Paracetamol (PARA) có tác dụng chủ yếu hạ nhiệt vàgiảm đau, hầu như không có tác dụng kháng viêm so vớicác thuốc NSAID khác 2. Nó được sử dụng khá phổbiến thay thế cho aspirin để hạ sốt và giảm đau ở mứcđộ trung bình. Hiện nay, tại thị trường Việt Nam các chếphẩm chứa hoạt chất PARA rất phong phú cả về hàmlượng và các dạng bào chế, nhưng chế phẩm viên nénparacetamol giải phóng nhanh chưa có trên thị trườngViệt Nam
NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC VIÊN NÉN PARACETAMOL 500 MG GIẢI PHÓNG NHANH SẢN XUẤT TẠI VIỆT NAM NGUYỄN THỊ HỒNG, CAO NGỌC CƯƠNG, NGUYỄN THỊ DUNG, TẠ MẠNH HÙNG, ĐOÀN CAO SƠN Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương Từ khóa: Paracetamol, sinh khả dụng, tương đương sinh học, huyết tương, HPLC Đặt vấn đề Paracetamol (PARA) có tác dụng chủ yếu hạ nhiệt giảm đau, khơng có tác dụng kháng viêm so với thuốc NSAID khác [2] Nó sử dụng phổ biến thay cho aspirin để hạ sốt giảm đau mức độ trung bình Hiện nay, thị trường Việt Nam chế phẩm chứa hoạt chất PARA phong phú hàm lượng dạng bào chế, chế phẩm viên nén paracetamol giải phóng nhanh chưa có thị trường Việt Nam Để góp phần nâng cao hiệu điều trị, nhóm nghiên cứu Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương thực dự án “Hồn thiện qui trình cơng nghệ sản xuất viên nén paracetamol 500 mg giải phóng nhanh”, sau tiến hành đánh giá tương đương sinh học (TĐSH) so sánh với chế phẩm đối chứng viên nén Panadol ActiFast (paracetamol 500 mg), sản xuất Công ty Dược phẩm GlaxoSmithKline, UK; Số lô: YW7X, Hạn sử dụng: 06/2021, sau uống liều đơn điều kiện đói 18 người tình nguyện (NTN) khỏe mạnh - Tủ lạnh sâu -35 °C ± °C, MDF-U5412, Panasonic, Nhật Bản; - Micropipet Eppendorf loại 10 -100 μl, 100 -1000 μl, 1000 - 5000 μl; - Ống ly tâm teflon chịu lực ly tâm lớn; - Bình định mức, pipet thủy tinh đạt tiêu chuẩn class A 2.1.2 Dung mơi, hóa chất, chất chuẩn - Dung mơi, hóa chất: Methanol, acetonitril (loại dùng cho HPLC); acid percloric, kali dihydrophosphat, kali clorid, acid hydrocloric (loại PA); nước RO - Chất chuẩn: + Paracetamol: Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương, SKS: C0619019.06; Hàm lượng: 100,29% (nguyên trạng) + Cafein: Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương, SKS: 0418099.04; Hàm lượng: 99,82% (nguyên trạng) - Huyết tương trắng: Không chứa PARA Viện Huyết học Truyền máu Trung ương Thực nghiệm 2.2 Đối tượng phương pháp nghiên cứu 2.1 Thiết bị, dụng cụ, hóa chất, chất chuẩn 2.2.1 Thuốc nghiên cứu 2.1.1 Thiết bị, dụng cụ phân tích - Thuốc thử (T): Viên nén Paracetamol 500 mg giải phóng nhanh sản xuất Cơng ty Cổ phần Tập đồn Merap, Việt Nam; số lơ: NC-01/Paravik, ngày sản xuất: 07/06/2019, đạt tiêu chuẩn chất lượng nhà sản xuất Tất thiết bị phân tích chuẩn hóa theo qui định ISO/IEC 17025 GLP - Hệ thống sắc ký lỏng hiệu cao Shimadzu, Nhật Bản; - Thiết bị thử hòa tan cốc LOGAN UDT; - Cân phân tích Mettler Toledo, Sartorius độ xác 0,1 mg; - Máy ly tâm Sartorius Sigma 4-16KS; - Máy lắc xoáy Vortex ZX3 VELP scientific; - Thuốc đối chứng (R): Viên nén Panadol ActiFast (paracetamol 500 mg), sản xuất Công ty Dược phẩm GlaxoSmithKline, UK; Số lô: YW7X, Hạn sử dụng: 06/2021 Hai thuốc kiểm tra đạt theo tiêu chuẩn chất lượng có hàm lượng paracetamol khác khơng q 5% Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 2.2021; Tập 19.(72) 15 2.2.2 Phương pháp nghiên cứu Đánh giá TĐSH thuốc thử so với thuốc đối chứng người tình nguyện (NTN) khỏe mạnh, uống liều đơn thuốc nghiên cứu điều kiện đói qua đêm với thiết kế nghiên cứu chéo, ngẫu nhiên, thuốc, giai đoạn, trình tự, nhãn mở theo hướng dẫn thực nghiên cứu TĐSH EMA (European Medicines Agency) US-FDA (United State Food and Drug Administratino) [5],[9] 2.2.2.1 Bước (tuyển chọn NTN) Nghiên cứu thực 18 NTN khỏe mạnh, khơng phân biệt giới tính (nữ khơng mang thai nuôi bú), đủ lực hành vi dân sự, có độ tuổi từ 18 – 40 tuổi, số BMI (cân nặng/ bình phương chiều cao) khoảng 18,5 – 25,0 kg/m2 NTN không nghiện rượu, thuốc chất gây nghiện, khơng có tiền sử mắc bệnh tim mạch, gan, thận, hô hấp, dị ứng; xét nghiệm máu, chức gan thận bình thường, xét nghiệm HbsAg HIV âm tính Tiêu chuẩn chấp nhận, loại trừ đối tượng tham gia nghiên cứu quy định cụ thể đề cương nghiên cứu Đề cương nghiên cứu cam kết tình nguyện tham gia nghiên cứu (ICF) Hội đồng đạo đức phê duyệt, chấp thuận trước thực theo quy định đạo đức nghiên cứu y sinh học Việt Nam quốc tế [3],[5],[7],[9] 2.2.2.2 Bước (uống thuốc thử thuốc chứng, lấy mẫu) Giai đoạn I nghiên cứu, NTN uống viên thuốc thử thuốc đối chứng giai đoạn II, NTN dùng thuốc nghiên cứu theo trình tự ngược lại so với giai đoạn I, tùy theo trình tự sử dụng thuốc ngẫu nhiên hóa nghiên cứu Ở giai đoạn, NTN uống thuốc với 240 ml nước lọc, sau nhịn đói qua đêm 10 Thời gian nghỉ giai đoạn để thuốc thải trừ khỏi thể NTN ngày Tại giai đoạn nghiên cứu, nghiên cứu viên tiến hành lấy 14 mẫu máu, mẫu máu khoảng ml qua kim luồn đặt cố định tĩnh mạch cánh tay NTN thời điểm trước uống thuốc (0 giờ) thời điểm 0,05; 0,10; 0,15; 0,20; 0,25; 0,33; 0,50; 0,75; 1; 2; 4; 6; sau uống thuốc Các mẫu máu NTN sau lấy cho vào ống nghiệm chứa chất chống đông dinatri edetat (Na2EDTA), sau ly tâm ngay, tách lấy huyết tương bảo quản huyết tương nhiệt độ - 350C phân tích 2.2.2.3 Bước (phân tích mẫu huyết tương) Phân tích định lượng paracetamol huyết tương NTN phương pháp HPLC với điều kiện sau: 16 + Kỹ thuật xử lý mẫu: Hút ml huyết tương, thêm 50 µl dung dịch chuẩn nội cafein, lắc xốy giây Thêm 250 µl dung dịch acid percloric 15%, lắc xoáy 15 giây Ly tâm 10.000 vòng/phút phút Hút 900 ml lớp dịch phía trên, lọc qua màng lọc kích thước 0,45 µm, tiêm sắc ký + Điều kiện sắc ký : - Cột phenomenex C18 (250 x 4,6 mm; µm) - Pha động: Acetonitril – Dung dịch đệm KH2PO4 pH 3,3 (tỷ lệ 17,5 : 82,5) Dung dịch đệm KH2PO4 pH 3,3: Hòa tan 34,02 g kali dihydrophosphat 900 ml nước chỉnh pH đến 3,3 acid orthophosphoric, thêm nước vừa đủ 1000 ml - Nhiệt độ cột: 40 0C - Tốc độ dòng: ml/phút - Detector: PDA, l = 245 nm - Thể tích tiêm: 50 µl - Nhiệt độ autosampler: Nhiệt độ phòng Phương pháp HPLC định lượng paracetamol huyết tương NTN xây dựng thẩm định theo hướng dẫn thẩm định phương pháp phân tích thuốc dịch sinh học US-FDA EMA Phương pháp phân tích có độ đặc hiệu – chọn lọc paracetamol; khoảng tuyến tính từ 0,2 – 12 µg/ml; độ ngày, khác ngày nằm khoảng từ 85 – 115%, độ xác với giá trị CV < 15% tất khoảng nồng độ; độ ổn định dài ngày mẫu huyết tương 50 ngày nhiệt độ - 350C [1],[4],[7],[8] 2.2.2.4 Bước (phân tích thống kê sinh khả dụng đánh giá tương đương sinh học) Từ kết phân tích định lượng nồng độ paracetamol mẫu huyết tương NTN, xác định thông số dược động học theo mơ hình dược động học khơng ngăn phần mềm Phoenix WinNonlin Phân tích phương sai, xác định ảnh hưởng yếu tố biến thiên cá thể, trình tự, giai đoạn thuốc nghiên cứu tới kết Xác định khoảng tin cậy 90% tỷ lệ trung bình hình học thuốc thử thuốc đối chứng tính giá trị chuyển log Cmax (nồng độ thuốc tối đa đạt máu), AUClast (diện tích đường cong tới nồng độ cuối đạt được), AUCinf (diện tích đường cong ngoại suy tới vô cực) So sánh giá trị Tmax (thời gian thuốc đạt nồng độ tối đa máu) theo phương pháp thống kê phi tham số Wilcoxon Đánh giá TĐSH chế phẩm thuốc thử theo hướng dẫn US-FDA EMA Hai chế phẩm TĐSH Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 2.2021; Tập 19.(72) khoảng tin cậy 90% tỷ lệ (T/R) Cmax AUC trung bình tính giá trị chuyển logarit nằm khoảng giới hạn 80% - 125% [5],[9] Kết bàn luận Nghiên cứu đánh giá TĐSH viên nén paracetamol 500 mg giải phóng nhanh tuân thủ theo nguyên tắc đạo đức tuyên bố Helsiki, tuân thủ hướng dẫn thực hành tốt lâm sàng hướng dẫn thực hành tốt phòng kiểm nghiệm thuốc (GLP) hành Bộ Y tế Việt Nam [3],[5],[9] Sau khám sức khỏe tổng quát tiến hành xét nghiệm cận lâm sàng (huyết học, nước tiểu; sinh hóa, chức tim, gan, phổi, ), thử chất gây nghiện nước tiểu; xét nghiệm mang thai (với nữ giới) NTN ký “Bản cam kết tình nguyện tham gia nghiên cứu”, nghiên cứu viên chọn 18 NTN đáp ứng yêu cầu đối tượng nghiên cứu ghi đề cương nghiên cứu Hội đồng đạo đức phê duyệt Trong 18 NTN tham gia lấy mẫu, khơng có NTN bỏ nghiên cứu chừng bị loại khỏi q trình phân tích thống kê Tiến hành phân tích nồng độ paracetamol huyết tương NTN phương pháp HPLC thẩm định Các mẫu huyết tương NTN phân tích điều kiện Tổng số 504 mẫu huyết tương 18 NTN sử dụng thuốc nghiên cứu phân tích 10 ngày Thời gian tính từ thời điểm lấy mẫu đến kết thúc q trình phân tích 24 ngày, đảm bảo tất mẫu phân tích khoảng thời gian thẩm định độ ổn định (50 ngày), đáp ứng quy định phân tích thuốc dịch sinh học US-FDA EMA [3],[5],[9] Từ kết phân tích HPLC xác định nồng độ paracetamol mẫu huyết tương NTN xác định đường cong nồng độ thuốc theo thời gian sau uống thuốc nghiên cứu NTN, xác định thông số dược động học Cmax, AUClast, AUCinf, Tmax, t1/2, thuốc thử thuốc chứng NTN Tổng hợp kết phân tích từ NTN, xây dựng đường cong trung bình nồng độ thuốc huyết tương theo thời gian 18 NTN tham gia nghiên cứu sau thi uống thuốc thử (T: Thu) thuốc đối chứng (R: Chung) mô tả Hình Hình Đường cong trung bình nồng độ paracetamol theo thời gian 18 NTN Xử dụng phân tích thống kê, thu thơng số dược động học trung bình thuốc thử thuốc đối chứng 18 NTN sau uống liều đơn 500 mg paracetamol tình trạng đói tóm tắt Bảng Bảng Thông số dược động học paracetamol 18 NTN Thuốc Thử (T) Thuốc Chứng (R) Tỷ số T/R* (%) Khoảng tin cậy 90% 10,004 ± 3,4 10,131 ± 3,1 96,63 83,86% - 111,34% AUClast ± SD (µg.h/ml) 27,275 ± 6,286 27,331 ± 6,398 99,88 96,98% - 102,86% AUCinf ± SD (µg.h/ml) 29,730 ± 7,013 29,777 ± 7,005 99,94 97,14% - 102,82% Tmax ± SD (h) 0,60 ± 0,55 0,60 ± 0,55 T1/2 ± SD (h) 2,11 ± 0,31 2,13 ± 0,20 0,334 ± 0,041 0,328 ± 0,031 Thơng số Cmax ± SD (µg/ml) Hằng số thải trừ lz (1/h) Kết phân tích phương sai, xác định khoảng tin cậy 90% tỷ số (T/R) Cmax, AUC thuốc thử thuốc đối chứng trình bày Bảng Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 2.2021; Tập 19.(72) 17 Bảng Kết phân tích phương sai giá trị Cmax, AUClast, AUCinf Thơng số Cmax AUClast AUCinf Nguồn biến thiên Trình tự thử Cá thể Thuốc Giai đoạn Sai số Dao động cá thể (Intrasubject CV) Trình tự thử Cá thể Thuốc Giai đoạn Sai số Dao động cá thể (Intrasubject CV) Trình tự thử Cá thể Thuốc Giai đoạn Sai số Dao động cá thể (Intrasubject CV) Bậc tự Tổng bình phương Trung bình bình phương 1,00 0,71 0,71 16,00 2,79 0,17 1,00 0,01 0,01 1,00 0,05 0,05 16,00 0,95 0,06 Power (%) 24,72% 1,00 16,00 1,00 1,00 16,00 0,27 1,90 0,00 0,00 0,04 0,27 0,12 0,00 0,00 0,00 Power (%) 5,06% 1,00 16,00 1,00 1,00 16,00 0,22 2,00 0,00 0,01 0,04 0,22 0,12 0,00 0,01 0,00 Power (%) 4,89% F - Stat 4,09 2,94 0,18 0,89 P 0,06 0,02 0,68 0,36 83,47 2,24 46,29 0,01 1,94 0,15 0,00 0,94 0,18 100,00 1,79 52,37 0,00 6,16 0,20 0,00 0,97 0,02 100,00 Kết phân tích phương sai cho thấy ảnh hưởng yếu tố trình tự giai đoạn khác khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05), chứng tỏ yếu tố ngẫu nhiên chuẩn hóa nghiên cứu đảm bảo yêu cầu Khoảng tin cậy 90% tỷ số Cmax, AUC tính giá trị chuyển logarit tự nhiên nằm giới hạn quy định từ 80% - 125% Sai số b đạt kỳ vọng (giá trị Power = - b > 80%) Phân tích so sánh giá trị Tmax thuốc thử thuốc đối chứng 18 NTN theo phương pháp thống kê phi tham số Wilcoxon trình bày Bảng Bảng So sánh giá trị Tmax theo phương pháp thống kê phi tham số Mã NTN A01 A02 A03 A04 A05 A06 A07 A08 A09 A10 A11 A12 A13 A14 A15 A16 18 Thuốc thử (T) 0,33 0,20 0,50 0,33 0,33 0,33 0,25 0,25 0,33 0,75 2,00 0,33 0,50 2,0 0,33 0,75 Tmax (giờ) Thuốc đối chứng (R) 0,33 0,25 0,25 1,00 2,00 0,50 0,33 0,50 2,0 0,50 0,75 0,15 0,50 0,33 0,25 0,20 Tỷ số T/R 1,00 0,80 2,00 0,33 0,17 0,66 0,76 0,50 0,17 1,50 2,67 2,20 1,00 6,06 1,32 3,75 Chênh lệch (-) (+) 0,05 0,25 0,67 1,67 0,17 0,08 0,25 1,67 0,25 1,25 0,18 1,67 0,08 0,5 Xếp hạng (-) (+) 12 15 4,5 2,5 15 13 15 2,5 10,5 Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 2.2021; Tập 19.(72) A17 A18 Trung bình SD 0,33 1,00 0,60 0,55 0,50 0,50 0,60 0,55 0,66 2,00 0,17 0,5 Tổng 4,5 62,5 10,5 73,5 Giá trị tra bảng ứng với số cặp sai khác N = Số NTN -2 = 16 30 mức tin cậy 95% Giá trị nhỏ tổng thứ hạng dương âm 62,5 (> 30) lớn giá trị tra bảng Do vậy, Tmax thuốc thử thuốc đối chứng khác khơng có ý nghĩa thống kê mức tin cậy 95% Kết luận Thuốc thử thuốc đối chứng có thời gian đạt đến nồng độ cực đại huyết tương (Tmax) khác khơng có ý nghĩa thống kê khoảng tin cậy 90% tỷ số Cmax, AUC thuốc thử với thuốc đối chứng nằm khoảng từ 80% - 125% Viên nén paracetamol 500 mg giải phóng nhanh sản xuất Việt Nam tương đương sinh học với viên nén Panadol ActiFast (paracetamol 500 mg) Công ty GlaxoSmithKline, UK sản xuất Thuốc thử sản xuất Việt Nam có đủ liệu khoa học tương đương sinh học, thay cho chế phẩm viên nén quy ước để nâng cao hiệu điều trị Tài liệu tham khảo Bayan Alkhawaja, Tawfiq Arafat, Eyad Mallah, Nidal Qinna, Naser Idkaidek, Wael Abu Dayyih, Hamza Alhroub, Adnan Badwan (2014): “Simultaneous Determination of Paracetamol and its Metabolites in Rat Serum by HPLC Method and its Application Supplement-Drug Pharmacokinetic Interaction” Faculty of Pharmacy and Medical Sciences, University of Petra, Amman, Jordan Bộ Y tế (2015), Dược thư quốc gia Việt Nam, lần xuất thứ hai Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật – Hà Nội, trang 1118 - 1121 Bộ Y tế (2018), Thông tư số 29/2018/TT-BYT: Quy định thử thuốc lâm sàng European Medicines Agency, Committee for Medicinal Products for Human Use (2012): Guideline on Validation of Bioanalytical Menthods European Medicines Agency, Committee for Medicinal Products for Human Use (2012): Guideline on the investigation of Bioequivalence Karalis V., Macheras P., (2013): “An insight into the properties of a two-stage design in bioequivalence studies” Pharm Res 30(7): 1824-35 Trường Đại học Dược Hà Nội, Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Nguyễn Thị Hồng (2020): “Bước đầu nghiên cứu sinh khả dụng tương đương sinh học viên nén paracetamol 500 mg giải phóng nhanh” U.S Deparment of Health and Human Services Food and Drug Administration (2018): Bioanalytical Method Validation - Guidance for Industry US-FDA- Guidance for Industry (2003): Bioavailability and Bioequivalence Studies for Orally Administered Drug Products-General Considerrations SUMMARY The bioequivalence of the two preparations of Paracetamol fast release tablets were evaluated by a two-way crossover randomized study, in 18 Vietnamese healthy volunteers after a single oral dose Plasma samples which collected at given intervals of time after administration, were assayed by high pressure liquid chromatography The pharmacokinetic parameters, area under the cuve total (AUClast) and to infinity (AUCinf), peak plasma concentration (Cmax), time to attain peak (Tmax), and elimination half-life (t1/2) were determined and analyzed statistically No statistical significant differences were observed for Cmax and AUC between the test and the reference 90% confidence limits calculated for Cmax and AUC of Paracetamol were included in the bioequivalence range (0.8 – 1.25) This study showed that the test drug is bioequivalent to the reference drug (Ngày nhận bài: 28/05/2020 ; Ngày phản biện: 05/12/2020 ; Ngày duyệt đăng: 10/06/2021 Tạp chí KIỂM NGhiệm thuỐC - Số 2.2021; Tập 19.(72) 19 ... xuất Việt Nam tương đương sinh học với viên nén Panadol ActiFast (paracetamol 500 mg) Công ty GlaxoSmithKline, UK sản xuất Thuốc thử sản xuất Việt Nam có đủ liệu khoa học tương đương sinh học, thay... 1824-35 Trường Đại học Dược Hà Nội, Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Nguyễn Thị Hồng (2020): “Bước đầu nghiên cứu sinh khả dụng tương đương sinh học viên nén paracetamol 500 mg giải phóng nhanh? ?? U.S Deparment... (T/R) Cmax AUC trung bình tính giá trị chuyển logarit nằm khoảng giới hạn 80% - 125% [5],[9] Kết bàn luận Nghiên cứu đánh giá TĐSH viên nén paracetamol 500 mg giải phóng nhanh tuân thủ theo nguyên