Nghiên cứu tác dụng sinh học và độc tính của cây lược vàng callisia fragans lindl woods

BAO CAO KET QUA NGHIEN CUU DE TAI CAP BO NGHIEN CUU TAC DUNG SINH HOC VA DOC TINH CUA CAY LƯỢC VÀNG CALLISIA FRAGRANS (LINDL.) WOODS Chủ nhiệm để tài: TSKH Nguyễn Minh Khởi Cơ quan chủ trì để tài: Viện Dược liệu BOY TE BAO CAO KET QUA NGHIEN CUU DE TAI CAP BO NGHIEN CUU TAC DUNG SINH HOC VA ĐỘC TÍNH CUA CAY LUGC VANG CALLISIA FRAGRANS (LINDL.) WOODS Cha nhiém dé tai: 'TSKH Nguyễn Minh Khởi Cơ quan chủ trì để tài: Viện Dược liệu Cấp quản lý: Bộ Y tế Thời gian thực hiện: từ tháng 9/2009 đến tháng 9/2010 Tổng kinh phí thực đề tài: 565 triệu đồng Trong đó, kinh phí nghiệp khoa học: 565 triệu đồng Năm 2010 BAO CAO KET QUA NGHIEN CUU DE TAI CAP BO Tên để tài Nghiên cứu tác dụng sinh học độc tính lược vàng Callisia fragrans (Lindl.) Woods Chủ nhiệm đề tài TSKH Nguyễn Minh Khởi Cơ quan chủ trì để tài: Viên Dược liệu Cơ quan quản lý đề tài: Bộ Y tế Thư ký đềtài: TS Trịnh Thị Điệp Danh sách người thực chính: TSKH Nguyễn Minh Khởi Viện Dược liệu 2, T8 Trịnh Thị Điệp Viện Dược liên Viện Dược liệu ThS Đỗ Thị Phương TS Phạm Nguyệt Hằng Th8 Nguyễn Thị Phượng Viện Dược liệu Viện Dược liệu T8 Phương Thiện Thương Viện Dược liên Viện Dược liệu Th8 Nguyễn Trang Thúy PG8.T8 Nguyễn Trọng Thông, G8TSEH Phan Thị Phi Phi 10 PG8.TS Phan Thi Thu Anh 11.Th8 Phạm Thị Vân Anh 12 PG8.TS Nguyén Thi Quy 13.8 Hoàng Thị Mỹ Nhung 14.Th8 Bùi Thị Vân Khánh Đại Đại Dai Đại Đại Đại Đại học học hoc học học học học Y Hà Y Hà ¥ HA Y Hà Khoa Khoa Khoa Nội Nội Ndi Nội học Tự nhiên học Tự nhiên học Tự nhiên 15.Th8 Phí Thị Xuyến Viện Dược liệu 16 ThS Nguyễn Quỳnh Nga Viện Dược liệu 17.CN Trần Thanh Hà Viên Dược liệu 18 DSTC Nguyễn Thị Huyền Phương Viện Dược liệu 19.D8 Hoàng Thị Diệu Hương Học viên cao học, Đại học Dược Hà Nội Thời gian thực hiện: từ tháng 9/2009 đến thang 9/2010 NHUNG CHU VIET TAT AST BCMTT BSA cD cs cy DMSO ĐƯMD HCC HPLC INF KTMD LVL LVT MDA MHC NE OA, TBTHHMC TBTQDH Alanine aminotransferase Aspartate aminotransferase Bach cầu múi trung tính Bovine Serum Albumin Cluter of differentiation Công Cyclophosphamid Dimethylsulfoxyd Đáp ứng miễn địch Hồng cầu cửu Sắc ký lỏng hiệu cao Interleukin Interferon Khang ngun Kích thích miễn địch Cao đơng khơ địch ép lược vàng Cao chiết cồn 50% thân bồ lược vàng Malonyl dialdehyd Major histocompatibility complex Natural killer Ovalbumin Té bao lympho lach tao hoa hồng mẫn cảm Té bao lympho léch tao quing dung huyét MUCLUC Trang ĐẶT VẤN ĐẺ TONG QUAN 1.1 Thực vật học 1.2 1.3 1.4 1.5 Thành phần hóa học Cøiiisiz Loefling Tác dụng sinh học thuốc Callisia Loefling Tác dụng sinh học số chất có Ơ agrans Một số chế phẩm chứa lược vàng ĐÓI TƯỢNG VẢ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu 2.2 Nguyên vật liệu 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp lấy mẫu nguyên liệu xác định thực vật 2.3.2 Phương pháp thử độc tính cấp 2.3.3 Phương pháp thử độc tính bán trường diễn 2.3.4 Phương pháp thử tác dụng kháng khuẩn 2.3.5 Phương pháp thử tác dụng chống viêm mạn 2.3.6 Phương pháp thử tác dụng giảm đau 2.3.6.1 Thực nghiệm gây đau tắm nóng 2.3.6.2 Thực nghiệm gây đau xoắn bụng bing acid acetic 2.3.7 Phương pháp thử tác dụng tăng cường miễn dịch 2.3.7.1.Mơ hình gây suy giảm miễn địch hố chất 2.3.7.2 Mơ hình gây suy giảm miễn địch tia xạ 2.3.8 Phương pháp thử tác dụng hạ huyết áp 2.3.9 Phương pháp thử tác dụng chống oxy héa in vivo 2.3.10 Phương pháp thử tác dung trén enzym xanthine oxidase lypoxigenase 2.3.11 Phương pháp thử tác dụng déc té bao in vitro 2.3.12 Phuong pháp xử lý số liệu KÉT QUÁ NGHIÊN CỨU 3.1 Kết nghiên cứu độc tính thân bô lược vàng 3.1.1 Kết thử độc tính cấp 10 24 25 25 25 27 28 28 30 33 34 34 35 36 37 37 41 42 43 45 47 48 48 48 3.1.2 Kết thử độc tính bán trường diễn 49 49 3.1.2.2 Kết 3.1.2.3.Kết 3.1.2.4.Kết 3.1.2.5 Kết 51 54 59 61 64 3.1.2.1 Kết theo đối tình trạng chung cân động vật thí nghiệm quả quả theo dõi số huyết học theo dõi số thuộc chức gan theo dõi số thuộc chức thận xét nghiệm mô học 3.2 Kết nghiên cứu số tác dung sinh học thân bổ lược vàng, 3.2.2 Kết thử tác dụng chống viêm mạn 3.2.3 Kết thử tác dụng giảm đau 3.2.3.1 Tác dụng giảm đau mô hình gây đau xoắn bụng acid 64 64 66 68 70 72 74 75 75 3.2.3.2 Tác dụng giảm đau rnơ hình gây đau tắm nóng 3.2.4 Kết thử tác dụng tăng cường miễn dịch 3.2.41 Kết thử tác dụng mơ hình gây suy giảm miễn dịch 76 79 79 3.2.1 Kết thử tác dụng kháng khuẩn 3.2.1.1 Két qua thir trén chiing S pnewmoniae 3.2.5.2 Kết thử chủng K pneumoniae 3.2.1.3 Kết thử chủng #f.iy/luenza 3.2.1.4 Kết thử chủng aureus 3.2.1.4 Kết thử chủng P aeruginosa acetic hóa chất 3.2.4.1.1 Nghiên cứu đánh giá tình trạng chung hệ miễn dịch 3.2.4.1.2 Nghiên cứu ảnh hưởng LVL LVT lên đáp ứng miễn dich dịch thể với kháng nguyên 3.2.4.1.3 Nghiên cứu đánh giá đáp ứng miễn dịch qua trung gian tế bảo 3.2.4.2 Kết thử tác dụng mơ hình gây suy giảm miễn dịch tia xa 3.2.4.2.1 Nghiên cứu đánh giá tỉnh trang chung cla mign dich 3.2.4.2.2 3.2.4.2.3 3.2.5 Kết 3.2.6 Kết Nghiên cứu đánh giá đáp ứng mién dich dich thé Nghiên cứu đánh giá đáp ứng miễn dịch qua trung gian tế bảo thử tác dụng hạ huyết ap thử tác dụng chống oxy hoa in vivo 32/7 Kết thử tác dụng trén enzym xanthine oxidase va 79 82 85 88 88 92 102 104 lypoxigenase in vitro 3.2.7.1 Hoat tính ức chế enzym xanthine oxidase mẫu chiết từ 104 3.27.2 Hoạt tính ức chế enzym lipoxygenase mẫu chiết từ 105 Kết thử tác dụng độc tế bào mẫu chiết từ thân 106 3.2.8.1 Kết thử độc tính mẫu chiết từ thân bồ lược vàng 106 3.2.8.2 Kết thử độc tính mẫu chiết từ thân bồ lược vàng 107 3.2.8.3 Kết thử độc tính mẫu chiết từ thân bồ lược vàng 108 3.2.8.4 Kết thử độc tính mẫu chiết từ thân bồ lược vàng 109 3.2.8.5 Kết thử độc tính mẫu chiết từ thân bồ lược vàng 110 3.2.8.6 Kết thử độc tính mẫu chiết từ thân bồ lược vàng 111 3.2.87 Kết thử độc tính mẫu chiết từ thân bồ lược vàng 112 3.2.8.8 Két thử độc tính mẫu chiết từ thân bồ lược vàng 113 BẢN LUẬN 115 136 138 139 thân bồ lược vàng thân bồ lược vàng bô lược vàng dòng tế bào A549 dòng tế bào 11358 dòng tế bao Hela dòng tế bào 11460 dòng tế bào Hep-G2 dòng tế bào Cos-7 dòng tế bào MCF-7 tế bào dòng KPL-4 KÉT LUẬN KIÊN NGHỊ TẢI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC BẢN TỰ ĐÁNH GIÁ 'VỀ tình hình thực đóng góp đề tài KH-CN cấp Bộ Tên để tài: Nghiên cứu tác dụng sinh học độc tính lược vàng Callisia fragrans (Lindl.) Woods Mã số Thuộc chương trình: KHCN cấp Bộ Y tế 10 Chủ nhiệm đề tài: TRKH Nguyễn Minh Khởi 11 Cơ quan chủ trì đề tài: Viện Dược liệu 12.Thời gian thực hiện: từ tháng 9/2009 ~ đến thang 9/2010 13.Tổng kinh phí thực đề tài: 565 triệu đồng Trong kinh phí từ NSNN: 565 triệu đồng, 14 Tình hình thực đề tài so với đề cương: 7.1 Về mức độ hoàn thành khối lượng cơng việc: Đã hồn thành đầy đủ khối lượng công việc theo để cương nghiên cứu, cụ thể hoàn thành nội dung nghiên cứu sau: Thu thập mẫu nguyên liệu lược vàng giám định tên khoa học đối tượng nghiên cứu Xác định độ an toàn liệu - _ Thử độc tính cấp cao chiết tồn phần bừ thân bồ lược vàng - _ Thử độc tính bán trường diễn thân bổ lược vàng, mẫu liều Thử số tác dụng sinh học mẫu cao chiết từ thân lược vàng thực nghiệm, mẫu 2-3 liều: - _ Tác dụng chống viêm, giảm đau -_ Tác dụng kháng khuẩn số chủng vi khuẩn điển hình thường gây viêm lợi, viêm họng, viêm phế quản - _ Tác dụng tăng cường miễn địch mơ hình thực nghiệm: gây suy giảm miễn dịch héa chất tia xa -_ Tác dụng chống oxy hóa - Tac dụng hạ huyết áp - Thc dung ddc tf bao trén déng tế bào gây ung thư 7.2 Về yêu câu khoa học tiêucơ sản phẩm KHCN Các sẵn phẩm đề tài Báo cáo kết đánh giá độc tính cấp độc tính bán trường diễn thân bỗ lược vàng Độc tính cấp - Cao đông khô dịch ép lược vàng gây chết chuột liều từ 12,8g đến 28,7g cao khô/kg thể trọng chuột Liều độc gây chết 50% chuột thí nghiệm LD¿n S,5 g caofkg tương đương với 1075,6g brơifkg thể trọng chuột 54,3g khôfkg thể trọng chuôt - Cao chiết cồn 50% thân bỗ lược vàng gây chết chuột liều từ 16,3g đến 32,5g cao khé/kg thé chuột Liền độc gây chết 50% chuột thí nghiệm LDạ = 21,3g cao/kg tương đương với 1115,2 g thân bổ tươi/kg thể trọng chuột 56,0g thân bỗ khô/kg thể trọng chuột Độc tính bán trường diễn Cao đơng khơ dịch ép lược vàng liều tương đương 6g, 18g, 60g tươi kg/ ngày cao chiết cồn 50% thân bồ lược vàng liều tương đương 1,2g, 3,6g, 12g thân bổ tươi/ kg/ ngày cho thỏ uống 60 ngày liên tục ảnh hưởng khơng có ý nghĩa thống kê đến số huyết học chức gan, thận chức tạo máu so với đối chứng sinh lý Tuy nhiên, có tượng gan bị viêm khoảng cửa xung huyết cầu thận, viêm thân kế nhẹ số cá thể Báo cáo kết thử tác dụng sinh học thân bổ lược vàng, Tác dung kháng khuẩm Cao đông khơ dịch vàng có tác dụng Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae va ép lược vàng cao chiết cồn 50⁄4 thân bỗ lược kháng khuẩn in vitro trén chủng vi khuẩn Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenza, Pseudomonas aeruginosa Tác đụng chồng viêm man - Cao đông khơ địch ép lược vàng có tác dụng chống viêm mạn, với liều uống 0,24g cao khô/ kg thể trọng/ngày chuột cống trắng, làm giảm trọng lượng ỗ viêm 29,04⁄ so với lơ đối chứng có ý nghĩa thống kê khơng có tác dụng liều thấp - Cao chiết cồn 50% thân bồ lược vàng có tác dụng chống viêm mạn, với liễu uống 0,013g, 0,026 g; 0,052 g cao/ kg thể trọng/ngày chuột cổng trắng ,đã làm giảm trọng lượng ỗ viêm ứng 23,04%, 25,20%, 22,01 % so với 1ơ đối chứng có ý nghĩa thống kê Tác đụng giảm đau Trên mơ hình gây đau xoắn bụng acid acetie - Cao đông khô dịch ép lược vàng có tác dụng giảm đau ngoại biên, với liều 0,2g 0,4g cao khô/kg thể trọng chuột nhắt làm giảm 23,9 — 30,7% số lần đau xoắn bụng chuột có ý nghĩa sau phút gây đau, tác dụng kéo dài 20 phút - Cao chiết cồn 50% thân bổ lược vàng có tác dụng giảm đau ngoại biên, thử liều 0,023; 0,046 0,092g cao khô/kg thể trọng chuột làm giảm 27,7 — 53,6% sé lin dau xoắn bụng chuột có ý nghĩa sau phút gây đau, tác dụng kéo đài 25 phút Trên mơ hình gây đau tâm nóng Cao đơng khơ dịch ép lược vàng liều 0,1, 0,2 0,4g cao khô/kg thể trọng cao chiết cồn 50% thân bổ lược vàng liều 0,023, 0,046 0,092g cao khô/kg thể trọng chuột nhắt rõ tác dụng giảm đau theo chế thần kinh trung ương, có làm kéo dai thời gian chịu nóng chuột nhưng, chưa có ý nghĩa thống kê hầu hết thời điểm theo đối Tác đụng tăng cường miễn dich Cao đông khô dịch ép lược vàng liều 0,1 0,4g cao khơíkg thể trọng/ngày cao chiết cồn 50% thân bồ lược vàng liều 0,023 0,092g cao khôfkg thể trọng/ngày chuột đùng liên tục ngày theo đường uống mơ hình gây suy giảm miễn dịch CY ngày mơ hình gây suy giảm miễn dịch tia xa, có tác dụng kích thích miễn dịch dịch thể miễn địch tế bào thông qua cải thiên số đánh giá tinh trang chung mién địch trọng lượng hương đối quan lympho, số lượng bạch cầu số đánh giá chức đáp ứng miễn dịch dịch thể, miễn địch tế bào Tác dung huyét ép Cao đông khô dịch ép lược vàng đưa vào da dày mào với liều 0,051g; 0,102g va 0,51g cao khô/kg thể trọng cao chiết cồn 50% thân bd lược vàng đưa vào đa dày mèo với liều 0,0114g, 0,0228g 0,228g cao