 Quả xạ đen 34 Hình 3.5 Bản đồ xạ đen ni trồng tỉnh Hịa Bình…………………38 v Luận văn thạc sỹ Sinh học KÝ HIỆU VIẾT TẮT ký hiệu 13 C-NMR Tiếng Anh Tiếng Việt Carbon (13) Nuclear Magnetic Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Resonance carbon (13) Hydro (1) Nuclear Magnetic Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Resonance proton (1) ppm Part per million Một phần triệu DMEM Dulbecco’s Medium MEME Minimum Essential Medium with Eagle’s salt PSF Penicillin- Streptomycin sulfate – Fungizone NAA Non-Essential Amino Acids BCS Bovine Calf Serum DMSO Dimethyl Sulfoside TCA Trichloro Acetic acid PBS Phosphate Buffered Saline SRB Sulfo Rhodamine B Hep-G2 Human hepatocellular carcinoma Ung thư gan LU-1 Human lung adenocarcinoma Ung thư phổi MCF-7 Human breast adenocarcinoma Ung thư vú HeLa HeLa cervical cancer cells Tế bào ung thư cổ tử cung HeLa H-NMR Vero Modified Eagle Tế bào thận khỉ vi Luận văn thạc sỹ Sinh học D Dichloromethane H n-Hexane M Methanol EtOAc Ethyl acetate A Acetone W Water Nước XĐ Xạ đen VSVKĐ Vi sinh vật kiểm định VQG Vườn quốc gia viii Luận văn thạc sỹ Sinh học MỞ ĐẦU Việt Nam quốc gia nằm khu vực nhiệt đới, có nhiều điều kiện thuận lợi cho sinh vật phát triển Theo thống kê "Tiếp cận nguồn gen chia sẻ lợi ích" (của Tổ chức Bảo tồn Thiên nhiên Thế giới - IUCN), Việt Nam có gần 12.000 lồi thực vật bậc cao có mạch thuộc 2.256 chi, 305 họ (chiếm 4% tổng số loài, 15% tổng số chi, 57% tổng số họ thực vật giới) Trong số đó, nguồn tài nguyên có tiềm sử dụng y học chiếm khoảng 30% Theo Danh lục Cây thuốc Việt Nam Viện Dược liệu (2016) điều tra nguồn tài nguyên thuốc cho thấy Việt Nam có tổng số 5.117 lồi loài, thuộc 1.823 chi, 360 họ ngành thực vật bậc cao có mạch, với số taxon thuộc nhóm rêu, tảo nấm lớn, thuộc nhóm thực vật bậc cao có mạch có tới 5.000 lồi Theo thơng tư số 40/2013/TT-BYT Bộ Y tế có 334 lồi thuộc danh mục thuốc thiết yếu, thuốc đông y, thuốc từ dược liệu Như vậy, việc sử dụng dược phẩm có nguồn gốc thiên nhiên ngày quan tâm Chi Ehretia P Br (họ Vòi voi, Boraginaceae) chi thực vật bao gồm có lồi, đó, có lồi người dân dùng làm thuốc E acuminata R Br (cườm rụng nhọn) E asperula (dót, xạ đen) để giải độc mát gan, tăng cường chức gan, hỗ trợ điều trị viêm gan, vàng da; điều trị u bướu, mụn nhọt, ung thũng; làm thuốc chống viêm kháng khuẩn cho bệnh nhân mắc bệnh viêm nhiễm Cây xạ đen E asperula thuốc thuộc nhóm nhiệt giải độc có tên khoa học vị thuốc Herba Ehretiae asperulae (thông tư số 40/2013/TT-BYT Bộ Y tế) Tuy nhiên, đến thời điểm nghiên cứu sâu chi Ehretia hay xạ đen E asperula tỉnh Hịa Bình nói riêng mức hạn chế Các cơng trình nghiên cứu thường giai đoạn xác định tên loài, bước đầu xác định số hợp chất hóa học thứ cấp Những nghiên cứu khác đánh giá trạng phân bố trữ lượng, đặc tính sinh học ứng dụng nghiên cứu chữa bệnh cịn khơng Luận văn thạc sỹ Sinh học bào hợp chất cho thấy methyl cafeate có hoạt tính mạnh với dòng tế bào ung thư Hep-G2, Hep-G2, MCF-7 với giá trị IC50 tương ứng 2,83; 3,38; 4,40 g/ml Chất oresbiusin có hoạt tính với dịng tế bào Hep-G2 với giá trị IC50 9,89 g/ml Tất cao chiết tổng, phân đoạn chất phân lập không gây độc tế bào lành tính Vero  Đóng góp luận văn Làm sáng tỏ hợp lý việc sử dụng thuốc dân gian xạ đen để chữa trị ung thư:  Chứa thành phần có hoạt tính gây độc tế bào ung thư  Không gây độc với tế bào lành nên sử dụng làm thuốc chữa bệnh  Gợi mở phận dùng làm thuốc thân, cành lá, phân đoạn EtOAc có hoạt tính mạnh V KIẾN NGHỊ Để xạ đen ngày trọng phát triển, trở thành nguồn lực phát triển kinh tế trước hết tỉnh Hịa Bình cần chủ trương quy hoạch, bảo vệ nguồn tài nguyên Tiếp tục nghiên cứu đánh hoạt tính sinh học khác hợp chất hóa học tách chiết cao chiết tổng cao chiết phân đoạn Dựa sở đầy đủ hoạt tính sinh học, thành phần hóa học cây, bước tiến hành nghiên cứu sản phẩm chức hỗ trợ công tác điều trị bệnh 59 Luận văn thạc sỹ Sinh học TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Võ Văn Chi (2012) Từ điển thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học Hà Nội Nguyễn Huy Cường (2008) Nghiên cứu thành phần hố học thăm dị hoạt tính sinh học xạ đen (Celastrus hindsii Benth & Hook ) Cùm rụm (Ehretia dentata Courch.), Luận án tiến sĩ Đỗ Thanh Hải (2011) Nghiên cứu đặc điểm phân bố, thử nghiệm nhân giống xạ đen (Ehretia asperula Zoll & Moritzi) phương pháp giâm hom gieo hạt tỉnh Hịa Bình, Luận văn Thạc sỹ Nguyễn Khắc Hải & cs (2013) Giáo trình mơ đun trồng xạ đen, Bộ Nơng nghiệp Phát triển Nơng Thơn Hồng Quỳnh Hoa (2010) Nghiên cứu số thuốc chi Cườm rụng (Ehretia P Br.), họ Vòi voi (Boraginaceae) miền Bắc Việt Nam”, Luận án tiến sỹ, Trường Đại học Dược Hà Nội Hoàng Quỳnh Hoa, Phạm Thanh kỳ, Phạm Hải Yến, Châu Văn Minh, Phan Văn Kiệm (2009) Menisdausin axit rosmarinic phân lập từ Cụm Rụng hoa dài (Ehretia longiflora champ., Boraginaceae), Tạp chí Hóa học T.47 (1), Tr 90-94 Phạm Thị Lương Hằng, Đoàn Thị Duyên, Nguyễn Thị Yến, Ngô Thị Trang (2013) Phát triển phương pháp khuếch tán - so màu đĩa thạch sàng lọc phát chất có hoạt tính kháng khuẩn từ dịch chiết thực vật, Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, khoa học tự nhiên cơng nghệ, tập 29, số 2, tr 10-17 Phạm Hoàng Hộ Cây cỏ Việt Nam Tr 804-806 60 Luận văn thạc sỹ Sinh học Nguyễn Thị Vân Khanh, Triệu Duy Điệt, Nguyễn Văn Minh, Vũ Bình Dương, Nguyễn Tuấn Quang, Lương Quang Anh, Phạm Quốc Long (2007) Tuyển tập cơng trình hội nghị Hố Hữu lần IV, 422-425 10 Phạm Thanh Loan (2018) Khảo sát hoạt tính sinh học cao chiết từ xạ đen Celatrus hindsii Benth.Báo cáo khoa học nghiên cứu giảng dạy sinh học Việt Nam 11 Đỗ Tất Lợi (2001) Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học Hà Nội 12 Đỗ Tiến Lực, Trần Thị Thanh Huệ, Lò Văn Nhập (2015) Nghiên cứu tham gia người dân bảo tồn phát triển tài nguyên thuốc xã Bảo Ái, huyện Yên Bình, tỉnh Yên Bái, Báo cáo Quản lý Tài nguyên Thiên nhiên 13 Phạm Bằng Lương, Lưu Hồng Sơn, Nguyễn Thị Tình, Phạm Thị Thủy, Nguyễn Hữu Thọ, Nguyễn Văn Bảo, Trần Trung Kiên, Ngơ Xn Bình (2015) Nghiên cứu nhân giống invitro xạ đen (Ehretia asperulla Zoll.&Mor.) Tạp chí nơng nghiệp phát triển nơng thôn T233-241 14 Bùi Hồng Quang, Vũ Xuân Phương, Trần Ninh (2007) Chi cườm rụng Ehretia p Br (Họ Vòi voi - Boraginaceae Juss.) Việt Nam, Báo cáo khoa học Tài nguyên Sinh vật, Hội nghi Khoa học tồn quốc lần thứ 2, nhà xuất Nơng nghiệp,Tr 216 15 Đỗ Thị Thảo, Đỗ Thị Phương, Đỗ Khắc Hiếu (2008) Xác định khả phòng chống ung thư số chất chiết thực vật Việt Nam phương pháp thử sinh học invitro Tạp chí sinh học (30): tr 79-82 16 Nguyễn Nghĩa Thìn (2005) Đa dạng thực vật VQG Pù Mát Nghệ An (Botanical diversity of Pu Mat National Park, Nghe An) Nhà xuất Nông nghiệp 17 Le Thi Thuy Tien, Tran Van Minh (2015) Tissue cultures of xa den (Ehretia asperula Zollinger et Moritzi), Journal of Science , Vol (3), p 113 – 123 61 Luận văn thạc sỹ Sinh học 18 Trịnh Thị Thủy, Nguyễn Huy Cường, Phạm Thị Ninh, Trần Văn Sung (2008) Phân lập xác định cấu trúc hợp chất Tritecpen từ xạ đen, Tạp chí hóa học, T.46, Tr 456-461 19 Lê Thế Trung (1998) Nghiên cứu đánh giá tác dụng hỗ trợ dự phòng điều trị ung thư thuốc phối hợp Phylamin dịch chiết từ xạ đen (K10) đề tài cấp Quốc phòng, Học viện Quân Y, Hà Nội 20 Lưu Thị Kim Yến (2006) Nghiên cứu đặc điểm thực vật thành phần hóa học dược liệu mang tên xạ đen thu hái Hịa Bình Khóa luận tốt nghiệp dược sỹ Đại học, Trường Đại học Dược Hà Nội 21 Trần Văn Sung , Nguyễn Huy Cường, Phạm Thị Ninh, Trịnh Thị Thủy (2009 Phân lập xác định cấu trúc tổng hợp số dẫn xuất α – amyrin từ cùm rụng răng, Tạp chí hóa học, T.47, Tr 691- 697 TIẾNG ANH 22 Balachandran C, Emi N, Arun Y, Yamamoto Y, Ahilan B, Sangeetha B, Duraipandiyan V, Inaguma Y, Okamoto A, Ignacimuthu S, Al-Dhabi NA, Perumal PT (2015) In vitro anticancer activity of methyl caffeate isolated from Solanum torvum Swartz fruit Chem Biol Interact 23 Brand-Williams, W., Cuvelier, M E and Berset C (1995) Use of a Free Radical Method to Evaluate Antioxidant Activity Lebensm.-Wiss u.Technol., 28: 25-30 24 Chien, Y C., Lin, C H., Chiang, M Y., Chang, H S., Liao, C H., Chen, I S., Peng, C F., & Tsai, I L (2012) Secondary metabolites from the root of Ehretia longiflora (Boraginaceae) and their biological activities Phytochemistry, 80, 50-7 25 El-Hagrassi, A M., Ali, M M., Osman, A F & Shaaban, M (2011) Phytochemical, investigation and biological studies of Bombax malabaricum flowers, Natural Products Research, 25(2): 141-151 ISSN: 1029-2349 62 Luận văn thạc sỹ Sinh học 26 Fabrice B., Robert A T., Olympe T., Nathalie J., Hubert H., Philippe C (2013) Antiproliferative and apoptotic effects of the oxidative dimerization product of methyl caffeate on human breast cancer cells Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 23(2): 574-578 27 Federico Ferreres, JulianaVinholes, AngelGil-Izquierdo, PatrớciaValentóo, Rui F.Gonỗalves, Paula B.Andrade (2013) Invitro studies of α-glucosidase inhibitors and antiradical constituents of Glandora diffusa (Lag.) D.C Thomas infusion, Food Chem, 136(3-4): 1390-8 28 F Freiburghaus, E.N Ogwal, M.H kunya, R Kaminsky and R Brun (1996) Trop Med Int Health, 1, page 765 29 Gottschling M & Hilger H.H (2001) Phylogenetic analysis and character evolution of Ehretia and Bourreria (Ehretiaceae, Boraginales) based on ITS1 sequences Bot Jahrb Syst 123: 249 – 268 30 Gottschling M., F Luebert, H.H Hilger & J.S Miller (2014) Molecular delimitations in the Ehretiaceae (Boraginales) Mol Phylogenet Evol 72: – (IF 2012: 4.018) 31 Gopalsamy GabrielPaulraj, RajivGandhi, SavarimuthuIgnacimuthu, PonnusamySasikumar (2011) Michael Antihyperglycemic activity and antidiabetic effect of methyl caffeate isolated from Solanum torvum Swartz fruit in streptozotocin induced diabetic rats, European Journal of Pharmacology, Volume 670, Issues 2–3, Pages 623-631 32 G.H Schmelzer, A Gurib-Fakim, Eds (2008) Plant Resources of Tropical Africa 11(1), Medicinal Plants 1, PROTA Foundation, Backhuys Publishers: Netherland, page 237 33 Holanda Pinto, S A., Pinto, L M S., Cunha, G M A., Chaves, M H., Santos,F A & Rao, V.S., (2008) Anti-inflammatory effect of α,βAmyrin, a pentacyclic triterpene from Protium heptaphyllum in rat 63 Luận văn thạc sỹ Sinh học model of acute periodontitis, Inflammopharmacology, 16:48-52 ISSN: 0925-4692 34 Hui-Chi Huang, Chien-Chang Shen, Chieh-Fu Chen, Yang-Chang Wu, and Yao-Haur Kuo, (2000) A Novel Agarofuran Sesquiterpene, Celahin D from Celastrus hindsii Benth, Chem Pharm Bull 48(7) page s1079— 1080 35 Huang H., Sun H D., Zhao M S., Xun S.(1996) Phenolic compounds of Isodon oresbius.J Nat Prod., 59(11): 1079-1080 36 Iizuka M., Warashina I., Noro T.( 2001) Bufadienolides and a New Lignan from the Bulbs of Urginea maritima, Chem Pharm Bull., 49: 282-286 37 K Iqbal, S.A Nawaz, A Malik, N Riaz, N Mukhtar, P Mohammad and M.I Choudhary,(2005), Chem Biodivers., 2, page 104 38 Kumar, G.P., Navyaa, K., Ramya, E.M., Venkataramana, M., Anand, T., Anilakumar, K.R., (2013) DNA damage protecting and free radical scavenging properties of Terminalia arjuna bark in PC-12 cells and plasmid DNA Free Rad Antioxid pages 35-39 39 Kuo YH, Kuo LM 1997 Antitumour and anti-AIDS triterpenes from Celastrus hindsii Phytochemistry, 44, pages1275–1281 40 L.I Li, P.Yong, Y Xia, X.U Li, E Ta-Na, L.Yong, S Ren-Ning and X Pei-Gen, Chin (2010) Herbal Med., 2, page 106 41 Likhitayawuid K., Angerhofer C.K (1993) Cytotoxic and antimalarial bisbenzylisoquinoline alkaloids from Sephania evecta, Jounal of Natural Products 56 (1) pages 30-38 42 Lily, M Peưy (1978) Medicinal plants of East and Southeast Asia, London, England, Pages 60 – 62 64 Luận văn thạc sỹ Sinh học 43 Ly, T.N; Shimoyamada, M.; Yamauchi, R (2006) Isolation and characterization of romarinic acid oligomers in Celastrus hinsii Benth and their antioxidative activity J Agric Food Chem 54, pages 37863793 44 M H Lecomte (1912-1936) (1944) Flore Générale de L’indo-Chine, Tome préliminaire, Tome quatrième, Publiée sous la direction de H Humbert,pp.54-59, 197-198, pages 205-213 45 M.I Sheikh (1993) Trees of Pakistan Pictorial Printers (Pvt.) Ltd., Islamabad, page 62 46 Miller J.S (1989) A revision of the new world species of Ehretia (Boraginaceae) Ann Missouri Bot Gard pages 76: 1050-1076 47 Moridi F M., Nazarianpoor E., Rustaie A., Akhbari M (2017) Phytochemical constituents and biological activities of Cleome iberica DC Nat Prod Res., 31(11): pages 1329-1332 48 Momtaz M H., Hamada R G (2010) Antioxidative Effects of Acetone Fraction and Vanillic Acid from Chenopodium murale L on Tomato Plant.Weed Biol Manag, 10: 64-72 49 Jamescullend.sc., (2006) Practical Plant Identification, Cambridge University, page 214 50 J D Hooker, C.B (1975), The Flora of British of India, pages 607, 617 -618 51 Rossi, F., Jullian, V., Pawlowiez, R., KumarRoiné, S., Haddad, M., Darius, H T., Gaertner-Mazouni, N., Chinain, M., & Laurent, D., (2012) Protective effect of Heliotropium foertherianum (Boraginaceae) folk remedy and its active compound Rosmarinic acid, against a Pacific ciguatoxin, J Ethnopharmacol, 143(1) pages 33-40 65 Luận văn thạc sỹ Sinh học 52 Saman Zara, Dildar Ahmed, Hira Baig and Muhammad Ikram (2012) Evaluation of antioxidant activities of various solvent extracts of Ehretia serrate, Asian Journal of Chemistry; Vol 24, No 10, 4345-4351 53 Shela G., Olga, M B., Elena, K., Antonin, L., Milan, C., Nuria, G M., Ratiporn, H., Yong- Seo, P., Soon-Teck, J., and Simon, T (2003) Bioactive compounds and antioxidant potential in fresh and dried Jaffa sweeties, a new kind of citrus fruit J Nutri Biolchem., 14, pages 154159 54 Smith, R C., Reeves, J C., Dage, R C., and Schnettler, R A., (1987) Biochem Pharmacol., 36, page 1457 55 Sy L K., Brown G D., 1999 Coniferaldehyde derivatives from tissue culture of Artemisia annua and Tanacetum parthenium, Phytochemistry, 50: 781-785 56 Thuy Linh Nguyen, Thi Hang Pham, Van Truong Do, Thi Thu Hue Huynh (2017) Evaluating the systemmatic position of Ehretia asperula Zoll & Moritzi based on ITS1 matK and trpI trpEDNA sequences, Vietnam Journal of Science, Technology and Engineering, Vol.59 Number 4, pages 63 -65 57 T Koyama, (1953) J Pharm Soc (Japan), 73, page 411 58 Vanden Bergher D A., and Vlietinck (1991) Screening methods for Antibacterial and Ativiral Agent from Higher Plants, Methods in Plant biochemistry Academic Press., USA, V 6, Pages 47-68 59 Vlietinck, A.,J., (1998) Screening methods for detection and evaluation of biological activities of plant preparation, Bioassay Methods in Natural Product reseach and Drug development, Kluwer acadamic publishers, USA 66 Luận văn thạc sỹ Sinh học 60 Rasika C Torane, Gayatri S Kamble, Eliza Khatiwora, Nevedita A Ghayal and Nirmala R Deshpande, (2011) Antioxidant capacity of leaves and stem of Ehretia laevis International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences ISSN- 0975-1491 Vol 3, Issue 61 W.T Wang (1979) Flora Reipublicae Popularis Sinicae, Science Press, Beijing 62 Wu Zheng-yi, Peter H Raven (2003) Flora of China, Missori (R) Bontanical Garden, vol 16, pages 329, 333 - 336 63 Z.D He, Y.Q Liu and C.R Yang, Acta Bot (1992) Yunnanica, 14, 328 64 Zheng Q., Sun Z., Zhang X., Yuan J., Wu H., Yang J., Xu X (2012) Clerodendranoic acid, a new phenolic acid from Clerodendranthus spicatus Molecules 17(11) pages 13656-13661 TÀI LIỆU INTENET 65 http://www.botanyvn.com/cnt.asp?param=edir&v=Ehretia%20asperula& list=species 67 Luận văn thạc sỹ Sinh học PHỤ LỤC KHÓA PHÂN LOẠI TỚI HỌ CỦA M.H LEMOTE Cây khơng có hoa thật (khơng có nhị, khơng có nhụy), sinh sản bào tử Khơng có mầm Nhóm 1: Ẩn hoa 1’ Cây có hoa thật (nhị nhụy gốc gốc khác nhau) Một hay nhiều mầm Hiển hoa Nỗn khơng đựng bầu nhiều mầm Nhóm 2: Hạt trần 2’ Nỗn đựng bầu Hạt kín Hạt có mầm Hoa mẫu Lá có gân phân nhánh, xếp thành mạng .Cây có mầm Có đài tràng hai Tràng có cánh hoa rời liền khơng hồn tồn Nhị dính tràng Nhóm 3: Bao hoa cổ 5’ Tràng có cánh hoa dính liền phần lớn bề dài Nhị dính tràng Nhóm 5: Cánh hợp Nhóm 5: Cánh hợp Tràng hoa có hoa dính liền phần lớn chiều dài, quãng ngắn gốc Nhị nnhiều đính tràng: Bầu thượng, nghĩa đài, khơng dính liền với ống đài Nhóm phụ 1: Bầu thượng Bầu hạ, nghĩa đính liền với ống đài .Nhóm phụ 2: Bầu Hạ Xác đinh chi theo khố phân loai chi theo H Lecomte [21] 2-4 núm nhụy riêng biệt 2 núm nhụy Vịi hình sợi Cây thân Quả thịt Chi Ehretia Xác định thị theo khóa phân loại thực vật Xác đỉnh chi theo khố phân loai thực vật chí Trung Quốc [48] 68 Luận văn thạc sỹ Sinh học la Bầu khơng chia, vịi nhụy đính đỉnh bầu, tận vịi nhụy có chia 2a Vịi nhụy chia 2, có núm nhụy, hạch ngăn, mầm uốn nếp Chi cordia 2b Vòi nhụy chia nguyên, có 1-2 núm nhụy; hạch thịt, thường chia làm 2-4 ngăn, không chia; mầm khơng uốn nếp 3a Vịi nhụy chia 2, phần bị tiêu biến khơng có khả sinh sản, phần cịn lại có núm nhụy, thường có dạng hình trịn 3b Vịi nhụy thường chia 2, ngun, có núm nhụy hình đầu thon dài, phần khơng phình, khơng có phần chia bị lép 4a Quả chín có vỏ có nhiều thịt hoá gỗ .Chi Tourne/ortia 4b Khi chín khơ, vỏ mỏng, vỏ cứng Chi Helỉotropỉum 5a Quả hạch, vỏ giữa, chín chia làm ngăn, ngăn có hạt Cây thảo hàng năm Chi Coldenia 5b Quả thịt hạch, vỏ có nhiều thịt, khơng chia chín chia làm 2-4 ngăn Cây gỗ bụi 6a Vịi nhụy khơng chia, núm nhụy thường có ngăn, vỏ chia ngăn, ngăn có hạt Chi Dotula 6b Vịi nhụy chia 2, có núm nhụy 7a Vịi nhụy chia làm nhánh nửa trên, vỏ khơng chia, có dạng hình trứng Phiến có đốm trắng.Chi carmona 7b Vòi nhụy chia phần trên; vỏ chia làm ngăn, ngăn có hạt; chia làm ngăn, ngăn có hạt; phiến khơng có đốm trắng Chi Ehretia 69 Luận văn thạc sỹ Sinh học KHÓA PHÂN LOẠI TỚI LOÀI [48] EHRETIA P Browne, Civ Nat Hist Jamaica 168 1756 厚壳树属 hou ke shu shu 1a Leaves serrate; endocarp divided at maturity into 2-seeded pyrenes 2a Leaves glabrous, teeth antrorse, apiculate; corolla lobes longer than tube; drupes 3–4 mm in diam E acuminata 2b Eaves pubescent abaxially, teeth spreading, not apiculate; corolla lobes shorter than tube; drupes 6–15 mm in diam 3a Leaf base cuneate to rotund, blade pubescent adaxially; drupes 10–15 mm in diam .3 E dicksonii 3b Leaf base cordate, blade densely tomentose adaxially; drupes 3–4 mm in diam …………………………………….2 E corylifolia 1b Leaves entire; endocarp divided at maturity into 1-seeded pyrenes 4a Corolla lobes longer than tube 5a Inflorescences and calyx densely yellow-brown pubescent, ebracteate 14 E laevis 5b Inflorescences glabrous or nearly so, with linear or linear-lanceolate bracts 6a Petiole tuberculate; leaf blade broadly elliptic to oblong-elliptic, apex obtuse or mucronate; flowers pedicellate ………………… 12 E asperula 6b Petiole smooth; leaf blade lanceolate to oblong-lanceolate, apex acute; flowers sessile ………………………………… 13 E hainanensis 4b Corolla lobes shorter than tube 7a Corolla tube cylindric; calyx lobes linear, 5–6 mm 70 Luận văn thạc sỹ Sinh học 8a Calyx 4–6 mm; stamens inserted at apex of corolla tube E resinosa 8b Calyx ca mm; stamens inserted at middle of corolla tube .5 E densiflora 7b Corolla tube distinctly wider distally; calyx lobes ovate to oblong, 1.5–3.5 mm 9a Cymes terminal; corolla funnelform, 5.5–6.5 mm; filaments ca 1.5 mm E confinis 9b Cymes terminal and lateral; corolla tube campanulate, 7–11 mm; filaments ca 3–6 mm 10a Leaf blade with evident reticulate venation 11a Inflorescences and calyx obscurely pubescent with glandular hairs E tsangii 11b Inflorescences and calyx with rust-colored glandular hairs E dunnian 10b Leaf blade with only midvein and lateral veins conspicuous 12a Petiole, calyx, and corolla densely rust-colored pubescent …9 E pingbianensis 12b Petiole and corolla glabrous, calyx ciliate 13a Corolla 10–11 mm, lobes ovate; filaments 8–10 mm, inserted 3.5–5 mm above base 10 E longiflora 13b Corolla 6.5–8 mm, lobes oblong-lanceolate; filaments 2.5–3 mm, inserted just below throat ….11 E changjiangensis 71 Luận văn thạc sỹ Sinh học PHIẾU ĐIỀU TRA THỰC TRẠNG CÂY XẠ ĐEN TẠI TỈNH HÒA BÌNH I Một số thơng tin chung Tỉnh/thành phố trực thuộc TW ……………………………………………………… Huyện/quận/thị xã/thành phố thuộc tỉnh………………………………………… Xã/phường/thị trấn …………………………………………………………… Thôn/ấp/bản Tên địa bàn điều tra……………………………………………………… Địa bàn số……………………………………………………………………… Họ tên chủ hộ………………………………………………Dân tộc ……………… II Thơng tin xạ đen tỉnh Hịa Bình Hộ gia đình có trồng xạ đen khơng (nếu có tích x) Thời gian trồng xạ đen từ Diện tích trồng xạ đen năm 2016 Sản lượng, suất sản phẩm năm 2016 Sản phẩm sau chế biến dạng O Lá khô O Thân khô O Cao chiết Giá thành sản phẩm (đồng/kg/) O Lá khô O Thân khô O Cao chiết Kênh tiêu thụ sản phẩm hộ O Bán trực tiếp O Bán cho công ty sản xuất dược liệu O Bán cho thương lái O Bán theo kênh khác 72 Luận văn thạc sỹ Sinh học Khả tiêu thụ sản phẩm hộ O Dư thừa O Bán hết, bị ép giá O Bán hết, giá O Không bán hết sản phẩm, bị ép giá Đầu sản phẩm O Giá không ổn định O Lượng tiêu thụ không ổn định O Thiếu doanh nghiệp, sở thu mua thường xuyên O Thiếu thị trường 73 Luận văn thạc sỹ Sinh học