Ứng dụng kỹ thuật pcr để phát hiện đột biến gene calr type 1 và type 2 ở những bệnh nhân mắc hội chứng tăng sinh tủy âm tính với đột biến jak2v617f

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC Phạm Thị Phương Thảo ỨNG DỤNG KỸ THUẬT PCR ĐỂ PHÁT HIỆN ĐỘT BIẾN GENE CALR TYPE VÀ TYPE Ở NHỮNG BỆNH NHÂN MẮC HỘI CHỨNG TĂNG SINH TỦY ÂM TÍNH VỚI ĐỘT BIẾN JAK2V617F KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH KĨ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC Hà Nội - 2023 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC Phạm Thị Phương Thảo ỨNG DỤNG KỸ THUẬT PCR ĐỂ PHÁT HIỆN ĐỘT BIẾN GENE CALR TYPE VÀ TYPE Ở NHỮNG BỆNH NHÂN MẮC HỘI CHỨNG TĂNG SINH TỦY ÂM TÍNH VỚI ĐỘT BIẾN JAK2V617F KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH KĨ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC Cán hướng dẫn: Ts Dương Quốc Chính Ths Trần Tuấn Anh Hà Nội - 2023 Khóa luận tốt nghiệp Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học LỜI CẢM ƠN Trước tiên, xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới TS Dương Quốc Chính – Giảng viên trường đại học Y Dược – Đại học Quốc gia Hà Nội kiêm Trưởng Khoa Di truyền & Sinh học phân tử - Viện Huyết học Truyền máu Trung Ương Giảng viên hướng dẫn q trình nghiên cứu, ln tận tình hướng dẫn, quan tâm, giải đáp thắc mắc, khó khăn, đồng thời ln động viên tơi suốt q trình, giúp học học quý báu, để hồn thành tốt đề tài Tơi xin trân trọng cảm ơn ThS Trần Tuấn Anh- Thạc sĩ kỹ thuật xét nghiệm – Khoa Di truyền & Sinh học phân tử - Viện Huyết học Truyền máu Trung Ương, người hướng dẫn điều từ ngày tham gia vào nhóm nghiên cứu thực nghiệm, hỗ trợ nhiệt tình cho tơi suốt q trình thực hành từ thao tác nhỏ giúp đỡ, chia sẻ cho tài liệu hữu ích suốt thời gian thành viên nhóm Đặc biệt cả, anh giúp tơi thêm gắn bó chặt chẽ với thành viên nhóm mơi trường thực hành viện Đồng thời thiếu được, trân trọng cảm ơn tài trợ Viện Huyết học Truyền máu Trung ương cho đề tài Trong trình học tập, làm việc thực khóa luận, tơi nhận giúp đỡ nhiệt tình thầy cơ, anh chị bạn sinh viên làm việc thực tập Khoa Di truyền – Sinh học phân tử Tôi xin chân thành cảm ơn Để thực tốt khóa luận này, tơi xin gửi lời cảm ơn tới Ban chủ nhiệm khoa, toàn thể thầy cô giáo trường đại học Y dược - Đại học Quốc gia Hà Nội cho kiến thức quý báu trình học tập trường Hà Nội, ngày 24 tháng 05 năm 2023 Phạm Thị Phương Thảo Khóa luận tốt nghiệp Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Từ viết tắt Tên đầy đủ Từ tiếng việt CALR Calreticulin CML Chronic myelogenous leukemia DNA Deoxyribonucleotid acid EDTA Ethylenediaminetraacetic acid ET Essential thrombocythaemia Bệnh tăng tiểu cầu tiên phát JAK2 Janus kinase Gen JAK2 MPNs Myeloproliferative neoplasm Bệnh tăng sinh tủy mạn MPL Myeloproliferative leukemia virus oncogene Gen MPL NC Normal Control Mẫu chứng âm NGS Next Generation Sequencing Giải trình tự gen hệ PCR Polymerase chain reaction Phản ứng khuếch đại chuỗi Ph Philadelphia chromosome Nhiễm sắc thể Philadelphia PMF Primary myelofibrosis Bệnh xơ tủy nguyên phát POS Positive Mẫu chứng dương Bệnh Lơ-xê-mi kinh dịng hạt Khóa luận tốt nghiệp Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học Bệnh đa hồng cầu nguyên phát PV Polycythaemia vera RNA Ribonucleic acid WHO World Health Organization Tổ chức Y tế giới G-CSF Granulocyte colonystimulating factor Yếu tố kích thích bạch cầu hạt HSC Hematopietic stem cells Các tế bào gốc tạo máu TBCAT Tăng bạch cầu toan TBCAK Tăng bạch cầu kiềm AS- PCR Allele-specific PCR Đặc hiệu allene Khóa luận tốt nghiệp Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Vị trí nhiễm sắc thể chứa gen CALR .6 Hình 1.2 Toạ độ gen CALR nhiễm sắc thể số 19 Hình 1.3 Cấu trúc protein Calreticulin Hình 1.4 Đột biến gen CALR type type exon [18] Hình 2.1 Quy trình nghiên cứu 12 Hình 2.2 Nguyên lí phản ứng PCR 15 Hình 2.3 Vị trí mồi đầu (F) Forward mồi đầu (R) Reverse 16 Hình 3.1 Kết tối ưu nhiệt độ gắn mồi PCR phát đột biến CALR type .…… .25 Hình 3.2 Kết tối ưu nhiệt độ gắn mồi PCR phát đột biến CALR type …… .27 Khóa luận tốt nghiệp Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 2.1 Các biến số nghiên cứu 10 Bảng 2.2 Dụng cụ vật tư tiêu hao sử dụng thí nghiệm 11 Bảng 2.3 Thành phần chu trình nhiệt phản ứng PCR phát đột 16 biến CALR type 16 Bảng 2.4 Thành phần điều kiện phản ứng PCR phát đột biếnCALR type 17 Bảng 3.1: Phân bố giới tính nhóm nghiên cứu 19 Bảng 3.2: Phân bố nhóm bệnh nghiên cứu 19 Bảng 3.3: Phân bố khoảng tuổi nhóm bệnh nghiên cứu 20 Bảng 3.4 Phân bố khoảng tuổi theo nhóm bệnh nghiên cứu 20 Bảng 3.5 Thiết kế mồi phát đột biến CALR type 22 Bảng 3.6 Thiết kế mồi phát đột biến CALR type 23 Bảng 3.7 Phân bố tỷ lệ đột biến nghiên cứu 26 Bảng 3.8 Phân bố tỷ lệ đột biến theo nhóm bệnh 27 Bảng 3.9 Phân bố tỷ lệ đột biến theo giới tính nhóm nghiên cứu 28 Bảng 3.10 Phân bố tỷ lệ đột biến theo khoảng tuổi nhóm nghiêncứu 28 Biểu đồ 3.1 Tỷ lệ thể bệnh nhóm nghiên cứu ……………………24 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG - TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1 Tổng quan hội chứng tăng sinh tuỷ … …3 1.1.1 Khái niệm đặc điểm dịch tễ học .……… 1.1.2 Cơ chế sinh bệnh học ……… 1.1.3 Tổng quan gen liên quan đến hội chứng rối loạn tăng sinh tủy…….5 1.2 Tổng quan gen CALR …….6 1.2.1 Đặc điểm di truyển gen CALR ………6 1.2.2 Vai trò gen CALR hội chứng tăng sinh tủy ……….7 CHƯƠNG - ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .9 2.1 Đối tượng nghiên cứu .……9 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu .……….9 2.1.2 Tiêu chuẩn lựa chọn …… 2.1.3 Tiêu chuẩn loại trừ ……….9 2.1.4 Phương pháp chọn mẫu ……….9 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu .……9 2.2.1 Địa điểm nghiên cứu ………9 2.2.2 Thời gian nghiên cứu .……… 2.3 Phương pháp nghiên cứu … 2.3.1 Thiết kế nghiên cứu: mô tả cắt ngang ……… 2.3.2 Phương pháp nghiên cứu ……… 2.3.3 Biến số nghiên cứu ……… 10 2.4 Vật tư, hóa chất trang thiết bị sử dụng nghiên cứu … 10 2.5 Quy trình nghiên cứu …….12 2.5.1 Quy trình kỹ chiết DNA tổng số sử dụng hạt từ ……… 12 2.5.2 Kiểm tra, đánh giá nồng độ DNA máy quang phổ Nano Drop ………13 2.5.3 Kỹ thuật PCR phát đột biến CALR type type 2…………14 2.6 Quản lý phân tích số liệu …… 19 2.7 Vấn đề đạo đức nghiên cứu .……19 CHƯƠNG - KẾT QUẢ .20 3.1 Đặc điểm chung bệnh nhân nghiên cứu …… 20 3.1.1 Đặc điểm giới tính nhóm nghiên cứu …… 20 3.1.2 Đặc điểm tuổi nhóm nghiên cứu .… 20 3.1.3 Đặc điểm thể bệnh nhóm nghiên cứu …… 22 3.2 Xây dựng hồn thiện quy trình PCR phát đột biến CALR type type ….22 3.2.1 Nghiên cứu cặp mồi cho qui trình PCR …… 23 3.2.1.1 Các cặp mồi suy biến cho đột biến CALR type .…… 23 3.2.1.2 Các cặp mồi đặc hiệu cho đột biến CALR type .……… 23 3.2.2 Tối ưu nhiệt độ kỹ thuật PCR phát đột biến CALR …….24 3.3 Kết ứng dụng quy trình PCR phát đột biến CALR type CALR type … 27 3.3.1 Đặc điểm, phân bố hai loại đột biến gen CALR nghiên cứu… 27 CHƯƠNG - BÀN LUẬN 31 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 34 4.1 Kết luận …34 4.2 Đề xuất … 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC ……… Khóa luận tốt nghiệp Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học ĐẶT VẤN ĐỀ Hội chứng tăng sinh tủy (Myeloproliferative neoplasm-MPNs) tăng sinh bất thường tế bào gốc tủy xương, biểu tăng tiểu cầu, tăng hồng cầu bạch cầu máu tăng sinh xơ tủy xương với diễn biên sinh máu tủy (sự sản xuất tế bào bên tủy xương) chúng phân loại tăng tiểu cầu tiên phát (Essential thrombocythaemia - ET), Xơ tủy nguyên phát (Primary myelofibrosis - PMF), Đa hồng cầu nguyên phát (Polycythaemia vera - PV), Lơ xê mi kinh dịng tủy Ngồi thể tăng sinh tủy phổ biến bao gồm hội chứng tăng bạch cầu toan tăng tế bào mastocytosis hội chứng tăng bạch cầu hạt khác Các khối u tăng sinh tủy tương đồng với hội chứng tăng sinh tủy Tuy có tên chung hội chứng tăng sản tủy kiểu bệnh khác mang đặc điểm di truyền học khác đó, đột biến gen JAK2V617F gen CALR xác định dấu ấn có giá trị chẩn đốn hội chứng tăng sinh tủy [1] Janus kinase thành viên họ enzym Tyrosine kinase loại I tham gia vào q trình truyền tín hiệu cho thụ thể erythropoietin, thrombopoietin yếu tố kích thích bạch cầu hạt Các đột biến gen Janus kinase (JAK2) nguyên nhân gây bệnh đa hồng cầu chiếm tỷ lệ cao trường hợp tăng tiểu cầu tiên phát bệnh xơ tủy nguyên phát.[2] Gen CALR bị đột biến tỷ lệ đáng kể bệnh nhân tăng tiểu cầu tiên phát bệnh nhân xơ tủy nguyên phát bệnh đa hồng cầu Đột biến gen CALR hội chứng tăng sinh tủy báo cáo dấu hiệu quan trọng chẩn đoán phân tử, đặc biệt bệnh nhân âm tính với JAK2 V617F[3] Gen CALR xác định đột biến gây bệnh phần tư bệnh nhân mắc ET PMF [4] Trong năm gần người ta phát thấy xuất đột biến gen CALR nhóm hội chứng tăng sản tủy khơng mang đột biến JAK2 đột biến CALR nhanh chóng trở thành tiêu chí để chẩn đốn bệnh này[5] Để tìm hiểu chuẩn đốn rõ biến thể đột biến gen CALR, đột biến CALR phân tích kỹ thuật bao gồm kỹ thuật PCR đặc hiệu Khóa luận tốt nghiệp Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học PHỤ LỤC PHỤ LỤC I - MẪU PHIẾU THU THẬP MẪU NGHIÊN CỨU Trường Đại học Y dược – Đại học quốc gia Hà Nội Bộ môn Y dược học sở BẢNG THU THẬP MẪU & KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Chẩn Một số đặc STT Họ tên BN Mã BN Tuổi Giới KẾT QUẢ đoán điểm huyết [DNA] XN (PCR) ban đầu học Khóa luận tốt nghiệp Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học PHỤ LỤC II - DANH SÁCH BỆNH NHÂN NGHIÊN CỨU STT Hoten BN Chandoan Gioi Tuoi NGUYỄN QUANG T Tăng tiểu cầu tiền phát M 1956 NGUYỄN THỊ T Tăng tiểu cầu tiền phát F 1990 ĐINH ĐĂNG Đ Bệnh tăng hồng cầu vô M 1937 NGUYỄN THỊ B Bệnh loạn sản tủy tăng sinh tủy, chưa phân loại nơi khác F 1970 NGUYỄN THỊ Đ Bệnh tăng hồng cầu vô F 1968 NGUYỄN MINH T Bệnh loạn sản tủy tăng sinh tủy, chưa phân loại nơi khác M 1962 HÀ THỊ C Tăng tiểu cầu tiền phát F 1959 VŨ THỊ T Tăng tiểu cầu tiền phát F 1930 LÊ THỊ L Tăng tiểu cầu tiền phát F 1947 10 PHẠM VĂN P Tăng tiểu cầu tiền phát M 1978 11 ĐỖ THỊ H Tăng tiểu cầu tiền phát F 1980 12 NGUYỄN HỮU K Tăng tiểu cầu tiền phát M 1935 13 NGUYỄN ĐĂNG H Bệnh tăng hồng cầu vơ M 1954 Khóa luận tốt nghiệp 14 Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học NGUYỄN THỊ N Tăng tiểu cầu tiền phát F 1962 PHỤ LỤC II - DANH SÁCH BỆNH NHÂN NGHIÊN CỨU 15 NGUYỄN THỊ L 16 Tăng tiểu cầu tiền phát F 1946 NGUYỄN VĂN T Bệnh tăng hồng cầu vô M 1964 17 NGUYỄN VĂN M Bệnh tăng hồng cầu vô F 1972 18 LÊ HỮU C Tăng tiểu cầu tiền phát M 1955 19 CẤN VĂN B Tăng tiểu cầu tiền phát M 1945 20 NGUYỄN THỊ H Tăng tiểu cầu tiền phát F 1975 21 CHỬ NGỌC T Bệnh tăng hồng cầu vơ M 1949 22 ĐỒN VĂN P Tăng tiểu cầu tiền phát M 1958 23 NGUYỄN THỊ T Tăng tiểu cầu tiền phát F 1951 24 NGUYỄN VĂN S Tăng tiểu cầu tiền phát M 1950 25 NGUYỄN THỊ T Tăng tiểu cầu tiền phát F 1946 26 PHẠM THỊ T Tăng tiểu cầu tiền phát F 1976 27 PHẠM VĂN Q Bệnh tăng hồng cầu vô M 1987 28 HOÀNG SƠN H Tăng tiểu cầu tiền phát M 1994 29 TRẦN ĐỨC M Tăng tiểu cầu tiền phát M 1940 30 TRẦN THỊ L Bệnh tăng hồng cầu vơ F 1979 Khóa luận tốt nghiệp 31 Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học CUNG MINH D Tăng tiểu cầu tiền phát M 1958 PHỤ LỤC II - DANH SÁCH BỆNH NHÂN NGHIÊN CỨU 32 NGUYỄN VĂN L Tăng tiểu cầu tiền phát M 1960 33 PHẠM THỊ L Tăng tiểu cầu tiền phát F 1948 34 VŨ ĐỨC H Bệnh tăng hồng cầu vô M 1946 35 LÊ HỮU N Bệnh tăng hồng cầu vô M 1974 36 BÙI THỊ V Tăng tiểu cầu tiền phát F 1932 37 NGUYỄN ĐÌNH T Tăng tiểu cầu tiền phát M 1947 38 PHẠM HỒNG H Tăng tiểu cầu tiền phát M 1971 39 HỨA THỊ H Tăng tiểu cầu tiền phát F 1970 40 NGUYỄN DUY H Tăng tiểu cầu tiền phát M 1961 41 ĐOÀN VĂN B Tăng tiểu cầu tiền phát M 1968 42 NGUYỄN ĐỨC T Tăng tiểu cầu tiền phát M 1964 43 NGUYỄN KIM S Bệnh loạn sản tủy tăng sinh tủy, chưa phân loại nơi khác M 1944 44 PHAN THỊ V Tăng tiểu cầu tiền phát F 1985 45 NGUYỄN NGỌC T Tăng tiểu cầu tiền phát M 1971 46 ĐINH THỊ X Tăng tiểu cầu tiền phát F 1976 Khóa luận tốt nghiệp 47 Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học NGUYỄN TUẤN A Tăng tiểu cầu tiền phát M 1958 PHỤ LỤC II - DANH SÁCH BỆNH NHÂN NGHIÊN CỨU 48 QUÀNG VĂN C Bệnh tăng hồng cầu vô M 1977 F 1962 49 TRIỆU THỊ T Bệnh loạn sản tủy tăng sinh tủy, chưa phân loại nơi khác 50 NGUYỄN THU H Tăng tiểu cầu tiền phát F 1975 51 ĐẶNG VĂN B Tăng tiểu cầu tiền phát M 1964 52 VŨ VĂN C Tăng tiểu cầu tiền phát M 1970 53 TRỊNH THỊ Tăng tiểu cầu tiền phát F 1953 54 TRẦN THỊ T Tăng tiểu cầu tiền phát F 1979 55 CÙ THỊ G Tăng tiểu cầu tiền phát F 1976 56 CHU THỊ N Bệnh tăng hồng cầu vô F 1995 57 NGUYỄN VĂN B Bệnh tăng hồng cầu vô M 1962 58 TRẦN THẾ S Bệnh tăng hồng cầu vơ M 1979 59 HỒNG VĂN V Tăng tiểu cầu tiền phát M 1964 60 PHAN THỊ Đ Tăng tiểu cầu tiền phát F 1946 61 NGUYỄN VĂN V Bệnh tăng hồng cầu vô M 1983 Khóa luận tốt nghiệp 62 TRẦN QUỐC H Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học Bệnh loạn sản tủy tăng sinh tủy, chưa phân loại nơi khác M 1957 PHỤ LỤC II - DANH SÁCH BỆNH NHÂN NGHIÊN CỨU 63 NGUYỄN THỊ L 64 TẠ QUANG B 65 HOÀNG THỊ P 66 TRỊNH ĐỨC C 67 HOÀNG VĂN B 68 Tăng tiểu cầu tiền phát F 1984 Bệnh tăng hồng cầu vô M 1954 Tăng tiểu cầu tiền phát F 1991 Bệnh tăng hồng cầu vô M 1992 Tăng tiểu cầu tiền phát M 1971 PHẠM ANH T Bệnh tăng hồng cầu vô M 1973 69 LÊ VĂN H Bệnh tăng hồng cầu vơ M 1979 71 ĐỒN VĂN T Tăng tiểu cầu tiền phát M 1983 72 TRẦN THỊ H Tăng tiểu cầu tiền phát F 1973 73 VŨ VĂN N Tăng tiểu cầu tiền phát M 1957 74 VŨ THỊ Đ Tăng tiểu cầu tiền phát F 1951 75 TRẦN THỊ Y Bệnh loạn sản tủy tăng sinh tủy, chưa phân loại nơi khác F 1943 76 ĐINH VĂN L Bệnh tăng hồng cầu vô M 1952 Khóa luận tốt nghiệp Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học 77 ĐỖ VĂN H 78 NGÔ THỊ T 79 PHẠM QUANG H Bệnh tăng hồng cầu vô M Tăng tiểu cầu tiền phát 1979 F 1956 Bệnh tăng hồng cầu vô M 1994 PHỤ LỤC II - DANH SÁCH BỆNH NHÂN NGHIÊN CỨU 80 PHƯƠNG THỊ L Tăng tiểu cầu tiền phát F 1955 81 NGUYỄN VĂN N Tăng tiểu cầu tiền phát M 2002 82 LƯƠNG NGỌC T Tăng tiểu cầu tiền phát M 1977 83 LẠI THỊ H Tăng tiểu cầu tiền phát F 1987 84 VŨ THỊ T Tăng tiểu cầu tiền phát F 1955 85 LÒ VĂN Ư Bệnh tăng hồng cầu vô M 1974 86 NGUYỄN VIẾT H Tăng tiểu cầu tiền phát M 1964 87 HỒ THỊ Q Tăng tiểu cầu tiền phát F 1975 88 NGUYỄN ĐỨC M Bệnh tăng hồng cầu vô M 1986 89 HOÀNG THỊ H Tăng tiểu cầu tiền phát F 1976 90 MAI KHẮC K Tăng tiểu cầu tiền phát M 1948 91 ĐOÀN HỒNG T Bệnh xơ tuỷ cấp M 1947 92 HOÀNG ANH T Tăng tiểu cầu tiền phát M 1977 93 LƯƠNG VĂN T Tăng tiểu cầu tiền phát M 1961 Khóa luận tốt nghiệp Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học 94 VŨ VĂN T Tăng tiểu cầu tiền phát M 1968 95 NGUYỄN THỊ D Tăng tiểu cầu tiền phát F 1957 96 VŨ SƠN H Tăng tiểu cầu tiền phát M 1995 PHỤ LỤC II - DANH SÁCH BỆNH NHÂN NGHIÊN CỨU 97 NGUYỄN VĂN C 98 NGUYỄN ĐÌNH D 99 PHAN THỊ H 100 TRẦN VĂN N 101 TRẦN THỊ VUI Tăng tiểu cầu tiền phát F 1963 102 ĐỖ THỊ N Bệnh xơ tuỷ cấp F 1939 103 NGUYỄN VĂN H Tăng tiểu cầu tiền phát M 1982 104 VŨ HẢI S Bệnh tăng hồng cầu vô M 1980 105 NGUYỄN ĐẮC Đ Tăng tiểu cầu tiền phát M 1998 106 NGUYỄN THỊ L Tăng tiểu cầu tiền phát F 1972 107 NGUYỄN ĐỨC Q Bệnh tăng hồng cầu vô M 1980 NGUYỄN THỊ H Bệnh loạn sản tủy tăng sinh tủy, chưa phân loại nơi khác 1944 108 Tăng tiểu cầu tiền phát M 1957 Bệnh tăng hồng cầu vô M 1962 Tăng tiểu cầu tiền phát F 1980 Bệnh tăng hồng cầu vơ M 1981 F Khóa luận tốt nghiệp Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học 109 ĐÀM DUY P Tăng tiểu cầu tiền phát M 1954 110 ĐỖ XUÂN T Tăng tiểu cầu tiền phát M 1936 F 1998 111 Bệnh loạn sản tủy tăng NGUYỄN THỊ BÍCH P sinh tủy, chưa phân loại nơi khác PHỤ LỤC II - DANH SÁCH BỆNH NHÂN NGHIÊN CỨU 112 NGUYỄN THỊ C Tăng tiểu cầu tiền phát F 1943 113 NGUYỄN THỊ H Tăng tiểu cầu tiền phát F 1970 114 NGUYỄN NGỌC H Bệnh tăng hồng cầu vô M 1977 115 VƯƠNG THỊ T 116 KHỔNG VĂN T 117 LƯƠNG THỊ H Tăng tiểu cầu tiền phát F 1983 118 NGUYỄN THỊ N Tăng tiểu cầu tiền phát F 1945 119 PHẠM KỲ S Tăng tiểu cầu tiền phát M 1951 120 LÊ THỊ V Bệnh tăng hồng cầu vô F 1956 121 TRỊNH THỊ B Tăng tiểu cầu tiền phát F 1970 122 VŨ XUÂN B Tăng tiểu cầu tiền phát M 1953 123 TRẦN VĂN H Tăng tiểu cầu tiền phát M 1986 124 NGUYỄN QUÝ T Tăng tiểu cầu tiền phát M 1956 Bệnh xơ tuỷ cấp F 1965 Bệnh tăng hồng cầu vô M 1967 Khóa luận tốt nghiệp Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học NGUYỄN HỮU T Bệnh tăng hồng cầu vô M 1964 126 NGUYỄN VĂN K Bệnh loạn sản tủy tăng sinh tủy, chưa phân loại nơi khác M 1958 127 NGUYỄN ANH T Bệnh tăng hồng cầu vô M 1974 125 PHỤ LỤC II - DANH SÁCH BỆNH NHÂN NGHIÊN CỨU NGUYỄN DUY T Bệnh loạn sản tủy tăng sinh tủy, chưa phân loại nơi khác M 1945 129 TRẦN VĂN D Bệnh loạn sản tủy tăng sinh tủy, chưa phân loại nơi khác M 1977 130 QUÁCH VĂN V Tăng tiểu cầu tiền phát M 1941 131 LÙ THỊ S Tăng tiểu cầu tiền phát F 1993 132 NGUYỄN XUÂN N Tăng tiểu cầu tiền phát M 1980 133 HOÀNG VĂN T Bệnh loạn sản tủy tăng sinh tủy, chưa phân loại nơi khác M 1944 134 NGUYỄN THỊ D Tăng tiểu cầu tiền phát F 1970 135 NGUYỄN CÔNG T Tăng tiểu cầu tiền phát M 1962 136 PHẠM VĂN T Tăng tiểu cầu tiền phát M 1946 137 ĐỖ DUY H Tăng tiểu cầu tiền phát M 2002 138 NGUYỄN THỊ T Tăng tiểu cầu tiền phát F 1963 128 Khóa luận tốt nghiệp Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học 139 VƯƠNG THỊ N Tăng tiểu cầu tiền phát F 1962 140 TĂNG VĂN N Bệnh xơ tuỷ cấp M 1941 LÊ VĂN Đ Bệnh loạn sản tủy tăng sinh tủy, chưa phân loại nơi khác M 1954 141 PHỤ LỤC II - DANH SÁCH BỆNH NHÂN NGHIÊN CỨU 142 NGUYỄN HUY N Tăng tiểu cầu tiền phát M 1958 143 LÊ THỊ K Tăng tiểu cầu tiền phát F 1960 144 VŨ ĐÌNH T Bệnh tăng hồng cầu vô M 1997 145 NGUYỄN THỊ M Tăng tiểu cầu tiền phát F 1999 146 HOÀNG MINH N Tăng tiểu cầu tiền phát M 1977 147 ĐÀO THỊ T Tăng tiểu cầu tiền phát F 1965 148 ĐỖ XUÂN C Bệnh tăng hồng cầu vô M 1980 149 LẠI NGỌC C Tăng tiểu cầu tiền phát M 1942 150 VŨ LINH N Tăng tiểu cầu tiền phát F 2021 151 ĐẶNG XUÂN T Tăng tiểu cầu tiền phát F 2004 152 NGUYỄN THỊ C Tăng tiểu cầu tiền phát F 1948 153 NGUYỄN VĂN H Tăng tiểu cầu tiền phát M 1987 154 LÊ HẢI B Bệnh tăng hồng cầu vơ M 1987 Khóa luận tốt nghiệp Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học 155 TRỊNH THỊ P Bệnh loạn sản tủy tăng sinh tủy, chưa phân loại nơi khác 156 VŨ THỊ M Tăng tiểu cầu tiền phát F 1979 157 NGUYỄN THỊ T Tăng tiểu cầu tiền phát F 1959 F 1966 PHỤ LỤC II - DANH SÁCH BỆNH NHÂN NGHIÊN CỨU 158 NGUYỄN TRỌNG N Bệnh tăng hồng cầu vô M 1980 159 TRẦN MINH S Bệnh tăng hồng cầu vô M 1967 160 NGUYỄN XUÂN P 161 NGUYỄN DUY K 162 PHÙNG THỊ T Tăng tiểu cầu tiền phát F 1958 163 BÙI ĐÌNH P Bệnh loạn sản tủy tăng sinh tủy, chưa phân loại nơi khác M 1954 164 NGUYỄN VĂN N Bệnh tăng hồng cầu vô M 1965 165 TRỊNH THANH O 166 NGUYỄN KHẮC V 167 PHẠM PHÚ TIÊU T Tăng tiểu cầu tiền phát M 2018 Bệnh tăng hồng cầu vô M 1991 Tăng tiểu cầu tiền phát M 1938 Bệnh tăng hồng cầu vô M 1975 Tăng tiểu cầu tiền phát F 1963 Khóa luận tốt nghiệp Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học 168 TẠ ĐỨC T Bệnh loạn sản tủy tăng sinh tủy, chưa phân loại nơi khác 169 NGUYỄN TIẾN Đ Tăng tiểu cầu tiền phát M 1984 170 NGUYỄN VĂN S Tăng tiểu cầu tiền phát M 1946 171 TRẦN THỊ H Tăng tiểu cầu tiền phát F 1984 F 1998 PHỤ LỤC II - DANH SÁCH BỆNH NHÂN NGHIÊN CỨU 172 NGUYỄN VĂN N Tăng tiểu cầu tiền phát M 1984 173 NGUYỄN THU H Tăng tiểu cầu tiền phát F 1985 174 DƯƠNG MINH T Tăng tiểu cầu tiền phát M 1985 175 NGUYỄN QUANG D Tăng tiểu cầu tiền phát M 1961 176 VŨ THỊ L Tăng tiểu cầu tiền phát F 1968 177 TRẦN VĂN Q Bệnh tăng hồng cầu vơ F 1981 178 LÊ DỖN H Bệnh tăng hồng cầu vô M 1986 179 TRẦN THỊ V 180 VŨ NGUYÊN V 181 NGUYỄN THỊ M 182 PHẠM VĂN D Tăng tiểu cầu tiền phát F 1953 Bệnh tăng hồng cầu vô M 2007 Tăng tiểu cầu tiền phát F 1952 Bệnh tăng hồng cầu vô M 1985 Khóa luận tốt nghiệp Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học 183 NGUYỄN THỊ T Tăng tiểu cầu tiền phát F 1981 184 NGUYỄN TRỌNG P Tăng tiểu cầu tiền phát M 1988 185 NGUYỄN MẠNH H Tăng tiểu cầu tiền phát M 1989 186 NGUYỄN XUÂN B Tăng tiểu cầu tiền phát M 1958 187 NGUYỄN CÔNG H Bệnh tăng hồng cầu vô M 1987 188 LÊ VĂN T Tăng tiểu cầu tiền phát M 1960 PHỤ LỤC II - DANH SÁCH BỆNH NHÂN NGHIÊN CỨU 189 NGUYỄN KIÊN C Bệnh tăng hồng cầu vô M 1999 190 NGUYỄN XUÂN C Bệnh tăng hồng cầu vô M 1976 191 NGUYỄN VĂN B Bệnh tăng hồng cầu vô M 1991 192 CẤN XUÂN T Bệnh tăng hồng cầu vô M 1983 193 NGUYỄN VĂN N Bệnh tăng hồng cầu vô M 1977 194 NGUYỄN TIẾN T Bệnh tăng hồng cầu vô M 1969 195 NGUYỄN THU T 196 NGUYỄN DUY H Tăng tiểu cầu tiền phát F 1988 Bệnh tăng hồng cầu vô M 1979 Khóa luận tốt nghiệp Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học PHỤ LỤC III: BẢN CAM KẾT THỰC HIỆN ĐÚNG NGUYÊN TẮC VỀ ĐẠO ĐỨC TRONG NGHIÊN CỨU CỦA NHÀ NGHIÊN CỨU Kính gửi: Hội đồng đánh giá đạo đức nghiên cứu Y học Trường Đại học Y dược – Đại học quốc gia Hà Nội Họ tên chủ nhiệm đề tài: Phạm Thị Phương Thảo Lớp: Kỹ thuật xét nghiệm Y học, Trường Đại học Y dược – Đại học quốc gia Hà Nội Tên đề tài: “Ứng dụng kỹ thuật PCR phát số đột biến gen CALR type 1, CALR type bệnh nhân mắc hội chứng tăng sinh tủy âm tính với JAK2V617F ” Tên đơn vị chủ trì đề tài: Đại học Y dược – Đại học quốc gia Hà Nội Tôi xin cam kết thực theo nguyên tắc đạo đức ghi đề cương nghiên cứu Hà Nội, ngày 24 tháng 05 năm 2023 Người viết cam kết Học viên: Phạm Thị Phương Thảo