Đồ án tốt nghiệp khảo sát sơ bộ thành phần hóa học và đánh giá một số hoạt tính sinh học trong tơ nấm linh chi đen amauroderma subresinosum

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP H o C KHẢO SÁT SƠ BỘ THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ hi in M ĐÁNH GIÁ MỘT SỐ HOẠT TÍNH SINH HỌC h TRONG TƠ NẤM LINH CHI ĐEN ity C AMAURODERMA SUBRESINOSUM ity rs ve ni U Ngành : CÔNG NGHỆ SINH HỌC of Chuyên ngành : CÔNG NGHỆ SINH HỌC ch Te MSSV: 1151110113 : TRẦN LÊ VIỆT HÀ gy Sinh viên thực lo no Giảng viên hướng dẫn : TS NGUYỄN HOÀNG DŨNG Lớp: 11DSH04 TP Hồ Chí Minh, 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CƠNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP H o C KHẢO SÁT SƠ BỘ THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ hi in M ĐÁNH GIÁ MỘT SỐ HOẠT TÍNH SINH HỌC h TRONG TƠ NẤM LINH CHI ĐEN ity C AMAURODERMA SUBRESINOSUM ity rs ve ni U Ngành : CÔNG NGHỆ SINH HỌC of Chuyên ngành : CÔNG NGHỆ SINH HỌC ch Te MSSV: 1151110113 : TRẦN LÊ VIỆT HÀ gy Sinh viên thực lo no Giảng viên hướng dẫn : TS NGUYỄN HOÀNG DŨNG Lớp: 11DSH04 TP Hồ Chí Minh, 2015 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng thực dựa sở thực nghiệm phịng thí nghiệm Vi sinh thuộc Viện Sinh học Nhiệt đới Tp Hồ Chí Minh Các số liệu, kết đồ án trung thực chưa H o công bố cơng trình khác C hi TP HCM, ngày 20 tháng 8, năm 2015 h in M ity C U ity rs ve ni Trần Lê Việt Hà of gy lo no ch Te LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đồ án cách tốt đẹp, em nhận nhiều giúp đỡ từ quý thầy cơ, gia đình bạn bè Em xin gửi lời cảm ơn lời chúc sức khỏe đến ban lãnh đạo trường Đại học Công nghệ Thành phố Hồ Chí Minh thầy khoa Cơng nghệ sinh học – Thực phẩm H – Môi trường truyền đạt cho em kiến thức chuyên ngành suốt o C trình học tập trường, giúp cho em nắm vững lý thuyết thực hành hi Em xin chân thành cảm ơn T.S Nguyễn Hoàng Dũng tận tình hướng dẫn M h in giúp đỡ em trình thực đồ án lúc viết báo cáo, để hôm C em hồn thành báo cáo tốt ity Và em xin gửi lời cảm ơn đến anh chị bạn làm việc ni U phòng Vi sinh thuộc Viện Sinh học Nhiệt đới tạo điều kiện thuận lợi cho em ve hồn thành cơng việc cách tốt ity rs Con vô cảm ơn ba mẹ, gia đình ln bên cạnh ủng hộ, động viên suốt trình học tập Cám ơn bạn bè, tập thể lớp 11DSH04 hỗ trợ, chia sẻ of việc học tập thời gian năm Đại học gy lo no ch Te MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT iv DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH ẢNH vi H MỞ ĐẦU o Tính cấp thiết của đề tài Tình hình nghiên cứu Mục đích nghiên cứu Nhiệm vụ nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu Các kết quả đạt được của đề tài Kết cấu đồ án tốt nghiệp C hi h in M ity C ve ni U 1.1 ity rs Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU Nấm linh chi of Khái quát chung 1.1.2 Đặc điểm sinh học 1.1.3 Điều kiện sống nấm linh chi 1.1.4 Sơ lược hoạt chất sinh học có nấm Linh chi 1.1.5 Tác dụng trị liệu nấm Linh chi 13 gy lo no ch Te 1.1.1 1.2 Nấm Linh chi đen (Amauroderma subresinosum) 16 1.2.1 Vị trí phân loại 16 1.2.2 Đặc điểm hình thái 17 1.2.3 Các nghiên cứu nấm Linh chi đen 19 Chương 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu 20 i 2.2 Đối tượng nghiên cứu 20 2.3 Vật liệu nghiên cứu 20 2.3.1 Thiết bị 20 2.3.2 Hóa chất 20 2.3.3 Môi trường sử dụng 21 2.4 Phương pháp nghiên cứu 21 H 2.4.1 Theo dõi tăng sinh khối tơ nấm linh chi môi trường lỏng 21 o C 2.4.2 Phân tích sơ thành phần hóa học nấm Linh chi đen A subresinosum 21 hi in M 2.4.3 Khảo sát hoạt tính tơ nấm linh chi chiết với phân đoạn dung môi khác 25 h 2.4.4 Xác định thành phần có phân đoạn dịch chiết thu kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 29 ity C 2.5 Phương pháp xử lý số liệu 30 U ni CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VẢ THẢO LUẬN 31 rs ve 3.1 Thu nhận sinh khối của tơ nấm linh chi môi trường lỏng 31 ity 3.2 Phân tích sơ thành phần hóa học nấm Linh chi A subresinosum 33 of 3.2.1 Định tính anthraglycosid 33 Te 3.2.2 Định tính flavonoid 33 ch 3.2.3 Định tính acid béo 34 lo no 3.2.4 Định tính alkaloid 35 3.2.5 Định tính tinh dầu 36 gy 3.2.6 Định tính carotenoid 36 3.2.7 Định tính phytosterol 36 3.2.8 Định tính steroid 37 3.2.9 Định tính tanin 38 3.2.10 Định tính đường khử 38 3.2.11 Định tính antocyanosid 39 3.2.12 Định tính saponin 40 ii 3.2.13 Định tính acid uronic 41 3.2.14 Định tính acid hữu 41 3.3 Khảo sát hoạt tính cao chiết Methanol tổng của tơ nấm Linh chi đen 44 3.3.1 Khả kháng khuẩn tơ nấm linh chi cao Methanol 44 3.3.2 Khả kháng oxy hóa cao chiết Methanol tổng 45 H 3.4 Khảo sát hoạt tính các phân đoạn cao của tơ nấm Linh chi A.subresinosum 47 o C 3.4.1 Hoạt tính kháng khuẩn cao chiết tơ nấm linh chi 47 hi 3.4.2 Khả kháng oxy hóa loại cao chiết 49 h in M 3.5 Kết quả phân tích thành phần có cao chiết tơ nấm A subresinosum bằng kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 55 ity C Chương KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 59 4.1 Kết luận 59 U ve ni 4.2 Kiến nghị 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO 60 ity rs PHỤ LỤC of gy lo no ch Te iii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT : Dimethylsunfoxide DPPH : 2,2 diphenyl-1-pycryl-hydrazyl HPLC : High-performance liquid chromatography IC50 : The half maximal Inhibitory Concentration (nồng độ ức chế 50%) LB H : Luria Bertani MeOH : Methanol o DMSO C hi OD M : Potato Dextrose Agar h in PDA : Optical Density : Potato Dextrose Broth UV : Ultra Violet ity C PD-broth ity rs ve ni U of gy lo no ch Te iv DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Điều kiện môi trường cần thiết cho phát triển nấm Linh chi Bảng 1.2 Các hoạt chất triterpenoid có tác dụng chữa bệnh nấm Linh chi 10 Bảng 1.3 Lục bảo Linh chi tác dụng trị liệu (Lý Thời Trân, 1590) 13 Bảng 3.1 Khả tích lũy hệ sợi nấm mơi trường lỏng nấm linh chi đen 31 Bảng 3.2 Tóm tắt diện hợp chất tự nhiên có cao chiết 42 H Bảng 3.3 Phân tích sơ thành phần hóa học có loại tơ nấm Linh chi 43 o Bảng 3.4 Kết khảo sát khả kháng khuẩn cao MeOH thu 44 C hi Bảng 3.5 Kết khảo sát khả bắt gốc tự cao MeOH thu 46 in M Bảng 3.6 Kết khảo sát khả kháng khuẩn phân đoạn cao thu đĩa thạch 47 h C Bảng 3.7 Kết khảo sát khả bắt gốc tự cao Hexane thu 50 ity Bảng 3.8 Kết khảo sát khả bắt gốc tự cao Chloroform thu 51 ni U Bảng 3.9 Kết khảo sát khả bắt gốc tự cao Ethyl acetate thu 52 ity rs ve Bảng 3.10 Kết khảo sát khả bắt gốc tự cao Nước thu 53 of gy lo no ch Te v DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Cấu tạo nấm Linh chi Hình 1.2 Chu trình phát triển nấm Linh chi Hình 1.3 Thành phần cấu tạo nấm Amauroderma subresinosum (Corner, 1993) 17 Hình 1.4 Quả thể A.subresinosum 19 Hình 2.1 Quy trình thu nhận dịch chiết tơ nấm để phân tích thành phần hóa hoc 22 H Hình 2.2 Sơ đồ điều chế cao chiết chứa hoạt chất từ tơ nấm Linh chi đen 26 o Hình 2.3 Phản ứng trung hòa gốc DPPH 28 C hi Hình 2.4 Quy trình phân tách mẫu phân đoạn Hexane Chloroform 30 M Hình 2.5 Quy trình phân tách mẫu phân đoạn Ethyl acetate Nước 30 h in Hình 3.1 Khả tích lũy sinh khối sợi nấm Amauroderma subresinosum môi C trường lỏng 32 ity Hình 3.2 Định tính anthraglycosid 33 ni U Hình 3.3 Định tính flavonoid 33 ve Hình 3.4 Định tính acid béo 34 ity rs Hình 3.5 Định tính alkaloid với thuốc thử Mayer 35 Hình 3.6 Định tính alkaloid với thuốc thử Bouchardat 35 of Hình 3.7 Định tính carotenoid 36 Te Hình 3.8 Định tính phytosterol 36 lo no ch Hình 3.9 Định tính steroid 37 Hình 3.10 Định tính tanin 38 gy Hình 3.11 Định tính đường khử trước đun 38 Hình 3.12 Định tính đường khử sau đun 39 Hình 3.13 Định tính antocyanosid 39 Hình 3.14 Định tính saponin 40 Hình 3.15 Định tính acid uronic 41 Hình 3.16 Định tính acid hữu 41 Hình 3.17 Kết khảo sát kháng khuẩn cao MeOH 45 Hình 3.18 Biểu đồ thể khả bắt gốc tự DPPH cao MeOH thu 46 vi Bảng 3.9 Kết khảo sát khả bắt gốc tự cao Ethyl acetate thu H Nồng độ mẫu (mg/ml) 0.5 0.25 0.125 o OD OD OD Trung bình % bắt gớc tự % sai số 0,125 0,119 0,252 0,409 0,400 0,555 0,107 0,097 0,237 0,397 0,501 0,562 0,109 0,098 0,231 0,396 0,486 0,555 0,114 0,105 0,240 0,401 0,509 0,557 84,39 85,62 67,04 44,98 30,11 23,48 1,35 1,706 1,485 0,993 3,827 0,555 C hi h in M ity C ity rs ve ni U of gy lo no ch Te Hình 3.24 Biểu đồ thể khả bắt gốc tự DPPH cao Ethyl acetate thu 52 Bảng 3.10 Kết khảo sát khả bắt gốc tự cao Nước thu H Nồng độ mẫu (mg/ml) 0.5 0.25 0.125 o OD OD OD Trung bình % bắt gớc tự % sai số 0,155 0,269 0,433 0,584 0,681 0,612 0,112 0,211 0,430 0,567 0,555 0,609 0,107 0,203 0,404 0,571 0,551 0,614 0,108 0,228 0,422 0,574 0,596 0,612 85,17 68,74 42,01 21,19 18,21 16,02 0,495 4,945 2,190 1,220 10,150 0,346 C hi h in M ity C ity rs ve ni U of gy lo no ch Te Hình 3.25 Biểu đồ thể khả bắt gốc tự DPPH cao nước thu Kết cho thấy phân đoạn thu có khả bắt gốc tự DPPH theo nồng độ tăng dần Và nồng độ ức chế 50% phân đoạn 1,115; 0,336; 0.521; 1,218 mg/ml cho cao Hexan, Chloroform, Ethyl acetate nước 53 Qua giá trị IC50 phân đoạn IC50 cao tổng MeOH cho thấy phân đoạn chiết với Chloroform, Ethyl acetate có khả bắt gốc tự tốt cao tổng với giá trị IC50 0,336 0,521 mg/ml Phân đoạn Hexane có giá trị tương đương với phân đoạn cao tổng Methanol phân đoạn nước có giá trị IC50 cao 1.4 H o 1.2 C 0.8 h in M 0.6 ity C IC 50 (mg/ml) hi 0.4 ni U 0.2 Hexan Cloroform Ethyl acetate ity MeOH rs ve H2O of Các phân đoạn ch Te gy lo no Hình 3.26 Giá trị IC50 phân đoạn cao chiết 54 3.5 Kết quả phân tích thành phần có cao chiết tơ nấm A subresinosum bằng kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Để xác định thành phần hoạt chất có phân đoạn cao, kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao thực Sắc ký đồ cao Hexane, Chloroform, Ethyl acetate, nước thề hình 3.27, 3.28, 3.29 3.30 H o C hi h in M ity C ity rs ve ni U of lo no ch Te gy Hình 3.27 Sắc ký đồ dung dịch cao Hexane đo bước sóng 254 nm Theo quan sát sắc ký đồ thu được, có peak đặc trưng, tương ứng với chất có cao Hexane Peak thời gian lưu 24 phút, peak vào khoảng phút 31 Peak thứ thời gian lưu 35 phút 55 H o C hi h in M ity C rs ve ni U ity Hình 3.28 Sắc ký đồ dung dịch cao Chloroform đo bước sóng 254 nm of Trong cao Chloroform, phân tích chất đặc trưng, thời gian lưu gy lo no ch Te chất phút thứ 24 56 H o C hi h in M ity C ni U Hình 3.29 Sắc ký đồ dung dịch cao Ethyl acetate đo bước sóng 254 nm ve Quan sát sắc ký đồ cao Ethyl acetate, có peak đồng nghĩa với việc có chất đặc ity rs trưng vài tạp chất khác Thời gian lưu chất 14 21 phút of gy lo no ch Te 57 H o C hi h in M ity C rs ve ni U ity Hình 3.30 Sắc ký đồ dung dịch cao Nước đo bước sóng 254 nm of Đối với phân đoạn cao nước, chất có thời gian gian lưu ngắn phân Te tách cột C18 nên việc phân tách cột C18 không hiệu Các chất có lo no ch thể đường khử, polysaccharide,… Phân đoạn tiến hành phân tách hệ thống sắc ký khác sử dụng cột carbohydrate, cột amine gy 58 Chương KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Thời gian nuôi cấy thích hợp để thu nhận sinh khối tơ nấm linh chi 18 ngày điều kiện nhiệt độ 30oC Trong thành phần tơ nấm linh chi, nuôi cấy điều kiện nhiệt độ 30oC có hoạt chất: antraglycosid, acid béo, tinh dầu, phytosterol, tanin, đường khử, H saponin, acid uronic, acid hữu cơ,… o C Cao Methanol đánh giá có khả kháng khuẩn tốt với loại vi hi khuẩn S.aureus, B.subtilis, E.coli, P.aeruginosa nồng độ 20 mg/ml Đồng thời cao M in Methanol có khả kháng oxy hóa tốt với IC50 1,094 mg/ml h Các phân đoạn cao chiết Hexane, Chloroform, Ethyl acetate, nước tơ nấm C ity có khả kháng khuẩn yếu cao tổng Methanol, khả kháng oxy hóa cao ni U Chloroform cao Ethyl acetate tốt cao tổng, cao Hexane tương đương, cịn ve cao nước khả kháng oxy hóa yếu ity rs Phân tích phân đoạn chiết, thu cao Hexane có hợp chất, cao Chloroform có chất, cao Ethyl acetate có chất cao nước chưa xác định of 4.2 Kiến nghị Te Xác định nồng độ ức chế tối thiểu cao Methanol chủng vi khuẩn ch lo no Dùng hệ thống sắc ký khác để xác định thành phần phân đoạn cao nước Thu nhận xác định hoạt chất có phân đoạn cao phân gy tách HPLC 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Arichi D.S and Hagashi D.T (2003) Linh chi nguyên chất bệnh thời (Đoàn Sáng dịch) Nhà xuất Y học, Hà Nội, Việt Nam Đỗ Tất Lợi (2006) Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y Học, Hà Nội H Đoàn Sáng (2003) Linh chi nguyên chất bệnh thời Nhà xuất Y học, o C Hà Nội, Việt Nam hi Đoàn Suy Nghĩ (2008), Nghiên cứu tác dụng bảo vệ nấm Linh chi M h in (Ganoderma lucidum) cấu trúc mơ tinh hồn chuột nhắt trắng dịng SWISS C bị chiếu xạ liều cao Tạp chí khoa học, Đại học Huế, số 49 ity Lê Quỳnh Loan (2014), Thử nghiệm nuôi cấy khảo sát thành phần hoạt chất ni U số chủng nấm họ Linh chi Ganodermataceae thu nhận tự nhiên, ve Luận văn Thạc sĩ, ĐH KHTN TP.HCM, Tp Hồ Chí Minh ity rs Lê Xuân Thám (1996) Nấm Linh chi – tài nguyên dược liệu quí Việt Nam Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội of Lê Xuân Thám (2013) Phát triển sản xuất nấm sở điều tra xây dựng bảo Te ch tàng nấm Vườn quốc gia Cát Tiên Báo cáo Khoa Học – Sở Khoa học Công lo no nghệ Đồng Nai Lê Xuân Thám (1996) Nghiên cứu đặc điểm sinh học đặc điển hấp thu khoáng gy nấm Linh chi Ganoderma lucidum (Leyss.ex Fr).Karst Luận án phó tiến sỹ khoa học sinh học, Đại học Khoa Học Tự Nhiên, Đại học Quốc Gia Hà Nội, Việt Nam Nguyễn Hữu Đống Đinh Xuân Linh (2000) Nấm ăn nấm dược liệu - công dụng công nghệ nuôi trồng Nhà xuất Hà Nội, Hà Nội 10 Nguyễn Hữu Đống, Nguyễn Thị Sơn Zani Federico (2002) Cơ sở khoa học công nghệ nuôi trồng Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội 60 11 Nguyễn Kim Phi Phụng (2007) Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, ĐH Quốc gia TP.HCM, Thành phố Hồ Chí Minh 12 Nguyễn Lân Dũng (2001) Cơng nghệ ni trồng nấm, tập Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội 13 Nguyễn Minh Khang (2005), Khảo sát sinh trưởng nấm Linh chi đen (Amauroderma subresinosum, Corner) phát vùng núi Chứa Chan – Việt H Nam, Luận văn kỹ sư, ĐH Nông Lâm TP.HCM, Tp Hồ Chí Minh o C 14 Nguyễn Phước Nhuận (2001) Giáo trình sinh hố học, phần 1, Nhà xuất Đại hi học Quốc Gia TPHCM, T.p Hồ Chí Minh M h in 15 Nguyễn Thị Mai Anh, Đào Văn Phan, Phạm Thị Vân Anh (2005), Bước đầu nghiên cứu tác dụng nấm linh chi Việt Nam (Ganoderma lucidum) qua số C ity số lipid máu chuột cống Tạp chí nghiên cứu Y Học 38 (5) ve TP.HCM ni U 16 Trần Hùng (2004) Phương pháp nghiên cứu dược liệu, Đại học Y Dược Nhà xuất Nông nghiệp, Hà nội ity rs 17 Trần Văn Mão (2004) Nuôi trồng chế biến nấm ăn nấm làm thuốc chữa bệnh of 18 Viện Dược liệu – Bộ Y Tế (2006), Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý Te thuốc từ Dược thảo, NXB Khoa học Kỹ thuật Hà Nội , tr 28-35, 279-292, 367 lo no ch Tài liệu Tiếng Anh gy 19 Chairul, T.T., Hayashi, Y., Nishizawa, M., Tokuda, H., Chairul, S.M., Hayashi, Y.(1991) Applanoxidic acids A, B, C and D, biologically active tetracyclic triterpenes from Ganoderma applanatum Phytochemistry 30, 4105–4109 20 Hamide Ceniuva and tuncel Ozden (2002) Simultaneous High Performance Liquid Chromatographic Determination of paracetamol, phenylephrin HCl and chlorpheniramine maleate in pharmaceutical dosage forms Journal of Chrmatografic Sience, ISSN 0021-9665 Volume 40, Number 2, pp 97-100 61 21 Masao Hattori (2006), Protective effects of an acidic polysaccharide isolated from fruiting bodies of Ganoderma lucidum against murine hepatic injury induced by Propionibacterium acnes and lipopolysaccharide, J Nat Med 22 Shwu-Bin Lin, Chyi-Hann Li, Shiuh-Sheng Lee, Lou-Sing Kan (2003) Triterpene-enriched extracts from ganoderma lucidum inhibit growth of hepatoma cells via suppressing protein kinase c, activatin mitogen-activated protein kinases H and g2-phase cell cycle arrest Life Sciences 72 (2003) 2381 – 2390 o C 23 Steyaert R.L (1972) Species of Ganoderma and related genera mainly of the hi boyor and leiden herbaria National de Beigique, Burxelle M h in 24 Yihuai Gao, Guoliang Chen, Jin Lan, He Gao and Shufeng Zhou (2001) Extractoin of Ganoderma polysaccharides at relatively low temperature Froc Int C ity Symposium Ganoderma Sci, Auckland ni U 25 YihuaiGao, Jin Lan and Zhifang Liu, Extraction and determination of Ganoderma ve polysaccharides Int Med Complement Med Vol 1, Supplement 1,00-00 ity rs 26 Zhaoji – Ding (1980) The Ganodermataceae in chine Berlin Shiffigart of Tài liệu từ Internet Te 27 https://sv.wikipedia.org/wiki/Ganoderma_subresinosum lo no ch 28 http://www.Mushroom InformationGanoHIV.mht 29 http://khoahoc247.com/index.php/2014/01/tim-hieu-ve-linh-chi-p2/ gy 62 PHỤ LỤC Phụ lục A: Hình ảnh thí nghiệm H o C hi h in M C ity Tơ nấm Linh chi đen nuôi môi trường PDA ity rs ve ni U of gy lo no ch Te Sinh khối nấm Linh chi đen môi trường lỏng sau 15 ngày nuôi cấy H o C hi M h in Thực hiện phản ứng DPPH đĩa 96 giếng (II) mg/ml; (III) 1mg/ml; (IV) 0,5 mg/ml; ity C (I) mg/ml ; ity rs ve ni U (V) 0,25 mg/ml; (VI) 0,125 mg/ml of gy lo no ch Te Máy HPLC Phụ lục B: Các bảng phân tích ANOVA Theo dõi tăng sinh khối tơ nấm Linh chi đen môi trường lỏng Summary Statistics Average 0.276333 0.651667 1.80267 1.904 2.11 2.15533 1.48333 H N3 N6 N9 N12 N15 N18 Total Count 3 3 3 18 Standard deviation 0.0100664 0.019218 0.101589 0.0504777 0.0655744 0.055003 0.761445 Coeff of variation 3.64286% 2.94906% 5.63549% 2.65114% 3.10779% 2.55195% 51.3334% Minimum 0.267 0.631 1.713 1.87 2.05 2.1 0.267 Maximum 0.287 0.669 1.913 1.962 2.18 2.21 2.21 Range 0.02 0.038 0.2 0.092 0.13 0.11 1.943 Stnd skewness 0.41407 -0.535305 0.620533 1.17089 0.473963 -0.0385617 -1.29252 o C ANOVA Table Sum of Squares 9.81524 0.0413287 9.85657 Df 12 17 hi Mean Square 1.96305 0.00344406 F-Ratio 569.98 P-Value 0.0000 h in M Source Between groups Within groups Total (Corr.) Multiple Range Tests C Homogeneous Groups X X X X X X ity ity rs ve ni U Method: 95.0 percent LSD Count Mean N3 0.276333 N6 0.651667 N9 1.80267 N12 1.904 N15 2.11 N18 2.15533 of Khả kháng khuẩn tơ nấm linh chi cao Methanol khảo sát phương pháp khuếch tán giếng thạch 17.0 20.3333 19.6667 17.0 18.5 Coeff of variation 5.88235% 2.83943% 2.93568% 10.1885% 9.91363% 16.0 20.0 19.0 16.0 16.0 Minimum Maximum Range 18.0 21.0 20.0 19.0 21.0 ANOVA Table Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Squares 27.6667 9.33333 37.0 Df 11 Mean Square 9.22222 1.16667 F-Ratio 7.90 Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Count Mean B subtilis 17.0 S aureus 17.0 P aeruginosa 19.6667 E coli 20.3333 Homogeneous Groups X X X X P-Value 0.0089 2.0 1.0 1.0 3.0 5.0 gy 3 3 12 Standard deviation 1.0 0.57735 0.57735 1.73205 1.83402 lo no Average ch B subtilis E coli P aeruginosa S aureus Total Count Te Summary Statistics Stnd skewness 0.0 1.22474 -1.22474 1.22474 -0.525181 Phụ lục C: Thành phần môi trường nuôi cấy vi khuẩn ▪ Môi trường tăng sinh vi khuẩn: LB Nước cất : 100 ml Pepton :1g NaCl :1g Yeast extract : 0,5 g H ▪ Môi trường đĩa thạch kháng khuẩn: LB-agar o C Nước cất : 100 ml :1g M hi Pepton :1g h in NaCl Yeast extract : 0,5 g :2g ity C Agar ity rs ve ni U of gy lo no ch Te