Nghiên cứu sản xuất kháng nguyên streptolysin 0 sử dụng trong chẩn đoán thấp tim và viêm cầu thận cấp ở trẻ em

BOY TE BAO CAO KET QUA NGHIEN CUU DE TAI CAP BO TÊN ĐỂ TÀI : NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT KHÁNG NGUYÊN _ STREPTOLYSIN O, SỬ DỤNG TRONG CHAN DOAN THAP TIM VA VIEM CAU THAN CAP GO TRE EM CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI : TS, NGUYEN THETUYEN GS.TSKH NGUYEN VAN DIP CO QUAN CHU TRI ĐỀ TÀI : TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI CAP QUAN LY BOY TE THO! GIAN THUC HIEN : TU THANG NAM 2001 DEN THANG NAM 2004 TONG KINH PHÍ THỰC HIẾN ĐỀ TÀI: 120 TRIỆU ĐỒNG TRONG ĐĨ: KINH PHÍ SNKH 120 TRIỆU ĐỒNG NAM 2004 SDE 161 105, BÁO CÁO KẾT QUÁ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI CẤP BỘ TÊN ĐỂ TÀI: NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT KHÁNG NGUYÊN STREPTOLYSIN O, SUDUNG TRONG CHAN DOAN THAPTIM vA VIEM CAU THAN CAP O TRE EM 2, CHU NHIEM ĐỀ TÀI: CƠ QUAN CHỦ TRÌ ĐỀ TÀI: 4, CƠ QUAN QUẦN LÝ ĐỀ TÀI: THƯ KÝ ĐỀ TÀI: Ts, NGUYEN THI TUYẾN GS.TSKH NGUYEN VAN DỊP TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BỘY TẾ CN.NGUYÊN THỊ HẢI DANH SÁCH NHŨNG NGƯỜI THỰC HIỆN CHÍNH: - - 'T§ Nguyễn Thị Tuyến, Bộ môn Vị sinh Y học, Trường Đại học Y Hà Nộ GS.TSKH.Nguyén Van Dip, Vu Khoa hoc va Dao tao, B6 ¥ t€ PGS.TS.Lé Huy Chính, Bộ mơn Vi sinh Y hoc, Trường Đại học Y Hà Nội CN Nguyén Thi Hai, Bé mén Visinh Y hoc, Trường Đại học Y Hà Nội KTV.Nguyén Thị Phong, Bộ môn Vi sinh Y hoc, Trường Đại học Y Hà Nội CN.Phan Duy Hưng, Bộ mơn Ví sinh Y hoc, Trường Đại học Y Hà Nội THỜI GIAN THỰC HIỆN ĐỂ TÀI: TỪTHÁNG NĂM 2001 DEN THANG NĂM 2004 DANH MUC CAC CHU VIET TAT -ASLO, ASO: Anti streptolysin O -BHI: -KT: Brain Heart Infusion Kháng thể -KN: Kháng nguyên -PBS: -SO: Phosphate Buffer Safin Streptolysin O -TCYT: Tổ chức Y tế MỤC LỤC NỘI DUNG PHẨN A : Tóm tắt kết bật để tài TRANG PHAN B : Noi dung báo cáo tiết kết nghiên cứn ĐẶT VẤN ĐỀ TONG QUAN 2.1.2 Kha nang gay bệnh liên cầu nhóm A 2.1.3 Độc tố streptolysin O 2.2 Phân ứng ASLO 2.3 Tình hình sản xuất kháng nguyên streptolysin O giới Việt Nam ĐỐI TƯỜNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cou 3.1 Đối tượng 3.2 Vật liệu 3.3 Phương pháp nghiên cứu KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 4.1 Kết nghiên cứu điều kiện giữ chủng liên cầu nhóm A C2038 4.2 Kết sản xuất kháng nguyên streptolysin O 4.3 Nghiên cứu hiệu sản xuất kháng nguyên streptolysin O môi trường khác BAN LUAN 5.1 Bần luận điều kiện giữ chủng liên cầu nhóm A 5.2 Bàn luận vẻ kỹ thuật tách chiết khẩng nguyên mos 2.1 Liên cầu nhóm A 11 14 14 15 20 22 31 + streptolysin O 36 Tự sản xuất 40 liên cầu nhóm A 41 5.3 Bàn luận hiệu giá kháng nguyên streptolysin O 5.4 Bàn luận môi trường sử đụng nuôi cấy KẾT LUẬN VÀ KHUYẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC PHAN A TOM TAT KET QUA NOI BAT CUA DE TAL LKET QUA NOL BAT CUA DE TAL a.Dong góp đề tài: *Đóng góp thứ là: lưu giữ chủng liên cầu nhóm A mơi trường 'BHI huyết ngựa với thời gian dài phương pháp dang sử dụng Liên cầu nhóm A giống số vi khuẩn gây bệnh đường hô hấp khác dễ chết khỏi thể Trong bệnh phẩm liên cầu nhóm A tồn vịng Trong mơi trường ni cấy thích hợp liên cầu nhóm A tồn 48 Để án lưu giữ nguồn gen vi sinh vật y học, giữ môi trường BHIglyxerol 20% u kiện - 70°C giữ 1-2 tháng Xuất phát từ mục tiêu để tài: sân xuất kháng nguyên streptolysin O, đo vấn để đặt là: làm để giữ chủng chuẩn phục vụ cho sản xuất kháng nguyên streptolysin O? Kết nghiên cứu đưa môi trường điều kiện tối ưu giữ chủng liên cầu nói chung chủng liên cẩu nhóm A chuẩn C203S sử dụng sản guất kháng ngun streptolysin O, mơi trường BHI huyết ngựa( tỷ lệ huyết ngựa 50% với môi trường) điều kiện bảo quản -70°C Kết theo đối để tài cho thấy:chủng liên cầu nhóm A C203S lưu giữ điều kiên từ tháng năm 2000 đến tháng năm 2004 sống khơng có thay đổi vẻ đặc điểm sinh học Đây vấn đề mới, đáp ứng cầu giữ chủng liên cầu nhóm A phục vụ sản xuất Kháng ngun streptolysin Ĩ nói riêng giữ chủng liên cầu nhóm Á đẻ án lưu giữ nguồn gen vi sinh vật Y học *Đóng góp thứ hai là: đưa bước cụ thể hố quy trình áp đụng sẵn xuất thành công kháng nguyên streptolysin O đạng lồng Việt Nam Hiện nhu cầu sử dụng phản ứng ASLO chẩn đoán lớn Việc sản xuất kháng nguyên streptolysin Q đưa bước cụ thể hố quy trình để sở có điều kiện ứng dụng sản xuất thay kháng nguyên strcptolysin O nhập ngoại với giá thành cao nghiên cứu có ý nghĩa thực tiễn b.Sản phẩm cụ thể: -Đưa công thức môi trường BHI huyết ngựa 50% điều kiện tối ưu sử dụng giữ chủng liên cầu nhóm A -Đưa bước cụ thể hoá điều kiện tối ưu quy trình sản xuất kháng nguyên streptolysin Ơ TCYT giới khuyến cáo -Ấp dụng quy trình cụ thể hoá với điều kiện tối ưu, sản xuất thành công kháng nguyên streptolysin O với hiệu giá 1;16 Trung tâm Kiểm định Vacxin Chế phẩm sinh học Quốc Gia ghí nhận kết quả kinh tế: rast -Hiện bệnh viện tuyến Trung ương số sở phòng thấp sử dụng kháng nguyên streptolysin O nước với giá thành cao: sản phẩm Mỹ, Pháp giá 42.000 đông/I mẫu xét nghiệm, sản phẩm Humatex ASO Đức bán định lượng nồng độ kháng thể kháng streptolysin O 200 đơn vị, giá thành 10.000 đồng/ mẫu xét nghiệm Kháng nguyên streptolysin O sản xuất giá khoảng 500-3000 đồng/ mẫu xét nghiệm tuỳ thuộc sử dụng môi trường tổng hợp hay trường tự điếu chế d.Hiệu xã hội: Hiện thấp tìm bệnh tim mắc phải thường gặp lứa tuổi học sinh nguyên nhân gây bệnh tìm mạch dẫn đến tử vong phổ biến lứa tuổi 40, Hậu nặng nể khơng bệnh nhân gánh chịu mà cịn gánh nặng xã hội Vì việc sản xuất thành công kháng nguyên streptolysin O dé cung cấp cho nhu cầu chẩn đốn, phịng thấp cấp, nhằm làm giảm tỷ lệ mắc thấp tim bệnh tim đo thấp, giảm viêm cầu thân cấp trẻ em tương lai việc làm có ý nghĩa thực tiễn 2,BÁNH GIÁ VIỆC THỰC HIỆN ĐỂ TÀI ĐỐI CHIẾU VỚI ĐỂ CƯƠNG NGHIÊN CỨU ĐÃ ĐƯỢC PHÊ DUYỆT: a Tiến độ: Để tài dự kiến tiến hành từ tháng 7/2001, tới tháng nam 2002 hoàn thiện việc phê duyệt đề cương cuối năm 2002 cấp Kinh phí Song chúng tơi cố gắng vay mượn để tài khác (để án lưu giữ nguồn gen Vi sinh vật Y học) để tiến hành để tài hoàn thành thời gian dự kiến để cương (tháng 6/2004) b Thực mục tiêu nghiên cứu để ra: Kết đề tài đáp ứng đủ yêu cầu mục tiêu để Chúng nghiền cứu đưa bước cụ thể hoá điều kiện tối ưu quy trình khuyến cáo TCYTIG Ap dụng quy trình, sản xuất thành cơng kháng ngun streptolysin O Sản phẩm Trung tâm Kiểm định vacxin chế phẩm sinh học Quốc gia kiểm định hiệu giá kháng nguyên đạt 1:16 cao so với mức quy định cần đạt quy trình khuyến cáo(1:8) Ngồi chúng tỏi nghiên cứu sản xuất kháng nguyên treptolysin O từ môi trường tự điểu chế từ nguyên liệu nước(theo khuyến cáo Kalbak ), thay môi trường tổng hợp Todd- Hewith BHI giá thành đất hon Day khuyến cáo có giá trị kinh tế để sở sắn xuất kháng nguyên streptolysin O sau tham khảo áp đụng, giúp hạ giá thành sẵn phẩm sản xuất hàng loạt c Đánh giá việc sử dụng kinh phí: “Tổng kinh phí thực đề tài: 120 triệu đồng ~Trong kinh phí SNKH; 120 triệu đồng -Kinh phí để tài đủ trả th khốn nhân cơng nguyên vật liệu tiêu hao, kiểm định sản phẩm, mua phéu lọc máy hút chân khơng, cịn máy móc khác phục vụ nghiên cứu mơn Vì sinh Y học phịng Xét nghiệm Trung tâm,Trường Đại hoc Y Hà Nội -Toàn kinh phí tốn PHAN NOI DUNG BAO CAO CHI TIET KET QUA NGHIEN CUU 1.ĐẶT VẤN ĐỀ: Tiện thấp tìm viêm cầu thận cấp hai bệnh thường gặp trẻ em đặc biệt lứa tuổi học sinh(1,301 Để làm giảm tỷ lệ mắc, việc xác định yếu tố nguyên nhân quan trọng Mối liên quan nhiễm liên cẩu nhóm A đường hơ hấp xuất bệnh thấp tìm viêm cầu thận cấp trẻ em sau nhiều tác gid dé cap va ching minh cách rõ ràng[1,3,4,/23,25,301 Dịch tễ học bệnh thấp tim bệnh tim đo thấp liên quan chặt chẽ với dịch tế học nhiễm liên cầu nhóm A họng[1,21,23] Thấp tim viêm cầu thận cấp thường xảy sau viêm họng đo liên cầu nhóm A từ 2-3 tuần, tương đương với giai đoạn tìm thấy kháng thể chống liên cầu táng cao máu Song liên cầu nhóm A gây bệnh thấp tim viêm cầu thận cấp theo chế vấn đề tiep tục nghiên cứu Tuy nhiên chế tự miễn nhiều tác giả để cập đến Các tác giả cho rằng: có phản ứng chéo kháng thể chống kháng nguyên liên cầu nhóm A với tổ chức ngư kháng thể chống kháng nguyên protein M phân ứng chéo với tổ chức tim số tổ chức liên kết khác, kháng thể chống kháng nguyên carbohydrare phản ứng chéo véi phdn glycoprotein cia van tim[6,24,30} Khing thể chống kháng nguyén glycoprotein cla mang tế bào với thành phần glycoprotein màng đáy cầu thận vv [6] Vi vay, tiêu chuẩn chấn đốn thấp tim viêm cầu thận cấp ngồi tiêu chuẩn phụ phải có chứng nhiễm liên cầu nhóm A trước Có nhiều kỹ thuật để phát kháng thể khác liên cầu nhóm A, song kỹ thuật phát kháng thể kháng streptolysin O phản ứng ASLO kỹ thuật đơn giản sử dụng phổ biến chẩn đốn gián tiếp tiên cầu nhóm A Việt Nam giới Hiện Việt Nam, phản ứng ASLO sử dụng hầu hết phòng xét nghiệm bệnh viện tuyến trung ương số bệnh viện tuyến tỉnh Ngồi cịn sử dụng chương trình phịng chống bệnh thấp tìm Vì vậy, nhu cầu sử đụng kháng nguyên streptolysin © lớn Song Việt Nam van chưa có quan nghiên cứu thành công sản xuất kháng nguyên streptolysin O Đo phịng xết nghiệm phải mưa kháng ngun nước với giá thành cao Xuất phát từ tình hình thực tế trên, chúng tơi tiến hành nghiên cứa sản xuất kháng nguyên streptolysin O, sử dựng phản ứng ASLO để chẩn đốn thấp tìm viêm cầu thận cấp trẻ em với mục tiêu sau: 1-Nghiên cứu điều kiện giữ chủng chuẩn liên cầu nhóm A: C2038 2-Nghiên cứu cụ thể hố vẻ mặt kỹ thuật bước trọng quy trình sản xuất kháng nguyên streptolysin O theo khuyến cáo Tổ chức Y tế Thế giới năm 1983 1996,