Nghiên cứu đánh giá tương đương sinh học viên nang helinzole omeprazol 20mg theo mô hình đơn liều kết hợp đa liều

Trang 1

BỘ Y TẾ

VIỆN KIỂM NGHIỆM THUỐC

BAO CÁO TONG KET DE TAI CAP BO

NGHIÊN CỨU DANH GIÁ TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC VIEN NANG HELINZOLE (OMEPRAZOL 20G)

THEO MO HINH DON LIEU KET HOP DA LIEU

Chủ nhiệm đẻ tài: TS PHÙNG THỊ VINH

6724 28/01/2008

Trang 2

BÁO CÁO KÉT QUÁ NGHIÊN CỨU ĐÈ TÀI CÁP BỘ

Tên để tai:

NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ

TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC VIÊN NANG

HELINZOLE (Omeprazol 20mg)

THEO MO HINH DON LIEU KET HOP BA LIEU

Chủ nhiệm đề tài: TS Phùng Thị Vinh Đồng chủ nhiệm: PGS.TS Trịnh Văn Lau

Cơ quan chủ trì: Viện Kiểm nghiệm thuốc TW, Bộ Y tế

Mã số dé tai: VKN 05 TC 01

HÀ NỘI - 2007

Trang 3

BOY TE

BAO CÁO KÉT QUÁ NGHIÊN CỨU ĐÈ TÀI CÁP BỘ

Tên đề tài:

NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ

TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC VIÊN NANG

HELINZOLE (Omeprazol 20mg)

THEO MO HINH DON LIEU KET HOP BA LIEU

Chủ nhiệm đề tài: TS Phùng Thị Vinh Đồng chủ nhiệm: PGS.TS Trịnh Văn Lâu

Cơ quan chủ trì: Viện Kiêm nghiệm thuốc TW, Bộ Y tế Cấp quản lý: Bộ Y tế

Ma sé: VKN 05 TC 01

Thời gian thực hiện: Từ tháng 01/ 2005 đền tháng 12/ 2007 Téng kinh phí thực hiện đề tài 400 triệu đồng

Trong đố: kinh phí sự nghiệp: 350 triệu đồng Nguồn khác: 50 triệu đồng

HÀ NỘI - 2007

Trang 4

BAO CAO KETQUA -

NGHIEN CUU DE TAI CAP BO

1 Tên đề tài: Nghiên cứu đánh giá tương đương sinh học viên nang Helinzole (omeprazol 20mg) theo mơ hình đon liều kết họp đa liều

2 Chủ nhiệm đề tài: TS Phùng Thị Vinh

3 Cơ quan chủ trì đề tài: Viện Kiểm nghiệm thuốc TW, Bộ Y tế Địa chỉ: 48 - Hai Bà Trưng, Hà Nội

Điện thoại: (84 4) 9 363 114 Fax: (84-4) 8 356 911 4 Cơ quan quản lý: Bộ Y tế

Trang 5

MỤC LỤC STT Nội dung Sẽ tran;

PHAN A: TOM TAT CAC KET QUA TOMTAT CUA DE TAI 1 as Kết quả nỗi bật của đề tài + a Đĩng gĩp mới của đề tà 1

b, Hiệu quả cụ thể 1

c, Hiện quả về đào tạo 2

đ, Hiệu quả về kinh tế 3

e, Hiện quả về xã hội 3

Ê, Các hiện quả khác 3

a ‘Ap dụng vào thực tiễn sẵn xuất và đời sống xã hội 3

3 Đánh giá thực hiện để tài đối chiếu với đề cương nghiên cứu đã| 4 được phê đuyệt

a, Tiên độ 4

b, Thực hiện mục liễu nghiên cứu 3

©, Cac sản phẩm lạo ra so với đự kiến của đề cương 3

4, Đánh giá việc sử dụng kinh phí 4

4 Các ý kiến đề xuất 4

PHAN B: NOI DUNG BAO CAO CHI TIET KET QUÁ NGHIÊN CỨU 5

ĐỂ TÀI CÁP BỘ,

1 DAT VANDE 5

11 [Tinh edp thidt cha dt 5

12 Giả thiết nghiên cứu của đề tài 6

13 |Muctiéunghién cứu 6

# TONG QUAN DE TAT Ỹ

21 [Tãnh hình nghiên cứu ngồi nước liên quan đến đề tài 7

21.1 | Tổng quan về omeprazol 7

212 [Phương pháp phân tích 8

2.12 [Nghiên cứu sinh khả đụng và tương đương sinh hoc 1

22 Tình hình nghiên cứu trong nước liên quan đến đề tài 13 3 ĐỐI TUGNG VA PHUGNG PHAP NGHIENCUU 16

Trang 6

34 TThiếtkếnghiên cứu 16 3.11 [Nghiên cfm in vitro 15

3.12 [Nghiên cfu in vivo 16

32 | Déitugng va điều kiện nghiên cứu 16

3.21 | Thuốc nghiên cứu 16

3⁄22 | Thiếtbi, dụng mơi, hố chất 1

33 — [Phương pháp nghiên cứu 17

3⁄31 [Khảo sát độ hồ tan in vitro 1

3.3.2 | Xây dựng phương pháp phân tích omeprazol trong huyết tương 18

3/33 | Đánh giá tương đương sinh học in vive 18

34 — [Xây đựng qui tink 2

4 KẾT QUÁ NGHIÊN CỨU 2

41 [Khảo sátđộhồtan nviro 2

4-11 | Thủ độ hịa tan trong mơi trường ph 4,5 và 1,2 2

4.12 | Thử độ hịa tan trong mơi trường pH 6,8 25

42 — | Xây dựng phương pháp phân tích omeprazol trong huyết trong 26

421_| Kay dng phwong phap 26

422 | Thâm định phương pháp phân tích 28

43 — | Nghiên cứu đánh giá tương đương sinh hgc in vivo 35

43.1 |Kết quả buyễn chọn người tình nguyên 35

43.2 |Kếtquảnghiên cứu thăm đỏ, 37

43.3 | Mahdava phan nhém nguti ình nguyện 37

43.4 | Quatrinh lay mẫu và đánh giá độ an tồn 38

43:5 | Xác định nơng độ thuốc trong huyết tương 38 43.6 | Phan tich được động học và đánh giá tương đương sinh học 4

Trang 7

44 — TXây đựng qui tink 50 444.1 [Lựa chọn cố mẫu thử 50 442 | Xây đụng qui trình thử 31 5 BANLUAN 5 51 |Thửnghiệmin viro 52 52 — [Phương pháp phântích 52 53 — | Tham dink phwong pháp phân tích 55 54 — |Thửnghiệmin vivo 53 6 KẾT LUẬN 58 6 TAILIEU THAMKHAO s0 7 PHU LUC %

DANH MUC CAC BANG KET QUA

% một số phucong phdp kiém nghiém omeprazol trong chế phẩm

Bang 2.1 Tom

Bảng 2.2: Tám tắt một số phương pháp phân tích omeprazol trong dịch sinh học

Bảng 2.3 Một số chế phẩm emeprazol đăng lum hành ở Việt nam:

Bang 3.1: kế hoạch tống thuấc và lẫy mẫu

Bằng 4.1 Kết quả thử độ hod tan vien nang Helinzole va Lomac trong méi truéng pH 1,2 và pH 4,5 sau 2 giờ

Bằng 4.2 Kết quả thử độ hồ tan viên nang Helinzole trong méi trường pH 6,8 Bằng 4.3 Kết quả thử độ hồ tan viên nang 1omae trong mơi truéng pH 6,8

Bằng 4.4 Sự phụ thuậc giữa tỷ lệ diện tích pic của chuẩn/ chuẪn nội và nâng độ

Omeprazol chuẩn pha trong huyết tương

Bang 4.5 Két quả xác định giới hạn định lượng dưới

Bảng 4.6 Kết quả khảo sát độ lặp lại trong ngày Bảng 4 7 kết quả khảo sát độ lặp lại giữa các ngày

Bảng 4.8 Kết quả đánh giá hiệu suất chiết

Bang 4.9 Kết quả đánh giá hiệu suất chiết Albendazol ra khỏi huyết krơng

Bảng 4.10 Kết quả nghiên cứu độ ẫn định sau 3 chủ kỳ đơng — rấ

ormeprazol ra khỏi huyết tương

Bang 4.11 Kết quả nghiên cứu độ ẫn định dài ngày

Bảng 4.12: Kết quả độ ân định của chuẩn và chuẩn nội gắc ở nhiệt độ phịng

Bảng 4.13: kết quả nghiên cứa ơn định của chuẩn và chuẪn nội gốc trong thời gian

Trang 8

Bảng 4.14: Kết quả xét nghiệm huyết học và sinh hố của người tình nguyện Bảng 4.15: kết quả khám lâm sằng người tình nguyện

Bang 4.16: Kết quả thăm dè thơng số được động học trên 3 NTN Bang 4.17: Bắ trí nồng thuấc và lấy mẫu máu

Bảng 4.18: Mơng độ omeprazol trong huyết tương của từng MTN sau khi uống liễu

đơn thuấc thử Helinzole

Bang 4.19: Nơng độ omeprazol trong luuyết tương của từng MTM sau khu uỗng 6 liễu

thude thir Helinzole

Bảng 4.20: Nơng độ omeprazol trong huyết trơng của từng NTN sau khi uỗng liều

don thudc ching Lomac

Bang 4.21: Wéng 43 omeprazol trong huyét tuong ctia từng NTN sau khi uống 6 liễu,

thuậc chứng Lomac

Bảng 4.22 Thơng số dược động học Cmax của người tình nguyện sau khi uống liều

đơn và uắng liên tục trong 6 ngày (na = 18)

Bằng 4.23: Phân tích phương sai giá trị lagarit Cmax khi dùng liều đơn Bang 4.24: Phân tích phương sai giá trị lagarit Cmax sau khi dùng Ø liễu

Bảng 4.25 Thơng số được động học AUCạa trung bình của người tình nguyện sau khi dùng liêu Äơn và 6 ngày liên tục (a = 18)

Bang 4.26: Phan tích phương sai giá trị lagart AC, khi dùng liều đơn

Bang 4.27: Phan tich plucong sai gid tr logarit AUCp sau khủ dùng 6 liều Bang 4.28: So sdnh gid tri Tmax saw khi ding liéu don

Bang 4.29: So sánh giá trị Tmax sau khi dùng thuắc liên tục 6 liễu Bảng 4.30 Phân tích phương sai Cmax khi uống ¡ liễu

Bảng 4.31: Phân tích phương sai Cma khi nồng ở liều Bảng 4.32: Phân tích phương sai AUC khiudng ¡ liễu Bang 4.33: Phân tích phương sai AUC kh uỗng 6 liễu

Bang 5.1: Thơng số dược động học trung bình sau khi dùng 1 liễu và ø liều

Bảng 6.1: Thơng số dược động học trang bình sau khi dùng viên nang omeprazol

Trang 9

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỎ THỊ

Hình 4.1: Phỗ UV của chuẩn omeprazol trong mơi trường acid sau 30 phút Hình 4.2 : Qui trình xử lý mẫu huyết tương

Hình 4.3 Sắc ký đề Huyết tương trắng (4) và huyết tương trắng cĩ pha chudn và

chuẩn nội (b)

Tình 4.4: Đường biểu diễn sự phụ thuậc của tÿ lệ diện tích pic chuẫnchuẩn nội

theo nơng độ Omeprazol chuẩn pha trong huyết tương

Hinh 4.5: Đường cong nâng độ thuốc trung bình trong luuết tương - thời gian của 18 NTN sau khi wong liéu don Helinzale va Lomac

c 6 thude trung bình trong luuyết tương - thời gian của

18 MTN sau khi uỗng thuấc liên tục ư liều Helinzole va Lomac

DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC:

-_ Phụ lục ]: Đề cương nghiên cứu, mẫu bản cam kết, Bản chấp thuận của Hội

đồng đạo đức

~_ Phụ lục 2: Qui tình phân tích emeprazol trong huyết tương

~_ Phụ lục 3: Qui tình đánh giá brơng đương sinh học viÊn nang omeprazol bao tan trong ruột

Trang 10

CÁC CHỮ VIẾT TẮT

Chữ viết tắt Nội dung

‘AUG Điện tích đưới đường cong

Cmax Tằng độ thuốc tơi đa or He <6 biển thiên DET Độ hồ lan GCP Thực hành lâm sàng tốt GLP Thực hành phịng thí nghiệm tốt Mech ‘Aeetonital MeOH “Methanol NIN ‘Ngwoi fink nguyén SD Độ lệch chuẩn SKD Sinh khả dụng, Tự Thời gian bán thải TP Trung bình

TDSH Tương đương sinh học

Tmax Thời gian đạt nồng độ thuốc tối đa

TW Trung ương

US-FDA Cơ quan Quản lý thuốc -thực phẩm Mỹ

USP Dược điện Mỹ

VENTTW Tiện Kiểm nghiệm thuộc trung ương, WHO Tế chức y tế thể giới

Trang 11

PHẢN A: TĨM TẮT CÁC KÉT QUẢ NĨI BẬT CỦA ĐẺ TẢI

1.Kết quả nỗi bật của đề tài

a Đĩng gĩp mới của để tài

- Đề tài đã thực hiện nghiên cứu so sánh để xác định mơ hình đánh giá tương, đương sinh học cho các chế phẩm cĩ chứa cmeprazol Kết quả nghiên cứu đưa ra bằng chứng để khuyến cáo các nhà khoa học lựa chọn mơ hình thích hợp, thu được kết quả tin cây và giảm thiểu những chỉ phí khơng cần thiết

- Phương pháp đánh giá brơng đương độ hồ tan khơng phủ hợp với loại chế phẩm viên nang cĩ chứa omeprazol dạng hạt bao tan trong một nĩi riêng và các chế phẩm cĩ chứa omeprazol nĩi chung, đo orneprazol khơng bên trong mơi trường acid Do vậy, khơng thể cĩ đủ dữ liệu so sánh độ hồ tan trong 3 mơi trường theo hướng,

dẫn của Tổ chức Y tế Thế giới WHO) hoặc Cơ quan Quản lý Thuốc và Thực phẩm

Mg (FDA) khi cin xem xét để miễn đánh giá tương đương sinh hoc (TDSH) in vivo

- Kết quả thử nghiêm invivo cho thấy những nghiên cứu sinh khả dụng (KD) và TĐSH cho chế phẩm cĩ chứa omeprazol nên thiết kế đánh giá sau khi dùng 5 - 6 liều, nhưng xử lý kết quả như đơn liễu

b, Kết quả cụ thể

- Kết quả nghiên cứu in vitro: Đã khảo sát mức độ hồ tan của chế phẩm Helinzole so với chế phẩm ngoại nhap (Lomac) trong 3 mdi trường pH đặc trưng

của đường tiêu hố (12 - dạ đày, 4,5 — lá tràng và 6,8 - một non), Lượng hồ tan trong vịng 2 giờ ở 2 mơi trường: ở pH 1,2, Helinzole hồ tan ít hon Lomac (6,5% so với 10,790), trong khi đĩ ở pH 4,5 thì Helinzole lại hịa tan nhiều hơn (52,94 so với

42,2⁄4) Trong mơi trường ruột non (pH 6,8), Helinzole cĩ phần hịa tan nhanh hơn

Lomac Ké quả so sánh quá trình hịa tan cho hệ số F; = 47,6 (khơng tương tự)

- Kết quả nghiên cứu in vivo: Thié kế nghiên cứu đã thực hiện đánh giá so sánh sinh khả dụng của chế phẩm Tielinzole sau khi uống đơn liễu (1 vién 20mg) va sau khi uống thuốc liên tục 6 liều điều 1 viên 20mg/ ngày)

+ Sau khi uống đơn liều, nồng độ thuốc tối đa trong máu trung bình

(Cmax) cũng như điện tích đưới đường cong (AUC) của Helinzole cao hơn thuốc chứng là Lomae Tuy nhiên, thời gian đạt đến nơng độ thuốc tối da cham hon kết quả so sánh cho thấy 2 chế phẩm này khơng tương đương sinh học

- + Sau khi uống thuốc liên tuc 6 liễu, các thơng số được động học của 2 thuốc tương tự nhau Kết quả so sánh qua đánh giá thống kê cho thấy 2 chế phẩm này tương đương sinh học

Trang 12

Bằng 1.1 Tĩm tắt các thơng số được động học sau thử nghiệm in vive (n=18)

ona, Cmax (agim) | AUC @ggiom) Tmax (giờ) Chế phẩm liều | 6iiều | liêu | 6iều | liều | 6iữu THỦ GIỦU 520 768 1056 1793 23 19 Gelinzole Thuộc đổi chứng | ¿vị Gomac 754 815 1889 1,6 13 Ket qua so sánh : 93- | 969- | 1087- |1 - mức tương đường | 122 4w | 115,99 | 1593 |1246% | P S005 |P> 0,05 đhử/ chứn,

Hai chế phẩm khơng tương đương sinh học sau khi dùng liều đơn, rhưng tương đương sinh học theo qui định của U8 ~ EDA sau khi đùng liên tục 6 liền trong 6

ngày

- Xây dựng được qui trình phân tích omeprazol trong huyết tương và qui trình chung cho đánh giá TĐ8H các chế phẩm viên nang cĩ chứa omeprazol đạng hạt bao tan trong ruột Qui trình đơn giản và khả thi với điền kiện trang thiết bị hiện cĩ của

một số trung tâm đánh gid TDSH trong nước

¢, Hiéu quả về đào tạo

- Đánh giá tương đương sinh học của thuốc là một nội dung hoạt đơng chuyên mơn mới của Viện Kiểm nghiêm Hầu hết các cán bộ chưa được đào tạo và chưa cĩ kinh nghiệm trong lĩnh vực này Do vậy, đề tài nghiên cứu này đã tạo cơ hội cho một số cán bộ của Viện tiếp cận và thực hiện một nghiên cứu đánh giá tương đương sinh học tương đối hồn chỉnh Nhờ đĩ, tạo nguồn nhân lực cho việc thành lập Trung tâm đánh giá tương đương sinh học của V iện (3/2007)

- Cung cấp tư liệu và kinh nghiệm cho một số cán bộ của V iện thực hiện lớp

tập huấn về TĐSH theo yêu cầu của Tổ chức Y tế Thế giới (11/ 2007)

- Kết hợp với cơ sở đào tạo (Học viên Quân y) để đào tao cán bộ sau đại học Đã cĩ 2 Thạc sĩ tốt nghiệp với luận văn thuộc nội dung cia dé tài này Cả hai luận văn đều được đánh giá xuất sắc và đạt điểm giỏi (> 9 điểm)

+ Ths Bui Bằng Giang với luận văn: Khảo sát độ hồ tan viên nang Helineale và xây dựng phương pháp phân tích omeprazdl trang dịch sinh học Người hướng dẫn: T8 Phùng Thị Vinh

+ Ths Quách Thị Hà Vân với luận văn: Nghiên ca sinh khả đựng và đánh giá tương đương sink hoc viên nang omeprazol theo mơ hùnh đơn liều

đa liễu Người hướng din: PGS.TS Trinh Van Lau

Trang 13

ä, Hiệu quả về kinh tế

Đề tài phối hợp với Cơng ty TNHH được phẩm Đơ Thanh (SPM) dé đánh giá

tương đương sinh học cho chính sản phẩm của cơng ty so với một chế phẩm ngoại nhập Kết quả thử nghiệm đã được cơng ty xem xét và đưa vào chiến lược quảng bá sản phẩm Bên cạnh đĩ, kết quả này cũng đã giúp cơng ty khẳng định nguồn nguyên liệu chất lượng và tin cây để duy trì sản xuất lâu dài

Ất quả nghiên cứu cung cấp thêm các thơng tin khoa học cũng như lời khuyến cáo cho các nhà khoa học khi thực hiện nghiên cứu đánh giá tương đương sinh học các chế phẩm cĩ chứa omeprazol về phương pháp phân tích cũng như mmơ hình thử nghiêm hoặc thiết kế các thời điểm lầy mẫu Nhờ đĩ, cĩ thể hạn chế được một số thử nghiệm sai lệch hoặc thử nghiệm thăm đị khơng cần thiết

ø, Hiệu quả về xã hội

Kết quả đánh gia TDSH cho viên nang Helinzole giúp cho người dân thấy

được chất lượng thực của các sản phẩm thuốc sản xuất trong nước cũng cĩ thể so sánh được với chế phẩm ngoại nhập Nhờ đĩ, người dân cĩ thêm niềm tin, chọn lựa sử dụng các sản phẩm nội địa đẻ hơn), giảm chỉ phí tiền thuốc và là niềm khích lệ cho các nhà sẵn xuất được phẩm trong nước tự tin hơn với sản phẩm của mình

2 Các hiệu quả khác

Việc thực hiện thành cơng đề tài nghiên cứu đánh giá TĐ8H hương đối phức tạp trong điều kiên một phịng thí nghiệm của Việt Nam thời gian qua đã gĩp phần

nao “khuấy động” ngành Dược Việt Nam quan tâm tới TĐSH Cuối năm 2006, và năm 2007, nhiều doanh nghiệp được trong nước đã sẵn sàng hưởng ứng, cĩ nhu cầu

đánh giá TĐ8H cho các sản phẩm của rnnh (mặc dù đã được phép lưu hành), Sự canh tranh lành rnanh hơn về chất lượng và thương hiệu đang diễn ra Cũng nhờ vậy, cơ quan kỹ thuật (ác labo đánh giá TĐ8H) thấy rõ hơn nhu cầu cơ sở vật chất, trang thiết bị, dụng cụ chuyên dùng cho lĩnh vực nghiên cứu mới này, làm cơ sở cho việc xây dựng dự án phát triển các Trung tâm đánh giá TĐ8H Cơ quan quản lý (Cục

Quản lý Dược, Vụ Khoa học đào Vụ Kế hoạch tài chính) biết rõ hơn về năng

lực nghiên cứu và những nhu cầu về đào tạo cán bộ, nhu cầu kinh phí, thời gian cho các hoạt động này

2 Áp đụng vào thực tiễn sẵn xuất và đời sống xã hội

Trang 14

3 Đánh giá thực hiện dé tài đối chiếu với đề cương nghiên cứu đã được phê duyệt a, Tiến độ - Đúng tiến độ - Rút ngắn thời gian nghiên cứu - Tổng số thời gian rút ngắn tháng, - Kéo dài thời gian nghiên cứu lol=l=|*x+

b, Thực hiện mục tiêu nghiên cứu

- Thực hiện đầy đủ các mục tiêu đề ra

- Thực hiện được các mục tiêu nhưng khơng hồn chỉnh - Chỉ thực hiện được một số rnục tiêu đề ra

- Những mục tiêu khơng thực hiện được ololo|x

©, Các sản phẩm tạo ra so với dự kiến của đề cương

- Tạo ra đầy đủ các sản phẩm dự kiến trong để cương

- Chất lượng sản phẩm đạt yêu cầu như đã ghi trong đề cương,

- Tao ra day đủ các sản phẩm nhưng chất lượng cĩ sản phẩm chưa đạt - Tao ra day đủ các sản phẩm nhưng tất cả đều chưa đạt chất lượng,

- Tạo ra được một số sản phẩm đạt chất lượng

- Những sản phẩm chưa thực hiện được ol=|=l=l+|*x

4, Dénh gid vibe sik dung kink phi - Tổng kinh phí thực hiện đề tài

- Trong đĩ: Kinh phí sự nghiệp: 350 triệu đồng

Kinh phí tử nguồn khác: 50 triệu (doanh nghiệp hỗ trợ)

- Tồn bộ kinh phí đã được quyết tốn và cĩ kế hoạch sử dụng

- Chưa thanh quyết tốn xong: Khơng - Kinh phí tồn đọng Khơng 4 Các ý kiến đề xuất

-_ Cơ quan quản lý (Cục Quản lý Dược Việt Nam) cần sớm ban hành qui chế yêu cầu thử tương đương sinh học cho một số chế phẩm thuốc Danh mục các chế phẩm cần thử nên cĩ viên nang omeprazol

- Để thống nhật trong nghiên cứu, các cơ quan quản lý sớm ban hành các hướng dẫn thực hiện đánh giá sinh khả dụng và tương đương sinh học của thuốc; đồng thời xem xé phê duyệt thuốc đối chứng cho từng trường hợp

cụ thể

-_ Để phản ánh chính xác hơn hiệu quả điều trị, một số chế phẩm cĩ sinh khả dụng biển thiên, nồng độ thuốc trong máu thấp và sử dụng dài ngày trong điều trị (như omeprazol), khi cần đánh giá tương đương sinh học, nên xem xét thiết kế thử nghiệm nghiên cứu sau khi dùng vài liễu, nhưng xử lý kết

Trang 15

PHẢN B: NỘI DUNG BÁO CÁO CHI TIẾT KÉT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐẺ TẢI CÁP BỘ 1 ĐẶT VẤN ĐÈ

1.1 Tính cấp thiết của đề tài

Tương đương sinh học được sử dụng để chỉ các sản phẩm tương đương về mặt dược phẩm hoặc cĩ thể thay thế nhau về mặt được phẩm cĩ sinh khả dụng tương, tự trong cùng điều kiện thử nghiệm Trên thực tế, nhiều chế phẩm thuốc cĩ cùng hoạt chất, cùng dạng bào chế nhưng tốc độ và mức độ hấp thu vào tuần hồn lại khác nhau nên tác dụng điều trị khơng hồn tồn giống nhau Chất lượng nguyên liệu, thành phần tá được và kỹ thuật bào chế là những yếu tố cĩ nhiều ảnh hưởng tới sự hấp thu của thuốc Trong quá trình nghiên cứu phát triển sản phẩm, đánh giá TĐSH là một trong những phương pháp thường được sử dụng trong việc lựa chọn cơng thức và kỹ thuật bào chế

Luật bản quyền (Patent Law) của các nước phát triển qui định rõ quyền lợi

của các nhà sản xuất Trong thời gian bản quyền cèn hiệu lực, các sản phẩm tương tự khơng được phép lưu hành Khi hết hạn, các sản phẩm tương by muốn đăng ký lưu hành đều phải được đánh giá so sánh và cĩ kết quả tương đương với chế phẩm phát minh (heo những tiêu chuẩn đã qui định)

Omeprazol là một thuốc được đùng trong điền trị trào ngược đa dày - thực quản; loét da day — tá tràng, hội chứng Zollinger — Ellison Thời gian điều trị thường kéo dài,

cĩ thể tới 8 tuần Thuốc được hấp thu tốt nhưng sinh khả dụng tương đối biến thiên

giữa các cá thể và thời gian dùng thuốc Theo các tài liệu tổng quan [1], sinh khả

dụng đạt khoảng 35% sau khi uống liều đầu tiên và đạt tới trên 60⁄2 sau khi ding

vài liều Hầu hết các tài liệu khơng cơng bố thời gian đạt tới nồng độ thuốc tối đã sau khi uống mà chỉ nĩi thuốc cĩ tác dụng sau khoảng 3 — 6 giờ Do vậy, việc thiết kế chương trình lầy mẫu cho các chế phẩm này tương đối khĩ khăn Chất lượng điều trị của các chế phẩm cĩ chứa omeprazol sẽ phụ thuộc nhiều vào cơng thức và kỹ thuật bào chế Việc xem xé sinh khả dụng và khả năng tương đương sinh học các

chế phẩm này là cần thiết khi cấp phép lưu hành

Nghiên cứu xây dựng mơ hình, qui trình đánh giá TĐ8H chế phẩm cĩ chứa omeprazol phủ hợp với điều kiện trang thiết bị và năng lực nghiên cứu hiện tại ở hầu hết các phịng thí nghiệm trong nước sẽ gĩp phần giảm chỉ phí cho việc thực hiện các thử nghiệm này hơn Đồng thời, nghiên cứu thực hiện đánh giá chất lượng một sẵn phẩm trong nước

Chính vì vậy, Hội đồng khoa học Bộ Y tế đã đề xuất chủ đề nghiên cứu sinh khả dung vA tong đương sinh học cho chế phẩm viên nang cĩ chứa omeprazol vào chương trình nghiên cứu của đề tài cấp bộ năm 2005 Đề cương nghiên cứu của đề

tài này đã được Hội đồng cấp Bộ xem xét và phê duyệt qua một qui trình tuyển

Trang 16

1.2 Giả thiết nghiên cứu của để tài

- Nghiên cứu khảo sát độ hồ lan trong 3 mơi trường pH Khác nhau theo hướng dẫn chung của FDA, và các tài liêu liên quan [17.38] Nên phương pháp khả thi, sẽ được áp dụng trong quá trình nghiên cứu phát triển sản phẩm để biết mức độ tương đương về khả năng hịa tan của chế phẩm nghiên cứu so với một chế phẩm đối

chứng Dựa vào đĩ, dự đốn phần nào khả năng hấp thu invivo của chế phẩm

- Xây dựng phương pháp phân tích omeprazol trong huyết tương Với điều kiện trang thiết bị hiện cĩ, khảo sát phương pháp phân tích trên hệ thống sắc kỹ lỏng

hiệu năng cao véi detector UV Khao sat các kỹ thuật chiết tách omeprazol từ huyết

tương: loại tạp bằng acid hay dưng mơi hữu cơ, chiết lỏng - lỏng bằng dung mơi hữu cơ, chiết pha rắn Thẩm định phương pháp phân tích theo các chi tiéu qui định của TDA cho phương pháp phân tích mnấu trong dịch sinh học: tính chon lọc (đặc hiệu), khoảng tuyến tính, giới hạn định lượng dưới, đơ đúng, độ chính xác, đơ Ổn định và hiện suất chiết

- Giả thiết rằng thuốc nghiên cứu tương đương với thuốc đối chứng, hoặc thuốc cĩ thể tương đương cả khi dùng đơn liều và nhiều liều, nhưng cũng cĩ thể thuốc chỉ tương đương sau khi đùng nhiều liều Do vậy, nghiên cứu đánh giá tương,

đương sinh học invivo được thiết kế đồng thời trên một nhĩm đối tượng người tình

nguyện sau khi uống thuốc liều đơn và sau khi uống liên tục 6 liều trong 6 ngày Thiết kế nghiên cứu chéo, 2 thuốc, 2 giai đoạn, đánh giá bằng xác định nồng độ thuốc trong huyết tương, tiến hành trên 20 người tỉnh nguyện Xác định nồng độ

omeprazol trong huyết trong NTN sau khi uống thuốc và xác định các thơng số

được động học Tính thống kê và đánh giá mức đơ tương đương theo phương pháp,

khoảng tin cậy 90% Tính kết quả riêng cho trường hợp đơn liều và sau khi dùng 6

liều

1.3 Mục tiêu nghiên cứu

- Xây dựng qui trình đánh giá TĐSH của omeprazol trên người tình nguyên ở

Việt nam

- Đánh giá tương đương sinh học viên nang Helinzole (omeprazol 20mg) sản xuất trong nước so với chế phẩm ngoại nhập

- Bổ sung dữ liệu cho dự thảo qui chế đánh giá TĐSH ở Việt nam

Trang 17

2 TONG QUANDE TAL

2.1 Tình hình nghiên cứu ngồi nước liên quan đến đề tài 2.4.1 Téng quan vé Omeprazot

Tén khoa hoc: 5 - methoxy-2-{[(4 -methouy - 3,5 - dimethyl — 2 -pyridinyl) methyl] sulfinyl] - 1H - benzimidazole

1ý tính: Omeprazol dưới dạng bột kết tỉnh trắng hoặc trắng ngà Mĩng chây ở khoảng 155°C kém theo sự phân huỷ, khĩ tan trong nước, khĩ tan trong aceton va isopropanol, tan trong dicloromethan, methanol va ethanol [8, 31]

Hố tính: Omeprazol vừa cĩ tính acid, vừa cĩ tính base, hấp thụ manh bức xạ tử ngoại Các tính chất này được ứng dụng trong định tính, định lượng và trong bào chế omeprazol Độ ẩn định của omeprazol phụ thuộc vào pH Trong mơi trường aoid, omeprazol nhanh chĩng bị phân huỷ, trong mơi trường kiểm omeprazol khá bền

vững [S]

Dược lý và cơ chế tác dụng [1]: Omeprazol là một dẫn xuất của benzimidazole khơng cĩ hoạt tính ức chế enzym ở mơi trường trung tính, nhưng ở pH < 5 cmeprazol được proton hố thành 2 dang acid sulphenic va sulphenamic Hai chất này gắn thuận nghịch với nhĩm sulfohydryl của enzym 1Í” - K” - ATPase ở tế bào thành nên ức

chế bài tiết acid trên 48 giờ Do vậy Omeprazol được dùng điều trị trong các trường

hợp : trào ngược đa dày thực quản, lo da đày tá tràng, hơi chứng Zollinger- Ellison,

Dược động học [1]: Omeprazol là một chất ức chế bài tiết dich vida đày do ức chế bom proton ở các tế bào thành da dày Thuốc cĩ tác dụng nhanh, kéo đài, Omeprazol được hấp thu tốt ở một non sau khi uống khoảng 3 — 6 giờ Sinh khả dụng sau khi

uống liều đầu tiên đạt khoảng 35% và đạt tới trên 60% sau khi dùng vài liều Sự hấp

thu của thuốc phụ thuộc vào liều dùng, khơng bị ảnh hưởng bởi thức ăn Thuốc liên

kết cao với protein huyết tương (hoảng 95%) và được phân bố vào các mmơ đặc biệt

ở các tế bào thành đa dày Thời gian bán thải của thuốc ngắn (khoảng 40 phú), nhưng tác dụng ức chế bài tiết kéo dài, nên cĩ thể chỉ cần dùng một liều rỗi ngày

Trang 18

hoạt tính, nhưng lại tương tác với nhiều thuốc khác do tác dụng ức chế các enzym

CYT.P450 của tế bào gan Dược động học của thuốc thay đổi khơng cĩ ÿ nghĩa ở

người già hay người cĩ chức năng thận suy giảm Với những người suy giảm chức năng gan, sinh khả dụng của thuốc tăng và độ thanh thải giảm, nhưng khơng cĩ biểu

hiện tích luỹ thuốc trong cơ thể,

Chỉ định: Trào ngược da dày - thực quản, Loét dạ đày - tá tràng, hơi chứng Zollinger - Ellison

Chống chỉ định: Mẫn cảm với thuốc

Phân ng bắt lợi: Một số phần ứng thường gặp cĩ thể xây ra khi điều trị với omeprazol như rối loạn tiêu hố, buơn nơn và nơn, đau bụng, trướng bụng Hiếm gặp hơn là các phản ứng gây mắt ngủ, chĩng mặt, mày đay, ra mỗ hơi

Liều đồng và cách dùng: Liều thường đùng cho người lớn là 20 ~ 40 mg/lần/ngày, thời gian điều trị từ 4 — 8 tuần

Viên nang omeprazol lần đầu tiên được cơng ty Astra (nay là AstraZeneca) nghiên cứu sử dụng làm thuốc điều trị và đăng ký lưu hành tử năm 1988 với tên biệt được

Losee (được cơng nhận là thuốc phát rninh, Innovator), với doanh số khoảng 8 tỷ

dola méi năm Tuy nhiên, khi chưa hết hạn bản quyền (1997), AstraZeneca đã xin

rút đăng ký sản phẩm này ở một số nước thành viên chính của EU, và cho ra đời

xiên nén và viên nang Losec MUPs (omeprazol + magnesi Mac dh ché phim méi đã được đánh giá TĐ8H với chế phẩm Losec gốc nhưng nhiều nước khơng coi 1osec MUPS là chế phẩm innovator Tử đĩ, trên thị trường hầu như chỉ cịn lưu hành

chế phẩm generic của omeprazol đã được đánh giá TĐSH với Losec hoặc chế phẩm

được cấp phép ở các nước Losec khơng được đăng ký bản quyền, như Apo —

omeprazol, (Apotex - Canada), Probitor Biochemie - Ao)

2.1.2 Phương pháp phân tích

Viên nang omeprazol đã được ghỉ trong dược điển một số nước như Mỹ, Án Độ

TIầu hết các được điển và tiêu chuẩn cơ sở đều định lượng omeprazol trong nguyên liêu cũng như chế phẩm bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao hoặc đo độ hấp thụ tử ngoại Tuy nhiên, điều kiện sắc ký cĩ thé thay đổi tuỷ từng tiêu chuẩn Với dạng bào

chế, phép thử độ hịa tan cĩ phương pháp thử khác nhau

Trang 19

Bảng 2.1 Tĩm tắt một số phương pháp kiểm nghiệm omeprazol trong chế phẩm

TLTK Định lượng Thử độ hịa tan

[22] [-C@RP18, 300mm x3,9mm | Thiết bị T1, 100 vịng/ phút

;5Hm Thử 2 mơi trường

- Pha động: Đêm phosphat

pH7,4 : MeCN (5: 35) Mơi trường acid: định lượng hạt cịn lại Xác định lượng cịn lại và hồ tan bằng

- Detector 302 nm HPLC giếng phần định lượn;

[32] |-CðLRP18, 150mm x 4,6mm | 2 phương pháp

x; Sym - PP1: Thiét bi II, 100 vịng/ phút Mơi

- Pha động: Hỗn hợp dém pH

9, MeCN vA MeOH

Sắc ký gradient dung mdi

thay đổi tỷ lê pha động thích hợp trong 20 phút - Detector 305 nm trường acid HCl 0,1N: 500ml, định lượng hạt cịn lại chưa tan sau 2h Mơi trường pH 6,8: 900ml, xác định lượng hồ tan sau 30 Đỉnh lượng bằng HPLC v6i detector 280nm -PP 2: Thiết bị 1, 100 vịng/ phút Mơi

trường acid HƠI 0,1N: 900ml, định lượng hạt cịn lại chưa tan sau 2h Mơi trường pH 6,8: 900ml, xác định lượng hồ tan sau 45", Xác định lượng chưa

hịa tan trong mơi trường acid bằng

THPLC như phân định lượng, Xác định

lượng hồ tan trong MT kiểm bằng đo UV ở305nm ~ CORP18, 250mm x 4mm, 10um - Pha động: Hỗn hợp đệm phosphat pH 6,8 - MeCN (65:35) - Tốc độ dịng 1,2ml/phút - Detector 302 nm Thiết bị 1, 100 vịng/ phút Thử 2 mơi trường

Mơi trường acid, 750ml lượng hồ tan sau 2 giờ

Mơi trường pH 68: Thêm nahi phosphat tiếp vào bình hồ tan của mơi

trường acid và điều chỉnh pH đến 6,8,

xác định lượng hồ tan sau 45 phút Định lượng bằng đo độ hấp thụ ở 302nm xác định [15] Đo độ hấp thụ ở 308nm Thiết bị II, 100 vịng/ phút Mơi trường pH 1,2; 900ml; định lượng hạt cịn lại chưa tan sau 2h Mơi trường pH 6,8 900m, xác định lượng hồ tan sau 30° Xác định lượng chưa hịa tan trong mơi trường acid và lượng hồ tan trong MT

kiềm bằng đo UV ở 302nm

Trang 20

"Một số phương pháp định lượng Omeprazol trong dich sinh học

Hầu hết các tài liệu tham khảo đều giới thiêu phương pháp định lượng Omeprazol trong dich sinh học bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao, sir dung detector tly

ngoại hoặc hưỳnh quang [25] Mẫu thử thường dùng nhất là máu (huyết tương) và

nude tidy (rat it) Các phương pháp phân tích: cĩ thé chiết bằng dung mơi hữu cơ hoặc chiết qua cột pha rắn (SPE) Phương pháp phân tích cĩ thể đùng chuẩn nội hoặc khơng Thiết bị phân tích thường dùng là HPLC với detector UV voi nhiều loại cột phân tích khác nhau Giới hạn định lượng cĩ thể tử 15 ng/ m1 — 100ng/ ml, tuỳ

vào điều kiện [17, 25, 23, 24, 34] Tĩm tắt một số phương pháp phân tích điển hình

được giới thiệu như sau

Bảng 2.2: Tĩm tắt một số phương pháp phân tích oneprazol trong dịch sinh học TLTK Phương pháp chiết Định lượng (Điều kiện sắc ký) Chuẩn nội [7 Chiết pha rắn, cột SPE C2, rửa giải MeCN - Cột RP18, 150mm x 4mm; 5 pum resolvosil BSA - Pha động: n - propanol : dém amoni phosphat pH 7, 50 mM (0 : 50) Detector: UV 302 nm LLOQ: 15ng/ml - [@ - methosy - 2 pyridiny) methyl sulffinyl) -4,6 = dimethyl - 1H- benzimidazol 3,5 - dimethyl - 2 - pyridinyl) methyl ] - h- benzimidazol [23] | Chiat bing hOn|- Cộ: G18 250 x 4,6; 5 um|- hợp nucleosil dichloromethan +|- Pha động: MeCN : đệm MeCN (80:20) |phosphatpH7,5 20 mM 37:63 - Detector: UV 302 nm -LLOQ: 25ng/ml

[344] | Ghiế pha rần cột|- Cột: C18, 125 x 4 4 um | Nitrazepam Bond Elute C18, | Lichro Cart

Trang 21

2.1.3 Nghiên cứu sinh khã đụng và tương đương sinh học

Ở một số nước phát triển, khi xem xét cấp phép lưu hành cho thuốc generic, cơ quan quản lý cĩ thể căn cứ vào các kết quả đánh giá chế phẩm bao gồm:

- Khả năng hồ tan của chế phẩm thử so với thuốc đối chứng để cĩ thể cho phép

mién thiy TDSH in vivo

- Kết quả đánh giá TĐ8H in vivo, qua việc so sánh một số thơng số được động

học hoặc hiệu quả sinh học trên người tỉnh nguyện

Những chế phẩm cĩ chứa được chất cĩ độ tan cao, tính thấm tốt đhuộc nhĩm I trong hệ thống phân loại sinh được - BC8) sẽ được xem xét để tiến hành so sánh đội

hồ tan và xem xét miễn thử TĐ8H in vivo Khi đĩ, sẽ giảm được một phần lớn kinh phí cho các việc nghiên cứu, đánh giá TĐ8H Với các được chất ít tan, tính thấm

kém (thuộc các nhĩm 4, 3, hoặc 2 trong BC8) và các thuốc cĩ khoảng điều trị hẹp sẽ

phải xem xét từng trường hợp để tiến hành đánh gia TDSH in vivo bang phan loai

theo BC8 đang được các nhà khoa học được nghiên cứu xây dựng

Đánh giá TĐ8H in vivo: là thực hiện so sánh sự đáp ứng sinh học của thuốc cần

nghiên cứu với một thuốc đối chứng trên cơ thể người hoặc sinh vật sống Cĩ một số

phương pháp đánh giá, nhưng thơng đụng nhất là đánh giá so sánh các thơng số được động học (Cmax, AUC, Tmax ) của thuốc nghiên cứu với thuốc đối chứng hoặc đánh giá so sánh hiệu quả sinh học của các thuốc trong cùng điều kiện

iết kế nghiên cứu: Mơ hình đánh giá TĐSH hay được áp dụng nhất là chéo, đơn liều/ đa liễu, ngẫu nhiên, mù đơn/ mở (khác với các thiết kế thử lâm sàng thường là bố trí song sơng, mù kép), Bố trí chéo là dùng đối chứng trên chính cá thể đĩ (ở giai đoạn khác) nhằm hạn chế sự biến thiên giữa các cá thể, thường được thiết kế chéo theo kiểu ơ vuơng latin, với n thuốc và n giai đoạn Ví dụ: trong nghiên cứu đánh giá 2 thuốc (1 thuốc nghiên cứu so với 1 thuốc chứng), bố trí theo kiểu ơ vuơng 2 z 2 @ thuốc, 2 giai đoạn) và lấp lại n lần cho đủ số liệu tinh tốn theo yêu cầu của thí

nghiêm Khi cần nghiên cứu 3 chế phẩm (2 thuốc nghiên cứu so với củng 1 thuốc

chứng), cĩ thể áp dụng mơ hình ơ vuơng la tỉnh 3 x 3 (3 thuốc, 3 giai đoan) để cĩ thể giảm bớt một số thí nghiêm, giảm phần nào chỉ phí Tuy nhiên, khi áp dụng mơ hình này, thời gian thử thuốc kéo dài hơn (3 giai đoạn) và mỗi người tình nguyện sẽ phải dùng 3 chế phẩm thuốc Thời gian nghỉ (rửa giảo giữa các giai đoạn phải đảm bảo cho thuốc thải trừ hết khỏi cơ thể, tức là tuỳ vào thời gian bán thải trờ của từng loại

thuốc

TIẦu hết các nghiên cứu đánh giá TĐSH sau khi uống liễu đơn thuốc thử hoặc thuốc đối chúng, Một số trường hợp cĩ thể phải thiết kế đa liễu khi:

- Cĩ sự khác biệt về tốc độ hấp thu nhưng khơng khác về mức độ hấp thụ

- Cĩ sự biến thiên về SKD quá mức giữa các cá thé

- Nồng độ của được chất hoặc chất chuyển hĩa trong máu cĩ được từ liễu đơn quá thấp, khơng cĩ phương pháp phân tích để xác định chính xác

- Chế phẩm thuốc là đạng phĩng thích kéo dài

Trang 22

- Người tình nguyện: đánh giá TĐSH thường tiến hành trên người tình nguyện khoẻ mạnh Trừ một số trường hợp các thuốc cĩ độc tính cao như các thuốc chống ung thự, thuốc chống HTV — Aids phải thử trên bệnh nhân Người tình nguyện phải được kiểm tra sức khoẻ và đạt tiêu chuẩn đo yêu cầu nghiên cứu đề ra Số lượng cá thể cho mỗi nghiên cứu tuỳ thuộc từng thiết kế, Với các phép đánh giá sinh học, khi số lượng mẫu thử (giá trị n) càng lớn, Kết quả càng chính xác Tuy nhiên, trong đánh giá TĐSH, hầu hết các tài liêu đều khuyến cáo đùng với số lượng nhỏ nhất cá thể mà vẫn đảm bảo yêu cầu mức độ tin cây trong tính thơng kê của phép thử Số lượng cĩ

thể tử 12, 18, 24, 30, tuỷ tửng loại thuốc và qui định của mỗi quốc gia Hướng dẫn của Asean khuyến cáo nên đủng số lượng NTN tối thiểu là 12

- Thuấc đối chứng: thuốc được chọn làm đối chứng tốt nhất là chế phẩm phát rninh (thuốc đầu tiên được lưu hành trên thị trường), đã được nghiên cứu một cách đầy đủ về hố học cũng như đặc tính lâm sang, đã được cấp phép lưu hành hoặc một thuốc tương tự cĩ chất lượng cao đang lưu hành trên thị trường ở thời điểm nghiên cứu Để thống nhất trong việc so sánh các kết quả đánh giá, mỗi quốc gia (Bộ Y tế hoặc hiệp hội các nhà sản xuất được phẩm) cần qui định thuốc đối chứng cho bừng loại được

chất

Trên thể giới, đánh giá TĐSH đã được thực hiện tử nhiều thập kỷ trước ở các

nước cĩ nền cơng nghiệp dược phát triển như Canada, Mỹ, Pháp, Đức, Bị, ấn độ và một số nước trong khu vực như Indonesia, Malaysia, Philipin Tại các nước này đều đã ban hành Qui chế và Hướng dẫn thử TĐSH Ngồi ra, Hướng dẫn thử TDSH in

vivo đã được ghi trong một số Dược điển như Mỹ, Châu Âu, Trung quốc, Nhật Bản Dược điển Mỹ đã cĩ hướng dẫn (protocol) thử TĐSH in vivo cho một số thuốc cụ thể và những trường hợp cĩ thể miễn thử TĐSH in vivo

Đánh giá TĐSH thường được thực hiện tại các trung tâm đánh giá sinh khả dung và TĐSH hoặc các đơn vị nghiên cứu phát triển thuốc Các nước cĩ nền cơng nghiệp được phát triển, các cơng ty dược phẩm lớn đều cĩ bộ phận nghiên cứu và đánh giá TĐSH của riêng ho (Ciba, Lyly, Bayer, Ranbaxy, Cipla ) Các nước trong, khu vực chưa cĩ những doanh nghiệp dược lớn, do vậy việc đầu tư cho nghiên cứu ở hệ thống doanh nghiệp chưa được chú trọng Một số nước như Indonesia, Malaysia, Philipin, vie nghiên cứu được thực hiện tại các Trung tâm đánh giá TĐSH độc lập khơng thuộc của doanh nghiệp Nghiên cứu đánh giá của các trung tâm này chủ yếu theo yêu cầu của các nhà quản lý đối với doanh nghiệp cần cung cấp bằng chứng khi cấp phép sản xuất

Trong quá trình triển khai hội nhập kinh tế của các nước khối Asean, ủy ban tư vấn về tiêu chuẩn chất lượng của Asean và các nhĩm cơng tác đã được thành lập Nhĩm cơng tác về dược phẩm đã nhiều lần họp để bàn về việc thống nhất các tiêu chi cĩ thể hồ hợp Trong quá trình này, nhĩm đã xây dựng một bản “ Hướng dẫn đánh giá sinh khả dụng và TĐ8H của thuốc” để áp dụng chung trong khối Theo lộ trình tiền

tới hồ hợp của các nước khu vực Asean, đến năm 2008 sẽ thống nhất được các vấn

đề chính trong đánh giá TĐ8H cho các thuốc khi đăng kỹ lưu hành: Thống nhất

Trang 23

danh mục các chất cần phải đánh giá, đanh mục thuốc đối chứng trong nghiên cứu,

thống nhất mẫu báo cáo, tiêu chuẩn một cơ sở thực hiện đánh giá TĐSH

Những nghiên cửu đánh gid TDSH omeprazol:

- Sayed Aboflaz! Mostafavi (ran) [27] đã nghiên cứu đánh giá TĐSH của 2

sản phẩm viên nang Omeprazol sản xuất tại Iran: omeprazol (Abidi) và

Lorsee Œorestan) so với thuốc chứng là viên nang Losec của Astra, Sweden,

Nghiên cứu thực hiện trên 12 người tình nguyện, thiết kế chéo theo ơ vuơng latin, mé, liễu đơn, 3 thuốc, 3 giai đoạn với thời gian nghỉ giữa các giai đoạn

là 7 ngày Phân tích nồng độ thuốc trong huyế tương bằng HPLC Kết quả đánh giá qua các giá trị được động học AUC và Cmax cho thấy 3 chế phẩm

này là hương đương sinh học

-_ Elkoshi Z [17] và cơng sự cũng đã nghiên cứu đánh giá tương đương sinh học của viên Omepradex so với thuốc đối chứng là viên Losec trên 2 mơ hình invitro đhử đơ hồ tan) và in vivo (được động học) Nghiên cứu In vivo với thiết kế chéo, ngẫu nhiên, đơn liều kết hợp với đa liễu, thực hiện trên 40 người tình nguyện khoẻ mạnh Hai chế phẩm nghiên cứu cho thấy khơng tương đương, sự sai khác sau khi dùng đa liều lớn hơn Các tác giả đã nhận định rằng nghiên cứu TĐ8H omeprazol nên thực hiện với th ion liều kết hợp đa liễu

~_ Nghiên cứu so sánh sinh khả dụng của 2 chế phẩm omeprazol đang uống,

Đepticum @huốc thử) và Mopral đhuốc ching), Duvauchelle T va cs [16] da

nhận thấy khơng cĩ sự khác nhau cĩ ý nghĩa về diện tích dưới đường cong (AUC) của 2 chế phẩm cả khi dùng đơn liều và đa liều Tuy nhiên, cĩ nhận

thấy sự khác nhau về giá trị Cmax (p< 0,05) va Tmax (P< 0,01) của thuốc thử

so với thuốc đối chứng ở tình trang ổn định (sau khi dùng thuốc 5 ngày) Kết

quả này khẳng định thêm rằng sau khi dùng liều nhắc lại, AUC và Cmax tăng

lên so với khi đùng đơn liều và sự biến thiên giữa các cá thể là đáng kể

2.2 Tình hình nghiên cứu trong nước liên quan đến để tài

Đánh giá TĐSH đã được thực hiện ở nhiều nước cĩ nên cơng nghiệp được phát triển và một số nước trong khu vực nhưng chưa được phổ biến ở nước ta Gần đây, việc triển khai một số đề tài nghiên cứu và hội thảo khoa học về vấn đề này được xem như những bước khởi đầu cho hướng đánh giá nhằm nâng cao chất lượng,

thuốc trong điều trị Tuy nhiên, hầu hết những nghiên cứu này mang tính chất thăm

dị nhằm tiếp cận phương pháp, đào tạo Chưa thấy cĩ những nghiên cứu đánh giá

xuất phát từ nhu cầu của các nhà sản xuất Một mặt cĩ thể đo các nhà sản xuất được phẩm ở Việt Nam chưa hiểu rõ và thấy được sự cần thiết của việc đánh giá TĐSH

Mặt khác, qui chế đăng ký thuốc hiện hành của nước ta chưa qui định phải đệ trình kết quả đánh giá TĐ8H khi đăng ký lưu hành cho những sản phẩm cần thiết

Trang 24

Để cĩ cơ sở xem xét các thử nghiệm trên người, Bộ Y tế đã ban hành “ Quy

chế về tổ chức và hoạt đơng của Hội đồng đao đức trong nghiên cứu y sinh học" Gố 5129/ 2002 QĐ-BYT) Hội đồng đạo đức cấp Bộ của Bộ Y tế cũng như hội đồng của các cơ sở đã được thành lập để xem xét đánh giá các đề tài nghiên cứu cấp tương ứng, Ngồi ra, các tài liêu như hướng dẫn của khối Asean, WHO, FDA Mỹ và

số nước trong khu vực đã được xem xét và tham khảo trong quá trình thực hiện để tài này,

Theo kế hoạch, Hội đồng Dược điển Việt nam đang biên soạn chuyên luận chung “Hướng dẫn nghiên cứu sinh khả đụng và tương đương sinh học các chế phẩm thuấc” và dự kiên ban hành trong Dược điễn Việt nam IV

Tháng 8/ 2003 được sự hỗ trợ kỹ thuật của WHO, Viện Kiểm nghiệm đã thực

hiện nghiên cứu "Mơ hình mẫu đánh giá TĐSH các dạng bào chế trên người tình

nguyện” nhằm chuẩn hố kỹ thuật trong đánh giá TDSH in vivo & Việt Nam Tiếp

theo đĩ, một số đề tài cấp bộ đã thực hiện như đánh giá tương đương sinh học viên nang cephalexin, diclofenac, mdt sé vién tác dụng kéo đài như theophylin, nifedipin Những nghiên cứu bước đầu mang tính chất thăm dị, chưa được thực hiện trong điều kiện tiêu chuẩn nên các kết quả cịn hạn chế

Giần đây, một số doanh nghiệp được trong nước đã quan tâm, yêu cầu đánh giá

TDSH cho các sản phẩm sản xuất trong nước: CT Dược VTYT Phú Yên, Cơng ty TNHH được phẩm Bài gịn PM), Cơng ty Cổ phần Dược Hậu giang, Imexpharm,

Domesco, Céng ty TNHH Hasan Tuy nhién, cho đến nay, chưa cĩ tài liệu nào cơng bố kết quả thử TĐ8H cho chế phẩm omeprazol của V iệt Nam

Tình hình lười hành chế phẩm oneprazol ở Việt nam

Trong khoảng 10 năm trở lại đây, Bộ Y tế đã cấp phép cho khoảng 42 chế phẩm của omeprazol lưu hành ở VN Hiện này, 37 sản phẩm cĩ số đăng ký cịn hạn, trong đĩ

cĩ 25 sản phẩm nước ngồi và 12 sản phẩm trong nước Các sản phẩm này cĩ giá

chênh lệch nhau khá nhiễu Chính vì vậy đã cĩ những vụ thuốc mang nhãn hiệu giả

(thuốc sản xuất ở VN mang tên Lomac - 2003) Dưới đây là một số chế phẩm dang được lưu hành ở V iệt nam

Bằng 2.3 Một số chế phẩm emeprazol đang luu hành ở Việt nam

Trang 25

3 | Lomac Cipla — India) VNN-3813-99 [2700đ/viên

4 |Loress Biological E Ltd VN-3692-99 |1000đ/viên

3 | Romesec (Ranbaxy) VN-4092-99 |1000đ/viên

Sẵn phẩm trong nước

T | Omezon (CTD Ha Tay) VNB-0243-02 |700đ/viên

2 | Omeprazol 20mg (CTD Vinh Phic) | VNA-2839-99 | 800 d/ wien

3 |Omeprazol NDPTW2) VNA-4617-01 |500đ/viên

4 [Omeprazol (CTCP Dược Hậu Giang) | VNA-0417-02 |900đ/viên 5 | Omeprazol @ Dược phẩm 2/9) VNB-0011-02 | 600 d/vién

6 | Vacomez (CTDP Long An) VNA-0116-02 |700đ/viên

TPHCM)

9 | Helinzole @ TNHH SPM) VNB-0516-03 | 1000 d/vién

Trang 26

3 ĐĨI TƯỢNG VẢ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1 Thiế ế nghiên cứu

3.1.1 Nghiên cứu iu vũro'

Nghiên cứu in vitro sử dụng phép thử đơ hồ tan, thiết kế thử nghiêm trong 3 mơi trường pH khác nhau tương ứng với 3 khoảng pH của đường tiêu hĩa: 1,2 (da day), pH.4,5 đá tràng) và pH 6,8 đuột non)

Thử nghiệm song song trong cùng điều kiên, cùng thời điểm 8o sánh kết quả dữ liêu độ hịa tan của 2 chế phẩm và đánh giá các kết quả theo hướng đẫn của US —

FDA va WHO

3.4.2 Nghién ctu in vivo

Đề cương nghiên cứu chỉ tiết đã được Hội đồng đạo đức cơ sở của Viện Kiểm

nghiệm thuốc TW thơng qua theo phiếu chấp thuận số 02/ HĐĐĐ ngày 29/06/2005 chéo, 2 thuốc, 2 giai đoạn, lấy mẫu máu trong ngày thứ nhất (đơn liều) và ngày thứ 6 sau khi dùng thuốc liên tục 6 liễu

- Thử nghiêm thăm dị thực hiện trên 3 NTN

- Thử nghiệm chính thức được thực hiện trên 20 NTN đã tuyển chọn đạt yêu cầu Người tình nguyện bốc thăm ngẫu nhiên để xác định thứ bz và phân nhĩm Mỗi người tỉnh nguyên sẽ uống cả 2 loại thuốc Người uống thuốc A trong giai đoạn 1 và uống thuốc B trong giai đoạn 2 và ngược lại Mỗi giai đoạn kéo dài 6 ngày, thời gian

nghỉ giữa 2 giai đoạn là 1 tuần Bảng 3.1: Kế hoạch uống thuấc và lấy mẫu Giai đoan I Ngày thứ 1 2 3 + 5 6 Thuốc A/Ð x x = x x x Lấy mẫu x x Thời gian nghỉ Tử ngày thứ 7 - 13 Giai đoan II 14 15 16 17 18 19 Thuốc B/A ae x x x x x Lấy mẫu x x

3.2 Đối tượng và điều kiện nghiên cứu

3.2.1 Thuốc nghiên cứu

Thuắc nghiên cứa(A): Viên nang Helinzole (vién nang omeprazol 20 mg, dang vi

nang bao tan trong ruột), đĩng gĩi vi 8 vin , SDK VNB-0516-03, sé lơ: 0601003, NSX 18-01-06 Sản xuất bởi cơng ly TNHH được phẩm Sài Gịn - SPM

Thuấc đối chứng (B): Lomac (viên nang cmeprazol 20 mg, dạng vi nang bao tan trong ruột), đĩng gĩi vi 10 viên, SĐK VN 9020 — 04, số 16: 6014, NSX 12/2005

Sản xuất bởi: Cipla Ltd, Ấn Độ

Trang 27

3.2.2, Thiét bi, dung mdi, hod chất

Chất chuẩn:

- Omeprazol chuẩn quốc gia, SK8 0106199, hàm lượng 99,86%, độ âm 0,03% - Albendazol chuẩn quốc gia, SK§ 0103199, hàm lượng 99,55%, độ âm 0,04%

Dụng mơi, hố chất:

- Acetonitril, methanol, dicloromethan loai ding cho HPLC - Merck

- Isopropanol, n - hexan và các hố chất, dung mơi khác đạt tiêu chuẩn tỉnh

khiết phân tích Œ.A.) đùng trong chiết tách và sắc ký,

Thuyết tương: dùng huyết tương trắng của người, mua tại Viện Huyết học và Truyền

máu Trung ương,

: đã được hiệu chuẩn theo qui định, đáp ứng yêu cầu I8OIEC17025 và GLP - Hê thống sắc ký lỏng hiệu năng cao Merck - Hitachi, L-7455, D-7000, DAD

- Các thiết bị: máy ly tâm lanh, máy lắc, tủ bảo quản mẫu ở - 40°Œ và các loại dụng cụ thuỷ tính cĩ độ chính xác thích hợp,

3.3 Phương pháp nghiên cứu 3.3.1 Khảo sát a6 hol tan in vitro Phương pháp thử độ hịa tan

Tiền hành phép thử độ hồ tan theo phương pháp chung ghỉ trong Dược điển Mỹ và Hướng dẫn của Tổ chức Y tế thế giới, với các điều kiên cụ thé như sau

- Thiết bị : Thiết bị thử độ hồ tan loại 1 (giỏ quay), tốc độ : 100vịng/ phút

- Mơi trường: 900ml, 3 mơi trường cĩ pH khác nhan:

+ Mơi trường pH 1,2 : Lấy 8,5 ml đụng dịch HƠI đậm đặc pha lỗng vừa đủ

1000 rnl nước điều chỉnh đến pH 1,2 với NaOH 0,1N

+ Mơi trường đệm acelat pH 4,5: Hồ tan 2,99 gam Natri acetat trihydrat, thêm 14,0 ml acid acetic 2N, điều chỉnh đến pH 4,5 bằng acid acetic 0,5N

+ Mỗi trường đệm phosphat pH 6,8: Hồ tan 27,22 gam KH;PO¿ trong vừa đủ 1000 ml nước Điều chỉnh đến pH 6,8 bằng NaOH 0,5N

- Nhiệt độ mơi trường hồ tan : 37°Œ+ 0,5°Œ

Tiến hành: Mẫu thử và mẫu đối chứng được thử ĐHT song song, cùng thời điểm trên cùng thiết bị, với các điều kiện như đã nêu ở trên, thử lần lượt trong 3 mơi trường pH khác nhau Với mỗi mẫu thử, thử 12 viên / một mơi trường

+ Với mơi trường pH 6,8: Lấy dịch hồ tan để định lượng omeprazol tại các

thời điểm : 5; 10, 15; 30 phút sau khi bắt đầu

+ Với mơi trường pH 1,2 và 4,5: Sau 2 giờ, lấy hạt cịn lại trong giỏ, hồ tan

trong dung dich NaOH 0,1N trong MeOH dé tinh Iuong omeprazol Tính lượng omeprazol đã hồ tan bằng cách trừ đi lượng cịn lại

Trang 28

Định lượng omeprazol

_ Định lượng omeprazol trong mơi trường hồ tan bằng phương pháp đo phổ hếp thụ tử ngoại tại bước sĩng 302 nm

Dung dich chuẩn: Cân chính xác khoảng 50 mg omeprazol chuẩn cho vào bình định mire 100 ml, Hoa tan và thêm tới vach băng dung dich NaOH 0,1N trong MeOH

+ Với mơi trường pH 1,2 và 4,5: Lấy 1 ml dung dịch chuẩn pha thành 100 ml

với NaOH 0,1N trong MeOH Ding dung dich NaOH 0,1N trong MeOH làm mẫu trắng, Xác định % lượng đã hồ tan sau 2 gid,

+ Với mơi trường pH 6,8: Lấy 2 ml dung địch chuẩn pha thành 50 ml với mơi trường pH 6,8 Dùng mơi trường pH 6,8 làm mẫu trắng, Với tùng mẫu, tính lượng Omeprazol giải phĩng ra tại mỗi thời điểm Xác định % hồ tan trung bình tại mỗi thời điểm so với hàm lượng ghỉ trên nhãn và độ lệch chuẩn tương đối

Đánh giá kết quả

- Mơi trường pH 6,8: Theo hướng dẫn của Cơ quan quản lý thuốc và thực phẩm Mỹ (US-FDA) và dự thảo hướng dẫn của Tổ chức Y tế thế giới, so sánh kết

quả và tính giá trị F; theo cơng thức

Fy, =50 x log{[1+( ME" Rt— TH] x100} Trong đĩ : Et là % hồ tan của thuốc chứng tại thời điểm t

Tt là %4 hồ tan của thuốc thử tại thời điểm t

Nếu F; > 50 hai chế phẩm được coi là cĩ độ hồ tan tương đương ở mơi trường

này

- Mơi trường pH 1,2 và 4,5: Do Omeprazol khơng bền trong hai mơi trường

này Nên chỉ tiến hành so sánh 4 lượng hồ tan được sau 2 giờ của chế phẩm thử và chế phẩm đối chứng

3.3.2 Xây đựng phương pháp phân tích oimeprasol trong huyét tuong

Dùng các mẫu huyết tương tự tạo để khảo sát và thẫm định phương pháp phân tích - Dung dich chu&n omeprazol: pha chất chuẩn omeprazol trong methanol đễ cĩ

các nơng độ thích hợp

~_ Dung địch chuẩn nội: pha chất chuẩn albendazol trong rnethanol để được nơng độ thích hợp

~_ Mẫu bự tạo: Lấy một thể tích dung dịch chuẩn cmeprazol cĩ nồng độ tương,

ứng, bốc hơi dung mơi đưới luồng khí nitơ Hồ tan cắn trong huyết tương trắng

Nghiên cứu chiết tách omeprazol từ huyết tương bằng phương pháp chiết lỏng - lỏng sử dụng hỗn hợp dung mơi hữu cơ; bốc hơi dung mơi, hồ tan cắn trong pha động để

Trang 29

chay sắc ký Khảo sát xác định các điều kiên sắc ký với các loại cột khác nhau, thành phần và tỷ lệ pha đơng thích hợp để cho khả năng tách tốt nhất

Dung dịch đệm phosphat pH 7,2: pha theo được điển Mỹ

Thâm Aịnh phương pháp

Thẩm định phương pháp phân tích theo các chỉ tiêu qui định của dược điển và hướng dẫn về thâm định phương pháp phân tích trong dịch sinh học của U8 - FDA

[18] Các chỉ tiêu thẩm định bao gỗ

- Tính đặc hiệu (chọn lọc): thử trên mẫu huyết tương trắng và huyết tương của

NTN tại thời điểm trước khi uống thuốc

- Đường chuẩn và khoảng tuyến tính - Giới han dinh luong duéi (LLOQ)

- Đơ chính xác (đơ lệch so với giá trị thực)

- Đơ đúng (độ lấp lại của các lần phân tích, biểu thi bằng hệ số biến thiên, CV)

- Độ dn định của omeprazol trơng huyết tương khi bảo quan (sau 3 chu kỳ đơng - rã đơng và bảo quản đài ngày), độ én định của dung dich chuẩn gốc và nội

chuẩn gốc trong ngày và thời gian đài

- Hiệu suất chiết (⁄4 so với mẫu chuẩn pha trong pha động, khơng qua giai đoạn chiết tách

3.3.3 Đánh giá tương đương sinh học iu vivo 3.3.3.1 Tuân thủ qui Aịnh về đạo đức

- Đề cương nghiên cứu đã được Hội đồng đạo đức cơ sở phê duyệt (Quyết định số 02/HĐ ĐĐ ngày 29 tháng 06 năm 2005

Chủ tịch: Ths Bủi Thị Hịa, Phĩ viện trưởng, V iên Kiểm nghiệm thuốc TW

Phiếu chấp thuận được kèm theo trong phụ lục 1

- Nghiên cứu này đã được thực hiện buân thủ theo các nguyên tắc đạo đức theo tuyên bé Helsinki và Hướng dẫn thực hành lâm sàng tốt (GCP),

- Bản cam kết của người tình nguyện được ký một cách tự nguyên trước khi tiến hành nghiên cứu Mẫu bản cam kết được đưa trong phụ lục Ì

3.3.3.2 Nguoi tình nguyện: -

Nguồn gốc: Tuyển chọn NTN là sinh viên của các trường đại học và một số người đang làm việc trong khu vực Hà Nội

Tiêu chuẩn chấp nhân - -

- Tiêu chuẩn chung: nam giới khoẻ mạnh, tuổi 18 — 55 Chỉ số BMI về cân

năng và chiều cao phải trong khoảng từ 18 — 25kg/m’, theo cách tính chiều cao, cân nang cha Metropolitan Index 1983 cho người lớn,

Trang 30

- Đánh giá chung về tình hình sức khoẻ, khám tổng quát về tim rnạch, tiêu hố, thần kinh, chiều cao, cân năng, huyết áp, nhịp thé, tất cả phải trong giới hạn bình thường,

- Các chỉ số xét nghiệm máu đều phải trong giới hạn bình thường Xét nghiệm bao gồm: hồng cầu, bạch cầu, tiểu cau, hemoglobin, hematocrit; Sinh hod

lâm sàng: A8T(GOT), ALT(GPT), creatinine, glucose;

- Xét nghiêm kháng thể HTV và kháng nguyên viêm gan B phải âm tính Tiêu chuẩn loại trừ

- NTN nghiện ma tuý, rượu hoặc thuốc lá,

~_ Người đang cĩ những rối loạn về tim mạch, hơ hấp, thận, tiêu hĩa, miễn dịch, huyết học, nội tiết, hệ thần kinh hoặc bệnh tâm thần ;

~_ Người cĩ các giá trị xét nghiệm nằm ngồi khoảng bình thường ;

- Người nghỉ ngờ cĩ nhiễm HIV và HbsAg (đương tính với phép thử nhanh)

~_ Người cĩ tiền sử dị ứng với omeprazol hoặc các thuốc cùng nhĩm,

-_ Người mới bị ốm trong vịng 2 tuần trước khi uống thuốc giai đoạn I,

- Người đã đồng bất Kỷ mơi loại thuốc nào gây cắm ứng hoặc ức chế chuyển hố thuốc ở gan trong vịng 28 ngày trước khi uống thuốc giai doan I,

Qui trinh kiém tra NTN khi tuyén chon: Tuyén chon va kiém tra NTN theo cée chi

tiêu trên trong vịng 2 tuần trước khi bất đầu uống thuốc giai đoạn 1 Loại bỏ NTN khi phân tích, đánh giá

Khơng đủng mẫu của NTN vào phân tích nếu:

- NTN rot lui trong quá trình nghiên cứu, khơng tham gia hết các giai đoạn - Trong hoặc sau khi nghiên cứu, phát hiện thấy NTN khơng tuân thủ

những qui định của nghiên cứu

- _ NTN bị nên hoặc ỉa chảy trong vịng 2 giờ sau khi uống thuốc hoặc cĩ các

phân ứng bất lợi nghiêm trong trong khi uống thuốc và lầy mẫu Số các mẫu máu lấy bị mất > 4 điểm

Khơng dùng số liêu của NTN vào tính thơng kê nếu

Mắt > 2 điểm lấy mẫu liên tiếp trong pha hấp thu hoặc xung quanh Trnax,

3.3.3.3 Liều dùng, cách dùng: mỗi giai đoạn, mỗi NTN sẽ uống 1 viên 20mg thuốc

thử hoặc thuốc đối chứng vào buổi sáng với 200ml nước tỉnh khiết, uống liên tục trong 6 ngày

Người tình nguyện uống thuốc liên tục trong 6 ngày đheo thiết kế) Những ngày từ

thứ 2 đến thứ năm của cả hai giai đoạn (khơng lấy mẫu máu), NTN tập trung uống thuốc vào đầu giờ buổi sáng tại phịng lấy mẫu Nghiên cứu viên trực tiếp cho uống thuốc và ghi chép các phản ứng bất lợi (nếu cĩ)

Trang 31

Riêng các ngày cĩ lấy mẫu (ngày 1 và ngày thứ 6), NTN tập trung tại khu vực lấy mẫu từ tối hơm trước Bữa tối trước ngày lầy mẫu máu, NTN chỉ được ăn nhẹ và ăn trước 10 giờ đêm, nước uống theo nhụ cầu, Trước khi uống thuốc, NTN được khám lâm sàng, kiểm tra huyết áp, tin mach, nhip thé dé dam bao ho dang trong tinh trang Khỏe ranh Trong vịng 1 giờ trước và sau khi uống thuốc, NTN khơng được uống nước Bữa ăn được thực hiện 4 giờ sau khi uống thuốc Khẩu phần ăn được qui định

bởi nhĩm nghiên cứu và đồng nhất giữa các WTN Trong suốt thời gian tiến hành lấy

máu, NTN chỉ được uống nước tỉnh khiết, khơng được uống sữa, nước chè, cà phê,

coea hoặc bắt kỷ một loại nước tăng lực nào

3.3.3.4 Cách lấy máu: Dùng kim vơ khuẩn luồn vào tĩnh mạch cẳng tay của mỗi

NTN và cố định sao cho khơng cản trở các hoạt động bình thường của cẳng tay Lay miu bing bom tiém rồi cho vào các éng nghiệm đã cĩ sin chất chống đơng (EDTA, 1ững/ ống) Thời điểm lầy mẫu: 0h (ngay trước lúc uống thuốc) và các thời điểm

30°; 60°; 90°, 2h, 2h30, 3h, 3h30'; 4h, 5h, 6h, và 8 giờ sau khi uống thuốc

Mỗi lần lầy khoảng 6 mÍ máu Các mẫu máu được ly tâm, tách lầy phần huyết tương Huyết tương được bảo quản ở - 40°C cho đến khi tiến hành phân tích

Quá trình cho uống thuốc và lấy mẫu máu được thực hiện tại phịng lấy mẫu

đặt tại Viên Kiểm nghiệm thuốc TW, 48 — Hai Bà Trưng, Hà Nội Các bác sĩ, y tá

của Bệnh viện Bạch Mai (do B8 Phạm Duệ phụ trách) cùng phối hợp theo đối, giám sát và chăm sĩc ÿ tế cho NTN, Phương tiện và thuốc cấp cứu cho các phản ứng sốc phan vé và phan img bat lợi được chuẩn bị sẵn sàng để sơ cứu tại chỗ Trường hợp năng sẽ được gửi tới phịng cấp cứu, BV Việt nam ~ Cuba, 37 - Hai Bà Trưng hoặc

chuyển tới Bệnh viên Bạch Mai, 79 - Đường Giải phĩng Quá trình lấy mẫu tuân thủ

theo Hướng dẫn thực hành lâm sàng tốt (GCP) của Tơ chức Y tế thể giới

cả người tình nguyện đều tham gia đầy đủ và được uống thuốc theo đúng thiết kế nghiên cứu

3.3.3.5 Phân tích mẫu luyết tương MTM sau khi uỗng thude

Sử dụng phương pháp phân tích đã được thấm định để định lượng các mẫu huyết

tương NTN sau khi uống thuốc

Khi phân tích, huyết tương được lấy ra khỏi tủ bảo quản và để tan chảy ở nhiệt độ phịng Tiến hành phân tích ngay sau khi để tan chảy Mẫu huyết tương của mỗi NTN (bao gồm cả thuốc thử và thuốc đối chứng, đơn liều và 6 liều được phân tích trong cùng 1 ngày với cùng một đường chuẩn và điều kiện phân tích

3.3.3.6 Xác định các thơng số dược động học:

Thơng số được động học của từng NTN được xác định bao gồm:

- Nơng độ thuốc tối đa (Cmax): xác định trực tiếp trên giá trị đo được

Trang 32

Với Ci là nâng đệ thuốc tại thời điểm lắp mẫu tí

AUCba= AUCp¡+ ChứAz

Với Cn là nồng độ thuấc tại thời điễn lấy mẫu cuối cùng và Az là hằng số tắc độ thải trừ - Thời gian đạt nồng độ thuốc tối đa (Tra): xác định trực tiếp trên giá trị đo được Tinh thếng kê và đánh giá tương đương sinh học theo các hướng dẫn và qui định của US - FDA:

- Phin tích phương sai, xác định khoảng tin cy 90% (CI) của các giá trị tỷ

18 LnCmax va LnAUC) _« trung bình giữa thuốc thử và thuốc đối chứng

= in Z) £200; 8") a MBE

Trong đĩ: T: Giá trị Gmax hoặc AUCg „của thuấc thử : Giá trị Cmax hoặc AUOa„ của thuốc chứng AM? Bậc tự do của sai số xác định bing ANOVA

MSE: Trung bình bình phương của sai số xác định bằng ANOVA Wz Tang số MTN tham gia đánh giá TĐSH

-_ 8o sánh giá trị Tmax được tính theo phương pháp phân tích khơng tham sé cia Wilcoxon (Wilcoxon signed — rank test) Gid trị Tmax của thuốc thử và thuốc chứng khác nhau khơng cĩ ý nghĩa thống kê Œ > 0,05) khi tổng thứ tự xếp hạng đương và âm (sưm đƒ possitvefegative rank) lớn

hơn giá trị tra bang với cỡ mẫu n (n là số lượng cặp giá trị Tmax thuốc thử

và thuốc chứng cĩ sai khác) Kết quả đánh giá Tmax cĩ thể chỉ mang tính

chất thơng tin và khơng căn cứ để so sánh đánh giá TĐSH

Hai chế phẩm tương đương sinh học nếu khoảng tín cậy 90% của tỷ lệ Cmax và AUCp « trung bình, tính thống kê với giá trị đã chuyển đổi logarit của thuốc thử so với thuốc đối chứng nằm trong khoảng 80 — 125 %

Trang 33

-_ Qui trình đánh giá TĐSH chế phẩm viên nang omeprazol bao tan trong

ruột,

Qui trình phân tích lựa chọn thiết bị phủ hợp với điều kiện hiện cĩ của phịng thí nghiệm V iệt Nam

Để xây đựng qui trình thử TĐSH, xác định cỡ mẫu tối thiểu &ố lượng người tình

nguyên) cần thiết cho nghiên cứu, xác định thiết kế nghiên cứu là đơn liều, đa liều hay kết hop Trong tùng trường hợp đơn liều hay đa liều, tính kết quả thống kê theo 2 cỡ mẫu khác nhau: 12, 18 Với cỡ mẫu 12, lấy ngẫu nhiên số cá thể trong số 18 để tính tốn Dựa trên kết quả thu được, nhận định và lựa chọn cỡ mẫu phủ hợp để đưa vào qui trình

Trang 34

4.KÉT QUÁ NGHIÊN CỨU

4.1 Khảo sát độ hồ tan mvitro

4.1.1 Thữ độ hó tan trong mơi trường pH 4,5 và pH 1,2

Omeprazol rất bị phân huỷ trong mơi trường acid, thực tế chúng tơi đã khảo sát mức

đơ phân huỷ, kết quả cho thấy:

- Chuẩn omeprazol pha trong HƠI 0,1N, sau 30 phút nhận thấy dung dịch

chuyển sang màu vàng,

_ = Quét phổ hấp thụ tử ngoại, cho thấy đỉnh hấp thụ cực đại đã bị dịch chuyển về phía bước sĩng đài Kết quả được ghỉ ở hình 4.1

Bang 4.1 Kết quả thử đệ hồ tan viễn nang Helinzole và Lomac trong mơi trường pH 1,2 và pH 4,5 sau 2 giờ

Tượng hịa tan (96) trong pH 12 |_ Lượng hịa tan (%) trong pH 45 STT | Helmzele Lomac Helinzole Lomac T s4 105 541 26 ? 93 s2 54 465 3 52 68 53,2 45,7 4 +6 114 50 37,8 5 95 12,0 55,1 479 6 41 +2 520 35,6 7 32 100 517 382 8 69 11,0 52,3 42,1 9 82 104 52,3 47,6 10 3 s8 531 412 1 46 55 520 36,6 12 3,3 112 515 42,1 TB 65 s2 s 422 SD 2,24 2,58 Lu 4,36 P 0,003 65x 107

So sánh kết quả đơ hồ tan giữa thuốc thử và thuốc chứng cho thấy lượng omeprazol hồ tan được trong mơi trường pH 1,2 và 4,5 khác nhau cĩ ý nghĩa thống kê (P<

0,01)

Trang 35

Overlay Spectrum Graph Report cane 2188 = 1 eee] an [eee 1w Tum Ax [3nbm so) — am a mg mạ | | nam aan a 3 ng Họ ra

Hình 4.1: Phỗ UV của chuẩn omeprazol trang mơi trường acid sau 30 phút

Trang 36

Bảng 4.3 Kết quả thử độ hồ tan viên nang Lomae trong mơi trường pH 6,8 Lugng Omeprazol hoa tan (%) STT 5 phút 10 phút 15 phút 30 phút 1 38 186 472 934 2 28 174 482 928 3 52 20,8 40,7 34,9 4 56 16,9 42,2 36,9 5 +1 196 558 s4 6 46 24,1 50,1 913 7 5,0 23,3 43,3 87,0 $ 36 28 40,1 87,0 9 63 212 42,2 873 10 41 19,8 45,7 #77 m 42 250 33/7 780 12 30 254 502 %0 TB 44 212 45,0 38,0 sD 1,0 28 56 42

Theo cơng thức, giá trị Fa= 47,6

Với kết quả thu được cho thầy viên nang Lomae và Helinzole thuộc loại dễ tan trong mơi trường pH 6,8 (sau 30 phút lượng hồ tan đạt 8894 và 99,594)

So sánh độ hồ tan của 2 chế phẩm giá trị F; xác định được 47,6 chứng tỏ 2 chế phẩm cĩ độ hồ tan trong mơi trường pH 6,8 khơng hương đương

4.2 Xây dựng phương pháp phân tích omeprazol trong huyết tương

4.2.1 Xây đựng phương pháp

hảo sát với một số dung mơi và qui trình chiết khác nhau, chúng tơi đã chọn được phương pháp chiết lỏng - lỏng để tách orneprazol ra khỏi huyết tương Qui

trình chiết được tĩm tắt như sau: lấy 1rnl mẫu huyết tương (tự tạo), thêm dung dich đệm Borat pH 9,0 và chiết bằng hỗn hợp dung méi dicloromethan: isopropanol: n-

hexan Lắc trộn kỹ, ly tâm Lấy lớp dung mơi, bốc hơi thu được cắn, hồ tan cắn trong pha động, lọc và tiêm vào máy sắc ký,

Quá trình chiết tách được tĩm tắt trong sơ đồ sau:

Trang 37

Huyết tương 1ml + chuẫn nội + đệm borat pH9,0 & Lắc xốy 30 giây + Hỗn hợp + dung mơi chiết Lắc tốc đơ |*“————— | đulànphú/ 1Uphút Hỗn dịch š Ly tâm tắc độ + 4000 vịng/phút x Dịch trong & Bốc hơi dịch ở 40°” ‘ cĩ khí Ne Cấn ®—- hà tan trang pha động + Dịch $$$] Loe qua mang loc + đ 45um Chay sắc ky

Hình 4.2 : Qui trình xử lý mẫu huyết tương

-Diéu kiện sắc kỷ HPLC: Bằng thực nghiệm, điều kiện sắc ký đã được xác định:

+ Cột: Cột RP\s, 250mm x 4,6 mm ; Sum

+ Pha động: methanol: acetonitril: đêm phosphat pH 7,2 với tỷ lê thích hợp, + Tốc độ dịng: điều chỉnh tốc đơ từ 1 — 2 ml phút theo thời gian để cĩ thể tách được omeprazol ra khỏi các pic tạp và thời gian phân tích phủ hợp,

+ Detector: 302nm

+ Thể tích tiêm mẫu: 100p1

+ Chuẩn nội: Albendazol

Trang 38

4.2.2 Thâm định phương pháp phân tích Tĩnh đặc cách pha chuẩn omeprazol trong huyết tương trắng) Kết quả thu được các sắc đỗ như trên hình 4.3 @ ) Hinh 4.3 Sdic ký đề luuyết tương trắng (4) và huyết tương trắng cĩ pha chuẪn và chuẩn nội (b)

Trên các sắc đề cho thấy: Mẫu huyết tương trắng cĩ pha chuẩn và chuẩn nội

xuất hiện pie của Omeprazol với thời gian lưu khoảng 5,2 phút, pic của chuẩn nội cĩ thời gian lưu khoảng 8,0 phút Tại vị trí này trên sắc đồ mẫu trăng khơng thấy cĩ pie nào

Khảo sát khoảng tuyển tính và đường chuẪn

Pha các dung dịch chuẩn cĩ nồng độ khoảng 20, 50, 100, 250, 500, 1000

ngínl Tiến hành sắc ký theo các điều kiện đã chọn Kết quả ghi trong bảng 4.4 và hình 4-4

Bằng 4.4, Sự phụ thuộc giữa 09 lệ diện tích pic của chuằn/ chuẪn nội và nơng độ ameprazel chudn pha trong huyết tươi

Ning độ Diện tích pic | Diện tich pie Tỷ lệ

Trang 39

Đường chuẩn Omeprazol § 20 00526+ 00076 Nẵng độ (ng/mI) 0 200 408 808 800 - 1000

Hình 4.4: Đường biểu diễn sự phụ thuộc của tỷ lệ diện ch pic chuÂn/chuẨn nội

theo nơng độ omeprazol chuẩn pha trong huyết tương

Từ kết quả thu được cho thấy trong khoảng nồng độ đã khảo sát cĩ sự tương,

quan tuyến tính giữa nồng độ omeprazol trong mẫu huyết tương với tỷ lệ diện tích

pic chuẩn/ chuẩn nội thu được (= 0,996) Khoảng tuyến tính này phù hợp để định

lượng omeprazol trong huyết tương

Giới hạn định lượng đưới - -

Pha mẫu chuẩn cĩ nồng đơ khoảng 20 ngíml trong huyết tương Tiến hành chiết và sắc ký theo các điều kiện đã chon Két quả thu được ghi trong bang 4.5

Bằng 4.5 Kết quả xác định giới hạn định lượng dưới _ _ Diện tích pic Mdv nắn Omeprazol đs= Albendazol tạ= 8,0 5,2 phút (tạ= 8,0 phú) phút: phút 1 3178 34708 615 525 2 4850 35167 121 531 3 3059 30101 - 645 4 4709 35032 472 : 5 3307 33229 950 479 6 4578 34708 219 - TP 4047 33824 475 425 CV() 19,0 58 2

_Tai vị trí tạ= 5,2 phút và 8,0 phit dap tng cha mau chuan cé néng 43 20 ng/ml

gấp 10 lần đáp ứng của mẫu trắng và đơ lấp lại sau 6 lần phân tích với CV < 20%

Trang 40

Như vậy mẫu chuẩn chứa Omeprazol cĩ nồng độ 20 ngím| đáp ứng yêu cầu là giới hạn định lượng đưới cho phép trong phương pháp phân tích dich sinh học

Độ chính xác, độ đúng

Tiền hành phân tích và sắc ký các mẫu tự tạo pha ở 3 khoảng nồng độ theo các điều kiện đã chọn, phân tích nhiều lần trong ngày và giữa các ngày Kết quả thu được ghỉ trong bằng 4.6 và 4.7 Bằng 4,6 Kết quả khảo sát chính xác, độ đẳng trong ngày

Tơng độ 24ng/ml Tơng độ 97ngíml Tơng độ 1050ng/mL

thấy xác thấy xác - | tìm thấy xác (ng/ml) @®) (ngiml) ) (ng/ml) @) 1 23,9 99,6 95,7 987 1039,0 99,0 2 22,7 94,6 96,9 99,9) 1013,1 965 3 20,5 85,4 95,1 98,0 1075,4 102,4 4 23,2 96,7 97,8 100,8 1035,1 98,6 5 23,5 97,9 96,3 99,3 1049,2 99,9 TP | 228 948 %4 99,3 1042,4 93 CVG9| 588 589 1,09) 1,09 218 216 Bằng 4.7 Kết quả khảo sát chính xác, độ đúng giữa các ngày Nẵng độ 50ngíml_ | Nơng độ 250ng/ml | Nơng độ 500ng/mL

Xết quả khảo sát cho thấy phương pháp định lượng cĩ độ chính xác cao (94,8 ~ 100,394 so với giá trị thực) và khả năng lặp lại trong ngày và khác ngày tốt ®2CV =1,09 - 9,1 9⁄9), đáp ứng yêu cầu cho phép phương pháp phân tích trong dịch sinh học