(Luận văn) nghiên cứu sản xuất kháng thể igy tinh khiết dùng để phòng và trị bệnh newcastle (nd)

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KOULDKIENG VILAYVONG lu an n va NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT KHÁNG THỂ IGY TINH KHIẾT p ie gh tn to DÙNG ĐỂ PHÒNG VÀ TRỊ BỆNH NEWCASTLE (ND) d oa nl w Thú y an lu Ngành: 8640101 va Mã số: ll u nf Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Lê Văn Phan oi m z at nh z m co l gm @ an Lu NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2019 n va ac th si LỜI CẢM ĐOAN Tơi xin cảm đoan cơng trình nghiên cứu riêng tôi, số liệu, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa công bố cơng trình khác Tơi xin cảm đoan thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Tác giả luận văn lu an va n KouldKieng Vilayvong p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th i si LỜI CẢM ƠN Qua thời gian học tập rèn luyện Học viện Nông nghiệp Việt Nam, giúp đỡ, dạy dỗ tận tình thầy, cô giảng viên Khoa Thú Y kiến thức chuyên môn tư cách đạo đức người Thạc sĩ thú y thời đại Tôi trưởng thành mặt nhận thức học thuật lu Nhân dịp hoàn thành luận văn tốt nghiệp chuyên ngành Thạc sĩ thú y, cho phép tơi bày tỏ lịng biết ơn chân thành sâu sắc tới thầy, cô giảng viên Xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến PGS TS Lê Văn Phan giảng viên môn Vi sinh vật-Truyền nhiễm, Phó trưởng Phịng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ sinh học Thú Y-Khoa Thú Y-Học viện Nông nghiệp Việt Nam, tạo điều kiện tận tình giúp đỡ, trang bị kiến thức chuyên môn để có đủ lực hồn thành khóa luận an n va tn to Xin cảm ơn tới toàn thể anh chị nhân viên Phịng thí nghiệm trọng điểm Cơng nghệ sinh học Thú Y-Khoa Thú Y-Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình hướng dẫn tạo điều kiện cho thực tập làm việc Bệnh viện p ie gh Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè, người động viên, sát cánh suốt q trình học tập hồn thành luận văn tốt nghiệp nl w Xin chân thành cảm ơn! d oa Hà Nội, ngày tháng năm 2019 u nf va an lu Tác giả luận văn ll KouldKieng Vilayvong oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th ii si MỤC LỤC Lời cảm đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình viii Danh mục biểu đồ ix Trích yếu luận văn x lu Thesis abstract xiii an n va Phần Đặt vấn đề Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu nghiên cứu đề tài 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn ie gh tn to 1.1 p 1.3.1 1.3.2 Ý nghĩa khoa học Ý nghĩa thực tiễn w oa nl Phần Tổng quan tài liệu Lịch sử nghiên cứu bệnh Newcastle 2.1.1 Giới thiệu chung bệnh 2.1.2 Lịch sử bệnh tình hình bệnh giới Việt Nam 2.2 Một vài nét khái quát virus newcastle 2.2.1 Phân loại 2.2.2 Hình thái cấu trúc virus Newcastle 2.2.3 Đặc tính sinh học virus Newcastle 2.2.4 Dịch tễ học 13 2.2.5 Triệu chứng 17 2.2.6 Bệnh tích 18 2.2.7 Chẩn đoán 19 2.2.8 Phòng bệnh Newcastle 20 2.3 Đáp ứng miễn dịch chống virus newcastle 23 2.3.1 Đáp ứng miễn dịch không đặc hiệu 23 d 2.1 ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th iii si 2.3.2 Đáp ứng miễn dịch đặc hiệu 23 2.3.3 Miễn dịch chống bệnh Newcastle 24 2.4 Kháng thể IGY 26 2.4.1 Kháng thể IgY gì? 27 2.4.2 Chuyển IgY vào lòng đỏ trứng 27 2.4.3 Cấu chúc kháng thể IgY 29 2.4.4 Tách chiêt IgY từ lòng đỏ trứng gà 31 Phần Đối tượng - nội dung - phương phápnghiên cứu 33 lu an n va Đối tượng, địa điểm thời gian nghiên cứu 33 3.2 Nội dung nghiên cứu 33 3.3 Vật liệu nghiên cứu 33 3.4 Phương pháp nghiên cứu 34 3.4.1 Phương pháp gây miễn dịch gà 34 3.4.2 Phương pháp lấy bảo quản huyết 35 tn to 3.1 Phương pháp xác định hiệu giá kháng thể độ dài đáp ứng miễn dịch gh 3.4.3 p ie sau tiêm vaccine phản ứng HI 35 Phương pháp xác định đặc tính kháng thể IgY 42 nl w 3.4.5 Phương pháp tách chiết kháng thể IgY từ lòng đỏ trứng gà 42 3.4.4 Phương pháp đánh giá hiệu phòng điều trị Newcastle 44 3.4.7 Phương pháp xử lý số liệu 45 d oa 3.4.6 lu Kết kiểm tra hiệu giá kháng thể Newcastle huyết gà u nf 4.1 va an Phần Kết thảo luận 46 ll trước gây miễn dịch 46 Khảo sát hiệu giá kháng thể newcastle huyết gà sau gây oi m 4.2 4.2.1 z at nh miễn dịch 47 Kết kiểm tra hiệu giá kháng thể huyết gà sau gây z miễn dịch 47 @ Khảo sát hiệu giá kháng thể newcastle lòng đỏ trứng gà gây gm 4.3 l miễn dịch 49 Kết theo dõi tỷ lệ trứng gà 49 4.3.2 Kết kiểm tra hiệu giá kháng thể lòng đỏ trứng gà sau m co 4.3.1 an Lu gây miễn dịch 51 n va ac th iv si 4.3.3 So sánh hàm lượng kháng thể lịng đỏ trứng lơ gà tiêm vaccine lô gà tiêm vaccine kết hợp với virus cường độc vô hoạt 53 4.4 Mối tương quan hiệu giá kháng thể gà qua huyết qua lòng đỏ trứng gà 53 4.5 Kết tách chiết kháng thể IgY 57 4.6 Khảo sát đánh giá hiệu phòng điều trị sản phẩm kháng thể IgY .58 4.6.1 Thông tin trại thử nghiệm 58 4.6.2 Kết phòng trị bệnh Newcastle chế phẩm kháng thể IgY 59 Phần Kết luận kiến nghị 62 lu 5.1 Kết luận 62 5.2 Kiến nghị 62 an Tài liêu tham khảo 63 va Phụ lục 68 n p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th v si DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT lu an n va Nghĩa tiếng Việt Avian paramyxovirus Acid ribonucleic Cytophathic Effect Funsion protein Food Agriculture Organization Haemagglutination test Hiệu giá kháng thể Haemagglutination Inhibition test HN IgA Haemagglutinin neuraminidase Immunoglobulins A IgD IgE IgY IgG IgM IPCI IVPI KDa L LD50 LĐT Immunoglobulin d Immunoglobulin e Yolk Immunoglobulin Immuno Globulin G Immuno Globulin M Intracerebral pathogenicity index Intravenous pathogenicity index Kilodalton Large protein p ie gh tn to Chữ viết tắt APMV ARN CPE F FAO HA HGKT HI d lu Matrix protein Mean Death Time Nature kill Nuclecapsid protein Office International Epizooties Phosphate buffered saline Microlit Microgarm Sodium Doecyl Sulfate ll u nf va an oi m z at nh z Thí nghiệm m co l gm @ TN oa nl w M MDT NK NP OIE PBS µl µg SDS Lethal Dose 50 Lòng đỏ trứng an Lu n va ac th vi si DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 So sánh số đặc tính kháng thể (KT) sản xuất từ huyết động vật (IgG) kháng thể sản xuất từ trứng gia cầm (IgY) (Schade et al., 2005) 30 Bảng 3.1 Quy trình gây miễn dịch cho gà vaccine sau bắt 34 Bảng 3.2 Trình tự tiến hành phản ứng HA 37 Bảng 3.3 Trình tự phản ứng HA để chuẩn độ HA 38 Bảng 3.4 Trình tự tiến hành phản ứng HI để đánh giá kháng thể chủ động gà sau gây miễn dịch 39 lu Bảng 3.5 Trình tự tiến hành phản ứng HI để đánh giá kháng thể thụ động an va chuyền qua lòng đỏ trứng 40 n Bảng 4.1 Kết kiểm tra hiệu giá kháng thể gà hậu bị bắt trước to tn gây miễn dịch 46 p ie gh Bảng 4.2 Kết kiểm tra hiệu giá kháng thể huyết lơ gà thí nghiệm I, thí nghiệm II lơ đối chứng 47 Bảng 4.3 Theo dõi tình hình đẻ gà 49 w oa nl Bảng 4.4 Kết kiểm tra hiệu giá kháng thể lòng đỏ trứng lơ gà thí d nghiệm I, thí nghiệm II lô đối chứng 51 an lu Bảng 4.5 Kết kiểm tra hiệu giá kháng thể huyết gà va lịng đỏ trứng (trên lơ gà) lô TN I lô TN II 54 u nf Bảng 4.6 Thông tin chế phẩm kháng thể IgY dùng để phòng trị bệnh ll Newcastle 60 m oi Bảng 4.7 Kết phòng trị bệnh Newcastle chế phẩm kháng thể IgY 61 z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th vii si DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Cấu trúc virus Newcastle Hình 2.2 Phương thức lây lan chủ yếu bệnh Newcastle 15 Hình 2.3 Minh họa phân bố loại kháng thể trứng gà 28 Hình 2.4 Cấu trúc kháng thể IgG IgY 29 Hình 2.5 Quy trình cơng nghệ sản xuất chế phẩm kháng thể IgY Học viện Nông Nghiệp Viêt Nam (Thú Y) 32 Hình 3.1 Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu HI 41 Hình 4.1 Điện di kháng thể IgY gel SDS-PAGE sau tách chiết 57 lu Hình 4.2 Kết mổ khám gà mắc bệnh Newcastle 58 an n va Hình 4.3 Kết mổ khám gà mắc bệnh Newcastle 59 p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th viii si DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 4.1 Biến động hiệu giá kháng thể huyết gà lơ thí nghiệm (TN I, TN II) lô đối chứng 49 Biểu đồ 4.2 Hiệu giá kháng thể lịng đỏ trứng gà lơ thí nghiệm I, lơ gà thí nghiệm II lơ đối chứng 52 Biêu đồ 4.3 Hiệu giá kháng thể lòng đỏ trứng lơ gà thí nghiệm I lơ gà thí nghiệm II sau gây miễn dịch 53 Biểu đồ 4.4 So sánh hiệu giá kháng thể trung bình huyết lịng đỏ trứng gà lơ TN I sau gây miễn dịch 55 lu Biểu đồ 4.5 an So sánh hiệu giá kháng thể trung bình huyết n va lịng đỏ trứng gà lô TN II sau gây miễn dịch 56 p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th ix si Qua biểu đồ 4.5 4.6 cho thấy: - Khi gây miễn dịch cho gà đẻ lấy trứng để dùng nghiên cứu sản xuất chế phẩm kháng thể lòng đỏ, muốn kiểm tra HGKT lòng đỏ ta cần kiểm tra HGKT có huyết gà đẻ Kết có ý nghĩa việc nghiên cứu sản xuất chế phẩm lòng đỏ trứng gà gây miễn dịch - Mức độ biến động hàm lượng kháng thể Newcastle huyết lòng đỏ trứng gà lô TN I (tiêm thêm virus cường độc vô hoạt) TN II (không tiêm thêm virus cường độc vô hoạt) không nhiều Thông qua bảng 4.5 ta thấy: HGKTTB Newcastle huyết lịng đỏ trứng lơ lu TN I 10,92 log2 8,1 log2 Trong lô TN II tương ứng 10,68 log2 7,71 log2 Do vậy, ta không cần thiết tiêm thêm virus cường độc vô hoạt sau tiêm vaccine để làm tăng đáp ứng miễn dịch chống bệnh Newcastle gà nghiên cứu Tuy nhiên, cần tiến hành theo dõi khoảng thời an n va ie gh tn to gian lâu để đánh giá xác mức độ tăng lên hàm lượng kháng thể, tăng lên trì Để từ xác định hiệu việc tiêm virus cường độc vô hoạt định xem có nên sử p dụng nghiên cứu hay không d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu Biểu đồ 4.5 So sánh hiệu giá kháng thể trung bình huyết lịng đỏ trứng gà lơ TN II sau gây miễn dịch n va ac th 56 si 4.5 KẾT QUẢ TÁCH CHIẾT KHÁNG THỂ IgY Trứng gà sau gây miễn dịch thu hoạch tách chiết IgY Dịch kháng thể IgY sau tách chiết kiểm tra phương pháp điện di SDSPAGE kết điện di thể hình 4.1 200 IgY 120 100 lu an n va 50 p ie gh tn to d oa nl w 10 lu Lane : Maker, Lane 2-4: Sản phẩm tinh IgY pha lỗng lần - Lane 5-7: Lịng đỏ trứng pha loãng lần ll u nf va an - oi m z at nh Hình 4.1 Điện di kháng thể IgY gel SDS-PAGE sau tách chiết z Quan sát kết điện di mẫu kháng thể IgY hình 4.1 cho thấy: Điện di mẫu kháng thể IgY khơng biến tính sản phẩm IgY tinh Sản phẩm IgY trước sau tinh chế cho thấy: Tại giếng 2, 3, có băng dy có kích gm @ m co l thước khoảng 160-180 kDa (Schade et al., 2005) Giếng 5, 6, mẫu lịng đỏ trứng pha lỗng trước tinh hình ảnh điện di cho thấy mẫu cịn chứa nhiều loại protein khác lòng đỏ trứng Như kết chạy điện di protein cho thấy điện di khơng biến tính (Schade et al., 2005) kết qủa chạy an Lu điện di cho thấy dịch sau tách chiết có kháng thể IgY n va ac th 57 si 4.6 KHẢO SÁT ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ PHÒNG VÀ ĐIỀU TRỊ CỦA SẢN PHẨM KHÁNG THỂ IgY 4.6.1.Thông tin trại thử nghiệm Trong nghiên cứu chúng tơi thử nghiệm hiệu phịng trị bệnh Newcatsle chế phẩm IgY trại gà bị nhiễm bệnh Newcastle Thông tin trại gà thử nghiệm sau: Trại 1: - Chủ trại: Anh Hiền; Địa chỉ: Bình Xun, Vĩnh Phúc - Quy mơ trang trại: 10.000 gà thịt - Lịch tiêm vaccine: Gà tiêm vaccine Newcastle sống, chủng Lasota lu an vào lúc gà ngày tuổi n va tn to - Gà bị bệnh Newcastle lúc 22 ngày tuổi (ngày tháng năm 2019), cụ thể đàn có 43 gà xuất triệu chứng lâm sàng ăn/bỏ ăn, ủ rũ, xù lông, sã cánh, tiêu chảy phân xanh Kết mổ khám cho thấy xung huyết, p ie gh xuất huyết khí quản, dày tuyến xuất huyết (Hình 4.2) Kết chẩn đốn Phịng thí nghiệm trọng điểm Cơng nghệ sinh học thú y, Khoa thú y, Học viện d oa nl w Nông nghiệp Việt Nam cho thấy gà dương tính với bệnh Newcastle ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu Hình 4.2 Kết mổ khám gà mắc bệnh Newcastle n va ac th 58 si Traị 2: - Chủ trại: Trại gà Công ty cổ phần giống gia cầm Lương Mỹ; Địa chỉ: Chương Mỹ, Hà Nội - Quy mô trang trại: 30.000 gà thịt - Lịch tiêm vaccine: Gà tiêm vaccine Newcastle sống, chủng Lasota vào lúc gà ngày tuổi - Gà bị bệnh Newcastle lúc 20 ngày tuổi (ngày tháng 10 năm 2019), cụ thể đàn có 62 gà xuất triệu chứng lâm sàng giống trại (gà ăn/bỏ ăn, ủ rũ, xù lông, sã cánh, tiêu chảy phân xanh) Kết mổ khám cho thấy gà xung huyết, xuất huyết khí quản, dày tuyến xuất huyết (Hình 4.3) Kết lu chẩn đốn Phịng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ sinh học thú y, Khoa thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam cho thấy gà dương tính với bệnh Newcastle an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z l gm @ Hình 4.3 Kết mổ khám gà mắc bệnh Newcastle m co 4.6.2 Kết phòng trị bệnh Newcastle chế phẩm kháng thể IgY an Lu Bệnh Newcastle bệnh truyền nhiễm virus Newcastle gây có tỷ lệ lây lan nhanh, tỷ lệ chết cao, lây lan diện rộng Vì hiệu phịng trị bệnh Newcastle chế phẩm kháng thể IgY phụ thuộc nhiều n va ac th 59 si vào việc chẩn đoán phát bệnh sớm Thực tế phòng trị bệnh kháng thể cho thấy bệnh phát sớm hiệu phòng trị bệnh cao Trong nghiên cứu sau trại gà thịt chẩn đốn dương tính với bệnh Newcastle, tồn đàn gà tiêm chế phẩm kháng thể IgY Thông tin chi tiết chế phẩm kháng thể IgY thể bảng 4.6 Bảng 4.6 Thông tin chế phẩm kháng thể IgY dùng để phòng trị bệnh Newcastle THÀNH PHẦN: Trong 100ml có chứa kháng thể Newcastle, bao gồm: lu an - HGKT Newcastle (HI) ≥ log2 - Chất bổ trợ vừa đủ: 100 ml va n CÁCH DÙNG VÀ LIỀU LƯỢNG tn to Sử dụng theo đường tiêm bắp da gh Phòng bệnh: Tiêm hai lần, lần cách tuần p ie + Gia cầm 500 g: ml/con w + Gia cầm 500 g: 0,5 ml/con d oa nl Trị bệnh: Tiêm hai lần, cách 48 ml/con + Gia cầm 500 g: ml/con va an lu + Gia cầm 500 g: u nf Kết nghiên cứu bảng 4.7 cho thấy trước tiêm kháng thể trại ll có 43 gà bệnh (0,43%) tổng số 10.000 con, sau tiêm kháng thể có m oi 15/43 (34,88%) gà bị chết, số gà khỏi bệnh 28/43 (65,12%) Tương tự trại 2, z at nh trước tiêm kháng thể trại có 62 gà bệnh (0,21%) tổng số 30.000 con, sau tiêm kháng thể có 22/62 (35,48%) gà bị chết, số gà khỏi bệnh 40/62 z (64,52%) Kết nghiên cứu cho thấy sau tiêm kháng thể IgY, @ gm số gà bị bệnh Newcastle trước tiêm kháng thể, đàn gà không phát sinh l trường hợp bị bệnh Newcastle Như sau tiêm mũi kháng thể cho m co hai trại gà (mũi cách mũi 48h giờ), theo dõi đàn gà tuần, kết nghiên cứu thu cho thấy trại gà không phát sinh dịch Newcastle an Lu (Bảng 4.7) n va ac th 60 si Bảng 4.7 Kết phòng trị bệnh Newcastle chế phẩm kháng thể IgY Tình trạng trại gà sau tiêm kháng thể IgY Trại thử nghiệm Số lượng gà/trại Số gà có dấu hiệu lâm sàng Tỷ lệ % Trại (Gà thịt) 10.000 43 30.000 62 Trại lu (Gà thịt) Số gà chết Tỷ lệ % Số gà sống Tỷ lệ % 0,43 15 0,15 9.985 99,85 0,21 22 0,07 29.978 99,93 an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 61 si PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN HGKT Newcastle có huyết gà tăng lên sau tiêm vaccine Newcastle giảm dần theo thời gian Ở lô không tiêm cụ thể trước tiêm vaccine hiểu giá kháng thể trung bình huyết đạt 10,4 log2; 10,3 log2 10 log2 lô TN I, TN II lô đối chứng Sau tiêm hiểu giá lơ TN I tăng lên 11 log2 Ngược lại lơ TN II giảm cịn 10,3 log2 thứ 15 8,7 log2 lô đối chứng HGKT Newcastle có huyết tỉ lệ thuận với hiệu giá lòng đỏ trứng gà cụ thể là: lu an - Ở lô TN I hàm lượng kháng thể huyết tăng dần 10,8 log2 tuần thứ tăng lên 11 log2 tuần thứ 15, hiệu giá kháng thể lòng đỏ trứng đạt 7,33 n va p ie gh tn to log2 tuần tăng lên 8,67 log2 tuần 15 kể từ bắt đầu gây miễn dịch - Ở lô TN II hiệu giá kháng thể huyết lòng đỏ trứng 10,8 log2 log2 tuần thứ sau giảm dần theo thời gian, tuần thứ 15 hiệu giá kháng thể 10,3 log2 7,67 log2 Sản phẩm IgY sau tinh chế loại bỏ protein khác lòng đỏ w oa nl trứng chứa protein IgY d Chế phẩm kháng thể IgY đặc hiệu cho virus Newcastle cho thấy hiệu cao u nf va 5.2 KIẾN NGHỊ an lu phòng trị bệnh Newcastle đàn gà Trong nghiên cứu này, chưa đánh giá rõ ràng ảnh hưởng ll oi m trình gây miễn dịch tới tỷ lệ đẻ đàn gà thí nghiệm Do vậy, cần thử nghiệm nghiên cứu quy mô đàn lớn để xác định trình gây miễn dịch cho gà vaccine Nobilis Cor 4+ IB+ ND+ EDS có ảnh hưởng đến tỷ lệ đẻ z at nh gà nào, mức độ ảnh hưởng nhiều hay z gm @ Cần tiến hành giám sát theo dõi đánh giá biến động kháng thể huyết lòng đỏ trứng dài để đánh giá hàm lượng kháng thể l huyết lòng đỏ trứng đạt cao nhất, giảm Để từ xác m co định thời gian thu trứng để làm sở cho việc nghiên cứu sản xuất chế phẩm góp an Lu phần làm nâng cao chất lượng hiệu lực chế phẩm, đồng thời xác định thời gian gây miễn dịch cho đợt sau để giảm chi phí sản xuất, hạ giá thành sảm phẩm n va ac th 62 si TÀI LIÊU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng Việt: Bộ Nông Nghiệp phát triển nông thôn (2011) Quyết định Bộ Nông nghiệp phát triển nông thôn số 5/2011/BNNPTNT ban hành ngày 24/1/2011 thông tư hướng dẫn biện pháp phịng chống bệnh Newcastle gia cầm Bộ Nơng Nghiệp Phát triển Nông thôn (2006) 10 TCN - Qui trình chẩn đốn bệnh cúm gia cầm Nguyễn Bá Huệ, Nguyễn Thu Hồng Trần Thị Hường (1978) Các chủng virus cường độc Newcastle gây vụ dịch lớn xí nghiệp nước ta lu hướng dẫn phòng bệnh Kết nghiên cứu KHKT Thú Y (1968-1978) NXB an Nông nghiệp, Hà Nội Tr 19-30 va Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Bá Hiên Trần Thị Lan Hương (2001) Vi sinh vật n tn to thú y, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Bá Hiên Trần Thị Lan Hương (2010) Giáo trình miễn dịch học thú y ie gh Nguyễn Bá Hiên Trần Thị Lan Hương (2010) Giáo trình miễn dịch học ứng p NXB Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Bá Hiên, Nguyễn Quốc Doanh, Phạm Sỹ Lăng, Nguyễn Thị Kim Thành oa nl w dụng NXB Nơng nghiệp, Hà Nội d Chu Đình Tới (2008) Vi sinh vật- Bệnh truyền nhiễm vật nuôi NXB Giáo an Nguyễn Bá Hiên, Huỳnh Thị Mỹ Lệ, Lê Văn Lãnh Đỗ Ngọc Thúy (2012) va lu dục, Hà Nội Phan Văn Lục (1994) Một số đăc điểm dịch tễ bệnh Newcastle lịch vaccine ll u nf Giáo trình bệnh truyền nhiễm thú y NXB Nơng nghiệp, Hà Nội m oi phịng bệnh thích hợp cho sở chăn nuôi gà công nghiệp, Luận án PTS khoa 10 z at nh nông nghiệp, Viện KHKT Nông nghiệp Việt Nam Tiêu Chuẩn Quốc Gia TCVN 8400-4:2010 xuất lần 1, Bệnh động vật- Quy @ Trần Đình Từ, (1979-1984) Nghiên cứu xác định độc lực chủng virus vaccine gm 11 z trình chẩn đốn- Phần 4: Bệnh Newcastle Thú Y Nhà xuất Nông Nghiệp, Hà Nội tr.119-146 12 m co l Newcastle sử dụng Việt Nam (năm 1995) Kết nghiên cứu KHKT Tống Minh Phương, Hồng Thị Bích Nguyễn Thị Hương (2016) Khả sản Khoa Học, Trường Đại học Hồng Đức (30) an Lu xuất trứng gà Isa Brown Ai Cập nuôi Yên Định, Thanh Hóa Tạp chí n va ac th 63 si II Tài liệu tiếng Anh: Abdelfatah, J Fisheries Livest Prod 2016 Building of Immune System in Poultry Chick for the Development Future Poultry Industry Acha, P N., and B Szyfres 1987 Zoonoses and communicable diseases common to man and animals 2nd ed Washington, D C.: Pan American Health Organization, Pan American Sanitary Bureau, Regional Office of the World Health Organization Akita, E and S Nakai (1992) “Immunoglobulins from egg yolk: isolation and purification.” Journal of food science 57(3).pp 629-634 Al-Natour, M Q., L A Ward, Y M Saif, B Stewart, and L D Keck, 2004 Effect of different levels of maternally derived antibodies on protection against infectious bursal disease virus Avian Dis 48.pp.177-182 lu an Alders R, Spradbrow P (2001) Controlling Newcastle disease in village chickens: va a field manual Autralian Center for International Agricultural Research (ACIAR) n Alexander DJ (1988) Newcastle disease: Methods of spread Newcastle disease to tn Boston, Kluwer Acad Pub pp 1-10 Alexander DJ (2001) Gord Memorial Lecture Newcastle disease Br Poult Sci 42 pp 5-22 Alexander DJ (2003) Newcastle disease, other Paramyxoviridae and Pneumovirus p ie gh Allan, W.H., Lancaster, J.E and Toth, B (1978) Newcastle Disease Vaccine- oa nl w Infections In; Disease of Poultry 11th edn Iowa State press, Ames d Ther Production and Use Animal Production and Heath Series No.10, Food and lu 10 va an Agriculture organization of the United Nationals, Rome 1978 Ashraf A, Shah MS (2014) Newcastle disease: Present status and future u nf challenges for developing countries African J Microbiol Res 8.pp 411-416 ll Beaudette and F R Bivins J A and Miller B R (1949) Newcastle disease oi m 11 12 z at nh immunization with live virus Corell Vet pp 302-304 Beard CW, Hanson RP (1984) Newcastle disease In Hofstad Ms, Barnes HJ, Calnek BW, Reid WM & Yoder HW (Eds.), Disease of Poultry pp 450-470 z Brambell, F W R 1970 Transmission of immunity in birds pp 20-41 in gm 13 @ Iowa State University Press, Ames and E L Tatum, ed Elsevier, New York, NY Brulbule NR, Madale DS, Mesharm CD, Pardeshi RB and Chawal MM (2015) an Lu 14 m co l Transmission of Passive Immunity from Mother to Young Vol 18 A Neuberger Virulence of Newcastle disease virus and diagnostic challenges n va ac th 64 si 15 Burnet, F M., 1942 The Affinity of Newcastle Disease Virus to the Influenza Virus Group Australian Journal of Experimental Biology & Medical Science 20(2) 16 Cattoli G, Susta L, Teregino C, Brown C (2011) Newcastle disease review of field recognition and current methods of laboratory detection J Vet Diagn Invest 17 Center for food security and public health (CFSPH) (2016) IOWA State University College of Veterinary Medicine Newcastle Disease Avian Paramyxovirus-1 Infection, Goos Paramyxovirus infection, Ranikhet disease 18 Cutting, J A., and T F Roth 1973 Changes in specific sequestration of protein during transport into the developing oocyte of the chicken Biochim Biophys Acta 298 pp 951-955 19 Diagnosis and Control Technique of Newcastle Disease.Nesradin Yune and lu Nejash Abdela (2017) Update on Epidemology an n va 20 Doyle, T.M 1935 Newcastle disease of fowls J Comp Pathol Therap 48.pp.1-20 21 HYPERLINK uthor=true&cauthor_uid=24589707" Ganar K, HYPERLINK "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Das%20M%5BAuthor%5D&caut ie gh tn to "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Ganar%20K%5BAuthor%5D&ca Das p hor=true&cauthor_uid=24589707" M, HYPERLINK nl w "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Sinha%20S%5BAuthor%5D&caut Sinha oa hor=true&cauthor_uid=24589707" S, HYPERLINK d "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Kumar%20S%5BAuthor%5D&ca lu an uthor=true&cauthor_uid=24589707" Kumar S ( 2014) Newcastle disease virus: Grindstaff, J L., E D Brodie III, and D K Ellen 2003 Immune function across u nf 22 va current status and our understanding ll generations: Integrating mechanism and evolutionary process in maternal m oi antibody transmission Proc Biol Sci 270.pp 2309-2319 Hebert Trenchi, Montevideo, Uruguay Immunology and Disease Prevention in Poultry z at nh 23 Https://igygate.vn-/cong-nghe-va-quy-trinh-san-xuat-igy-467/ 25 Kaleta, EF and Baldauf, C., 1988 Newcastle disease in free birds and pets In: DJ z 24 gm @ l Alexander (editor), Newcastle Disease, (Kluwer Academic Publishing House, 26 m co Boston, USA).pp.197-246 Klemperer, F (1893) Ueber natürliche Immunitätund ihre Verwerthung für die an Lu Immunisirung-stherapie Archiv für Experimentelle Pathologieund Pharmakolo – gie 31.pp 356-382 n va ac th 65 si 27 Kowalczyk, K., J Daiss, J Halpern, and T F Roth 1985 Quantitation of maternal-fetal IgG transport in the chicken Immunology 54.pp.755-762 28 Kramer, T T., and H C Cho 1970 Transfer of immunoglobulins and antibodies in the hens egg Immunology 19.pp 157-167 29 Laemmli, U K (1970) “Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4.” Nature 227.pp 680-685 30 Lancaster J E (1966) Newcastle disease-a review 1926-1964 Monogr No Can Dep Agric Ottawa 31 Lancaster J E and Alexander D.J (1975) Newcastle dissease: virus and spread Monogr No11 Can Dep Agric Ottawa 32 Leslie, G A., and W L Clem 1969 Phylogeny of immunoglobulin structure and lu function Immunoglobulins of the chicken J Exp Med 130.pp.1337-1352 an n va 33 Levine, B B., and Price, V H (1964) Immunology 7.pp 542 34 Loeken, M R., and T F Roth 1983 Analysis of maternal IgG subpopulations tn to which are transported into the chicken oocyte Immunology 49.pp 21-28 Lorna Timms, DJ Alexander Cell-mediated immune response of chickens to Newcastle disease vaccine ie gh 35 MacPherson, L.W 1956 Some observations on the epi-zootiology of Newcastle p 36 MARGARET Tisdale, P Ertl, Ba Larder, DJ Purifoy, G Darby, KL Powell 1988 oa 37 nl w disease Canadian Journal of Comparative Medicine 10.pp 55-168 d Characterization of human immunodeficiency virus type reverse transcriptase lu an by using monoclonal antibodies: role of the C terminus in antibody reactivity and Mayo MA (2002) A summary of taxonomic changes recently approved by ICTV m Narat, M (2003) “production of antibodies in chickens.” Food Technology and oi 39 ll Arch Virol pp.147 u nf 38 va enzyme function Journal of virology 62 (10) pp 3662-3667 z at nh Biotechnology 41(3).pp 259-267 Newcastle disease: an overview and Appendix - FAO 41 OIE Terestrial Manual 2012 Chapter 2.3.14 Newcastle disease ( infection with z 40 gm J E Pearson, D A Senne, D J Alexander, W D Taylor, L A Peterson and P l 42 @ Newcastle disease virus).pp.555-569 m co H Russell Avian Diseases Characterization of Newcastle Disease Virus (Avian Paramyxovirus-1) Isolated from Pigeons Vol 31, No (Jan - Mar., 1987) 43 PLAN AVE (2010) Disease Stratery Newcastle disease an Lu pp 105-111 n va ac th 66 si 44 Rose, M E., E Orlans, and N Buttress 1974 Immunoglobulin classes in the hen’s egg: Their segregation in yolk and white Eur J Immunol pp 521-523 45 Staak, C (1995) Dourine-ELISA In Proceedings of an Ad Hoc Working Group, pp 5-6 Paris, France: NTTAT, OIE 46 Schade, R., E G Calzado, R Sarmiento, P.A Chacana, J Porankiewicz-Asplund and H R Terzolo (2005) “Chicken egg yolk antibodies (IgY-technology): a review of progress in production and use in research and human and veterinary medicine.” Altern Lab Anim 33(2) pp.129-154 47 Sharaway (1994), Common diseases of quail, Quail production Systems areview by M Sharaway food and Agriculture Organization of the Unite Nation, Rom pp 890-901 94 lu 48 Zhang, W.-W (2003) “The use of gene-specific IgY antibodies for drug target an discovery.” Drug Discovery Today 8(8) pp 364-371 n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 67 si PHỤ LỤC Phụ lục Quy trình phịng bệnh vaccine cho gà thí nghiệm Tên vaccine Phòng bệnh Cách tiêm ngừa 01 Marek Marek Tiêm da 05 ND - IB Newcastle + VPQTN Nhỏ mắt/ uống 07 Gum + Đậu Gumboro + Đậu Nhỏ mắt 18 Gum + Nemovac Gumboro + Sưng phù đầu vi khuẩn Nhỏ mắt 28 CGC H5N1 CGC Tiêm cơ/ Tiêm da cổ 35 Haemovac Sổ mũi truyền nhiễm vi khuẩn Tiêm bắp 42 ILT Viêm TKQTN Nhỏ mắt Nemovac Sưng phù đầu vi khuẩn Uống Galimun SE Thương hàn gà Tiêm Fencare Tẩy giun Trộn thức ăn/ uống ND Emusion Newcastle Tiêm cơ/ Tiêm da IB88 VPQTN Nhỏ mắt 70 ILT Viêm TKQTN Nhỏ mắt 75 Haemovac 82 lu Ngày tuổi an n va p ie gh tn to d oa 48 nl w 45 ll oi m 62 u nf 55 va an lu 50 z at nh Tiêm Galimun SE Thương hàn gà Tiêm 105 CGC H5N1 CGC 110 Fencare Tẩy giun z Sổ mũi truyền nhiễm @ Trộn thức ăn/ uống m co l gm Tiêm cơ/ Tiêm da cổ an Lu n va ac th 68 si Phụ lục Hình ảnh đàn gà thí nghiệm lu an n va p ie gh tn to Phụ lục Hình ảnh đệm chạy điện di d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 69 si Phụ lục Hình ảnh chạy điện di protein lu an n va p ie gh tn to d oa nl w Phụ lục Hình ảnh lịng đỏ tinh khiết kháng thể IgY ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 70 si