Ứng dụng kỹ thuật PCR đa mồi đặc hiệu, xác định methyl hóa promter ebna1 của EBV trong ung thư vòm mũi họng

& BỌ YTẺ Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO trưởng đại học Y Hà Nội nguyễn thị hịng gám ÍTNG DỤNG KỸ THUẬT PCR DA MỎI DẶC HIỆU, XÁC ĐỊNH METHYL HĨA PROMOTER EBNA1 CỦA EBV TRONG UNG THU'VỊM MŨI HỌNG Chuyên ngành: Miền dỊch Mi số: 607204 LUẬN VĂN THẠC SỲ Y HỌC Người hưứng dẫn khoa học: TS Nguyễn Văn Dơ TS Bùi Cơng Tồn Hà Nội, 2012 / nrdkn «s> ■> LỜI CÂM ƠN Dế hồn thảnh luận ủn tơ! xin bừy tó lịng biỉt ơn sấu sức đétiĩ TS Nguyễn Vàn Dô người thầy đâ trục tiềp htrứng dấn tạo điêu kiện giùp đờ suốt quà trỉnh nghiên cửu hục lộp hồn thành ln vân TS Bùi Cơng Tồn Phó giám dỗc Bệnh viên K Trưởng khoa Xạ trị tồng hụp Bênh viên K người thầy dà hướng dãn dòng góp ỷ kiến cho tơi suốt trình nghiên cứu hoàn thành luân vũn fiS TSKH Pharr Thị Phi Phi, Ngưyén Chù nhìỹm hộ mồn Sinh ỉỷ b^nh — mien dịch trường Đqi học Y Hừ Nội, người thầy ỉìtơn giúp đừ tọo diều kiện cho tỏỉ hoe tập nghicn cứu khoa học PGS TS Phạm Dăng Khoa Chủ nhiệm hộ Sinh lý bệnh—mien dịch trường Dại học Y Hà Nội PGS TS Nguyen Thị Vinh Hà, Nguyên Chù nhiệm hộ môn Sinh Ịý bệnh — miên dịch trường Dự! học Y Hà Nội PGS TS Dỗ Hịa Bình Là người thầy, nhà khoa học giảng dạy, hưởng dẫn quan tâm dụng viên có ỷ kiến đóng góp quỷ bàu cho tỏi suốt q trình học tập hồn thành luận vỏn Tỏi xin gửi lời cám ơn sâu sảc dền Ban giám hiệu Khoa Sau Dọi hoe Trường Dại học Y Hà Nội íịĩp cản hộ nhân viên cùa mủn Sinh ìỷ bệnh - Miễn dịch trường Dại hoe Y Hà Nội đà ĩụo moi diều kiện chơ tơi q trình học láp nghiên cứu «s> ■> Tịi xin chân thành cảm ơn tập thề hức sĩ, y tá Khoa Khám bệnh Dầu mặt cồ Bênh viện K người giúp dờ tài thời gian thu thập xồ lỉýu nghiên cứu Tôi xin câm ơn Ban giám hiệu, thầy cô giáo, dồng nghiệp Bộ môn Sinh lỷ bệnh - Mỉễn Trưởng Đợi học Y Thái Nguyên đà giúp đờ tói thời gian nghiên cửu hồn thành luận văn Cuối xin vỡ câm ơn đền người thân gia dinh tôi, người hên tỏi nóng mang dền cho tài niềm vui lịng tự tin cững say mê cơng vỉộc Hờ Nội, ngày thúng /làm 21)12 Nguyễn Thị Hằng Gầm ■> *4: LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan toân số liệu luận văn kết trung thực liến hành nghiên cửu tại: Phịng thí nghiệm cúa 13Ộ mơn Mien dịch - Sinh lý bệnh, Trường Dọi học Y Ilả nội Bệnh viện K I Nội Những sỗ liệu chưa dược sử dụng vả công bố bết kỳ tài liệu hay lạp chí khoa học não 'rỏi xin hoàn toàn chiu trách nhiệm VC số liệu mà tỏi dưa Túc giả ỉrtfin via Nguyền Thị Hồng Glim DANH MỤCCHỬV1ÊT TÁT AD.V Acid Desoxyribonucleic ARN Acid Ribonucleic CD Cluster of DifTcrenciation cs Cộng RA Early Antigen EBV Epstein Barr Virus EBER Epstein Barr virus Encoded RNAs EBNA Epstein Barr Virus Nuclear Antigen IỈLA Human Leucocyte Antigen LMr Latent Membrane Protein MHC Major Histocompatibility Complex PCR Polymerase Chain Reaction UCNT ƯTVMH VCA Undifferentiated Carcinoma of Nasopharyngeal Type ZEBRA /ARC Ung thư vòm mũ I họng Viral Capsid Antigen Bam Hl EBV Replication Actlvatcur International Agency For Research on Cancer MỤC LỤC ĐẬT VÁN ĐÈ CHƯƠNG 1: 1.1 Tinh hình ung thư vòm ntũi họng thể giới Việt Nam 1.2 Những yều tố nguy liên quan dến UTVMH 1.2.1 Vai trỏ cũa virut Epstcin-Barr 1.2.2 Mơi trưởng sống thói quen sinh hoạt 1.2.3 Ycu lố di truyền 1.3 Bệnh học ƯTVMH I I 1.3.1 Triộu chứng lâm sàng 1.3.2 Chần đoán 1.3.2.1 Lãm sàng 1.3.2.2 Cận lâm sàng 1.3.2.3 Chần doán giai đoạn 1.3.3 Diêu trị 1.3.4 Tien lượng 10 1.4 Virut Epstein- Barr 1.4.1 Sinh học EBV 10 1.4.2 Cấu trúc cùa EBV 18 1.4.3 Thê tiềm ổn cùa EBV 13 1.4.4 Các gen ABV thể tiềm ẩn 14 1.4.4.1 EBNA1 14 1.4.4.2 EBNA2 15 1.4.4.3 Gia dinh EBNA3 15 1.4.4.4 EBNA - LP ' ' 16 1.4.4 LMP1 16 1.4.4.6 LMP2A/2B 16 l.S.Yốu tổ ngoại di truyền 17 1.5.1 Methyl hóa ADN diều hỏa biều lộ gcn .17 1.5.2 Methyl hóa ADN promoter EBNA1 18 «s> ■> CHƯƠNG 2: ĐĨI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 20 2.1.Thời gian I DẬT VẤN DÊ Theo báo cảo tồ chức ung thư quốc tc (JARC — 1903), ung thư vòm mũi họng tám loại ung thư hay gặp [I) Tỳ lệ ung thư vòm mùi họng (UTVMII) thay đồi khác quần the dân cư cổc vùng dịa lỷ khác the giới Nơi cỏ tỷ lệ ung thư vòm cao miền Nam Trung Quốc Grơnlcn, ỏ châu Âu lại cỏ tỳ lộ rắt thắp Cúc nước dịng nam Ả, dỏ cỏ Việt Nam có tỷ lộ UTVMII trung hình (4] Virul Epstein-Barr (EBV), yểu lổ mõi trường kliâc nhạy cám di truyền dều dược cho liên quan dến nguyên nhân ung thư vòm mũi họng EBV yếu tổ dược nghiên cứu nhiều nhát EBV có mặt 100% khối u vòm mũi họng thề ung thư biếu mơ khơng biệt hóa JUCNT] vả trì thể nhiễm tiềm ẩn I II, dỏ EBV biểu lộ cỏc gcn quan trọng lả EBNA1, LMPI LMP2 [7] (35] EBNA1 giúp tri gen EBV tề bào chù LMPI lọi lâ gcn có chức nâng quan trọng liên quan den dẫn truyền tin hiệu, chổng lại chót theo chương trình tế bão cỏ khâ nũng sinh ung thư cho te bào bi nhiễm Các gcn nìm cách xa gen EBV dược biểu lộ hoạt hỏa cảc promoter khác EBNAI dược biểu lộ the nhiễm tiềm ẩn nhờ hoạt hỏa cảc promoter: Cp, Wp Qp Tuy nhiên, ung thư vòm mũi họng hai promoter Cp wp khơng hoạt dộng mà chi có Qp diêu hịa biêu lộ gcn EBNAI [10], [34] Methyl hỏa DNA vủng promoter yếu to ngoại di truyền có vai trị rẳt quan trọng dièu hịa biếu lộ gcn Mức dộ methyl hỏa diễn vị trí đảo CpG vùng promoter cxonl có vai trờ diều hịa bicu lộ gcn, cỏ the làrn giảm biểu lộ không biểu lộ hồn lồn gcn mà bình thường vần dược bicu lộ [36] Methyl hóa promoter ngàycâng cơng nhận chẻ hàng dầu chi phổi im lặng gcn liên quan den UTVMH [18], [37] Trong nghiên cứu cũa Nguyễn Vân Đô cs (2006) chi mức dộ bicu gcn ức ché u CD1I13 dòng tế bào UTVMH từ mẳu sinh thiết tưong quan với tinh trạng methyl hóa promoter Sự methyl hộa cụ thề dược xác định bảng kỹ thuật PCR đặc hiệu (MSP: Methylation specofic PCI *4: 54 Nhận xétĩ Ọp không methyl hỏa hầu het mồu nghiên cứu Wp methyl hóa ỡ hầu hết mảu nghiên cứu, \Vp khơng methyl hóa khơng xác định Cp khống methyl hóa /25, chiếm tỷ lộ 24 %, cp methyl hỏa xâc định dược 5/25 với tỷ lộ lhỉXip20 % -w ã* CN ôG 55 CHNG BN LUN Nhựng biến dổi ngoại di truyền, methyl hứa promoter gcn dang dược nhiều tác giã quan tâm Sự methyl hóa có mối liên quan den biều lộ gcn Việc xác định methyl hỏa cho gcn dặc hiệu, sử dụng cảc kỹ thuật khác nhau, dó PCR loụi phổ bicn nhai Tuy nhiên, PCR da mồi vàn chưa có nhiều cỗng trinh dược công bổ Chúng lôi lien hành ngliién cứu methyl hỏa promoter điều hòa biểu lộ gen EBNAl, bao gồm \Vp, Cp Qp theo phương pháp PCR da mồi Vật liệu nghicn cứu mẫu ADN dược chiết tách tù tế bào dòng mầu sinh thiết ƯTVMH Chất lượng ADN dược kiếm tra bàng diện di Ihạch agarose dược trinh bày Hình mật dộ quang học Các ADN dược chiết lâch lừ tể bào dịng có trọng lượng phân từ cao hon chiết tủch từ câc màu sinh thiết ung thư vòm họng, sii dụng cảc quy trinh chiet lách khác Tuy nhiên, chất lượng nùy cổ ihể sử dụng cho phân ứng PCR vói cập mồi có kích thước nhỏ Các cập mồi dược thiết ke bỏi phần mềm chuyên dụng, có khả loại bớt nhừng yếu lổ ảnh hưởng đến kỹ ihuật cho nhiệt độ gẳn mồi dao động Irong khoảng nhiệt độ họp tính đen nồng dộ Mg++ Theo Nguyền Văn Đô vả cs, kỹ Ihuậl PCR da mồi dặc hiệu methyl hỏa dà dược sứ dụng xác đinh mức dộ methyl hóa gcn ủc che ung thư (so liêu dà gửi dỉíng báo quốc tố) Đối với gen EBV, te bào ddng chuẩn Namahva dược sử dụng để tim diều kiện lổi ưu độ nhạy vâ dộ dàc hiệu cùa phản ứng , 56 De lìm diều kiện tói ưu cho cặp mồi phàn ứng PCR, người ta cần phái thử thành phẩn tham gin nồng độ Mg++, lượng mồi, dNTPs enzyme thành phần khác tham gia Nồng dộ cặp mồi dưọc sù dụng củng tham khảo từ nghiên cứu chúng lôi Kct quà cho thấy với nồng dộ mồi cúa wp (NE>2) cho kết quà tôt nhất, nhicn với dộ phân giải cứa thạch agarose nồng độ 2.5% dộ sác nét chưn cao (Hĩnh A, B, C) Độ nhạy cùa kỳ thuật dựa lưọng ADN tương dương 1000 te bào pha loãng 10 Inn Kct quà cho thấy cỏc mức độ methyl hóa dược xác tlịnh nồng độ 1000 le bào kết tốt the ỏ mức dộ dtrưng tính khác dưục quy dịnh nhũng dấu (+) Cũng phù hợp với nghiên cứu trước chúng tỏi Sự tối ưu phản ứng dã dược xem xét den yếư tố khác phàn ứng PCR, nòng độ Mg++ vài phản ứng khác Hỉnh ? cho thầy kết quà tổl vổ cãc điều kiên phân ứng, có dầy đủ cốc thành phần PCR thích hợp cho bùng cỏ thẻ phân biệt dược methyl hóa khơng methyl hóa cùa cảc mẫu nghiên cứu Phân ứng PCR da mồi dược ứng dụng dế xâc dịnh mức dộ methyl hóa cùa promoter \Vp, Cp Qp mẫu sinh thiẻt ung thư vòm mOi họng Wp methyl hóa dương tinh hầu hết mẫu nghiên cứu, cặp mồi không methyl hốa lợi âm tinh hồn tồn Diêu cỏ thể gian tiếp cho thấy methyl hỏa promoter lién quan den biểu lộ gen I-BNAI mSu ung thư vòm mũi họng, dó Ọp yếu tổ chủ yen dicu hòa biẽu lộ EBNAI trường hợp 57 Mức độ methyl hỏn promotor wp vã Qp phũ hợp với nhiều lác giã () Kiêng Cp mội mẫu khơng xác định cà methyl hóa khơng methyl hóa có the dột biển vị trí cộp mồi dược thiềt ke -w •* CN «G S8 KÉT LUẬN Điều kiện phân ủng PCR đa mỏi dặc hiệu methyl hóa (MMSP) cho promoter \Vp Qp, Cp đà xác định sau: - Các cặp mồi hoạt dộng tổt, riêng cặp mồi cp methyl hịa khơng methyl hóa băng khơng rõ -NồngdộMg” :4mM - Nồng độ cdc cộp mồi tương ứng: Qp lOmM, Cp lOmM, Wp lOmM - Sổ Lượng DNA lương đương 1000 tề bào dòng chuẩn (Namalvva) Wp methyl hóa dương tinh ỡ hầu het mău sinh thiết ung tlnr vịm Wp khơng methyl hỏa âm tính hầu het mẫu sinh thiết ung thư vòm họng Qp khơng methyl hóa chiếm tỳ lệ cao, Qp methyl hóa khơng xác định mầu sinh thiết ung thư vịm họng cpkhõng methyl hóa đương linh với tỳ lệ tháp, cp methyl hóa khỏng xác định dược 59 KIẺN NGIIỊ Đe khảng định rô VC mức ■> 11 Tài Uệu tham khảo tiếng Anh Aitken, C-, Scngupta, S.K., Acdcs, c., Moss, D.J andScullcy, T.B.(1994) Heterogeneity within the Epstein - Barr virus nuclear antigen gene in different strains of the Epstein - Barr virus J Gew Virol, 75(1’1 I), p 95-100 10 Altiok, E.» Minarovits, J andilu, L.F.(I992), Hott- ceil -phenotype- depdent control of thr BCR2/BWRI promoter complex regulates the expression of Epstein - Barr viruss nuclear antigens 2-6, Proc Nail Acad Sei USA, 89, p 905-909 11 Am Older, lt.F., Mullen, M.A., Chang, Y.N., Hayward, G.S andllnywarrl, S.D.(I99I), Functional domains of Epstein - Barr virus nuclear antigen EBNAI JPYro/, 65(3), p 1466-1478 12 Andersson - Anvret M., Klein, G.J Forsby, N :i nd Henle, W.(I978), The Association between undifferentiated nosopharygeal carcinoma and Epstein - Barr virus shown by correlated nucleic acid hybridization and histopathological studies., /ARC Sei Plfbf, p 347-357 13 Harwell, J., Bochkcrcv, A., pfuetzner, R., Tong, H., Yang, D., Frappicr, L a nd Edwards, A.(I995), Prification and crystallization of the DNA - binding and dimerization mam of the Epstein - Barr virus nuclear antigen I, J Bio.Chem, 270„ p 20556-20559 14 Bedforrd, M.T and Richard, S(2005), Arginine methylation an emerging regulator of protein function Mei Cell, 18, p 263-272 15 Chang, E.T andAdaini, 11.0.(2006), The Enigmatic epidemiology of nasopharygeal carcinoma Cancer Epidemiol Biornarkcr Prev, 15(10), p 1765- 1777 16 Christina, Dahl and Per, Guldbcrg(2003), DNA methylation analysis techniques, Biogerontolgy, p 233-250 17 Degranges, T.C., Li, J.Y a nd De, T.(I977), EBV specific scctctory IgA in saliva of NPC patients Presence of secretory piece in epithelial malignant cells, /nt J Cancer, 20(6), p 881 -886 nrdkn «s> *4: 18 Fharcus, R Fu, 11.1«, Ernbcrg, 1„ I'inkc,.I nndRowc, M.(1988), Exspression of Epstein - Barr virus - encoded proteins in nasopharyngeal carcinoma, Ini J Cancer, 42„ p 329-338 19 Fingeroth, J I)., Weis, J J., Tedder, T I\ Stromlngcr, J L., Biro, p A a nd Fearon, I) T.(I984), Epstein - Barr virus receptor of human B lymphocytes is Cd3 receptor CR2, Proc Natl Acad Sei USA, 81, p 4510-4514 20 Furukawa, VI., Komori, T-, Ishiguro, H andưmeda, R.(I986), Epstein - Barr virus early antigen induction in nasopharygeal hybrid cells by Chinese medicinal herbs Aiírừ Nasus Larynx, 13(2), p 101-105 21 Goldsmith, D.B., West T.M andMornton, R.(2002), IILA associations with nasopharygeal carcinoma in Southern Chinese : a meta­ analysis, Clin Otolaryngol Allied Sei, 27(1) p 61-67 22 Hennessy, K., Fcnncwnld, S-, Cole, T andKieff, E (1984), A membrane protein encoded by Epstein - Barr virus in latent growth - transforming in fcction Proc Natl Acad Sei USA, 81(22), p 7202-7211 23 Hennessy, K andKieff, E.(1983), One of two Epsticn - Barr virus nuclear angtigens contais a glycine - alanine copolymer domain Proc Natl Acad Sei USA, 80(18), p 5665-5669 24 Joab, I nndNicolas, J.( 1991), Detection of anti- Epstein • Barr virus transactivator (ZEBNA) antibodies increase from paticns with nasopharygeal carcinoma, Jnt J Cancer, 48, p 647-649 25 Li, Ọ., Spriggs, M.K., Kovats, s Turk, S.M., Comeau, M.IL, Nepom, B andllUtt-Fletcher, L.M.(I997) Epstein - Barr virus uses HLA class 11 as a cofactor for infection of B lymphocytes ,J Virol, p 4657-4662 26 Miller, We andEhar, T.N.( 1995), The Epstein - Barr virus latent z membrane protein I induces expression of the epidermal growth factor receptor, J Virol, 69, p 4390-4398 L 27 Miyamoto, K andUshijima,T.(2005), Diagnostic and therapeutic I applications of cpigcnetics, Jpn J Clin Oncol, 35(6), p 293-301 I TW jfcfc «s> *4: 28 Mu ray, P.G andYoung, L.S.(2OO2), The role of the Epstein - Barr vims in human disease.Front Biasci 7, p 519-540 29 Nielsen N.H , Mikkclscn, F andllnnscn, J.p(1977), Nasopharygeal canccrin Greenland The incidence in an Arctic Eskimo population, Acta Pathol Microbiol Scanci A, 85(6), p 850-858 30 o Rourke Anne, M andMeschcr Matthew, F.» (1993),The role of CDS in cytotoxic T lymphocyte funtion Immunology today, p 183-187 31 Pathnnmnthan, R andTraul), Raab (1997),Epstein - Barr virus Nasopharygea! Carcinoma, p 14-23 32 Ilcddy, S.P., Rnslan, W.F., Gooncrantne, s., Kathui ia, s andMarks, J.E.(1995), Prognostic significance of keratinization in nasopharyngeal carcinoma Am J Otolaryngol, 16(2), p 103-108 33 Rickinson, A.B., E., Kicif, B.N., Field, D.M., Knipc andP.M., Ilowlcy(2001), Epstein-Barr virus in virolory, Lippincott - Raven, p 2575- 2627 34 Roberson, K.D., Hayward, S.D., Ling, P.D., Samid, D andAmbider, R.l'.(1995), Transcriptional activation of the Epstein - Barr virus latency c promotor alter 5- azacytidin treamem: evidence that demethyl lai ion at a single CpG site is crucial, Mol Cell Biol, 15, p 6150-6159 35 Robertson, E.S., Lin, J andKieff, E.(1996), The amino - terminal domains of Epstein - Barr virus nuclear proteins 3/X, 3B, and c interact with R13PJ (kappa), J Virol, 70(5), p 3068-3074 36 Salamon, I)., Takacs, M andUjavari, 0.(2001), Protein - DNA binding and CpG methylation at nucleotide resolution of latency - asscociatcd promoters Qp Cp an LMP1 p of Epstein- Barr virus J Virol, 75 p 2548-2596 37 Tierney, R.J., Steven, N andYoung, L.s.(1994), Epstein - Barr virus latency in blood mononuclear cells: analysis of viral gene transcription during primary infection and in the carrier state, J Virol 68, p 7374-7385 .-/? ir: « s ■ -Ể: 38 Timothy, T.c andRogcr, K E.(I994), A possible Progsnostic role of Immunoglobulin G- antibody against rcoonbinani Epstein - Barr virus: BZLF-I Trasaclivator protein ZEBRA in patients with Nasopharygeal carcinoma, Cfl/tcer, 74(9), p 2414-2423 39 Tugizov, S.M., Bcrlinc, J.vv andPalcfsky, J.M.(2003), Epstein - Ban­ virus infection of polarized tongue and nasopharygeal cphkthclial cells, Nat Med, 9, p 307-314 40 Woisctschclacgcr, M., Jin, X.W., Yandava, C.N., Furmanski, L.A undStrongmlngcr, J.L.(199l), Role for the Epstein - Barr virus nuclear antigen in viral promoter swiching during initial stages of infection fJroc Nat/ Acad Sei USA, 88, p 3942-3946 ị 41 Zeng Y., Zhong, J.M., I.i, L.Y., Wang, P.Z., Tang, IL, Ma, Y.R., Zhu, l.s^ Pan, W.J., Liu, Y.x andWei, Z-N.(1983), Follow - up studies on Epstein - Barr virus IgA /VCA antibody - positive persons in ZangXVu Country, China, ĩntervỉroỉory, 20(4), p 190-194 I I I f I r -w rfs tri « ; ã ô* : anh sỏch bnh nhõn STT ll vù Tên Tuổi Địa chi Giửi Ngày vào khám Bùi Vãn Hờa 58 Nam Thanh Hỏa 07/07/2011 Nguyền Văn Dân 52 Nam Cồm Giang Hài 13/07/2011 Dương Nguyen Văn Vinh 51 Nam Thái Hòa, Nghệ An 13/07/2011 Nguyên Vỉin Hùng 39 Nam Việt I rì 14/07/2011 Pham Thị Xoa 46 N& loãng Ván Xít 58 Nam lx»ng Sơn 25/07/2011 Lẻo Van ljim 54 Nam Bẳc Giang 27/07/2011 Nông Vãn Thao 34 Nam Cao Bảng 27/07/2011 Vù Văn Minh 19 Nam Hải Phòng 15/08/2011 10 Trân rhanhbỉhất 23 Nam Hả Nội 15/08/2011 II Nguyen Dửc Long 155“ Nam Hịa Bình 17/08/2011 12 Nguyên rhị Kim Vụ Bản, Nam Định 21/07/2011 54 N& Vĩnh Phúc 17/08/2011 43 Nữ Hỏi Phòng 17/08/2011 40 NQ Hài Dương 18/08/2011 Liên 13 14 Trân Thị Mai T“Z w~ Nguyen Thị Cúc 15 ỉồ sr Tri 53 Nam Yên Thanh Nghệ An i 8/08/2011 14 Nguyen Văn Thi 43 Nam Bẳc Giang 18/08/2011 17 Nguyen Dinh Thiộu 59 Nam Hà Nội 22/08/2011 18 Định Thị Nguyệt 33 Nừ Quảng Binh 22/08/2011 19 Vương Thi Miên 42 Nữ Hồ nội 22/08/2011 20 Nguyen Minh Hủi 24 Nam Hồ Nội 22/08/2011 21 Tran Ngộc Thê 71 Nam Thanh Hỏa 23/08/2011 22 Bùi Ngọc Kỳ 33 Nam HÙ nội 23/08/2011 23 Kim Văn Cành 64 Nam Vĩnh Phúc 23/08/2011 24 Nguyen Trọng Duột 22 Nam Hà Tính 24/08/2011 25 Nguyẻn Hữu Hoửn 41 Nam Quãng Ninh 24/08/2011 26 Nguyễn Thọ ‘Ihông 49 Nam Thanh Hỏa 24/08/2011 27 Trương van Hiên 57 Nam Thái Binh 25/08/2011 28 Bùi 'Hìị Nhan 40 Nữ llịa Binh 30/09/2011 29 Nguyền Thị Tơ 55 Nữ Thanh lỏa 24/10/2011 Hà Nội, Ngây Xác nhặn cùa (hay hưởng dan Tháng Nỏm 2012 Xúc nhộn cùa phòng kề hoạch tẨng hợp , Bệnh Viện K a "HVY1? BbMiviG’NK PwAs'ntf.linACHtO^Hffl I ể xác định mức độ methy hóa, mỏi gcn cần thiết kể cụp mồi Một cặp mồi dùng cho xác định methyl hóa (M) cặp mồi dùng dể xác định không methyl hóa (K),... sung vào te bào Chúng tói phát triển kỳ thuật PCR da mồi đặc hiệu methyl hóa mơ hỉnh cùa EBV ung thu vịm mùi họng, dồng thời ứng dụng cho nhiều cấc gcn khác cùa bệnh lý khác Đe xác định sụ methyl. .. methyl hóa gcn đặc hiệu hay toàn bộ gcn Các kỹ thuật dựa vào nguyên lý khác nhau, có kỳ thuật phức tạp, cỏ nhừng kỳ thuật dơn giản thông dụng [16] Chủng sử dụng kỹ thuật PCR đặc hiệu methyl hóa