Nghiên cứu sự tồn tại của dấu vết máu dưới một số điều kiện môi trường nhất định phục vụ công tác giám định sinh học hình sự

Bùi Anh Tuấn – Cao học K15 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT BÙI ANH TUẤN NGHIÊN CỨU SỰ TỒN TẠI CỦA DẤU VẾT MÁU DƢỚI MỘT SỐ ĐIỀU KIỆN MÔI TRƢỜNG NHẤT ĐỊNH PHỤC VỤ CÔNG TÁC GIÁM ĐỊNH SINH HỌC HÌNH SỰ LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC HÀ NỘI - NĂM 2013 Tai ngay!!! Ban co the xoa dong chu nay!!! Luận văn thạc sỹ - 2013 Bùi Anh Tuấn – Cao học K15 MỤC LỤC Nội dung Trang MỞ ĐẦU 1 Sự cần thiết việc nghiên cứu đề tài Mục tiêu nghiên cứu Đối tƣợng, phạm vi nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Chƣơng I MỘT SỐ VẤN ĐỀ VỀ DẤU VẾT MÁU VÀ GIÁM ĐỊNH DẤU VẾT MÁU Đại cƣơng dấu vết máu 1.1.Khái niệm dấu vết máu 1.2.Phƣơng pháp phát hiện, ghi nhận, thu lƣợm, bảo quản dấu vết máu trƣờng 1.3 Các phƣơng pháp giám định định hƣớng dấu vết máu 10 1.4 Phƣơng pháp miễn dịch khuếch tán kép - Ouchterlony: 11 Tác động số yếu tố mơi trƣờng đến tồn vẹn phân tử ADN 12 2.1 ADN tế bào máu 12 2.2 Cấu trúc ADN 13 2.2 Sự tác động đến tính tồn vẹn phân tử ADN 14 Giám định ADN từ dấu vết máu 17 3.1 Khái niệm đời giám định gen (ADN) 17 3.2 Cơ sở khoa học giám định gen 22 Tình hình nghiên cứu nƣớc lĩnh vực liên quan đến đề tài 25 4.1 Tình hình nghiên cứu ngồi nƣớc 25 4.2 Tình hình nghiên cứu nƣớc 29 Chƣơng II 31 VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31 Vật liệu: 31 1.1 Vật liệu dùng tách chiết định lƣợng ADN 31 1.2 Chọn lựa, thu thập mẫu: 32 Luận văn thạc sỹ - 2013 Bùi Anh Tuấn – Cao học K15 Phƣơng pháp nghiên cứu: 32 2.1 Bố trí thí nghiệm 32 2.2 Giám định định hƣớng dấu vết máu 35 2.3 Xác định protein loài theo Ochterlony từ dấu vết máu [2,3] 36 2.4 Tách chiết ADN từ mẫu máu thu nhận trƣờng: 37 2.5 Định lƣợng sản phẩm ADN sau tách chiết: 39 2.6 Phƣơng pháp định lƣợng ADN kít Quantifiler™ Human ADN Quantification 39 2.7 Nhân bội sản phẩm ADN sau tách chiết phản ứng PCR 40 2.8 Điện di phân tích kết quả: 43 2.8.1 Nguyên lý điện di máy giải trình tự gen ABI Prism 3130 Genetic Analyzer 43 2.8.2 Các bƣớc tiến hành điện di 44 Chƣơng III 45 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 45 Kết nghiên cứu 45 1.1 Kết xác định định hƣớng dấu vết máu thu từ vụ án với dung dịch phenolphthalein: 45 1.2 Kết xác định protein loài sử dụng kỹ thuật khuếch tán miễn dịch kép theo Ouchterlony: 45 1.3 Kết định lƣợng ADN tổng số từ dấu vết máu kỹ thuật Realtime – PCR : 46 1.3.1.Kết định lƣợng với mẫu thu từ vụ án: 47 1.3.2 Kết định lƣợng ADN mẫu khảo nghiệm 50 1.4 Kết phân tích điện di sản phẩm PCR sử dụng phần mềm GeneMapper ID v.3.2 50 2.2 Đối với mẫu khảo nghiệm 62 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 67 Kết luận 67 Kiến nghị 68 Luận văn thạc sỹ - 2013 Bùi Anh Tuấn – Cao học K15 MỞ ĐẦU Sự cần thiết việc nghiên cứu đề tài Trong vụ án hình sự, đặc biệt vụ án xâm phạm tính mạng, sức khỏe nhân phẩm ngƣời, máu loại dấu vết thƣờng gặp máu hệ điển hình tác động qua lại đối tƣợng nạn nhân chế hình thành dấu vết hoạt động phạm tội hình Dấu vết máu dạng dấu vết vật chất có vai trị nguồn cung cấp thơng tin có giá trị công tác điều tra, xét xử vụ án [5] Thực tế công tác giám định gen (ADN) vụ án hình sự, dấu vết máu đƣợc đƣa đến phịng thí nghiệm với khơng đồng chất lƣợng số lƣợng Các phòng giám định gen thƣờng xuyên phải giải mẫu khó, chất lƣợng thấp đƣợc thu thập từ dấu vết trƣờng sau tổn môi trƣờng tự nhiên thời gian dài Dấu vết máu đƣợc thu lƣợm trƣờng thƣờng dạng dấu vết khơ, bị phân hủy hay nhiều, bị tạp nhiễm nhiều chất gây ức chế phản ứng PCR Chất lƣợng dấu vết máu ảnh hƣởng lớn đến chất lƣợng ADN tách chiết trực tiếp đƣợc từ tế bào máu Đối với mẫu máu chất lƣợng kém, bị thối rữa, phân hủy hay lẫn chất ức chế thƣờng gây cho giám định viên khơng khó khăn cơng đoạn quy trình giám định ADN Ở Việt Nam, việc khai thác, nghiên cứu, sử dụng dấu vêt máu giám định ADN hình cịn nhiều hạn chế, thiếu sót chƣa đáp ứng đƣợc yêu cầu thực tiễn Do nhiều ngun nhân, cơng tác phát hiện, nhận định, thu lƣợm, bảo quản dấu vết máu khám nghiệm trƣờng cịn có nhiều sai sót, chƣa đƣợc tiến hành nhanh chóng, kịp thời, xác Việc thu dấu vết máu không cách, không đảm bảo số lƣợng, chất lƣợng, bảo quản dấu vết máu cịn sơ sài, qua loa, khơng đảm bảo yêu cầu mặt kỹ thuật Điều làm cho chất lƣợng dấu vết không tốt bị hƣ hỏng dẫn đến Luận văn thạc sỹ - 2013 Bùi Anh Tuấn – Cao học K15 đánh giá, giám định để khai thác triệt để thông tin vụ án Về mặt lý luận, giới, có số lƣợng định cơng trình nghiên cứu chất lƣợng số dấu vết sinh vật nhƣng chƣa có nghiên cứu cụ thể chuyên sâu chất lƣợng dấu vết máu phục vụ giám định sinh học hình điều kiện Việt Nam Việc nghiên cứu đánh giá chất lƣợng ADN thu đƣợc từ dấu vết máu dƣới tác động môi trƣờng tự nhiên thời gian tồn góp phần đƣa phƣơng thức tốt để cải tiến kỹ thuật, công đoạn công tác khám nghiệm trƣờng, đánh giá, thu thập bảo quản dấu vết máu, nhƣ thủ thuật phân tích ADN phịng thí nghiệm Giúp cho cơng tác điều tra, khám nghiệm trƣờng giám định ADN từ dấu vết máu đạt hiệu cao, qua góp phần giải nhanh chóng vụ án hình Xuất phát từ vấn đề nêu trên, việc thực Đề tài: “Nghiên cứu chất lƣợng dấu vết máu dƣới tác động số điều kiện môi trƣờng định phục vụ cơng tác giám định sinh học hình sự” cấp thiết phƣơng diện lý luận thực tiễn Mục tiêu nghiên cứu Nghiên cứu đƣợc tiến hành nhằm mục đích phân tích, đánh giá tác động số yếu tố môi trƣờng khoảng thời gian định lên chất lƣợng dấu vết máu giám định định hƣớng, xác định tính đặc hiệu loài, chất lƣợng số lƣợng ADN tách chiết đƣợc từ dấu vết máu thu trƣờng vụ án từ mẫu khảo nghiệm Trên sở kết nghiên cứu, đƣa nhận định giúp cho cán khám nghiệm trƣờng có giải pháp phát hiện, thu lƣợm, bảo quản, đánh giá dấu vết máu; giám định viên có thủ thuật thực giám định đánh giá kết Luận văn thạc sỹ - 2013 Bùi Anh Tuấn – Cao học K15 3 Đối tƣợng, phạm vi nghiên cứu Dấu vết sinh vật trƣờng vụ án thƣờng chịu tác động đa dạng yếu tố khách quan chủ quan nhƣ thời tiết, khí hậu (nhiệt độ, độ ẩm) nhƣ ý thức trình độ cán khám nghiệm trƣờng Do điều kiện hạn hẹp, đề tài tập trung nghiên cứu tác động yếu tố khí hậu thời tiết điều kiện nhà trời, qua bốn mùa năm mẫu thu đƣợc từ vụ án thực tế Đề tài chƣa thể sâu nghiên cứu tác động mang tính chủ quan khác nhƣ tác động ngƣời, động vật (giặt, tẩy, sử dụng hóa chất, chùi, xóa, …); điều kiện thiên nhiên đặc biệt (mƣa, bão, lũ lụt,…); yếu tố học hay tác động yếu tố vật mang lên tồn dấu vết Đề tài luận văn tập trung nghiên cứu dấu vết máu dạng khô bám dính bề mặt vật mang thƣờng gặp vải cotton Ngồi yếu tố điều kiện mơi trƣờng, kết giám định dấu vết máu phụ thuộc vào khối lƣợng dấu vết, dấu vết đƣợc lựa chọn làm đối tƣợng nghiên cứu đƣợc nhận định trƣớc lƣợng cảm quan Với mẫu khảo nghiệm, Đề tài tập trung nghiên cứu vào hai điều kiện vật lý thƣờng tác động đến chất lƣợng dấu vết máu trƣờng thực tế vụ án là: nhiệt độ độ ẩm theo không gian thời gian Về mặt thời gian, không gian khảo sát: dấu vết máu vụ án xảy địa bàn Miền Bắc Việt Nam, bốn mùa năm 2012 tồn qua mốc thời gian ngày, 10 ngày tuần Việc sử dụng kỹ thuật realtime PCR định lƣợng ADN khâu quy trình giám định sinh học giúp ta đánh giá đƣợc hàm lƣợng ADN tách chiết đƣợc từ dấu vết máu, từ định hƣớng điều chỉnh hàm lƣợng Luận văn thạc sỹ - 2013 Bùi Anh Tuấn – Cao học K15 ADN khuôn đƣa vào phản ứng PCR Việc đánh giá chất lƣợng dấu vết máu đối tƣợng nghiên cứu đề tài phải đƣợc kết hợp công đoạn quy trình giám định, giám định định hƣớng, xác định tính đặc hiệu lồi, định lƣợng ADN tổng số sau tách chiết phân tích kết điện di sản phẩm PCR Quá trình nghiên cứu đƣợc tiến hành phịng thí nghiệm Trung tâm Giám định sinh học pháp lý, Viện Khoa học hình sự, Bộ Cơng an Nội dung nghiên cứu Vật liệu nghiên cứu thu đƣợc từ nguồn: - Các dấu vết máu thu thập từ vụ án giết người, cướp Các dấu vết điều kiện khác khí hậu, thời gian tồn Cụ thể mẫu máu từ vụ án đƣợc chọn lựa theo tiêu chí tồn qua mốc thời gian xảy nơi có khí hậu mùa rõ rệt miền Bắc Việt Nam Tất đối tƣợng nghiên cứu đƣợc chia vào nhóm tách biệt dấu vết máu đƣợc tồn điều kiện nhà trời qua mốc thời gian ngày, 10 ngày tuần: mẫu vụ án hình (có ký hiệu từ MA1 – MA6) dấu vết máu có điều kiện tồn nhà mẫu vụ án hình (có ký hiệu từ MA7 – MA12) dấu vết máu có điều kiện tồn ngồi trời vào mùa xuân mẫu vụ án hình (có ký hiệu MA13 – MA18) dấu vết máu có điều kiện tồn ngồi trời vào mùa hè mẫu vụ án hình (có ký hiệu từ MA19 – MA24) dấu vết máu có điều kiện tồn ngồi trời vào mùa thu mẫu vụ án hình (có ký hiệu từ MA25 – MA30) dấu vết máu có điều kiện tồn ngồi trời vào mùa đông Luận văn thạc sỹ - 2013 Bùi Anh Tuấn – Cao học K15 Tổng số mẫu từ vụ án đƣợc chọn làm đối tƣợng nghiên cứu mẫu x nhóm = 30 mẫu - Các mẫu khảo nghiệm tạo ra: Quy trình: lấy mẫu máu tƣơi ngƣời nhỏ với lƣợng khoảng 50 ul lên vật mang mảnh vải cotton khơ, sau đƣợc đƣa vào điều kiện giả định mơi trƣờng, khí hậu mẫu khảo nghiệm (có ký hiệu từ KN1 – KN6) dấu vết máu tạo đƣợc tạo phịng thí nghiệm để đƣa vào điều kiện nhiệt độ khác mẫu khảo nghiệm (có ký hiệu từ KN7 – KN12) dấu vết máu tạo đƣợc tạo phịng thí nghiệm để đƣa vào điều kiện ẩm độ khác Địa điểm tiến hành thí nghiệm Phịng thí nghiệm Trung tâm giám định Sinh học pháp lý - Viện Khoa học hình Mẫu khảo nghiệm đƣợc lƣu trữ tƣơng ứng với mốc thời gian 3, 10 ngày tuần điều kiện nhiệt độ ẩm độ khác Số lƣợng mẫu ứng với điều kiện cụ thể nhƣ sau: Tổng số mấu khảo nghiệm là: x = 12 mẫu Các mẫu đƣợc đánh giá chất lƣợng gián tiếp qua bƣớc quy trình giám định nhƣ sau: Sử dụng dung dịch phenolphthalein để xác định định hƣớng dấu vết máu Sử dụng phƣơng pháp khuếch tán miễn dịch kép thạch theo Ouchterlony để xác định tính đặc hiệu lồi protein dấu vết ADN đƣợc tách chiết theo quy trình chuẩn phƣơng pháp vơ sử dụng hạt Chelex (quy trình đƣợc phịng thí nghiệm ADN hình Cảnh sát bang Victoria - Liên bang Úc phê chuẩn) Luận văn thạc sỹ - 2013 Bùi Anh Tuấn – Cao học K15 Sử dụng kit Quantifiler Human ADN, máy Realtime PCR 7500 cña hãng ABI (Mỹ) để định lƣợng ADN tổng số từ mẫu đƣợc tách chiết Đơn vị định lƣợng là: ng/µl Sử dụng kit IdentifilerTM hãng ABI (Mỹ), với phức hệ mồi STR gồm 16 locus gen máy chu trình nhiệt ABI - 9700 Sau thu đƣợc sản phẩm PCR, tiến hành xác định kiểu gen mẫu nghiên cứu phƣơng pháp điện di huỳnh quang (điện di mao quản) máy giải trình tự gen AB 3130 hãng Applied Biosystems Các kết thu đƣợc đƣợc xử lý phần mềm Genemapper ID v.3.2 để xác định hình ảnh đặc trƣng peak, hình thái alen locus, qua đánh giá chất lƣợng kiểu gen thu đƣợc từ sản phẩm PCR, gián tiếp xác định đƣợc chất lƣợng ADN khuôn thu đƣợc từ đối tƣợng nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Nghiên cứu đƣa mức đánh giá tác động đến chất lƣợng số lƣợng ADN tách chiết đƣợc từ dấu vết máu dƣới điều kiện nhiệt độ độ ẩm khoảng thời gian cụ thể Việc nghiên cứu đánh giá chất lƣợng ADN dấu vết máu góp phần đƣa phƣơng thức tốt để cải tiến kỹ thuật, công đoạn công tác khám nghiệm trƣờng, đánh giá, thu thập bảo quản dấu vết máu, nhƣ giám định, phân tích ADN phịng thí nghiệm Từ giúp cho việc khai thác hiệu tối đa thơng tin từ dấu vết máu góp phần giải vụ án Hoàn thiện sở lý luận giám định sinh học pháp lý nói chung giám định gen (ADN) nói riêng phục vụ cho cơng tác thực tiễn đấu tranh phòng chống tội phạm, nhƣ nghiên cứu đào tạo Luận văn thạc sỹ - 2013 Bùi Anh Tuấn – Cao học K15 Chƣơng I MỘT SỐ VẤN ĐỀ VỀ DẤU VẾT MÁU VÀ GIÁM ĐỊNH DẤU VẾT MÁU Đại cƣơng dấu vết máu Khái niệm dấu vết máu Dấu vết máu lƣợng máu đƣợc tìm thấy trƣờng, công cụ, phƣơng tiện gây án, quần, áo, đồ dùng, thân thể nạn nhân hay thủ phạm Sự xuất dấu vết máu hậu hành vi xảy vụ việc có tính hình sự, đƣợc thu giám định theo qui định pháp luật.[2] Qua thống kê, dấu vết máu chiếm tới 60% tổng số loại dấu vết sinh vật hình thành tồn liên quan đến vụ việc hình cần điều tra khám phá Máu thuộc loại mô lỏng lƣu thông hệ thống tuần hoàn ngƣời động vật Ở giới động vật, thành phân cấu cạo hemglobin máu có ion sắt hóa trị (Fe++) nên máu có màu đỏ Trong thể ngƣời, máu chiếm 8% trọng lƣợng thể, thành phần bao gồm hồng cầu, loại bạch cầu, tiểu cầu, sợi huyết huyết Ngƣời bình thƣờng 1ml máu có từ 4,5-5,0 triệu hồng cầu 7000-9000 bạch cầu Đối tƣợng dùng để giám định gen bạch cầu (chủ yếu bạch cầu limpho) Số lƣợng tỷ lệ bạch cầu ngƣời lớn trẻ em có biểu khác Ngƣời lớn bạch cầu limpho chiếm 20-23% Do cần lƣợng máu nhỏ đủ để giám định [4] Phƣơng pháp để tìm dấu vết máu trƣờng nhƣ giám định đồ vật nghi dính máu quan sát điều kiện chiếu sáng tốt, sử dụng cơng cụ hỗ trợ nhƣ kính lúp đèn chiếu xiên kít định hƣớng để tìm vết máu bị chùi, xoá Luận văn thạc sỹ - 2013 Bùi Anh Tuấn – Cao học K15 62 Các mẫu thu trƣờng điều kiện trời, mẫu đƣợc thu mùa thu mùa đông độ tuổi dấu vết thấy chất lƣợng ADN tốt so với hai mùa xuân, hè Thể mẫu đƣợc thu mùa đơng thu phân tích kiểu gen đƣợc đầy đủ 16 locus, chất lƣợng hình thái peak (alen) thể biểu đồ tốt Nhìn cách tổng thể với mẫu nghiên cứu, hàm lƣợng ADN tách chiết đƣợc có xu hƣớng tỷ lệ nghịch với thời gian tồn dấu vết Đặc biệt dấu vết điều kiện trời thời gian dài lên đến tuần, thƣờng cho chất lƣợng kiểu gen không đồng đều, bị alen số locus nhƣ mẫu MA11, MA12, MA18,… (Biểu đồ kết phần Phụ Lục).Các mẫu cho kết định lƣợng ADN với hàm lƣợng cao thƣờng dấu vết (dƣới ngày), ADN chƣa bị biến tính nhiều Các mẫu có điều kiện tồn nhà, có chất lƣợng tốt hẳn mẫu tồn trời xét khoảng thời gian, thể hàm lƣợng ADN khuôn chất lƣợng kiểu gen sản phẩm sau khuếch đại 2.2 Đối với mẫu khảo nghiệm Tất mẫu xử lý mức nhiệt độ 37, 450C giám định định hƣớng xác định protein loài, thu đƣợc kiểu gen đầy đủ qua mốc thời gian ngày 10 ngày Việc ủ mẫu khảo nghiệm 370C lên đến tuần không làm thay đổi kiểu gen thu đƣợc từ mẫu đối chứng Kết biểu đồ điện di mẫu KN3 cho thấy, xuất thêm alen tƣơng ứng locus D8, D13, D16, D18 Lý giải cho tƣợng khả thời gian bảo quản kéo dài nên dễ bị nhiễm ADN ngoại lai khơng phải chất lƣợng ADN khn bị biến đổi.(Hình 10 ) Luận văn thạc sỹ - 2013 Bùi Anh Tuấn – Cao học K15 63 Hình 10 Kết điện di mẫu KN3 Luận văn thạc sỹ - 2013 Bùi Anh Tuấn – Cao học K15 64 Lƣợng mẫu khơng có ADN là: mẫu Đây mẫu tồn điều kiện ẩm độ cao 98% thời gian dài (từ tuần trở lên) hay mẫu đƣợc để nhiệt độ cao 1000C thời gian 10 phút Các mẫu thƣờng bị thối rữa, phân hủy hoàn toàn điều kiện yếm khí ẩm độ gần nhƣ tuyệt đối Đối với mẫu tiến hành giám định định hƣớng đƣợc dấu vết máu xác định đƣợc protein lồi Kết định lƣợng ADN khn mẫu (KN5, KN6) thấp gần nhƣ không thu đƣợc kiểu gen, xác định đƣợc giới tính sau tiến hành chạy điện di sản phẩm PCR Hình 11 Kết điện di mẫu KN6 Luận văn thạc sỹ - 2013 Bùi Anh Tuấn – Cao học K15 65 Ở mức nhiệt độ cao 1000C, nhƣ thể biểu đồ, số hồ sơ kiểu gen mẫu thu đƣợc bị số alen Có locus bị alen Vì nhiệt độ cao 1000C thời gian dài (≥ 10 phút) bắt đầu có tƣợng biến đổi thành phần máu (nhân hem) phá hủy vật liệu di truyền (ADN) Kéo dài thời gian lên 30 phút 1000C không thu đƣợc kiểu gen từ dấu vết (kiểu gen bị hồn tồn) Hình 12 Kết điện di mẫu KN12 Luận văn thạc sỹ - 2013 Bùi Anh Tuấn – Cao học K15 66 Ở ẩm độ 0, 55% thời gian dƣới ngày kết định lƣợng chất lƣợng hồ sơ kiểu gen thu đƣợc không thay đổi Ở ẩm độ 0% thời gian dài lên đến tuần, thu đƣợc kiểu gen đầy đủ 16 locus Ở mức ẩm 55%, thời gian đến tuần có biến đổi hồ sơ kiểu gen thu đƣợc Kết định lƣợng ADN giảm, số locus bị alen nhƣ D7, CSF, TPOX, D18 (ở mẫu KN1) tƣợng nhiễu xuất nhiều theo thời gian tồn dấu vết Hình 13 Biểu đồ kết điện di mẫu KN11 Luận văn thạc sỹ - 2013 Bùi Anh Tuấn – Cao học K15 67 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Các điều kiện khí hậu tác động mạnh đa dạng đến chất lƣợng dấu vết Đặc biệt vào mùa xuân mùa hè thời tiết nóng độ ẩm lớn điều kiện thuận lợi thúc đẩy nhanh q trình biến tính phân hủy dấu vết máu Các mẫu án đƣợc gửi giám định có chất lƣợng gây khó khăn cho cơng tác giám định Kết nghiên cứu với mẫu khảo nghiệm dƣới tác động yếu tố môi trƣờng thƣờng gặp nhiệt độ, độ ẩm ảnh hƣởng không nhỏ đến chất lƣợng dấu vết Đặc biệt độ ẩm yếu tố hàng đầu thúc đẩy phân hủy thành phần tồn dấu vết máu, ảnh hƣởng đến kết giám định Đối với dấu vết máu khô tồn điều kiện khô ráo, không ảnh hƣởng nhiều điều kiện mơi trƣờng khí hậu việc tách chiết ADN đạt hiệu cao nhất, phụ thuộc vào độ tuổi dấu vết Những dấu vết bị ƣớt, bị thối mức độ khác việc tách chiết ADN tổng số gặp nhiều khó khăn, hiệu Dấu vết nhiệt độ cao 450C khả giám định định hƣớng nhƣng khả xác định protein đặc hiệu loài bị dần Ở 1000C tuần dấu vết hẳn khả xác định loài protein bị biến tính mạnh Dấu vết máu dùng giám định ADN hình cần phải đƣợc làm khơ cách Khơng nên đƣợc đóng gói kín điều kiện ẩm ƣớt, yếm khí với điều kiện giúp vi sinh vật phát triển mạnh, ADN bị đứt gãy, phá hủy mẫu vật làm khó khăn tách chiết phân tích ADN Luận văn thạc sỹ - 2013 Bùi Anh Tuấn – Cao học K15 68 Kiến nghị Từ nghiên cứu trên, đƣa số nguyên tắc bảo quản dấu vết máu, để đảm bảo chất lƣợng dấu vết phục vụ giám định sinh học nhƣ sau: Nên làm khô cách trƣớc bảo quản Khơng nên đóng gói kín mơi trƣờng ẩm tƣơng đối tuyệt đối (vì tạo điều kiện thuận lợi cho vi sinh vật phát triển) Nếu môi trƣờng ẩm tƣơng đối tuyệt đối dấu vết cần phải đƣợc đem phân tích Việc làm khơ nên tránh sử dụng quạt điện nguồn nhiệt trực tiếp ( nhƣ tủ ấm, hơ nóng,…) Sau làm khơ khí, dấu vết nên đƣợc đóng gói tờ giấy thấm Không sử dụng chất bảo quản Có thể đƣợc vận chuyển nhiệt độ phịng Đối với mẫu có ẩm độ cao, cẩn tiến hành làm khô kịp thời tránh ảnh hƣởng đến chất lƣợng dấu vết Tuy nhiên, nên tránh việc làm khô quạt làm khả bị tạp nhiễm sử dụng nguồn nhiệt trực tiếp gây biến tính, đứt gãy phân tử ADN Sau làm khơ nhiệt độ phịng, khơng khí (gió) tự nhiên, mẫu cần phải đƣợc đóng gói giấy thấm Không cần yêu cầu chất bảo quản Do khuôn khổ hạn hẹp đề tài, cần có thêm nghiên cứu tác động chủ quan vào dấu vết (nhƣ giặt, chùi xóa, sử dụng hóa chất nhƣ thuốc tẩy, xà phòng, axit, kiềm…) Vật mang dấu vết yếu tố có tác động lớn tới chất lƣợng dấu vết máu cần có nghiên cứu tác động số vật mang tiêu biểu lên chất lƣợng Luận văn thạc sỹ - 2013 Bùi Anh Tuấn – Cao học K15 69 dấu vết phục vụ giám định sinh học, đặc biệt giám định gen điều kiện Việt Nam Việc phát hiện, thu lƣợm bảo quản dấu vết quan trọng hoạt động tố tụng Tình hình tội phạm phát triển theo hƣớng ngày tinh vi, phức tạp với nhiều thủ đoạn để che dấu, xóa loại bỏ dấu vết Với biện pháp kỹ thuật xác, tiên tiến đƣợc sử dụng đồng triệt để giúp ta bƣớc khai thác sử dụng dấu vết có hiệu quả, đáp ứng nhu cầu thực tế điều tra khám phá tội phạm Luận văn thạc sỹ - 2013 Bùi Anh Tuấn – Cao học K15 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Ngô Tiến Quý, Hà Quốc Khanh, Nguyễn Văn Hà, cộng sự, , 2005 Hà Quốc Khanh, Nguyễn Văn Hà , 2007 Ngô Tiến Quý, Bảo vệ khám nghiệm trƣờng, NXB Công an Nhân dân, 2008 Phạm Xuân Thủy, Hà Quốc Khanh Dấu vết sinh vật pháp y hình sự”, Giáo trình Học viện Cảnh sát Nhân dân, 2010 Trịnh Tuấn Toàn, “Nghiên cứu ứng dụng phƣơng pháp giám định định hƣớng dấu vết máu dung dịch phenolphthalein Việt Nam”, Đề tài nghiên cứu khoa học cấp bộ, 2011 Trần Minh Đôn Bảo tồn Ex-situ vật liệu sống xây dựng sở liệu cho tàng thƣ an ninh năm 2006 Báo cáo tổng kết nhiệm vụ khoa học thƣờng xuyên, Viện Kỹ thuật hóa sinh tài liệu nghiệp vụ, 2008 Bạch Quốc Tuyên cộng , Huyết học (tập 1), Nhà xuất Y học, Hà Nội 1974 Đặng Đức Trạch, Nguyễn Đình Hƣơng, Phạm Mạnh Hùng, Ponsmand K.W, Wrigt P.E Miễn dịch học; NXB Khoa học Kỹ thuật 1987 Tiếng Anh McNally, L., Shaler, R C., Baird, M., Balazs, I., De Forest, P., and Kobilinsky "Evaluation of Deoxyribonucleic Acid (DNA) Isolated from Human Bloodstains Exposed to Ultraviolet Light, Heat, Humidity, and Luận văn thạc sỹ - 2013 Bùi Anh Tuấn – Cao học K15 71 Soll Contamination," Journal of Forensic Sciences JFSCA, Vol 34 No 5, Sept 1989, pp 1059-1069 10 John M Butler Forensic DNA Typing Elsevier 2005 11 Chelex® DNA Extraction, Method N0 6A Victoria forensic Science – 1998 12 John M Butler Fundamentals of Forensic DNA Typing, Elsevier.2010 13 Barry A.J Fisher Techniques of Crime scene investigation CRC Press 2004 Trang Web 14 https://www.cstl.nist.gov/strbase/NISTpub.htm 15 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1968692 16 http://www.investigativegenetics.com/content/1/1/14 Luận văn thạc sỹ - 2013 Bùi Anh Tuấn – Cao học K15 72 PHỤ LỤC Hình ảnh biểu đồ kết điện di sản phẩm PCR ADN tách chiết đƣợc từ mộ số mẫu tiêu biểu: MA1 Luận văn thạc sỹ - 2013 Bùi Anh Tuấn – Cao học K15 73 2.MA2 MA4 Luận văn thạc sỹ - 2013 Bùi Anh Tuấn – Cao học K15 74 4.MA7 5.MA8 Luận văn thạc sỹ - 2013 Bùi Anh Tuấn – Cao học K15 75 MA12 7.MA17 Luận văn thạc sỹ - 2013 Bùi Anh Tuấn – Cao học K15 76 MA29 KN10 Luận văn thạc sỹ - 2013