Tạo các hạt nanochitosan tripolyphosphate có kích thước khác nhau bằng phương pháp liên kết ion và đánh giá hoạt tính đối kháng vi sinh vật của chúng

1 VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT TRẦN THỊ KIM DUNG TẠO CÁC HẠT NANOCHITOSAN-TRIPOLYPHOSPHATE CĨ KÍCH THƢỚC KHÁC NHAU BẰNG PHƢƠNG PHÁP LIÊN KẾT ION VÀ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH ĐỐI KHÁNG VI SINH VẬT CỦA CHÚNG Ngành: Sinh học Chuyên ngành: Vi sinh vật học Mã số: 60.42.40 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS PHẠM VIỆT CƢỜNG Hà Nội - 2013 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Tai ngay!!! Ban co the xoa dong chu nay!!! LỜI CẢM ƠN Để hồn thành đề tài luận văn thạc sĩ, bên cạnh nỗ lực cố gắng thân cịn có hƣớng dẫn nhiệt tình q Thầy Cô, nhƣ động viên ủng hộ gia đình bạn bè suốt thời gian học tập nghiên cứu thực luận văn thạc sĩ Xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Phạm Việt Cƣờng Phịng Cơng nghệ sinh học - Viện Hoá sinh biển- Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam, ngƣời hết lịng giúp đỡ tạo điều kiện tốt cho hồn thành luận văn Đồng thời, tơi xin đƣợc gửi lời cảm ơn tới PGS.TS Nguyễn Thị Kim Cúc anh chị em Phịng Cơng nghệ sinh học - Viện Hoá sinh biển- Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam tận tình giúp đỡ tơi q trình nghiên cứu Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành đến tồn thể q Thầy Cô môn Vi sinh vật học hết lòng truyền đạt kiến thức quý báu nhƣ tạo điều kiện thuận lợi suốt q trình học tập nghiên cứu tơi hồn thiện đề tài Cuối xin chân thành bày tỏ lịng biết ơn đến gia đình, bạn bè, ngƣời không ngừng động viên, hỗ trợ tạo điều kiện tốt cho suốt thời gian học tập thực luận văn Hà Nội, Ngày tháng năm 2013 Học viên Trần Thị Kim Dung Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ MỤC LỤC trang DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ MỞ ĐẦU Chƣơng - TỔNG QUAN 1.1 Chitosan 1.1.1.Cấu trúc chitosan 1.1.2 Tính chất chitosan 1.1.3 Cơ chế kháng khuẩn Chitosan 1.1.4 Ứng dụng chitosan lĩnh vực khoa học công nghệ 1.2 Tổng quan nano chitosan 1.2.1 Các phương pháp chế tạo nano chitosan 1.2.2 Ứng dụng hạt nano chitosan 1.2.3 Hoạt tính kháng khuẩn nano chitosan 1.3 Các chủng vi sinh vật thử nghiệm 1.3.1 Bacillus subtilis 1.3.2 Bacillus cereus 1.3.3 Micrococcus luteus 1.3.4 Listonella damsela 1.3.5 Candida albicans 1.3.6 Fusarium oxysporum 1.3.7 Aspergillus awamori Nakazawa Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Chƣơng - VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Hóa chất dụng cụ thiết bị 2.1.1 Hóa chất 2.1.2 Dụng cụ 2.1.3 Thiết bị 2.1.4 Các chủng vi sinh vật thử nghiệm 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 2.2.1 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến trình tạo hạt nano chitosan phương pháp liên kết ion 2.2.1.1 Khảo sát ảnh hƣởng khối lƣợng phân tử chitosan 2.2.1.2 Khảo sát ảnh hƣởng tỷ lệ CS/TPP 2.2.1.3 Khảo sát ảnh hƣởng thời gian khuấy, tốc độ khuấy 2.2.2 Tạo loại hạt nano chitosan có kích thước khác phương pháp liên kết ion 2.2.3 Đánh giá hoạt tính kháng vi sinh vật loại hạt nano chitosan có kích thước khác Chƣơng - KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến trình tạo hạt nano chitosan - TPP 3.1.1 Khảo sát ảnh hưởng khối lượng phân tử chitosan 3.1.2 Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ CS TPP 3.1.3 Khảo sát ảnh hưởng tốc độ khuấy thời gian khuấy lên trình tạo hạt nano chitosan 3.2 Tạo loại hạt nano chitosan có kích thƣớc khác 3.3 Đánh giá hoạt tính đối kháng vi sinh vật loại hạt nano chitosan có kích thƣớc khác (CF2: 1000 nm, CF1: 450 nm, CF6: 100 nm) 3.3.1 Đánh giá khả kháng khuẩn loại hạt nano chitosan có kích thước khác 3.3.2 Đánh giá khả kháng nấm loại hạt nano chitosan có kích thước khác Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 3.3.2.1 Khả kháng nấm men Candida albicans loại hạt nano chitosan 3.3.2.2 Khả kháng nấm mốc loại hạt nano chitosan có kích thƣớc khác KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT CF2 Hạt nanochitosan-tripolyphosphate kích thƣớc 1000nm CF1 Hạt nanochitosan-tripolyphosphate kích thƣớc 450nm CF6 Hạt nanochitosan-tripolyphosphate kích thƣớc 100nm MIC90 Minimum Inhibitory concentration - Nồng độ ức chế tối thiểu MBC Minimum bactericidal Concentration - Nồng độ diệt khuẩn tối thiểu MFC Minimum Fungicidal Concentration - Nồng độ diệt nấm tối thiểu OD Optical Density DD Degree of Deacetylation (Độ deacetyl hóa) DNA Deoxyribonucleic Acid FE-SEM Field Emission Scanning Electron Microscopy (Kính hiển vi điện tử quét phát xạ trƣờng) TPP Tripolyphosphate B.s Bacillus subtilis M.lu Micrococcus luteus V23 Bacillus cereus V1 Listonella damsela M15 Aspergillus awamori Nakazawa F.oxys Fusarium oxysporum C.ab Candida albicans KLPTTB Khối lƣợng phân tử trung bình CS Chitosan khơng xử lý C5 Chitosan xử lý lị vi sóng 600w/ phút C10 Chitosan xử lý lị vi sóng 600w/ 10 phút ηo : Độ nhớt đặc trƣng M: Khối lƣợng phân tử trung bình NMR: Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy) - phổ cộng hƣởng từ hạt nhân cs: Cộng Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Tóm tắt phƣơng pháp điều chế hạt nano chitoan làm chất dẫn loại thuốc, protein gen khác Bảng 2.1 Thành phần môi trƣờng MPA Bảng 2.2 Thành phần môi trƣờng Hansen Bảng 2.3 Thành phần môi trƣờng Czapek-Dox Bảng 3.1 : KLPTTB Chitosan xử lý không xử lý Bảng 3.2: Kích thƣớc hạt nano chitosan thu đƣợc điều kiện khác Bảng 3.3: Khả ức chế vi khuẩn hạt nanochitosan (%) Bảng 3.4: Giá trị MIC90 MBC chế phẩm với chủng vi khuẩn nghiên cứu Bảng 3.5: Khả ức chế Candida albicans hạt nanochitosan (%) Bảng 3.6: Giá trị MIC90 MFC chế phẩm với chủng Candida albicans Bảng 3.7: Khả ức chế nấm mốc hạt nanochitosan (%) Bảng 3.8: Giá trị MIC90 MFC chế phẩm với chủng nấm sợi nghiên cứu Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1: Quy trình thu nhận chitin chitosan Hình 1.2: Cơng thức cấu tạo chitin chitosan Hình 1.3 : Sơ đồ tạo hạt phƣơng pháp khâu mạch nhũ tƣơng Hình 1.4 : Sơ đồ tạo hạt phƣơng pháp giọt tụ, kết tủa Hình 1.5 : Sơ đồ tạo hạt phƣơng pháp tạo giọt nhũ tƣơng Hình 1.6: Sơ đồ tạo hạt phƣơng pháp mixen đảo Hình 1.7: Sơ đồ tạo hạt phƣơng pháp liên kết ion Hình 1.8: Hình thái Bacillus subtilis Hình 1.9: Hình thái Bacillus cereus Hình 1.10: Hình thái Micorcoccus luteus Hình 1.11 Hình thái Photobacterium damselae Hình 1.12 Hình thái Candida albicans Hình 1.13 Hình thái Fusarium oxysporum Hình 1.14 Hình thái Aspergillus awamori Nakazawa Hình 3.1: Kích thƣớc hạt nanochitosan với chitosan xử lý lị vi sóng Hình 3.2: Kích thƣớc hạt nanochitosan với chitosan khơng xử lý Hình 3.3: Dung dịch nano chitosan điều chế từ tỷ lệ CS/TPP khác (từ trái qua phải): 4:1, 5:1, 6:1 Hình 3.4: Kích thƣớc hạt nanochitosan với tốc độ khuấy1500v/2h Hình 3.5: Kích thƣớc hạt nanochitosan với tốc độ khuấy 4000v/2h Hình 3.6: Kích thƣớc hạt nanochitosan với tốc độ khuấy 8000v/2h Hình 3.7: Kích thƣớc hạt nanochitosan với tốc độ khuấy 8000v/1h Hình 3.8: Kích thƣớc hạt nanochitosan với tốc độ khuấy 8000v/3h Hình 3.9: Kích thƣớc hạt nanochitosan đƣợc báo cáo theo số lƣợng (a) theo cƣờng độ (b) mẫu CF2 Hình 3.10: Điện zeta hạt nanochitosan thu đƣợc từ mẫu CF2 Hình 3.11 Ảnh FE-SEM hạt nano chitosan mẫu CF2 Hình 3.12: Kích thƣớc hạt nanochitosan đƣợc báo cáo theo số lƣợng (c) theo cƣờng độ (d) mẫu CF1 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Hình 3.13 : Điện zeta hạt nanochitosan thu đƣợc từ mẫu CF1 Hình 3.14 Ảnh FE-SEM hạt nano chitosan mẫu CF1 Hình 3.15 :Kích thƣớc hạt nanochitosan đƣợc báo cáo theo số lƣợng (c) theo cƣờng độ (d) mẫu CF6 Hình 3.16: Điện zeta hạt nanochitosan thu đƣợc từ mẫu CF6 Hình 3.17 Ảnh FE-SEM hạt nano chitosan mẫu CF6 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 10 MỞ ĐẦU Chitosan dạng deacetyl hóa từ chitin, có cấu trúc polysaccharide, đƣợc tìm thấy lồi động vật giáp xác, trùng vài loại nấm Với nhiều tính nhƣ tƣơng thích sinh học, phân hủy sinh học, bám dính màng khơng độc hại, trở thành nguyên liệu cho nhiều ứng dụng dƣợc sinh học đƣợc sử dụng làm nguyên liệu điều chế hạt nano chitosan năm gần tính chất ƣu việt kích thƣớc nano Hạt nano chitosan đƣợc tạo nhiều phƣơng pháp khác nhƣ phƣơng pháp khâu mạch nhũ tƣơng (emulsion cross-linking), phƣơng pháp giọt tụ/kết tủa (coacervation/precipitation), phƣơng pháp hợp giọt nhũ tƣơng (emulsion-droplet coalescence), phƣơng pháp liên kết ion (ionic gelation) phƣơng pháp mixen đảo (reverse micellar) Hiện phƣơng pháp đƣợc sử dụng nhiều liên kết ion, ƣu điểm phƣơng pháp trình chuẩn bị đơn giản không cần phải sử dụng dung môi hữu hay sử dụng lực nén lớn, phƣơng pháp đƣợc nghiên cứu rộng rãi tổng hợp chất dẫn thuốc thực phẩm chức Hạt nano chitosan tạo khơng giữ đƣợc tính chất chitosan ban đầu mà tỏ vƣợt trội kích thƣớc nhỏ gọn, có diện tích tiếp xúc lớn chitosan thơng thƣờng nên có hiệu kháng khuẩn cao nhiều lần so với chitosan Hoạt tính đối kháng vi sinh vật nano chitosan khơng phụ thuộc vào chủng loại vi sinh khác mà cịn phụ thuộc nhiều vào kích thƣớc zeta hạt, việc lựa chọn quy trình tạo hạt nano chitosan đánh giá hoạt tính kháng vi sinh vật chúng vấn đề cần đƣợc nghiên cứu để ứng dụng khơng lĩnh vực y sinh, mà cịn ứng dụng lĩnh vực khác nhƣ bảo quản trái cây, thực phẩm nhằm đáp ứng nhu cầu nƣớc hƣớng tới xuất Nhƣ biết Việt Nam nƣớc có nhiều loại trái cây, phong phú chủng loại nhiều loại độc quyền tồn giới, có giá trị xuất cao, nhiên việc bảo quản loại trái cịn vấn đề nan giải, bảo quản khơng Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 67 Phụ lục 2: Đồ thị C - (ηdd /ηdm -1)/C mẫu Chitosan xử lý vi sóng 600w/5 phút (C5), Đồ thị C - (ηdd /ηdm -1)/C mẫu Chitosan xử lý vi sóng 600w/10 phút (C10) Đồ thị C - (ηdd /ηdm -1)/C mẫu Chitosan không xử lý (CS) y = 164877x + 296.27 R2 = 0.9811 600 (ηdd/ηdm -1)/c 500 400 300 CS 200 100 0 0.0005 0.001 0.0015 Ccs (g/ml) Đồ thị C - (ηdd /ηdm -1)/C mẫu Chitosan không xử lý Đồ thị C - (ηdd /ηdm -1)/C mẫu Đồ thị C - (ηdd /ηdm -1)/C mẫu Chitosan xử lý vi sóng 600w/5 phút Chitosan xử lý vi sóng 600w/10 phút Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 68 Phụ lục 3: Mật độ phát triển Bacillus subtilis môi trƣờng thạch sau 24h phơi nhiễm với hạt nano chitosan Chế phẩm Kháng sinh Chitosan CF2 CF1 CF6 Nồng độ chế phẩm (μg/ml) 0,3125 0,15625 0,07813 100 75 50 25 100 75 50 25 50 40 25 50 40 25 Số hóa Trung tâm Học liệu Bacillus subtilis Mật độ vsv % ức chế (CFU/ml) (1 ± 0,3) x 109 99,99 (1,7 ± 0,45) x 10 92,2 (7,8 ± 0,35) x 10 (2,1 ± 0,65) x 10 79 (2,4 ± 0,25) x 10 100 89,58 (2,5 ± 0,26) x 10 54,16 (1,1 ± 0,61) x 10 37,5 (1,5 ± 0,49) x 10 (2,4 ± 0,25) x 10 100 90,83 (2,2 ± 0,41) x 10 50 (1,2 ± 0,3) x 10 41,66 (1,4 ± 0,36) x 10 (2,4 ± 0,25) x 10 100 89,16 (2,6 ± 0,62) x 10 45,83 (1,3 ± 0,46) x 10 (1 ± 0,3) x 10 100 91 (0.9 ± 0,26) x 10 55 (4.5 ± 0,15) x 108 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 69 Sự phát triển Bacillus subtilis mơi trƣờng khơng có kháng sinh (1) mơi trƣờng có bổ sung kháng sinh nồng độ khác (2,3,4) 10 Sự phát triển Bacillus subtilis Sự phát triển Bacillus subtilis mơi trƣờng có bổ sung chitosan mơi trƣờng có bổ sung nano chitosan kích Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ nồng độ khác (5,6,7) thƣớc 1000 nm nồng độ khác (8,9,10) 70 11 12 13 Sự phát triển Bacillus subtilis mơi trƣờng có bổ sung nano chitosan kích thƣớc 450 nm nồng độ khác (11,12,13) Số hóa Trung tâm Học liệu 14 15 16 Sự phát triển Bacillus subtilis mơi trƣờng có bổ sung nano chitosan kích thƣớc 100 nm nồng độ khác (14,15,16) http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 71 Phụ lục 4: Mật độ phát triển Bacillus cereus môi trƣờng thạch sau 24h phơi nhiễm với hạt nano chitosan Chế phẩm Kháng sinh Chitosan CF2 CF1 CF6 Bacillus cereus Nồng độ chế phẩm (μg/ml) Mật độ vsv (CFU/ml) % ức chế 0,625 0,3125 0,2 0,15625 200 150 100 50 200 150 100 200 100 75 50 200 100 75 50 (1,8 ± 0,65) x 108 (2 ± 0,3) x 102 (1,6 ±0,58) x 107 (5,2 ±0,47) x 107 (1,8 ± 0,65) x 108 (1,7 ± 0,43) x 107 (0,91± 0,4) x 108 (1.12 ± 0,44) x 108 (1,1 ± 0,45) x 1010 (9,56 ± 0,41) x 108 (4,8 ± 0,46) x 109 (1,1 ± 0,45) x 1010 (2,9 ± 0,21) x 106 (1,08 ± 0,6) x 109 (3 ± 0,4) x 109 (1,8 ± 0,65) x 108 (4,2 ± 0,38) x 104 (1,7 ± 0,5) x 107 (3,4 ± 0,57) x 107 100 99,99 87,77 71,11 100 90,55 49,46 37,77 100 91,3 56,36 100 99,97 90,18 72,72 100 99,97 90,55 81,11 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 72 Phụ lục 5: Mật độ phát triển Micrococcus luteus môi trƣờng thạch sau 24h phơi nhiễm với hạt nano chitosan Chế phẩm Kháng sinh Chitosan CF2 CF1 CF6 Nồng độ chế phẩm (μg/ml) 2,5 1,25 200 100 50 40 200 100 50 40 100 50 40 25 50 40 25 Số hóa Trung tâm Học liệu Micrococcus luteus Mật độ vsv % ức chế (CFU/ml) (2,7 ± 0,36) x109 100 94,8 (1,4 ± 0,3) x 10 90,74 (2,5± 0,38) x 10 (2,7 ± 0,36) x10 100 99,97 (7,2 ± 0,36) x 10 91,48 (2.3 ± 0,51) x 10 84,81 (4,1± 0,7) x 10 10 (1,1 ± 0,21) x 10 100 99,99 (1 ± 0,26) x 10 93,09 (7,6 ± 0,77) x 10 88,18 (1,3 ± 0,55) x 10 10 (1,1 ± 0,21) x 10 100 98 (2,2 ± 0,4) x 10 90,36 (1,06 ± 0,35) x 109 83,63 (1,8 ± 0,15) x 10 (2,1 ± 0,4) x 10 100 91,9 (1,7 ± 0,65) x 10 86,19 (2,9 ± 0,46) x 10 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 73 Phụ lục 6: Mật độ phát triển Listonella damsela môi trƣờng thạch sau 24h phơi nhiễm với hạt nano chitosan Chế phẩm Kháng sinh Chitosan CF2 CF1 CF6 Listonella damsela Nồng độ chế phẩm (μg/ml) Mật độ vsv (CFU/ml) % ức chế (3,1 ± 0,32) x 1010 1,25 0,625 0,3125 0,2 0,15626 200 100 50 25 20 12,5 100 50 25 12,5 10 6,25 50 25 12,5 10 6,25 50 25 (5,1 ± 0,41) x 106 (1,1 ± 0,36) x 108 (2,9 ± 0,4) x 109 (6,6 ± 0,55) x 109 (3,1 ± 0,32) x 1010 (7,9 ± 0,53) x 102 (1,4 ± 0,41) x 104 (8,5 ± 0,55) x 107 (2,7 ± 0,65) x 109 (6,5 ± 0,4) x 109 (3,1 ± 0,32) x 1010 (7 ± 0,5) x 103 (3,8 ± 0,86) x 107 (9,2 ± 0,26) x 107 (3,4 ± 0,41) x 109 (1,2 ± 0,45) x 1010 (3,1 ± 0,32) x 1010 (6 ± 0,74)x 105 (6,6 ± 0,32) x 107 (2,8 ± 0,37) x 109 (9,1 ± 0,36) x 109 (3,1 ± 0,32) x 1010 (8,8 ± 0,45) x 105 100 99,98 99,67 90,64 78,71 100 99,99 99,99 99,72 91,3 79,03 100 99,99 99,87 99,70 89,03 61,29 100 99,99 99,79 90,96 70,64 100 99,99 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 74 12,5 10 6,25 (8,8 ± 0,41) x 107 (2,66 ± 0,5) x 109 (8,7 ± 0,3) x 109 99,71 91,42 71,93 Phụ lục 7: Mật độ phát triển Candida albicans môi trƣờng thạch sau 24h phơi nhiễm với hạt nano chitosan Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 75 Chế phẩm Kháng sinh Chitosan CF2 CF1 CF6 Candida albicans Nồng độ chế phẩm (μg/ml) Mật độ vsv (CFU/ml) % ức chế 50 25 10 2,5 1,25 0,625 200 100 50 40 25 12,5 200 100 50 25 12,5 100 50 25 20 12,5 100 50 25 20 12,5 (1,1 ± 0,45) x 108 (4,7 ± 0,7) x 104 (1,1 ± 0,64) x 105 (2,4 ± 0,47) x 105 (5,4 ± 0,45) x 105 (7,56 ± 0,75) x 106 (1,16 ± 0,61) x 107 (2,8 ± 0,4) x 109 (1,2 ± 0,53) x 103 (3,6 ± 0,65) x 106 (2,5 ± 0,62) x 108 (4,8 ± 0,4) x 108 (7,3 ± 0,43) x 108 (2,8 ± 0,4) x 109 (2,8 ± 0,55) x 102 (2 ± 0,47) x 106 (2,9 ± 0,81) x 108 (6,8 ± 0,61) x 108 (2,8 ± 0,4) x 109 (1,1 ± 0,4) x 105 (1,4 ± 0,56) x 108 (2,56 ± 0,61) x 108 (6,1 ± 0,6) x 107 (2,8 ± 0,4) x 109 (2,5 ± 0,32) x 105 (1,7 ± 0,38) x 108 (2,4 ± 0,55) x 108 (4,4 ± 0,4) x 108 100 99,96 99,91 99,80 99,55 93,12 89,45 100 99,99 99,87 91,07 82,85 73,93 100 99,99 99,93 89,64 76,07 100 99.99 95 90,85 78,21 100 99,99 94,28 91,43 83,92 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 76 21 22 23 Sự phát triển Candida albicans mơi trƣờng có bổ sung chitosan nồng độ khác (21,22,23) Số hóa Trung tâm Học liệu 24 25 26 Sự phát triển Candida albicans mơi trƣờng có bổ sung nano chitosan kích thƣớc 1000 nm nồng độ khác (24,25,26) http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 77 Phụ lục 8: Mật độ phát triển Fusarium oxysporum môi trƣờng thạch sau 24h phơi nhiễm với hạt nano chitosan Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 78 Chế phẩm Kháng sinh Chitosan CF2 CF1 CF6 Nồng độ chế phẩm (μg/ml) 50 35 25 125 62,5 31,25 25 15,625 125 62,5 31,25 25 15,625 31,25 25 15,625 7,813 6,5 31,25 25 15,625 7,813 6,5 33 Số hóa Trung tâm Học liệu Fusarium oxysporum Mật độ vsv % ức chế (CFU/ml) (3,8 ± 0,41) x 105 100 90,63 (3,56 ± 0,81) x 10 86,48 (5 ± 0,15) x 10 (1 ± 0,45) x 10 100 99,99 (3,7 ± 0,55) x 10 99,31 (6,9 ± 0,3) x 10 89,4 (1,06 ± 0,6) x 107 62 (3,8 ± 0,37) x 10 (1 ± 0,45) x 10 100 99,99 (1,9 ± 0,3) x 10 99,95 (5,1 ± 0,8) x 10 91,87 (8,13 ± 0,68) x 10 77,27 (2,5 ± 0,4) x 10 (1 ± 0,45) x 10 100 99,98 (1,8 ± 0,55) x 10 97,27 (3 ± 0,3) x 106 92,72 (8 ± 0,72) x 10 85,4 (1,46 ± 0,25) x 10 (1 ± 0,45) x 10 100 99,99 (1,3 ± 0,4) x 10 96,9 (3,1 ± 0,57) x 10 91,54 (8,46 ± 0,35) x 106 86,4 (1,36 ± 0,3) x 10 35 34 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 36 79 37 38 39 Sự phát triển Fusarium oxysporum môi trƣờng có bổ sung chitosan nồng độ khác (37,38,39) Số hóa Trung tâm Học liệu 40 41 42 Sự phát triển Fusarium oxysporum môi trƣờng có bổ sung nano chitosan kích thƣớc 1000 nm nồng độ khác (40,41,42) http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 80 Phụ lục 9: Mật độ phát triển Aspergillus awamori Nakazawa môi trƣờng thạch sau 24h phơi nhiễm với hạt nano chitosan Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 81 Chế phẩm Kháng sinh Chitosan CF2 CF1 CF6 Aspergillus awamori Nakazawa Nồng độ chế phẩm (μg/ml) Mật độ vsv (CFU/ml) % ức chế 50 25 12,5 10 1000 500 250 125 1000 500 250 125 500 250 125 62,5 500 250 125 62,5 (4,9 ± 0,47) x 105 (3,9 ± 0,32) x 103 (5,7 ± 0,6) x 103 (4,43 ± 0,58) x 104 (7,2 ± 0,61) x 104 (4,4 ± 0,51) x 106 (1,1 ± 0,45) x 105 (4,8 ± 0,61) x 105 (5,6 ± 0,75) x 105 (4,4 ± 0,51) x 106 (7,2 ± 0,65) x 104 (2,63 ± 0,47) x 105 (4,46 ± 0,75) x 105 (4,4 ± 0,51) x 106 (1,1 ± 0,66) x 104 (4,2 ± 0,75) x 105 (7,3 ± 0,62) x 105 (4,4 ± 0,51) x 106 (2 ± 0,4) x 103 (4,1 ± 0,71) x 105 (5,8 ± 0,8) x 105 100 99,18 98,81 90,96 85,30 100 97,7 89,09 87,27 100 98,3 94,02 89,86 100 99,75 90,45 83,4 100 99,95 90,68 86,82 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/