Nghiên cứu ứng dụng công nghệ sản xuất và truyền cấy phôi nhằm nhân nhanh giống bò sữa cao sản ở tp hcm

Bộ Nông nghiệp vỏ PINT VIEN CHĂN NUỒI TIÊN REE he TÀI LIỆU TẬP HUẤN CÔNG NGHỆ CẤY TRUYỂN PHÔI 8Ò POSTS ThS Wodng -ưw ng Kia Qiaa Xhink Độ Môn Cấy truyền phôi Hà nội, 3/2001 Bộ Nông nghiệp PTNT VIỆN CHĂN NUÔI a eM! Load “TÀI LIỆU TAP HUAN ‘CONG NGHE CA¥ TAUYEN PHOL BO cob PP 228 225 * Hà nội, 3/2001 PS EES KHIÁI NIỆM, Ý NGHĨA VÀ LỊCH SỬ PHÁT 'TRIỂN CỦA CÔNG NGHỆ PHÔI Khới niệm từ cá thể Cấy truyền phơi (CÚP) mội q trình đưa phôi tạo (cái cho phôi) vào cá thể khác (cái nhận phơi) phơi sống, phát triển bình phù hợp với trang thai thường sở trạng thái sinh lý sinh dục nhận phối (gọi phù hợp sinh lý sinh dục cho phôi phù hợp với tuổi phôi đồng phá) Ý nghĩa tẾ sản xIHẤt tiên Phổ biến nhân nhành giống tốt, quí, hiểm ca thực cao sản thông qua My sở khai thác triệt để tiểm đị tuyển, ‹ thể tính đồng thời đạc phơi cấy truyền phối chúng (tận qiánp tốt bổ mộ}, Nâng cao cường độ chọn nhành tiến truyền hàng năm, lạc, đẩy mạnh công tác giống tiên SỬ tăng ` chân nuôi Nang cao khả sinh sẵn, sẵn phẩm thịt, sữa giảm phí Hạn chế mức tối thiểu số lượng, gia súc làm giống, từ khác kèm (chuồng trại, vật tt, nhân lực, v.v ) nhập, vận chuyển, Giúp cho người dễ dàng, thuận lợi việc xuất thương mại trao đổi piếng nước, vùng, dịa phương hóa giữ gìn vật liệu Bảo tôn giống dạng trứng, phôi, tỉnh trùng nhằm truyền (phương pháp ex sin) chống chịu bệnh, khả Hạn chế gố dịch bệnh nâng cao khả năng thích nghỉ cho vật môi trường mới, cụ thể: - Phần lớn bệnh gia súc không lây qua phôi , mẹ nhận phôi - Nếu phôi đem đến môi trường dé cấy truyền thời gian mang rà dời thai tạo cho kháng thể chống lại số bệnh, quanh từ đầu vật dễ dàng thích ứng với mơi trường xung, triển số ngành Làm sở để thúc đẩy nhanh việc nghiên cứu phát khoa học có liên quan như: - Sinh lý, sinh hóa (vấn để hình đào thải khí cấy chuyển, v.v ) thành, phát triển phơi; q tình tiếp nhận, mới, v.V ) Đi truyền học (lai ghép phôi, chuyển gen tạo giống gen xấu, miễn địch - Thú y y hợc (chế tạo vacxin chống bệnh, thay sinh sẵn,V,V } Lich str phat trién 3.1 Trên thể giới nghệ cấy truyền phối: Một số mốc lịch sử q trình phát triển cơng thé bot Walter Heap - 1890 -Thí nghiệm CPP thành công cừu (1934), cho để (1932), cho chuột cống (1933), cho Sau d6,thanh cong cho lợn (1951), cho bê ( 1951) ' phôi, 1959; Từ phôi thd Seidel di nhân lên Hằnh động tình, lầm sở CEP đồng - 1976; 'Thành công bảo quần phối lạnh bò (1972) nghiệm CrP - 1978: Em bé đời từ thụ tỉnh Gong, ống - 198%; Nghề dời bang CEP fai MY - 1984; Cấy phôi san chỉa li thành công, ĐỒ 1986: cảm thành công khủ chín phối thành ữ phi đoạn phơi bào nga, lợn, để sÌnH (sinh đơn hợp tử qua tách phơi bào), bọ gình - 1987:;:Có hệ sinh ta cấy phép pene tầng titởng nhanh, trâu đôn lạnh - 1991: Nghề lrên giới dời Ùị ng CTP phôi cho phôi - 1992: Hằng kỹ thuật Cloning từ phối bè nhân tế bào tuyến vũ HỘI - 997: Một cừu dời trưởng thành tỉ cừu Ô nữ n tuổi, tổ chức Mỹ, Vào 20-5- 1949: Hội nghị quốc tế lần thứ C TP tế dược thành lập Năm 1975 hội nghị lần thứ 1974 tổ chức cấy phôi tổ chức năm (pẤn liển với Khi thành lập (1974) có 800 thành viên quốc ta hàng, tiến hành, từ tới hội nghị thường diễn vật nuôi) vấn để sinh sản, giới tính, chuyển pen, v.v sau TƠ năm Hội cấy truyền phơi có 24 thành viên, chuyên đũng 35 nước, Trang thiết bị, hóa chất, dụng cụ Cơ sở thương mại dầu tiên kỹ thuật CTP dược thương mại hóa, (Canada), sau có thêm 20 giới CTP dược thành lập tai Alberta công ty khác dời CTP nghiên củu, ứng dung hầu hết Ngày này, kỹ thuật công ngÏ tất nước giới, đặc Đức, Anh, Pháp, Nhật, WV.) biệt nước chân nuôi tiên tiến (MY, Canada, thuật thự tĩnh ống nghiệm, Công nghệ cấy truyền phôi kỹ phôi, cấy chuyển gen, v.Ý giới tính © cắt phơi, nhân phơi từ tế bào đơn, xúc dịnh wim có nhiều ding, dai hge vii hing dược diút vào giảng dạy trường cao nước khóa đào tạo xun quốc gìn dược mở nhiều 3,2, Ở Việt Nam Công nghệ quốc Năm 1978 Trưng tâm Khoa học tự nhiên gia có năm 1980, CÚP bị Tháng - 1989, phận bát dầu nghiê cứu ŒTP thỏ; thành lẠp, gầm nghiên cứu Viện chân nuôi Quốc gia, Hộ môn CEP nhà nước hỗ Công nghệ CTP dược viên đào tạo thực tộp tÌ Hước ngồi 1-1985), 520 -0I -13 (1986 -1990), KCtrợ kinh phí để tài 47010107 (198 sinh học than pia clin Công nghệ 08 -16 (1991-1995) với chủ trì viện 103, Viện châu nuôi sf co qian trường Đại học nông nghiệp L, Viện quân y khác Những thỏ đời công nghệ cấy truyền phôi vào năm 1979, Năm 1986, bê nước tà đời từ công nghệ này, Năm 1994, be bồ sinh đơi bê trứng rạng, le nhiên chu ky dong duc va mot cấy truyền phôi, Dây trường hợp đầu tiến sinh nước ta cần Viện chăn nuôi thực cấy phôi, Cuối năm 1989, 50 phối đông lạnh hai chuyên gia Cuba dược dựa sang, Việt năm với Viện chân nhôi tổ chức phôi không thủ dược kết Năm 1996,1997, 150 phôi đồng lạnh với chuyên gia Newzcaland đến Việt nam tiến hành thí nghiệm cấy truyền phơi bị sữa đần bị niền Nam Hà nội Kết khả quan, 40-45% bò cấy phơi đồng lạnh dã có chữa, Đến nay, bê sinh từ công nghệ Huyền phối sinh trưởng, phát triển tối, “sinh san bình thường cho sữa vượi toàn đần 20-30% CTP nghiên cứu áp dụng tiên tấi c c động vẬt, đặc biệt động vật quí đơn thái Trong khuôn khổ giới hạn, để cập tới kỹ thuật công nghệ bồ ` NGUYEN TAC VA CO SO KHOA HOC CUA CÔNG CTP NGHỆ Nguyên lốc công nghệ CTP Phối tạo từ hứng cá thể bò mẹ A (sau khí thu tink Hong i hoặcle ngồi cho cá thể bị mẹ e B, l1, phơi sống, phát triểu ng thể mẹ) dem cấyy uuyền sinh thái trạng phù hợp với - bình thường trạng thái sinh lý sinh sẵn củ:ña bồ mẹ mẹ A gọi Tà cho phôi, Bồ phôi, lý sinh sản bò mẹ A phù hợp với tuổi bồ mẹ B gọi Tà bồ nhận phối Một bồ mẹ cho phơi có nhiều bồ mẹ nhận phơi Như vậy, để cấy truyền phơi, dịi hỏi phải có mức phối cho trứng; phải tạo dược phơi lấy phơi th ngồi thể mẹ cho, Sau cấy truyền phơi vào mẹ nhận phơi kích thích động dục nhân tao động dực tự nhiên trùng với thời gián động dục bồ cho phôi (phôi tươi) phù hợp với tuổi phôi (phối dong tanh) Sự phù hợp gifta me che -me Wedn hoae me nhậu -tuổi phôi lúc cấy chuyển gọi đồng pha Các bước cơng nghệ CTP khái qt qua hình Í : @® Vatzaldg donar H1 LAP CC ậq tf sơn , tế co ÉP RỂ hon ae Oestus Trailer C) tk, Ne ®) Wa af embryos @' Hormal breeding; @ or totum after twa lothrae months , for anothei tranÍlar fait : ire afasstouscyctasy Tey Recovery @ operation - rv " Synchrantsation @ Breewdieng Valuable si 33, Thenventa See ¬ ca 16 of embryos i NA cv os Pregnancy: G3) tel ett tr , : ed yar Jeu AL tr Be AS WOE | “Valuable offsming 1, Bị cho phơi, _ Gay động dục đồng loạt | Bà nhận phôi : Phối giống đực giống lối bô Thự hoạch phôi : cho phối động dục Bộ cho phôi cho sinh kảa lại bù) thường ` 8, Cấy truyền phôi ¬ `2: 14 Đàn mtAng giống tốt sinh ¡4 4, Gay siêu noân bở cho phối ; Bị nhận phơi động dực ut 10 Bồ nhận phơi có chứa ` Hịnh 57: Các bước trồng công h$hệ truyền phôi —_ i Sorat en cl copes `! Dac diém sinh ly sinh duc bd cai (nét chính) 2.1 Chu kỳ đơng dục quấng 2Í ngày Bồ gia súc đa chủ kỳ, thời giàn trung bình chủ kỳ trước dong dục, (17 -24) Chủ kỳ sinh dục bình thường bò gồm giai doạn: tae thành phá: động dục, sau động dục cân bing (yén Galt) Các giải đoạn diễn biến loại phá noãn nang phá thể vàng Hoạt động thể vàng hormon mot chu ky thể qua bình Norinal Estrous Cycle Developed corpus luteum {10-12 days} : Developing cy Ñ " Regressing corptds CORpUS luteunn VG (4-5 days} (3) I 21 hf lutetuan (4-5 days} \ Estrus Tứ {1 day] Động đực Í ngày Thể vàng thối hóa 4-5 ngày Thể vàng hoại động 10-12 ngày Hình kỳ động dục bình thường cia be cdi (ABS, 1991) Cu lage 'Phể vàng phát triển 4-5 ngÀy ịm Ul FSH Day ot arte Ocstradiol ——— “Progestctonc động đục Hình Nông độ hormone máu cúi guốt kỳ nang (folicular Wave) Sóng Trong chủ kỳ động dục bồ có đợt sóng thời gian bò nang phát triển đồng loạt số bao non Dot | dién triển (một số íLcá dợU) chủ kỳ thường có -3 dợt sóng nang phát đợt ngày T - L7 đợt ngày sau KhÍ rụng trứng, vào ngày thứ -9 chủ kỳ; 15 nang (kích thước -7 mm) phat 18 -0 Mỗi đợt sóng nang huy động tới nang trội (nang khống chế) triển, sau có nang phát triển mạnh gọi Tà phá triển có tính tự Đặc điểm quan trọng đợi phát triển nang lớn phát Oi, (raph pitta cic mang Mai dot cd F-2 nang điều khiển nàng khống tại, tổn thể vàng triển nang cịn Lai bi kin ham, Toy wy, cịn bị thối hóa, có đợt cuối khí thể vàng không chế nang lớn ra, lý tụng trứng xây mạng khổng chế mớt phát tiểu tới chín bị có trứng chín giải thích chủ kỳ động dục rụng (cá biệt gọi sóng phát triển có 2), Do đặc điểm đợt phát triển nang cịn nưình tiga chủ kỳ động dục Sự nhát triển nang, sóng nang tring qua hình O57 m O 10 OC, œ0" OO OO ut T T† Bạn Firat follicular Sóng nang đợt nội Sóng nang đợi hai + 72 + a ye mm nó, @ T T 16, O Oo | ' Qo Oo O of%o2 ¬ oO Qa ole O ru Ovulolion o[ The + doininald fallicte c9 , © ‘ đo {iat we ot fee 18 Sự rụng trứng trang trội $ Kích thước nang, + 4, Sóng máng đợt chủ Kỳ Hình bị, Các đợt sóng nang chủ kỳ động dục 2.2 Sự phát triển phôi giai đoạn đầu Quá trình rụng trứng bồ xây sau kết thúc chịu dực TÔ -14 giờ, Sau rụng khỏi buồng trứng, trứng dược hút, chuyển xuống loa kèn, ống trứng trình thụ tĩnh xây mm 1/3 phía ống, dẫn hứng, chia Sau trứng thụ Ứnh tạo thành hợp từ Hợp tử phát triển phân (phối 2, 4, 8, 16 tế bào, phôi dâu, phôi ngày tạo phơi giai đoạn k kích nang, ) cuốt phít triển thành thể Từ trứng hình cầu, dẹt có sinh t co thước trung bình 125 4t (95 -158 LỊ sau 270 -290 ngày (rong bung me để tế bào thể có trọng lượng sơ sinh 15 -15 kg tùy giống Giai đoạn đầu phân chia, trứng hay phối không lớn lên kích thước chúng cịn nằm mắng suốt, hóa lớn Khi vỡ màng suốt, phối chúi rà ngồi lúc tế bào phối phân -4 ngày; lên Khoảng thời gian di chuyển phôi ống dẫn trứng khoảng it tai định chóp sững tử củng, Ngày thứ 5, sau động dục trứng -phôi gọi Dịnh dưỡng phối lúc dụa vào nỗn hồng trứng dịch tử cung dã ` "sữa tử cung” qua chế thẩm thấu màng tế bào Những đặc điểm dụng dịch, môi trường dược người kỹ thuật lợi dụng để giội rửa lay phot, chế tạo phù hợp để ni cấy, bảo quản phơi ngồi thể mẹ Thời gian, su phan chia dị chuyển phôi thể qua lùnh coming out of zona pøllucld (hatching blastecys!) fertilization aelled ovulation celled egg O@® infundibulum ampulla ovary time lapse celled we: oviduct after 16 celled sgg egg age blastocyst morula Gy Se utero-tubal ferlitizaljon: uterine junction horn 12th day Hình Thời gian để chuyển phải ống dân trúng tử san thụ tính đến ngày thứ T2 Cơ sở thực tiễn công nghé CTP CTP công nghệ sinh học đại dã dang dược nghiên cứu ứng dụng vào điểu kiện chăn nuôi nước ta, Dựa sở thực tiễn sau đây: Những hiểu biết đặc điểm sinh lý sinh sẵn gia súc, chất tà hormon sinh sản), loài hormon chế tác động chúng Ý gẵn vật nuôi thông qua nhiững người chủ động điều khiển trình hormon Arteseertexaoth chế tạo SH, PMSG, HCG, PO2„, Piogesicron, giúp người kỹ thuat dat hiệu cao trình gây rụng trứng nhiều gây dộng dục đồng pha Nhờ biết đặc điểm phát triển phôi giải đoạn sớm, phân chia phat triển ứng với giai doạn định; môi trường ảnh hưởng thuận nghịch phôi, đặc diểm định dưỡng phôi, người chế tạo dược mơi trường phù hợi ni trứng, phơi ngồi thể mẹ thành công lĩnh vực thụ tỉnh ống nghiệm ` ` Đã có dụng cự giội rửa lấy phôi khỏi thể mẹ; có phương pháp soi tìm, đánh gid phân loại phôi, bảo quần phôi cuối cấy chuyển phôi vào thể khác Đã có nhiều thể sinh vật (người, động vậ) sinh kỹ thuật cre Nhiing thể sinh trưởng, phát triển sinh sản bình thường, đặc biệt khả sản xuất bình quan cao nhiều so với khác giống, điểu kiện sinh đường thông thường Ngày nước tá, có 60 be ta dời từ công nghệ ỚEP Kết theo đối thấy sinh trưởng, phát triển chúng cao khác 30 -40%, suất sữa bình quân ch kỳ 4000 -4500 li Co sit kết hợp công nghệ phôi với lĩnh vực sinh học phân tử, y học thú y Đã có động vật chuyển gen, ghép phôi tạo thể kham, co nhiing vacxin phịng chống bệnh dược sẵn xuất thơng qua đường phơi, Và cuối phải nói có nhiều công ty chuyên dụng sản xuất, buôn bán trang tiết bị, máy móc, dụng cụ hóa chất, honnon cho cơng nghệ phối, Các ngân hàng phơi lưu giữ trứng, phôi, tỉnh trùng, piống gia súc, động vật quí hiếm, Những sở nêu trên, khẳng định thêm bước chấn tat yến công nghệ việc cải tạo nhân giống gia súc mà phục vụ chờ nlủ cầu người lĩnh vực y học dời sống, CAY PRUYEN PHOT (CTP) Khai niệm hành CTP (phải dưa Khi có phơi, có bồ nhận phơi, người kỹ thuật phải tiến Nguyên tí của CTP phơi phơi dạng bên ngồi vào thể bị nhận phơi) phải trả phơi vào trí dường sinh dục cho lắc cấy dược lấy vị ống dân trứng phải cấy trả phơi dó vị trí nhận Nếu giội rửa lấy phơi chóp sững tứ củng boặc sừng tử vio Ong, dln trứng, Cịn phơi dược gội rửa lấy sừng tử Như vậy, có hai vị trí để cúng phải cấy chuyển vào chóp sừng sừng) Ngày nay, thường cấy CTP: ống dẫn trứng sừng tử cung (dỉnh chóp Có phương pháp dưa phơi vào phối vào sừng phía chóp sừng từ Mỗi phương pháp có ưu nhược tử cung bị nhận: phẫu thuật không phẫu thuật thai cao thuật, tý lệ đậu điểm riêng Cấy phôi phương pháp phẫu cấy phơi khơng phẫu thuật tỷ phức tạp khó áp dụng sở, Phương pháp sản sử dụng nhiều lệ đậu thai có thấp chút íL đồng thời kỹ thuật viên tay xuất Phương pháp đơn giản, tiện lợi, dễ áp dụng pháp phẫu thuật, nghề giỏi cho tý lệ dau thai không thưa phương (chất lượng phôi, dụng dịch Tỷ lệ dậu thai sau cấy phụ thuộc nhiều yếu tố khí hậu, mơi trường đồng pha nhận phôi, bệnh tật, điều kiện nuôi cấy phôi, tác ) tý lệ thường dao dong O sinh thái, thức ăn, nuôi dưỡng, kỹ thuật thao nước có nến chân ni tiên tiến (Mỹ, 100% Hiện này, tỷ lệ đậu thai bình quân tươi 50 -00% phôi đông Canada, Newzcaland) 65 -75% dối với phôi 50 -55% phôi tươi; 40 -50% phôi dông lạnh Tỷ lệ Nhật tính cho toần quốc là: với phối tươi, 25 -35% nước bắt đầu, tỷ lệ (35 -45% dối lạnh lệ dậu thai cấy phối tươi 40 phôi đông lạnh), nước ta, tỷ -50% 35-40% phôi đông lạnh Phương phap CTP qua phau thudt sừng tử cung bị pháp mổ để dựa phơi vào ống dẫn trứng điểm riêng mổ hông Mỗi phương pháp có ưu nhược đọc có khái mô tả kỹ phương pháp, thiệu qua để người nước ta cho hồ, thực tế phương pháp chưa dược ấp dụng gây mề, cố định mổ theo Sau làm tốt khâu chuẩn bị, bị bên ngồi sau người kỹ thuật cách Bộ phận sinh duc sé kéo ống dẫn trứng đầu chóp sừng tử tiến hành cấy chuyển phơi Có thể dựa phơi vào cấy vào bên phía buồng trứng cụng tùy thuộc vào tuổi phôi, tất nhiên phải nhanh, cẩn thực 15 phút vàng (hình 3-5- L5) Mọi thao tác phải tiến hành dưỡng tốt phải dược ho ly Bị sau Khi dược CTP, ngồi việc chăm sóc, ni kết dính bên tro0g tốt, tránh khơng để với mổ viêm nhiễm, viêm Có phương nhận: mổ bụng nó, Chứng tơi khơng niệm, Hơn nữa, A Cấy vào ống dẫn trứng Hình 15 I Cay vào chói? sừng Cấy tuyển phơi phương pháp phần thuật Phương phớp CTP không phễu thuột sừng tử CIP không phẫu thuật dựa phơi cấy vào phan tiên phín cơng việc dược cung không cấy vào ống dẫn trứng (hình 16) Vì vậy, -§ ngày (thơng thường tiến hành dối với nhậu động dục dược nước ta những, ngày) Phương pháp CTP không phẩu thuật dược áp dụng năm qua, quy trình tóm tắt sau: 3.1 Dung cụ hóa chất cần thiết af Dụng cụ - Kính hiển vỉ sơi Stereo Microscopc - Mieropipet để hút phôi vào cọng rạ - Súng cấy phôi ~ Vỏ nhựa lắp vào súng cấy phôi bẩn súng - áo non bọc bên vỏ nhựa súng (nhằm tránh nhiễm thao tác), - Các loại pant dé kẹp Cọng rạ phải - Cong cỡ (tốt loại 0/25 mi Đức Pháp) để quiản sát dược phôi hút vào - Kéo dao để cắt cong ra, kim tiêm - Xơ + ranh loại 1) 55 20 ml - Dụng cụ mộng lỗ cổ tử cần thiết ~ Garg tay nilon chất b/ Hóa - Bang, cồn 70" - Giấy vệ sinh - Thuốc gây tê - Xà phòng - Có thể có thêm Progesteron dể tiêm hỗ trợ „ 34 external Foritice o‡ Bi(urcation the Traosfer intnreal #fircatiơa t3 (13 Rãnh tử (ngã bứ bếo ng (2) Vách ngân hai sững tử (ngã la bên trong) (3) Vị tí phơi cần dược cấy Hình 16 Vj ứí phối cần cấy tử 3.2 Đưa phôi vào cọng rạ Phôi sau đánh giá phân loại dạt Hêu chuẩn cấy có bị nhận phơi, người kỹ thuật phải hút đưa phôi vào cong để cấy chuyển Cọng rạ chứa phôi phải sạch, võ trùng thường thường phải cất -2 cm để vừa với súng cấy phôi Phối hút vào cọng thông qua micro pipet cách lấp trực tiếp cong phía hút cotton với xơ - ranh i ml Để tránh nhầm lñn việc chọn cặp cho -nhận cấy chuyển, cộng phải ghỉ thông tin cần thiết (mục 3-5-0-3-2) Phối cọng ta, cong ln giữ tự nằm ngang, tránh tác động ánh sắng nhiễm khuẩn lúc lắp vào súng để cấy đông lạnh 3.4 Lấp cọng rạ vào sting - Mọi thao tác kỹ thuật lắp cọng rạ (đã có phơi) vào súng cấy phôi giống lắp cạng rạ tỉnh vào súng bắn tỉnh, - Sau đờa cọng rạ vào súng, lắp vỏ nhựa súng áo nilon vỏ nhựa, cần thao tác cấy chuyển nhanh, tránh tác động môi trường nhiễm khuẩn ‘ ' 3.4 Chuditbi bo nhan phoi - Bị nhận phơi dược phát thiện động dục trước Trước cấy, bò nhận ° khám để xác định thể vàng, chất lượng thể vàng (có thể khám trước Ï ngày /2 ngày) Người kỹ thuật khám không mắt xa mạnh, nhiều lên buồng trứng sợ làm ảnh hưởng đến thể vàng on + 36 - Đánh đấu vị trí thể vàngụ, bên phải bên trái để tiến hành CTP vào bên, ~ Tiêm thuốc gây tê vàng khưm đuôi, liều lượng tùy theo thuốc, - Giội nước ấm rửa âm hộ, hậu môn vùng xung quanlh, dùng giấy vệ sinh lau khô, cuối dùng thấm cén vệ sinh lại - Khi chọn cặp cho -nhận ý cặp phải tương đồng trạng thái sinh lý sinh dục để nâng cao tỷ lệ đậu thai, Phôi thường dược piội rừa vào ngày thử sau phối giống (giai doạn phát triển phôi lúc phôi dâu phôi nang) Bo “nhan động động phdi cd thé dong duc trước -8 ngày Vì vậy, phơi dâu cấy cho bị dã dực dược ngày; phôi nang sớm phôi dâu muộn cấy chợ bò dã động dục ngày phối nàng giai đoạn cuối phôi màng trương nở cấy cho bị dục ngày (hình 17) Day Day Estrus Cycle of Recipients Developmental Stage 0! Embryos Compacted Morula Early Blastocyst - {1} Phối dâu (21 - - - Phối đâu già - sớm Expanded Blastocyst ———=~ ° {3k Phải trương nữ Minh 17 Giat dogn pheit wien phơi tìng với thời gian chư ki: dong duc bà nhận phôi 4.5 Thao tác cấy chuyển phôi ~ Thao tác cấy chuyển phôi giống thao tác thụ tỉnh bang cong ra, chi khác vị trí bom tinh bơm phôi, Bơm tỉnh thực mặt trước cổ tử cung tiêp giáp thân từ cũng, Cịn phơi bơm vào chóp sừng tử (1/3 phía liên sừng từ cưng) ~ Để dâm bảo vô trùng, súng cấy phơi đến lỗ cổ tử cũng, áo nilon ngồi chọc thủng dé sting qua lỗ thủng túi vào cổ, ý Đưa súng cấy phoi qua cd tử cùng, vào sừng tử phía buồng trứng vàng Người kỹ thuật viên dễ nhận biết sừng tử qua đầu súng, - Đầu súng cấy phơi phải vào sâu phía dinh chóp sừng tử củng, Khoảng cách từ gốc sừng (ngã ba) tới đỉnh súng thường - 10 em A ean Ranean ch tines 36 bơm phôi - Ki đầu súng vào ding vi Wf, hic day'ngudi ky thuat viên mặc dường sinh (Minh 16) Thao ie phải nhánh, nhẹ nhàng tránh lầm xây xát niềm dục nhận, đặc biệt niềm mục tử cũng, trước - Nếu cổ tử cung nhỏ, chặt ta dùng “nong” lỗ cổ tử cúng dưa súng cấy phôi Thời - Thời gian cấy phối nhanh tốt (khoảng I -3 phút tốt nhất) co bóp nhiều gian thao tác đài, tý lệ đậu thai thấp? có lẽ đo vận động phận sinh dục Khám thơi bỏ nhận phôi khám -3 tháng sau cấy chuyển phối, bò nhận cần khám thai Khi thai cho bị nhận phơi cần ý mặt sau đây: động dục 1- Sau cấy phôi 10 -[2 ngây cần quan sát theo dõi xuất bị nhận lúc ứng với n 18 -22 chủ kỳ động dục Tiến hành quan sát ghí chép, -3 lần ngày theo dõi Mếu bò xuất triệu chứng động dục, phối giống không phối giống bị biểu động dục giả Bị động dục xuất chủ kỳ sau, hầm lượng 2- Có thể xác định khả có chửa qua việc định lượng (tức sau tuần kế Progestcron máu sữa ngày thứ 2l 23 chủ kỳ ng/ml, bò nhận từ cấy phôi); hầm lượng Propcstcron mau cao hon 2,5 98% bị có chữa Độ xác phương pháp 85% bd có chữa tuấn khơng có chữa Việc định lượng Prbgesteron lập lại sau ngày khám 3- Phương pháp chẩn đốn có chữa xác thất sau 50 -60 kết khẩm tháng) qua trực tràng kỹ thuật viên giỏi, sau 90 ngày (ba xác 100% kỹ thuật viên khác ảnh hưởng nhiều TY 16 đậu thai, sau khí cấy chuyển phối cho bò nhận chịu yếu lố như,d ä để cập trên, o0 ae tee men ase | 3? KỸ THUẬT ĐƠNG LẠNH PHƠI Khới niệm độ phịng thí nghiệm sang Đơng lạnh phối là: q tình dưa phối từ nhiệt giữ bảo quản nhiệt độ tạnh sâu - 900C khiển sinh sản Dong lạnh phôi giúp cho người chan nuôi điều Lượi ích đồng lạnh thể vật khơng không gian mi thời giản, qua so dé 6: 1.ưu giữ nghiên cứu r dĩ truyền Nâng, cao hiệu cud B phôi oo sử đụng phí để trì Giamichi¡ nhận phơi Bảo quần dự ữ phôi vô thời hạn Đồng lạnh phối : ƑƑ————] : L— sa ro Nhập giống TS g maitế hoa Thuonquốc Giảm lây truyền bệnh: Sơ đô Lợi ích động lụnh phơi Kỹ thuội i i 2.1 Chọn lọc phôi để đông lạnh Tiong q tình đơng lạnh phơi thích ứng sống dược phối dua vào đơng lạnh bị phá hủy, chết phải lựa chọn phôi thật kỹ theo tiêu bảo quần phối sau giải thối hóa, chuẩn sau để q nhiệt độ thấp khơng phải đơng Có khoảng 10-25% Vì vậy, người kỹ thuật cần trình đơng lạnh, bảo quản đạt hiệu cao, phôi a/ Giai đoạn phát triển đến số lượng phôi bào phân Giai doại phát triển phơi liên quan phơi bào, tính thẩm thấu màng tế chia, (tức có liên quan đến kích thước bị 6-§ ngày tuổi thường phối đâu bào, sức chịu nhiệt chúng, v.V ) Phối sớm, phôi nang dem dong lạnh cho hiệu phối nàng loại Phơi đâu phơi nàng màng đĩa phôi xoang cao hơn, Phối nang trường nở phối thay đổi yếu hơn, hạn chế đến kết nang lớn, sức kháng học nhiệt độ phôi đâu, phôi nang (từ loại trương nở đơng lạnh Chính vậy, thực tế, màng) dem đơng lạnh nhù hợp: 38 b/ Chất lượng phơi Q trình làm lạnh từ nhiệt dộ phịng thí nghiệm đến nhiệt độ lạnh sâu 196C làm thay đổi số kết cấu phôi bào từ giảm sức sống chất lượng phơi, Vì vậy, để dem dơng lạnh người kỹ thuật viên chọn phơi có chất lượng tốt: thường chọn phơi loạt l, HÍ loại A B Như khoảng 1020 -30% phôi loại IH (loại C) bị loại phải tiến hành cấy chuyển chợ đần bị nhận (cấy phơi tươi) 2:2 Hồ sung chất bảo vệ lạnh Trong q trình đơng lạnh, hạt đá kết tụ lại bến bên ngồi phơi làm hự hại màng phơi mầm phơi Để trính tác hại này, cần phải bổ sung vào mơi trường chat bilo vệ lạnh thích hợp (thường dùng nhiều Glycerol Ethylene glycol), a/ Glycerol LA chất bảo vệ tốt cho phôi q trình đơng lạnh, Nhược điểm sử dung Glycerol q trình giải đơng phối phải qua bước, thời gian kéo dài đồng thời phải có thêm dụng cụ kính hiển vị, đĩa petri, đụng cụ hút phôi, v.v Phối sau đánh giá phân loại dựa vào dụng dịch PHS có chứa 15 20% huyết thành tui bệ (CS), Phối đủ tiêu chuẩn động hạnh dựa vào mơi trường có Clyeerol, Thường tiến hành cách sau: -[Dưn phối vào mơi trường ni cấy có thêm 1,0 1,5M glyccrol, để phôi môi trường 10-5 phút -Đưa nhôi thứ tự vào môi trường nuôi cấy có nồng độ glycerol khác phu sau: 0,3M glycerol để 2-5 phút, sau đưa sang mơi trường có nồng độ 0.75M glycerol để 4-10 phút, cuối dưa vào mơi trường có l,0 X 6-10 phút 1,5M glycerol để -Đưa phôi thứ tự vào môi trường ni cấy có nồng độ glycerol nhu sau: 0,45; 0,90 LẠM, mơi trường để vịng 10 phút, thêm -Đưa phơi vào mơi trường PBS có 10% giycerol, dung địch có chứa lượng nhỏ đường để piúp cho thẩm Đề phôi trơng môi trường 20 phút thấu glycerol qua màng phôi b/ Ethylene glycol Ethylene glycol ¢6 thé ding thay glycerol Phuong thttc ste dung tương tự glycerol nhung thời gian để phôi môi trường ngắn: 5-10 phút Với phương thức phơi giải đơng tính cọng rạ va dua phôi cấy ngay, Phương pháp nầy nhành, đơn giản, khơng cần kính hiển vị số dụng cụ khác có nhược diễn; Khơngbiết chất lượng phối trước cấy Tỷ lệ đậu thai san khỉ cấy thường thấp hợp sơ với môi trường đồng lạnh có gÌyserol Q trình đồng lạnh: `'§au để phôi vào môi trường dông lạnh với thời gian cần thiết, phôi hút vào cọng rạ phi số thơng tin phối, Có thể | cọng rạ chứa l, 2, phối tùy theo yêu cầu diểu kiện cụ thể, Ghi bổ sung thêm thông tin cần thiết, dem phoi vào đông lạnh, Quá trình dong lạnh thực theo ¿ chương định sẵn hệ thống máy đơng lạnh Q trình thường qua giai doạn: `" trình 39 -0°C PC nghiệm xuống, nhiệt độ -5°C * Dưa phôi từ nhiệt độ phịng thí phơi 5-10 phút Ki dạt nhiệt độ trên, giữ dụng sử lạnh dong ng trườ tùy môi Dước hạ nhiệt độ giai doan 1”Œ/ phút t dg -33°C -35”C với bước hạ nhiệ g xuốn ) -7?C C (-6° -5°C tù * Ha nhiệt độ rạ có độ 5-10 phút, Sau lấy cọng từ 0,2-0,4°C /phút, Giữ phôi nhiệt nhiệt độ (-196°C) bao quin voi thời gian chứa phơi -dưa thang vio Nite lơng dích người sử dụng, 2.4, Q trình giải đơng tơn -196°Œ người kỹ Muốn sử dụng phôi dược bảo trạng thái tiểm sinh nhiệt độ động, Giải động q trình dưa phơi giải đơng thường ‹ lí ngược với độ phịng thí nghiệm, Nguyễn tắc tầy thuộc mục thuật phải giải - 196C nhiệt trình dong tanh, theo bude: Ấm 33t độ -196'C, dưa vào cốc nước nhiệ dang phối chứa cong - Lay tay nước đá, sưởi Ấm nấm chặt lau gidy 15-2 vòng g tron 39°C dụng dịch có midi Saw đó: Nếu đồng lạnh hay lướt nhẹ nhiều lần cong rạ g lạnh với cho C nhận đồng pha, Nếu đồn cấy ta cọng lấp ol, glyc Ethylene dưa qua dụng dịch: dụng dịch có Glycerol, phơi phải sucrose - Dung dịch 1: 6,6% glycerol + 0,4M M sucrose - Dung dich 2: 3,3% glyccrol -+ 0,4 - Dung dich 3: 0,4M sucrose lại phút Qua mdi dung dich phối dược lưu S+ 14M glycerol Dung dich J: PBS + 15% Cũng có thể: M glycerol Dung dich 2: PBS + (5% FCS + 0,9 0,45M glycerol Dung dich 3: PBS + 15% FCS + lại 10 phút, Qua mdi dung dich phôi hữu dé 5-10 vào dung dich PBS + 15% rcs - Sau bước trên, hút dưa phôi cho nhận vào cọng rạ đen! cấy chuyển phút, đánh giá, phân loại, hút phôi đồng phú dưa phôi giải dông nhanh phôi cách - Người kỹ thuật dua M sucrose, chờ 5-10 phút Hút phôi 0,5 va TCS 15% + PBS dich g ngày vào dun vào cọng rạ sau đánh giá, phân loại, hút phơi 15% + PBS dich g dun vio cấy cho nhận đồng phá nance iaree een te 40 MOT SO CÔNG NGHỆ KHÁC LIÊN QUAN ĐẾN CÔNG NGHỆ PHÔI } Thụ tinh ống nghiệm bao gồm mot loạt kỹ “Thụ tỉnh ống nghiệm công nghệ phức tạp thuật sau dây: -Thụ hồi tế bào trứng từ buồng trứng Đồ -Nuôi trứng phát triển va chin ~Hoạt hóa tính trùng ~ưa tính trùng vào gấp trúng chín phơi nang -Ni trứng dã thự tính phải triển đến giai doạn phối dâu, gid ket -Cấy phối thy tink ong nghiệm, đánh tạo nhiều phôi, Ý nghĩa lớn thọ nh ong ống nghiệm mặt phổ biến nhạành những, đặc mặt giảm giá thành công nghệ phôi, cách hệ đánh piá nhanh tính tốt cá thể, giống thực tế, rút ngắn khoảng sở cho cơng nghệ cấy lượng bị đực giống, Thụ tính ống nghiệm ni truyền nhân, cấy truyền gen xác dịnh giới tính vật 2, Xắc định giới lính củơ phơi lên người chân nuôi Hiệu công nghệ cấy truyền phôi tầng dực thường sử dựng xác định dược giới tính phơi trước cấy Phơi nuội bị sữa chân ni bồ thịt, phôi sử dụng chăn nhiều plhương pháp nhằm xác giống bò ưu việt cần dược bảo vệ phát triển Có định giới tính phơi nhữ sau: sắc thể cou - Xác định thể Bar nhiễm - Xác định cặp nhié sic thé gidi tinh XX, XY nguyên - Phương pháp hóa nghiệm miễn dịch, vào việc ]Í-Y, có dực - DNA - Phương pháp dấu hiệu phân từ DNA với chuỗi Y định giới tính phối phương xác định kháng đặc trưng Xác pháp có hiệu cao, niức độ nhạy cẩm khuếch dai DNA kỹ thuật dấu hiệu DNA tăng theo lấy thừa việc bào phối dùng để xác dịnh giới tính PCR Ưu điểm phương pháp số tế xác định giới tính phơi khơng cần nhiều tỷ lệ có chữa cấy phôi sau khủ nghiên cứu ấp khơng xác định giới tính 5-10% Phuong pháp dụng nhiều,tiên bò sữa cừu Ở số nước Sản xuốt vậi đồng nhốt CON vật đồng cầu thiết gắn xuất rà Trong chân nuôi, việc lên biệt xuất sắc mặt di truyền tăng nh số lượng vật đ trị lớn nghiên cứu vỀ nhậnh chóng Hơn vật cịn có giá di tuyển - kiểu gen Đồng thời ảnh hưởng môi tường ngoại pảnh đến kiểu 41 Cho dén chúng vật thí nghiệm số loại thuốc vacxin tiến hành góc dộ: việc sẵn xuất vật đồng -Cắt phôi, từ phôi cắt thành hai phốt sở ~-Nhân phôi từ tế bào đơn, từ phôi nhân lên thành nhiều phôi cấy chuyển tế bào mầm phôi vào trứng khác hút nhân tế bào Nhân gen - tức trình tạo vật piếng hệt từ thể s) Ghép phôi (phối hợi: kết hợp phôi - Aggregation of Embryo dê, đầu sư Nếu chuyện 66 tich Ty fap nói đến qi vật kết hợp hai tử, duối rấn quất vật sinh học tạo khác loài Quá nhiều tế bào phôi giống khác giống, sinh val mdi (thể trình kết hợp gọi ghép phôi Sự phép phối tạo giống mới, lồi Có khẩm) lầm phong phú, đa dạng giới sinH vật, sở tạo phương pháp tạo thé ghép + Ghép phôi giai doan phat triển sớm lai với nhau, + Tiêm phần phôi bào phôi vào phôi bào kỉa, tiêm mầm phôi túc 8-16 phơi bào vào fb phơi khác Hoặc Ví tuổi, giống, loài khác vào xoang phối 7-8 ngày Laurus Holstein với phơi bị Guernsey; phép phơi giống bị Bos indieus; ghép phơi cừu phơi dê đình Có sổ dụ với thể tiêm phơi bầu phép phối giếng bo 1/2 bồ Bos l8), (Fehilly va ctv, 1984) Hình 18: Vật sinh từ ghép phối cửu với phối dé nen 5xx xreCH rnkemmrerde 42 mới, cịn vật Những vật ghép phơi sở giống mới, lồi mơ, tế bào, cung cấp? thí nghiệm loại thuốc, loại vacxin nguồn người quan, phủ tạng, v.v phục vụ cho nhiều nghiên cứu khác Sản xuối cúc vội cấy chuyển gen động vật “Trong năm gần dây, nghiên cứu cấy truyền gen đến cho người nhiều để cập nhiều Những vật dược chuyển gen nang phẩm tốt hơn, v.v lên cạnh lợi ích to lớn ví dụ suất cao hơn, chất lượng sẵn môi trường ngoại cảnh chúng cịn động vật thí nghiệm tác động nguồn cứng cấp mô, khác nhau, tác dộng số loại thuốc, vacxin nghiên cứu khác tế bào, quan, phủ tạng; v.v phục vụ cho nhiều giới sinh vật , luo co người Chính chúng tạo phong phú, da dạng cho chất củn sống sở để loài người biểu sâu chấi ci sinh vật, a | Bê Gxaex+eCH phage 43 MỤC LỤC “Trang Nội dụng nghệ phơi Khới niệm, ý nghĩa lịch sử hiển công Khái niệm Ý nghĩa Lich sử phát triển “Trên giới 32 Ở Việt Nam Nguyên lắc sở Khoa học công nghệ cốy lruyền phôi Nguyên tắc công nghệ cấy truyền phôi Đặc diểm sinh lý sinh dục bò 21 Chu ky động dục 22 Sự phát triển phôi giai doạn đầu Cơ sởhực tiễn công nghệ cấy truyền phơi Gơy siêu bi nỗn bồ cho phơi (Gây rụng trứng nhiều - GRTN) 10 Khái niệm 10 Chọn lọc bè cho phôi Phương pháp gây rụng trứng nhiều Sử dụng PMSG (huyết ngựa chữa) Sử dụng PSH lo II , Phối giếng cho bd GRTN “Thời pm phối giống Chất lượng tỉnh trùng Kết qua gay rụng trứng nhiều (GRTN) ND nhọ No gCH nhaentidee 15 44 Các nhân tố ảnh hưởng đến trình GR'EN 6.1 Giống 6.2 16 16 Tôi 16 “Thời gian tiến hành GR'TN sau dé va mot chu kỳ l6 16 64 GRTN lập lại 6.5 Loait hormone va liễu lượng hornione xử dụng CÍRTN 6.6, Ảnh hưởng mùa vụ 6.7, ey 21 ” Ậ Ảnh hưởng trạng thái sinh lý dinh dưỡng L6 17 A “ Gây động dục đồng phd bỏ cúi nhận phôi Khái niệm Chọn lọc nhận phôi” Phương pháp gây động dục đồng phá cho bd nhận phôi Thu hoạọch phôi Dung dich piội rửa, nuôi phôi ngồi thể mẹ Dụng cụ lấy phơi (giội rữa phôi) 32 23 Thu hoạch phôi qua phẫu thuật "Thú hoạch phơi phương pháp khơng phẫu thuật Sói tìm phôi , 41, Dung dich soi Gin phôi 42 Phương pháp soi tìm phơi Đánh giá phâu loại phơi Sự ðhát triển phơi sau khí trứng rụng 52 Đánh giá, phân loại phôi 5.3 Giii chép theo dõi 20 23 Phương pháp giội rửa 8A, 20 24 21 27 21 28 28 29 45 Cốy truyền phôi Khái niệm Phương pháp C'TP qua phẫu thuật Phương pháp CTP khơng phẫu thuật Dụng cụ hố chất cần thiết Đưa phối vio cong Lap cong vao sting Chuẩn bị bị nhậu phơi "Thao tác cấy truyền phơi Khám thai bị nhận phơi Kỹ thuột đơng lạnh phơi Khái niệm Kỹ thuật 2.1 Chọn lọc phôi dé dông lạnh 22 Bổ sung chất bảo vệ lạnh 143 Q trình đơng lạnh 2.4 Q trình giải đơng 38 38 39 39 40 Mot số công nghệ ichức liên quan đến công nghệ phôi "Thụ tỉnh ống nghiệm Xác dịnh giới tính phơi Sản xuất vật đồng Ghép phôi Sản Xuất vật cấy chuyển gen 41 42 43 `46