Xây dựng và ứng dụng các quy trình xác định dư lượng thuốc trừ sâu thuộc các nhóm clo hữu cơ lân hữu cơ, cúc tổng hợp và carbamat thường sử dụng trên rau bằng phương pháp hplc và gc

ỦY BAN NHÂN DÂN TPHCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CHI CỤC BẢO VỆ THỰC VẬT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO NGHIỆM THU XÂY DỰNG VÀ ỨNG DỤNG CÁC QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG THUỐC TRỪ SÂU THUỘC CÁC NHÓM CLOR HỮU CƠ, LÂN HỮU CƠ, CÚC TỔNG HỢP VÀ CARBAMAT THƯỜNG SỬ DỤNG TRÊN RAU BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC VÀ GC Chủ nhiệm đề tài: ThS Nguyễn Văn Đức Tiến PGS.TS Nguyễn Đức Tuấn THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 6/2011 TĨM TẮT NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Tại TPHCM, ngày có khoảng 1200 rau loại nhập vào thành phố, có khoảng 3% lượng rau có nhiễm dư lượng thuốc trừ sâu Hiện phương pháp phát dư lượng thuốc trừ sâu phổ biến phân tích nhanh phương pháp sinh hóa với kit Đài Loan hay Thái Lan Tuy nhiên, phương pháp khơng phát thuốc trừ sâu nhóm cúc tổng hợp nhóm clor hữu cơ, độ nhạy phương pháp thuốc trừ sâu có khác nên mẫu rau nhiễm thuốc trừ sâu có vượt mức cho phép hay khơng Một số trung tâm thuộc khu vực phía Nam có khả xác định dư lượng thuốc trừ sâu định danh cụ thể, hình thức dịch vụ theo yêu cầu khách hàng nên tốn nhiều thời gian khơng có tính chủ động để áp dụng ngồi thị trường Từ thực tế này, việc nghiên cứu xây dựng quy trình định lượng thuốc trừ sâu nhóm mà nơng dân thường sử dụng thách thức nhà phân tích Mục tiêu đề tài Xây dựng ứng dụng quy trình xác định dư lượng thuốc trừ sâu nhóm carbamat, lân hữu cơ, clor hữu cúc tổng hợp thường sử dụng rau phương pháp HPLC GC Phƣơng pháp nghiên cứu Điều tra thuốc trừ sâu mà nông dân sử dụng phổ biến rau Thiết lập cách thức tạo mẫu giả định phòng thí nghiệm Xây dựng quy trình chiết làm giàu mẫu phân tích từ mẫu giả định Xây dựng ứng dụng quy trình xác định dư lượng thuốc trừ sâu nhóm carbamat thường sử dụng rau phương pháp HPLC với đầu dò huỳnh quang Xây dựng ứng dụng quy trình xác định dư lượng thuốc trừ sâu nhóm lân hữu thường sử dụng rau phương pháp GC với đầu dò NPD Xây dựng ứng dụng quy trình xác định dư lượng thuốc trừ sâu nhóm clor hữu cơ, cúc tổng hợp thường sử dụng rau phương pháp GC với đầu dò ECD Kết nghiên cứu Đã xác định danh mục thuốc trừ sâu mà nông dân sử dụng phổ biến rau Đã xây dựng quy trình chiết làm giàu mẫu phân tích thuốc trừ sâu phổ biến từ mẫu giả định phịng thí nghiệm Đã xây dựng ứng dụng quy trình xác định dư lượng thuốc trừ sâu nhóm carbamat thường sử dụng rau phương pháp HPLC với đầu dò huỳnh quang Đã xây dựng ứng dụng quy trình xác định dư lượng thuốc trừ sâu nhóm lân hữu thường sử dụng rau phương pháp GC với đầu dò NPD Đã xây dựng ứng dụng quy trình xác định dư lượng thuốc trừ sâu nhóm clor hữu cơ, cúc tổng hợp thường sử dụng rau phương pháp GC với đầu dò ECD ii SUMMARY Everyday, there are about 1,200 tons of green vegetables imported into Ho Chi Minh city Three percentages of that have determined to have pesticide amount higher than permitted residue levels Currently, the biochemical tests are often used to detect quickly pesticides However, the tests not detect pyrethroid and organochlorine pesticides, detection limit of each pesticide is different that leads to their results can not approve if the pesticide amount is higher than accepted residue level Several analytical laboratories in the South have capability to quantify the pesticide which is required by customer As a result, the waste time and reality are limited Therefore, study on quantitative determination of residue of commonly used pesticides on green vegetables is challenged Objectives Development and application of the HPLC and GC methods for quantitative determination of residue of carbamate, organophosphorous, pyrethroid, and organochlorine pesticides, which are commonly used on green vegetables Methods Investigation of list of pesticides which are commonly used on green vegetables by farmer Establishment of assumed samples in the laboratory Establishment of extraction and clean-up of assumed samples Quantitative determination of commonly used carbamate pesticides residue on green vegetables by HPLC with fluorescence detector (FLD) Quantitative determination of commonly used organophosphorous pesticides residue on green vegetables by GC with nitrogen phosphorus detector (NPD) Quantitative determination of commonly used organochlorine and pyrethroid pesticides residue on green vegetables by GC with electron capture detector (ECD Results A list of pesticides, which are commonly used on green vegetables by farmer, was established An extraction and clean-up process of commonly used pesticides from assumed samples in the laboratory was developed The HPLC-FLD method was developed, validated, and applied for quantitative determination of commonly used carbamate pesticides residue on green vegetables The GC-NPD method was developed, validated, and applied for quantitative determination of commonly used organophosphorous pesticides residue on green vegetables The GC-ECD method was developed, validated, and applied for quantitative determination of commonly used organochlorine and pyrethroid pesticides residue on green vegetables iii MỤC LỤC Trang ii iv vi viii x xii xiii 2 13 16 17 TÓM TẮT NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Mục lục Danh mục chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình Danh mục sơ đồ BÁO CÁO NGHIỆM THU ĐẶT VẤN ĐỀ TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình nghiên cứu thuộc lĩnh vực đề tài 1.2 Thuốc trừ sâu tình hình sử dụng Việt Nam 1.3 Nhóm thuốc carbamat 1.4 Nhóm thuốc lân hữu 1.5 Nhóm thuốc cúc tổng hợp 1.6 Nhóm thuốc clor hữu 1.7 Tiêu chuẩn rau an toàn 1.8 Hệ thống HPLC với đầu dò huỳnh quang phương pháp tạo dẫn xuất sau cột 1.9 Hệ thống sắc ký khí với đầu dị ion hóa lửa phosphor – nitrogen (NPD) đầu dò cộng kết điện tử (ECD) NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Chất chuẩn, ngun liệu, hóa chất, dung mơi, trang thiết bị 2.2 Điều tra thuốc trừ sâu nông dân thƣờng sử dụng rau thành phố Hồ Chí Minh tỉnh cung cấp rau cho thành phố 2.3 Thiết lập cách thức tạo mẫu giả định phịng thí nghiệm 2.4 Xây dựng quy trình xác định dƣ lƣợng thuốc trừ sâu nhóm carbamat thƣờng sử dụng rau HPLC với đầu dò huỳnh quang 2.4.1 Xác định điều kiện phân tích đồng thời thuốc trừ sâu nhóm carbamat 2.4.2 Xây dựng quy trình chiết làm mẫu 2.4.3 Thẩm định quy trình 2.5 Xây dựng quy trình xác định dƣ lƣợng thuốc trừ sâu nhóm lân hữu thƣờng sử dụng rau GC với đầu dò NPD 2.5.1 Xác định điều kiện phân tích đồng thời thuốc trừ sâu nhóm lân hữu 2.5.2 Xây dựng quy trình chiết làm mẫu 2.5.3 Thẩm định quy trình 2.6 Xây dựng quy trình xác định dƣ lƣợng thuốc trừ sâu nhóm cúc tổng hợp clor hữu thƣờng sử dụng rau GC với đầu dò ECD iv 18 18 20 20 22 22 23 23 23 23 25 25 25 26 26 2.6.1 Xác định điều kiện phân tích đồng thời thuốc trừ sâu nhóm cúc tổng hợp clor hữu 2.6.2 Xây dựng quy trình chiết làm mẫu 2.6.3 Thẩm định quy trình 2.7 Ứng dụng quy trình xác định dƣ lƣợng thuốc trừ sâu nhóm carbamat, lân hữu cơ, cúc tổng hợp thƣờng phun rau – So sánh kết phân tích với phịng thí nghiệm đạt ISO/IEC 17025 TPHCM KẾT QUẢ 3.1 Kết điều tra thuốc trừ sâu nông dân thường sử dụng rau 3.2 Xây dựng quy trình xác định dư lượng thuốc trừ sâu nhóm carbamat thường sử dụng rau HPLC với đầu dò huỳnh quang 3.3 Xây dựng quy trình xác định dư lượng thuốc trừ sâu nhóm lân hữu thường sử dụng rau GC với đầu dị NPD 3.4 Xây dựng quy trình xác định dư lượng thuốc trừ sâu nhóm cúc tổng hợp clor hữu thường sử dụng rau GC với đầu dị ECD 3.5 Ứng dụng quy trình xác định dư lượng thuốc trừ sâu nhóm carbamat, lân hữu cơ, cúc tổng hợp thường phun rau - So sánh kết phân tích với phịng thí nghiệm đạt ISO/IEC 17025 TPHCM THẢO LUẬN KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 1: Thuốc trừ sâu nhóm carbamat PHỤ LỤC 2: Thuốc trừ sâu nhóm lân hữu PHỤ LỤC 3: Thuốc trừ sâu nhóm cúc tổng hợp clor hữu PHỤ LỤC 4: Phiếu điều tra nông dân trạng sử dụng thuốc BVTV rau nông dân TPHCM tỉnh cung cấp rau cho thành phố PHỤ LỤC 5: Sản phẩm đề tài v 26 26 26 27 28 28 29 43 52 62 65 71 PL-01 PL-14 PL-29 PL-44 PL-48 Danh mục chữ viết tắt Từ viết tắt ACN Từ nguyên Acetonitrile Nghĩa tiếng Việt Acetonitril ADI Acceptable Daily Intake Lượng ăn vào ngày chấp nhận AOAC ASEAN Association Official Analytical Hiệp hội nhà hóa học phân tích Chemist tắc The Association of Southeast Hiệp hội quốc gia Đông Nam Á Asian Nations BVTV Bảo vệ thực vật CNS Chinese National Standards Bộ tiêu chuẩn quốc gia Trung Quốc ECD Electron Capture Detector Đầu dò cộng kết điện tử EPA Environmental Protection Agency Cơ quan bảo vệ môi trường FAO Food and Agriculture Organization Tổ chức Lương thực Nông nghiệp Liên hiệp quốc FID Flame Ionization Detector Đầu dị ion hóa lửa FLD Fluorescence Detector Đầu dò huỳnh quang GC Gas Chromatography Sắc ký khí HPLC High Performance Liquid Sắc ký lỏng hiệu cao Chromatography IS Internal Standard Nội chuẩn IUPAC International Union of Pure and Hiệp hội Quốc tế hóa học túy Applied Chemistry ứng dụng LC Liquid Chromatography Sắc ký lỏng LD50 Lethal Dose 50 Liều làm chết 50% thú vật thử nghiệm LOD Limit of Detection Giới hạn phát LOQ Limit of Quantitation Giới hạn định lượng MeOH Methanol Methanol MRLs Maximum Residue Limits Dư lượng tối đa cho phép MRMs Multi Residue Methods Phương pháp xác định đa dư lượng MS Mass spectrometry Khối phổ vi NPD Nitrogen Phosphorus Detector Đầu dị ion hóa lửa phosphor nitrogen OPA o- phthaldehyde o- phthaldehyd PHI Pre-Harvest Interval Thời gian cách ly ppb Parts per billion Phần tỉ ppm Parts per million Phần triệu Phân tử lượng PTL RSD Relative standard deviation Độ lệch chuẩn tương đối SD Standard deviation Độ lệch chuẩn SPE Solid Phase Extraction Chiết pha rắn SPME Solid Phase Micro Extraction Vi chiết pha rắn TB Trung bình TMSH Trimethyl sulfonium hydroxyde Trimethyl sulfonium hydroxyd UV Ultraviolet Tử ngoại WHO World Health Organization Tổ chức Y tế giới vii Danh mục bảng Trang Bảng 1.1: Mức dư lượng cho phép số thuốc trừ sâu rau ăn 17 Bảng 2.1: Các chất chuẩn sử dụng nghiên cứu 20 Bảng 2.2: Các loại thuốc trừ sâu dùng nghiên cứu 21 Bảng 3.1: Tần suất sử dụng thuốc trừ sâu theo điều tra Chi cục BVTV 28 TPHCM Bảng 3.2: Thể tích dung dịch chuẩn thuốc trừ sâu carbamat khảo sát 29 cần thêm vào rau Bảng 3.3: Mô ̣t số điề u kiê ̣n sắ c ký khảo sát 30 Bảng 3.4: Chương triǹ h rửa giải gradient sử du ̣ng cho điề u kiê ̣n 30 Bảng 3.5: Hiệu suất thu hồi carbamat với quy trình chiết ACN 36 (n=6) Bảng 3.6: Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống mẫu chuẩn 37 carbamat khảo sát (n = 6) Bảng 3.7: Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống mẫu thử 37 carbamat khảo sát (n = 6) Bảng 3.8: Kết khảo sát khoảng tuyến tính carbamat 39 Bảng 3.9: Phương trình hồi quy, hệ số tương quan carbamat khảo sát 39 Bảng 3.10: Các giá trị thống kê phương trình hồi quy carbamat 40 Bảng 3.11: Phương trình hồi quy carbamat sau đánh giá 40 Bảng 3.12: Kết khảo sát độ độ xác carbamat (n = 18) 40 Bảng 3.13: Kết khảo sát LOD LOQ carbamat 40 Bảng 3.14: Thể tích dung dịch chuẩn thuốc trừ sâu lân hữu khảo sát 43 cần thêm vào rau Bảng 3.15: Chương trình nhiệt GC với đầu dò NPD 43 Bảng 3.16: Hiệu suất thu hồi lân hữu với quy trình chiết ACN 47 (n=6) Bảng 3.17: Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống mẫu chuẩn 47 lân hữu (n = 6) Bảng 3.18: Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống mẫu thử 48 lân hữu (n = 6) Bảng 3.19: Kết khảo sát khoảng tuyến tính thuốc trừ sâu lân hữu 49 Bảng 3.20: Phương trình hồi quy, hệ số tương quan lân hữu 49 Bảng 3.21: Các giá trị thống kê phương trình hồi quy lân hữu 49 Bảng 3.22: Phương trình hồi quy lân hữu sau đánh giá 50 Bảng 3.23: Kết khảo sát độ độ xác lân hữu (n = 50 18) viii Bảng 3.24: Kết khảo sát LOD LOQ lân hữu Bảng 3.25: Thể tích dung dịch chuẩn thuốc trừ sâu clor hữu cúc tổng hợp khảo sát cần thêm vào rau Bảng 3.26: Chương trình nhiệt GC với đầu dò ECD Bảng 3.27: Hiệu suất thu hồi thuốc trừ sâu cúc tổng hợp clor hữu với quy trình chiết aceton (n=6) Bảng 3.28: Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống mẫu chuẩn thuốc trừ sâu clor hữu cúc tổng hợp (n = 6) Bảng 3.29: Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống mẫu thử thuốc trừ sâu clor hữu cúc tổng hợp (n = 6) Bảng 3.30: Kết khảo sát khoảng tuyến tính thuốc trừ sâu cúc tổng hợp clor hữu Bảng 3.31: Phương trình hồi quy, hệ số tương quan thuốc trừ sâu cúc tổng hợp clor hữu Bảng 3.32: Các giá trị thống kê phương trình hồi quy thuốc trừ sâu cúc tổng hợp clor hữu Bảng 3.33: Phương trình hồi quy thuốc trừ sâu cúc tổng hợp clor hữu sau đánh giá Bảng 3.34: Kết khảo sát độ độ xác thuốc trừ sâu cúc tổng hợp clor hữu (n = 18) Bảng 3.35: Kết khảo sát LOD LOQ thuốc trừ sâu cúc tổng hợp clor hữu Bảng 3.36: Liều phun thuốc trừ sâu nghiệm thức rau m2 Bảng 3.37: Kết phân tích dư lượng thuốc trừ sâu mẫu rau đồng (n=4) Bảng 3.38: Kết phân tích dư lượng thuốc trừ sâu thường sử dụng mẫu rau, củ, lấy chợ đầu mối địa bàn TPHCM Chi cục BVTV TPHCM (n=2) ix 50 53 53 56 57 57 58 58 59 59 59 60 62 63 64 Danh mục hình Trang Hình 2.1: Rau muống trồng thủy canh nhà lưới 20 Hình 2.2: Hệ thống HPLC với đầu dị huỳnh quang kết nối với tạo dẫn xuất 22 sau cột Hình 2.3: Hệ thống sắc ký khí với đầu dị NPD 22 Hình 3.1: Sắc ký đồ hỗn hợp chuẩn carbamat khảo sát với pha động 30 theo điều kiện Hình 3.2: Sắc ký đồ hỗn hợp chuẩn carbamat khảo sát với pha động 30 theo điều kiện Hình 3.3: Sắc ký đồ hỗn hợp chuẩn carbamat khảo sát với pha động 31 theo điều kiện Hình 3.4: Phổ UV thời gian lưu carbamat với pha động theo điều 31 kiện Hình 3.5: Sắc ký đồ dịch chiết carbamat rau methanol 32 Hình 3.6: Sắc ký đồ dịch chiết carbamat rau ethyl acetat 33 Hình 3.7: Sắc ký đồ dịch chiết carbamat rau ACN 34 Hình 3.8: Sắc ký đồ dịch chiết carbamat rau ACN, phân tích 35 HPLC với đầu dị huỳnh quang Hình 3.9: Sắc ký đồ hỗn hợp chuẩn carbamat khảo sát với đầu dị huỳnh quang 36 Hình 3.10: Sắc ký đồ mẫu trắng Điều kiện sắc ký hình 3.8 38 Hình 3.11: Sắc ký đồ mẫu thử 38 Hình 3.12: Sắc ký đồ mẫu thử thêm chuẩn 39 Hình 3.13: Sắc ký đồ hỗn hợp chuẩn A (lân hữu cơ) mức dư lượng cho 44 phép Hình 3.14: Sắc ký đồ dịch chiết thuốc trừ sâu lân hữu rau 45 ethyl acetat, rửa giải với acetonitril – toluen (3:1) Hình 3.15: Sắc ký đồ dịch chiết thuốc trừ sâu lân hữu rau 45 ethyl acetat, rửa giải với dicloromethan – ethyl acetat (7:3) Hình 3.16: Sắc ký đồ dịch chiết thuốc trừ sâu lân hữu rau (được 46 phun hỗn hợp chuẩn A) acetonitril, rửa giải với acetonitril – toluen (3:1) Hình 3.17: Sắc ký đồ dịch chiết thuốc trừ sâu lân hữu rau (được 47 phun hỗn hợp chuẩn B) acetonitril, rửa giải với acetonitril – toluen (3:1) Hình 3.18: Sắc ký đồ mẫu trắng Điều kiện sắc ký hình 3.13 48 Hình 3.19: Sắc ký đồ hỗn hợp chuẩn A (cúc tổng hợp clor hữu cơ) 54 mức dư lượng cho phép Hình 3.20: Sắc ký đồ dịch chiết thuốc trừ sâu cúc tổng hợp clor hữu 55 rau acetonitril, rửa giải với acetonitril – toluen (3:1) x Yêu cầu: quy trình chiết chấp nhận với hiệu suất thu hồi từ 70% - 110% Hiệu suất thu hồi phải ổn định với RSD ≤ 11% 7.3 Tính đặc hiệu Tính đặc hiệu phương pháp xác định mẫu thử, mẫu trắng (mẫu rau không thêm hỗn hợp chuẩn) mẫu chuẩn Tiến hành sắc ký mẫu lần Yêu cầu: Trên sắc ký đồ, thời gian lưu các pic m ẫu thử phải tương đương thời gian lưu pic m ẫu chuẩn, đồng thời mẫu trắng pic trùng với pic hoạt chất 7.4 Khoảng tuyến tính Từ dung dịch chuẩn gốc, pha mẫu chuẩn mức nồng độ khác loại thuốc trừ sâu, cho mức mức dư lượng cho phép Tiến hành sắc ký mẫu lần, tính diện tích pic chất Tính hệ số tương quan R thiết lập phương trình hồi quy tuyến tính diện tích pic nồng độ Sử dụng trắc nghiệm F (F test, phân phối Fischer) để đánh giá tính tương thích phương trình hồi quy Sử dụng trắc nghiệm t (t test, phân phối Student) để kiểm tra ý nghĩa hệ số phương trình hồi quy Yêu cầu: Hệ số tương quan R nồng độ diện tích pic phải lớn 0,99 7.5 Độ xác – độ Độ xác độ ngày ngày xác định mức nồng độ 80%, 100% 120% so với mức dư lượng cho phép thuốc Mỗi nồng độ chuẩn bị mẫu thử Tiến hành sắc ký mẫu lần Ở nồng độ, tính tỷ lệ phục hồi chất xác định RSD tỷ lệ phục hồi Yêu cầu: nồng độ, tỷ lệ phục hồi tất chất phải nằm khoảng 70% - 110% với giá trị RSD tỷ lệ phục hồi không 18% 7.6 Giới hạn phát (LOD) – giới hạn định lượng (LOQ) Giới hạn phát giới hạn định lượng chất xác định cách tiến hành sắc ký mẫu trắng mẫu thử pha loãng 10 lần, 20 lần, 100 lần, … thu tỉ số chiều cao pic (mẫu thử) chiều cao nhiễu đường (mẫu trắng) nồng độ giới hạn định lượng nồng độ giới hạn phát Yêu cầu: LOD LOQ phải mức ppb phải thấp 10 lần lần so với mức dư lượng cho phép PL-53 Phụ lục 5.3 Quy trình xác định dư lượng thuốc trừ sâu nhóm lân hữu thường sử dụng rau phương pháp GC với đầu dò NPD Đối tượng áp dụng Quy trình áp dụng để xác định dư lượng thuốc trừ sâu thuộc nhóm lân hữu thường sử dụng mẫu rau Mức dư lượng cho phép lân hữu thường sử dụng rau Mức dư lượng cho phép thuốc trừ sâu thuộc nhóm lân hữu đối tượng rau ăn qui định rõ theo định 46/2007/QĐ-BYT Bộ Y tế ban hành ngày 19/12/2007 Một số thuốc trừ sâu khơng có quy định rau dựa theo theo tiêu chuẩn Đài loan (Taiwan Agricultural Chemicals and Toxic Substances Research Institute "Guide to Pesticdes Tolerances on Crops in Taiwan" March 1997) Tiêu chuẩn áp dụng Chi cục BVTV TPHCM Trung tâm Kiểm định khảo nghiệm thuốc BVTV phía Nam Bảng 1: Mức dư lượng cho phép lân hữu thường sử dụng rau ăn Thuốc trừ sâu Mức dư lượng cho phép Mức dư lượng cho phép theo tiêu theo qui định Bộ Y tế chuẩn Đài Loan (ppm, mg/kg) (ppm, mg/kg) Clorpyrifos Diazinion 0,5 Dimethoat Methidathion 0,5 Phenthoat 0,5 Profenofos 0,5 Fenitrothion 0,5 Chất chuẩn, trang thiết bị, hóa chất, dung môi 3.1 Chất chuẩn Bảng 2: Các chất chuẩn sử dụng quy trình Chất chuẩn Hàm lượng (kl/kl) Nơi cung cấp Clorpyrifos 99,5% Diazinion 96,0% Công ty Dr Dimethoat 99,0% Ehrenstorfer GmbH Methidathion 99,0% (Đức) Phenthoat 96,6% Profenofos Fenitrothion 90,0% 97,5% PL-54 3.2 Trang thiết bị - Máy sắc ký khí Clarus 500, đầu dị NPD (Perkin Elmer, Mỹ) - Cột mao quản OV-1: 100% dimethyl polysiloxan, chiều dài 30 m, đường kính 0,25 mm, bề dày lớp phim 0,25 µm (Ohio Valley, Mỹ) - Cột chiết pha rắn Envi-carb Super Clean 12 ml chứa g than hoạt graphit hóa (graphitized carbon black, GCB) (Supelco, Mỹ) - Cân phân tích Sartorius (Đức), cân kỹ thuật Sartorius (Đức), máy siêu âm (Elma, Đức), máy lắc rung (Vortex), máy xay mẫu chuyên dụng IKA, máy cô quay IKA (IKA, Đức) - Bình nón 250 ml, 100 ml, 50 ml; bình định mức 100 ml, 50 ml, 20 ml, 10 ml, ml; bình lê 100 ml, 50 ml; ống đong 50 ml, 100 ml; cốc có mỏ 250 ml, 100 ml, 50 ml - Pipet xác 10 ml, ml, ml, ml - Micropipet 0,1 – ml - Màng lọc Sartorius 0,45 µm; giấy lọc cellulose - Phễu thủy tinh 3.3 Hóa chất, dung mơi Aceton, natri sulfat khan, natri clorid, ethyl acetat, methanol (MeOH), acetonitril, toluen đạt tiêu chuẩn phân tích (Merck, Đức) Chuẩn bị mẫu 4.1 Chuẩn bị mẫu chuẩn Sử dụng aceton để pha dung dịch chuẩn gốc có nồng độ clorpyrifos 500 ppm (500 µg/ml), diazinon 500 ppm, dimethoat 500 ppm, fenitrothion 500 ppm, methidathion 500 ppm, phenthoat 500 ppm profenofos 500 ppm Từ dung dịch chuẩn gốc này, pha loãng với aceton để thu dung dịch chuẩn mức nồng độ loại thuốc trừ sâu, cho mức mức dư lượng cho phép ứng với 25 g rau Lọc qua màng lọc 0,45 µm Bảng 3: Khoảng nồng độ định lượng lân hữu Thuốc trừ C1 C2 C3 sâu (ppm) (ppm) (ppm) Dimethoat 1,25 10 Diazinon 0,625 2,5 Fenitrothion 0,625 2,5 Clorpyrifos 1,25 10 Phenthoat 0,625 2,5 Methidathion 0,625 2,5 Profenofos 0,625 2,5 Vì điều kiện phân tích chung áp dụng cho thuốc trừ sâu nên số chất làm chuẩn nội cho chất lại Clorpyrifos làm chuẩn nội cho chất lại fenitrothion làm chuẩn nội cho clorpyrifos PL-55 Dung dịch nội chuẩn: từ dung dịch chuẩn gốc, pha loãng với aceton để thu dung dịch nội chuẩn clorpyrifos 25 ppm fenitrothion 12,5 ppm Lọc qua màng lọc 0,45 µm 4.2 Chuẩn bị mẫu thử Rau sau làm băm xay nhuyễn Cân xác khoảng 25 gam rau, cho vào bình nón 250 ml Thêm xác 50 ml acetonitril, lắc đều, siêu âm 15 phút Lọc qua giấy lọc áp suất giảm, hứng dịch lọc vào bình định mức 100 ml, tráng giấy lọc với khoảng 40 ml ACN, sau thêm ACN vừa đủ đến vạch, lắc Lấy xác 50 ml dịch chiết, cho vào ống đong 100 ml, thêm gam NaCl, lắc kỹ máy lắc rung (Vortex) phút, để yên từ – phút cho tách lớp Lọc lớp qua giấy lọc có chứa g natri sulfat khan Dịch lọc hứng vào bình bình lê 100 ml Cơ quay dịch lọc 40oC cịn khoảng ml, cho qua ̣t Envi -carb Super Clean 12 ml đã hoạt hóa* Rửa giải với 20 ml ACN: toluen (3:1), tố c đô ̣ khoảng ml/phút Dịch rửa giải hứng vào bình lê 50 ml Bay dung mơi cô quay 350C cắn khô Hòa cắn 2,5 ml ethyl acetat, siêu âm phút, lọc qua màng lọc 0,45 µm, tiế n hành sắ c ký ( ) * Cột hoạt hóa trước 10 ml methanol 10 ml acetonitril - toluen (3:1) Bảng 4: Hiệu suất thu hồi lân hữu Thuốc trừ sâu Hiệu suất thu hồi trung bình Khoảng tin cậy (p < 0,05) Dimethoat 81,46% 73,32% - 95,11% Diazinon 87,24% 78,13% - 96,69% Fenitrothion 71,16% 68,72% - 74,03% Clorpyrifos 88,61% 84,12% - 91,03% Phenthoat 91,60% 84,26% - 100,64% Methidathion 95,69% 81,42% - 109,91% Profenofos 97,55% 90,98% - 107,34% Tiến hành định lượng Tiến hành sắc ký mẫu thử mẫu chuẩn, mẫu lần theo điều kiện sau: - Máy sắc ký khí Clarus 500, đầu dị NPD - Cột mao quản OV-1: (30 m x 0,25 mm; bề dày lớp phim 0,25 µm) - Buồng tiêm mẫu: nhiệt độ 270oC, thể tích tiêm µl, tỷ lệ chia dịng 1:10 - Áp suất khí mang nitơ 14 psi - Đầu dị NPD: nhiệt độ 300oC, lưu lượng khí hydro ml/phút, lưu lượng khơng khí nén 100 ml/phút - Nhiệt độ buồng cột: chương trình nhiệt 60 – 270oC theo bảng sau Bước Nhiệt độ (oC) Tốc độ gia nhiệt (oC/phút) Thời gian giữ nhiệt (phút) 60 2 180 10 12 270 15 PL-56 270 10 Phép thử có giá trị RSD thời gian lưu tỷ số diện tích pic (S/SIS) mẫu chuẩn nhỏ 2%, hệ số đối xứng pic mẫu chuẩn nằm khoảng 0,8 – 1,5 độ phân giải pic mẫu chuẩn lớn 1,5 So sánh thời gian lưu pic sắc ký đồ mẫu thử với mẫu chuẩn để xác định loại thuốc trừ sâu nhiễm Sau chuẩn bị mẫu thử thêm ml dung dịch nội chuẩn (clorpyrifos fenitrothion) trước chiết với ACN, tiến hành sắc ký lần Tính kết Dư lượng thuốc trừ sâu rau xác định dựa vào tỷ số diê ̣n tích pic chất cần xác định nội chuẩn (S/SIS) mẫu thử, phương trì nh hồ i quy gi ữa nồng độ chất phân tích tỷ số diện tích pic (S/SIS) mẫu chuẩn hiệu suất thu hồi của lân hữu Trường hơ ̣p nồ ng đô ̣ thuố c trừ sâu mẫu thử quá lớn vươ ̣t quá khoảng tuyến tính , cầ n pha loañ g cho nồ ng đô ̣ chấ t phân tích nằ m khoảng tuyế n tiń h Dư lượng thuốc trừ sâu rau tính theo cơng thức X C 100  d m H X: Dư lượng thuốc trừ sâu rau (ppm, µg/g) C: Nồng độ thuốc trừ sâu (ppm, µg/ml) suy từ phương trình hồi quy m: Khối lượng mẫu rau (g) H: Hiệu suất thu hồi lân hữu (%) d: Độ pha lỗng (nếu có) Đánh giá phương pháp 7.1 Xác định tính phù hợp hệ thống Tính phù hợp hệ thống xác định cách đánh giá thông số sắc ký thời gian lưu (tR), tỷ số diện tích pic (S/SIS), hệ số đối xứng (As) độ phân giải (Rs) Để xác định thông số trên, sử dụng rau muống thủy canh (không nhiễm thuốc trừ sâu) cắt xay nhuyễn Sau cho vào lượng hỗn hợp chuẩn thuốc trừ sâu lân hữu mức dư lượng cho phép thuốc tương ứng với 25 g rau, trộn đều, để qua đêm cho bay dung môi thuốc ngấm vào rau hoàn toàn Chiết mẫu rau theo quy trình nêu mục 4.2 (mẫu thử) Chuẩn bị mẫu chuẩn có nồng độ lân hữu tương đương với nồng độ mẫu thử Tiến hành sắc ký mẫu lần Yêu cầu: quy trình phân tích đạt tính phù hợp hệ thống độ phân giải Rs ≥ 1,5; hệ số đối xứng nằm khoảng 0,8 – 1,5; RSD thông số thời gian lưu tỷ số diện tích pic ≤ 2% 7.2 Xác định hiệu suất thu hồi lân hữu Hiệu suất thu hồi lân hữu xác định cách tiến hành sắc ký mẫu thử mẫu chuẩn Mỗi mẫu bơm lần PL-57 Yêu cầu: quy trình chiết chấp nhận với hiệu suất thu hồi từ 70% - 110% Hiệu suất thu hồi phải ổn định với RSD ≤ 11% 7.3 Tính đặc hiệu Tính đặc hiệu phương pháp xác định mẫu thử, mẫu trắng (mẫu rau không thêm hỗn hợp chuẩn) mẫu chuẩn Tiến hành sắc ký mẫu lần Yêu cầu: Trên sắc ký đồ, thời gian lưu các pic m ẫu thử phải tương đương thời gian lưu các pic m ẫu chuẩn, đồng thời mẫu trắng khơng có pic trùng với pic hoạt chất 7.4 Khoảng tuyến tính Từ dung dịch chuẩn gốc, pha mẫu chuẩn mức nồng độ khác loại thuốc trừ sâu, cho mức mức dư lượng cho phép Tiến hành sắc ký mẫu lần, tính diện tích pic chất Tính hệ số tương quan R thiết lập phương trình hồi quy tuyến tính tỷ số diện tích pic (S/SIS) nồng độ Sử dụng trắc nghiệm F (F test, phân phối Fischer) để đánh giá tính tương thích phương trình hồi quy Sử dụng trắc nghiệm t (t test, phân phối Student) để kiểm tra ý nghĩa hệ số phương trình hồi quy Yêu cầu: Hệ số tương quan R nồng độ diện tích pic phải lớn 0,99 7.5 Độ xác – độ Độ xác độ ngày ngày xác định mức nồng độ 80%, 100% 120% so với mức dư lượng cho phép thuốc Mỗi nồng độ chuẩn bị mẫu thử Tiến hành sắc ký mẫu lần Ở nồng độ, tính tỷ lệ phục hồi chất xác định RSD tỷ lệ phục hồi Yêu cầu: nồng độ, tỷ lệ phục hồi tất chất phải nằm khoảng 70% - 110% với giá trị RSD tỷ lệ phục hồi không 18% 7.6 Giới hạn phát (LOD) – giới hạn định lượng (LOQ) Giới hạn phát giới hạn định lượng chất xác định cách tiến hành sắc ký mẫu trắng mẫu thử pha loãng 10 lần, 20 lần, 100 lần, … thu tỉ số chiều cao pic (mẫu thử) chiều cao nhiễu đường (mẫu trắng) nồng độ giới hạn định lượng nồng độ giới hạn phát Yêu cầu: LOD LOQ phải mức ppb phải thấp lần lần so với mức dư lượng cho phép PL-58 Phụ lục 5.4 Quy trình xác định dư lượng thuốc trừ sâu nhóm clor hữu cúc tổng hợp thường sử dụng rau phương pháp GC với đầu dò ECD Đối tượng áp dụng Quy trình áp dụng để xác định dư lượng thuốc trừ sâu dicofol (thuộc nhóm clor hữu cơ) nhóm cúc tổng hợp thường sử dụng mẫu rau Mức dư lượng cho phép cúc tổng hợp thường sử dụng rau Mức dư lượng cho phép thuốc trừ sâu thuộc nhóm cúc tổng hợp đối tượng rau ăn qui định rõ theo định 46/2007/QĐ-BYT Bộ Y tế ban hành ngày 19/12/2007 Dicofol thuốc trừ sâu thuộc nhóm clor hữu nên không phép sử dụng Bảng 1: Mức dư lượng cho phép cúc tổng hợp thường sử dụng rau ăn Thuốc trừ sâu Mức dư lượng cho phép theo qui định Bộ Y tế (ppm, mg/kg) Alpha-cypermethrin Cyfluthrin Deltamethrin 0,5 Fenvalerat Lambda-cyhalothrin 0,2 Chất chuẩn, trang thiết bị, hóa chất, dung mơi 3.1 Chất chuẩn Bảng 2: Các chất chuẩn sử dụng quy trình Chất chuẩn Hàm lượng (kl/kl) Nơi cung cấp Alpha-cypermethrin 99,5% Công ty Dr Cyfluthrin 96,0% Ehrenstorfer GmbH Deltamethrin 99,0% (Đức) Fenvalerat 97,5% Lambda-cyhalothrin 99,0% Dicofol 100 µg/ml 3.2 Trang thiết bị - Máy sắc ký khí Clarus 500, đầu dị ECD (Perkin Elmer, Mỹ) - Cột mao quản OV-1: 100% dimethyl polysiloxan, chiều dài 30 m, đường kính 0,25 mm, bề dày lớp phim 0,25 µm (Ohio Valley, Mỹ) - Cân phân tích Sartorius (Đức), cân kỹ thuật Sartorius (Đức), máy siêu âm (Elma, Đức), máy lắc rung (Vortex), máy xay mẫu chuyên dụng IKA, máy cô quay IKA (IKA, Đức) PL-59 - Cột chiết pha rắn Florisil 12 ml có chứa g magnesi silicat (Strata, Mỹ) Bình nón 250 ml, 100 ml, 50 ml; bình định mức 100 ml, 50 ml, 20 ml, 10 ml, ml; bình lê 100 ml, 50 ml; ống đong 50 ml, 100 ml; cốc có mỏ 250 ml, 100 ml, 50 ml - Pipet xác 10 ml, ml, ml, ml - Micropipet 0,1 – ml - Màng lọc Sartorius 0,45 µm; giấy lọc cellulose - Phễu thủy tinh 3.3 Hóa chất, dung mơi Aceton, natri sulfat khan, ethyl acetat, methanol (MeOH), n-hexan, diethyl ether đạt tiêu chuẩn phân tích (Merck, Đức) Chuẩn bị mẫu 4.1 Chuẩn bị mẫu chuẩn Sử dụng aceton để pha dung dịch chuẩn gốc có nồng độ dicofol 40 ppm (40 µg/ml), lambda-cyhalothrin 40 ppm, cyfluthrin 200 ppm, alpha-cypermethrin 400 ppm, fenvalerat 600 ppm deltamethrin 100 ppm Từ dung dịch chuẩn gốc này, pha loãng với ethyl acetat để thu dung dịch chuẩn mức nồng độ loại thuốc trừ sâu, cho mức mức dư lượng cho phép ứng với g rau Lọc qua màng lọc 0,45 µm Bảng 3: Khoảng nồng độ định lượng cúc tổng hợp dicofol Thuốc trừ sâu Dicofol* Lambda -cyhalothin Cyfluthrin Alpha- cypermethrin Fenvalerat Deltamethrin C1 (ppm) 0,05 0,05 0,25 0,5 0,75 0,125 C2 (ppm) 0,2 0,2 0,5 C3 (ppm) 0,4 0,4 (*) Nồng độ dicofol chọn tương ứng với mức dư lượng cho phép thấp số thuốc khảo sát Vì điều kiện phân tích chung áp dụng cho thuốc trừ sâu nên số chất làm chuẩn nội cho chất lại Alpha-cypermethrin làm chuẩn nội cho chất lại fenvalerat làm chuẩn nội cho alpha-cypermethrin Dung dịch nội chuẩn: Từ dung dịch chuẩn gốc, pha loãng với ethyl acetat để thu dung dịch nội chuẩn alpha-cypermethrin 10 ppm fenvalerat 15 ppm Lọc qua màng lọc 0,45 µm 4.2 Chuẩn bị mẫu thử Rau sau làm băm xay nhuyễn Cân xác khoảng gam rau, cho vào bình nón 250 ml Thêm xác 50 ml aceton, lắc đều, siêu âm 20 phút Lọc qua giấy lọc áp suất giảm, hứng dịch lọc vào bình định mức 100 ml, tráng PL-60 giấy lọc với khoảng 40 ml aceton, sau thêm aceton vừa đủ đến vạch, lắc Lấy xác 50 ml dịch chiết, lọc qua giấy lọc có chứa10 gam natri sulfat khan, rửa giấy lọc với 20 ml aceton, gộp chung dịch lọc, cho vào bình lê 100 ml, cô quay 30oC không còn bay (khoảng phút) Thêm 20 ml ethyl acetat, lắc kỹ máy lắc rung (Vortex) phút, để yên cho tách lớp Lọc lớp dịch chiết qua giấy lọc có chứa gam natri sulfat khan, rửa giấy lọc với 10 ml ethyl acetat Hứng dịch lọc vào bình lê 100 ml Cô quay dịch lọc 30oC cắn khô Hòa cắn với ml n-hexan, lắc kỹ máy lắc rung (Vortex) vịng phút, cho qua ̣t Florisil 12 ml đã hoạt hóa* Rửa giải với 20 ml n-hexan : diethyl ether (5:1), tố c đô ̣ kho ảng ml/phút Dịch rửa giải hứng vào bình lê 50 ml Bay dung môi cô quay 300C cắn khô Hòa cắn 2,5 ml ethyl acetat, siêu âm phút, lọc qua màng lọc 0,45 µm, tiế n hành sắ c ký ( ) * Cột Florisil hoạt hóa trước 20 ml methanol 20 ml n-hexan – diethyl ether (5:1) Bảng 4: Hiệu suất thu hồi cúc tổng hợp dicofol Thuốc trừ sâu Hiệu suất thu hồi trung bình Khoảng tin cậy (p < 0,05) Dicofol 81,26% 75,65% - 88,75% Lambda -cyhalothin 83,38% 75,68% - 96,87% Cyfluthrin 94,64% 88,27% - 108,03% Alpha- cypermethrin 109,76% 91,25% - 120,60% Fenvalerat 93,44% 83,12% - 103,56% Deltamethrin 77,04% 72,16% - 88,79% Tiến hành định lượng Tiến hành sắc ký mẫu thử mẫu chuẩn, mẫu lần theo điều kiện sau: - Máy sắc ký khí Clarus 500, đầu dị ECD - Cột mao quản OV-1: (30 m x 0,25 mm; bề dày lớp phim 0,25 µm) - Buồng tiêm mẫu: nhiệt độ 270oC, thể tích tiêm µl, khơng chia dịng - Áp suất khí mang nitơ 14 psi - Đầu dị ECD: nhiệt độ 300oC, lưu lượng khí nitơ 35 ml/phút - Nhiệt độ buồng cột: chương trình nhiệt 60 – 280oC theo bảng sau Bước Nhiệt độ Tốc độ gia nhiệt Thời gian giữ nhiệt o o ( C) ( C/phút) (phút) 60 120 20 280 4 280 20 Phép thử có giá trị RSD thời gian lưu tỷ số diện tích pic (S/SIS) mẫu chuẩn nhỏ 3%, hệ số đối xứng pic mẫu chuẩn nằm khoảng 0,8 – 1,5 độ phân giải pic mẫu chuẩn lớn 1,5 So sánh thời gian lưu pic sắc ký đồ mẫu thử với mẫu chuẩn để xác định loại thuốc trừ sâu nhiễm Sau chuẩn bị mẫu thử thêm PL-61 ml dung dịch nội chuẩn (alpha-cypermethrin fenvalerat) trước chiết với aceton, tiến hành sắc ký lần Tính kết Dư lượng thuốc trừ sâu rau xác định dựa vào tỷ số diê ̣n tić h pic chất cần xác định nội chuẩn (S/SIS) mẫu thử, phương triǹ h hồ i quy gi ữa nồng độ chất phân tích tỷ số diện tích pic (S/SIS) mẫu chuẩn hiệu suất thu hồi của thuốc trừ sâu Trường hơ ̣p nồ ng đô ̣ thuố c trừ sâu mẫu thử quá lớn vươ ̣t quá khoảng tuyến tính , cầ n pha loañ g cho nồ ng đô ̣ chấ t phân tić h nằ m khoảng tuyế n tính Dư lượng thuốc trừ sâu rau tính theo cơng thức X C 100  d m H X: Dư lượng thuốc trừ sâu rau (ppm, µg/g) C: Nồng độ thuốc trừ sâu (ppm, µg/ml) suy từ phương trình hồi quy m: Khối lượng mẫu rau (g) H: Hiệu suất thu hồi thuốc trừ sâu (%) d: Độ pha lỗng (nếu có) Đánh giá phương pháp 7.1 Xác định tính phù hợp hệ thống Tính phù hợp hệ thống xác định cách đánh giá thông số sắc ký thời gian lưu (tR), tỷ số diện tích pic (S/SIS), hệ số đối xứng (As) độ phân giải (Rs) Để xác định thông số trên, sử dụng rau muống thủy canh (không nhiễm thuốc trừ sâu) cắt xay nhuyễn Sau cho vào lượng hỗn hợp chuẩn thuốc trừ sâu dicofol cúc tổng hợp mức dư lượng cho phép thuốc tương ứng với g rau, trộn đều, để qua đêm cho bay dung môi thuốc ngấm vào rau hoàn toàn Chiết mẫu rau theo quy trình nêu mục 4.2 (mẫu thử) Chuẩn bị mẫu chuẩn có nồng độ dicofol cúc tổng hợp tương đương với nồng độ mẫu thử Tiến hành sắc ký mẫu lần Yêu cầu: quy trình phân tích đạt tính phù hợp hệ thống độ phân giải Rs ≥ 1,5; hệ số đối xứng nằm khoảng 0,8 – 1,5; RSD thông số thời gian lưu tỷ số diện tích pic ≤ 2% 7.2 Xác định hiệu suất thu hồi cúc tổng hợp dicofol Hiệu suất thu hồi cúc tổng hợp dicofol xác định cách tiến hành sắc ký mẫu thử mẫu chuẩn Mỗi mẫu bơm lần Yêu cầu: quy trình chiết chấp nhận với hiệu suất thu hồi từ 70% - 110% Hiệu suất thu hồi phải ổn định với RSD ≤ 11% 7.3 Tính đặc hiệu Tính đặc hiệu phương pháp xác định mẫu thử, mẫu trắng (mẫu rau không thêm hỗn hợp chuẩn) mẫu chuẩn Tiến hành sắc ký mẫu lần PL-62 Yêu cầu: Trên sắc ký đồ, thời gian lưu các pic m ẫu thử phải tương đương thời gian lưu các pic tro ng mẫu chuẩn, đồng thời mẫu trắng pic trùng với pic hoạt chất 7.4 Khoảng tuyến tính Từ dung dịch chuẩn gốc, pha mẫu chuẩn mức nồng độ khác loại thuốc trừ sâu, cho mức mức dư lượng cho phép Tiến hành sắc ký mẫu lần, tính diện tích pic chất Tính hệ số tương quan R thiết lập phương trình hồi quy tuyến tính tỷ số diện tích pic (S/SIS) nồng độ Sử dụng trắc nghiệm F (F test, phân phối Fischer) để đánh giá tính tương thích phương trình hồi quy Sử dụng trắc nghiệm t (t test, phân phối Student) để kiểm tra ý nghĩa hệ số phương trình hồi quy Yêu cầu: Hệ số tương quan R nồng độ diện tích pic phải lớn 0,99 7.5 Độ xác – độ Độ xác độ ngày ngày xác định mức nồng độ 80%, 100% 120% so với mức dư lượng cho phép thuốc Mỗi nồng độ chuẩn bị mẫu thử Tiến hành sắc ký mẫu lần Ở nồng độ, tính tỷ lệ phục hồi chất xác định RSD tỷ lệ phục hồi Yêu cầu: nồng độ, tỷ lệ phục hồi tất chất phải nằm khoảng 70% - 110% với giá trị RSD tỷ lệ phục hồi không 18% 7.6 Giới hạn phát (LOD) – giới hạn định lượng (LOQ) Giới hạn phát giới hạn định lượng chất xác định cách tiến hành sắc ký mẫu trắng mẫu thử pha loãng 10 lần, 20 lần, 100 lần, … thu tỉ số chiều cao pic (mẫu thử) chiều cao nhiễu đường (mẫu trắng) nồng độ giới hạn định lượng nồng độ giới hạn phát Yêu cầu: LOD LOQ phải mức ppb phải thấp 10 lần lần so với mức dư lượng cho phép PL-63 Phụ lục 5.5 Hai báo liên quan đến nội dung đề tài công bố tạp chí Dược học Lê Tuấn Vũ, Nguyễn Văn Dũng, Nguyễn Văn Đức Tiến, Nguyễn Đức Tuấn (2010), “Xây dựng quy trình xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật nhóm carbamat thường sử dụng rau phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao với đầu dị huỳnh quang”, Tạp chí Dược học số 3-2010; 39-45 Trương Quốc Kỳ, Nguyễn Văn Dũng, Nguyễn Văn Đức Tiến, Nguyễn Đức Tuấn (2011), “Xây dựng quy trình xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật nhóm lân hữu thường sử dụng rau phương pháp sắc ký khí với đầu dị ion hóa lửa phosphor – nitrogen”, Tạp chí Dược học số 1-2011; 10-16 PL-64 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt [1] Bộ Nông nghiệp phát triển nông thôn, Quyết định số 116/1999/QĐ-BNNKHCN ngày 04 tháng năm 1999, "Phương pháp lấy mẫu kiểm định chất lượng dư lượng thuốc bảo vệ thực vật", Phụ lục 10 TCN 786-1999, tr.1 [2] Bộ Nông nghiệp phát triển nông thôn, Quyết định số 49/2008/QĐ-BYT ngày 27 tháng năm 2008, "Danh mục thuốc BVTV phép sử dụng, hạn chế sử dụng, cấm sử dụng Việt Nam", tr.1-266 [3] Bộ Y tế, Dược điển Việt Nam IV (2009), PL-122, PL-242, PL-243 [4] Bộ Y tế, Quyết định số 46/2007/QĐ-BYT ngày 19 tháng 02 năm 2007, "Giới hạn tối đa ô nhiễm sinh học hóa học thực phẩm", Phụ lục 5, tr.77-106 [5] Nguyễn Mạnh Chính (2005), "Sổ tay trồng rau an tồn", Nhà xuất Nơng nghiệp, tr.5-10 [6] Cục Bảo vệ thực vật, Bộ Nông nghiệp phát triển nông thôn, Quyết định số 800/QĐ-BVTV ngày 12 tháng năm 2003, "Qui trình kiểm tra nhanh dư lượng thuốc trừ sâu nhóm phosphor hữu carbamat rau quả", tr.4-8 [7] Trần Văn Hai (2005), "Hóa bảo vệ thực vật”, Bộ mơn Bảo vệ thực vật, Khoa Nông nghiệp sinh học ứng dụng, Trường Đại Học Cần Thơ, tr.6–52 [8] Chu Phạm Ngọc Sơn (2010), "Kĩ thuật sắc ký khí", Trung tâm đào tạo phát triển sắc ký, tr.36-37 Tài liệu tiếng nước [9] Alvin Chai Lian Knee & Lau Seng (2003), “Determination of Pyrethroid Pesticides in Vegetables by Solid-Phase Extraction Cleanup and Gas Chromatography”, Pertanika J Sci & Techno 11(1), pp.107–117 [10] Amadeo Ferndndez-Alba (2004), Chromatographic-Mass Spectrometric Food Analysis for Trace Determination of Pesticide Residues, pp.75-81 [11] Anagilda B Gobo, Mácia H S Kurz, et al (2004), "Development and Validate of Methodology for the Determination of Residue of Organophosphorus Pesticide in Tomatoes", J Braz Chem So., pp.945-950 [12] Anna Sannino, Mirella Bandini & Luciana Bolzoni (2003), "Determination of Pyrethroid Pesticide Residues in Processed Fruits and Vegetables by Gas Chromatography with Electron Capture and Mass Spectrometric Detection”, Journal of AOAC International, Vol 86, p.101 [13] AOAC, Guideline for single laboratory of analytical methods for trace level concentrations of organic chemical, p.7 [14] AOAC (1999), Official method 968.24 Organophosphorus Multiresidue Pesticide, pp.223-229 [15] Beatriz I A Kaiper, Luiz A S Maureira, et al, (2001), "Use of Activated Charcoal in a Solid - Phase Extraction Technique for Analysis of Pesticide Residue in Tomatoes" , J Braz Chem So 2001, Vol 12, No 4, pp.514 - 518 [16] British Crop Protection Council Publications (2000), The Pesticide Manual, 12th edition, pp.70- 129 [17] Chai Mee Kin, Tan Guan Huat, et al (2008), "Application of Solid-Phase Microextraction for the Determination of Pesticides in Vegetable Samples by Gas Chromatography with an Electron Capture Detector", The Malaysian Journal of Analytical Sciences,Vol 12, No 1, pp.67-72 [18] Chinese National Bureau standard (1999), “Method test for pesticide residues in food”, CNS 13570-2, pp.1-10 [19] Chuanhong Tu (2004), Analysis of Organophosphorus Pesticides with Agilent 6820 Gas Chromatography/Nitrogen Phosphorus Detector, pp.1-6 [20] Clive Tomlin (1997), The Pesticide Manual, Crop protection Council, p.306 [21] FAO (2003), FAO Specifications and Evaluations for Public Health Pesticides, pp.11–22 [22] FAO/WHO (1993), Codex Alimentarius, Vol.2B, p.36 [23] Fernandez M., Pico Y., Manes J (2000), “Determination of Carbamate Residues in Fruits and Vegetables by Matrix Solid-phase Dispersion and Liquid Chromatography – Mass Spectrometry”, Journal of Chromatography A, Vol 871, pp.43–56 [24] Harald Farber, Heinz F Scholer (1993), "Gas Chromatography Determination of Carbamate Pesticides after Flash-heater Methylation with Trimethyl Sulfonium Hydroxyde", Journal of Agricultural and Food Chemistry 41, pp.217220 [25] Jack Cazes (2004), Encyclopedia of Chromatography: Validation of HPLC Instrumentation, pp.344-345 [26] Khin L Zan, Somporn Chantara (2007), “Optimization Method for Determination of Carbofuran and Carboxin Residues in Cabbages by SPE and HPLC-UV”, Chiang Mai J Sci, 34(2), pp.227-234 [27] Lehotay M., Stajnbaher S J., Schenck (2003), "Fast and Easy Multiresidue Method Employing Acetonitrile Extraction-Partitioning and Dispersive Solid Phase Extraction for the Determination of Pesticide Residues in Produce" (QuEChERS method), J AOAC Int 86, No.2, pp.412-431 [28] Ludwig Huber (2007), Validation and Qualification in Analytical Laboratories, second edition, pp.144,146 [29] Masaru Kawasaki, Tsuyoshi Inoue, Katsuharu Fukuhara, Sadao Uchiyama (1999), “Study on GC/MS (SIM) for Determination of Carbamate and Organitrogen Pesticides in Foods with Simple Clean-up by SPE Method”, J Food Hyg Soc Japan, Vol 40, No.5, pp.382-387 [30] McMahon M F., Hardin N F (1990), FDA Pesticide Analytical Manual, Vol 1, form 2905a, p.401 [31] Sanchez-Brunete C., Rodriguez A., Tadeo J (2003), “Multiresidue Analysis of Carbamate Pesticides in Soil by Sonication-assisted Extraction in Small Columns and Liquid Chromatography”, Journal of Chromatography A, Vol 1007, pp.85–91 [32] SANCO (2003), Guidelines on Good Laboratory Practice In Residue Analysis, CAC/GL 40-1993, p.21 [33] Supelco (1997), "Solid Phase Extraction of Pesticides from Fruits and Vegetables for Analysis by GC or HPLC", Bulletin 900B, pp.1-2 [34] Tadeo, José L (2008), Analysis of Pesticides in Food and Environmental Samples, pp.151-163 [35] Taiwan Agricultural Chemicals and Toxic Substances Research Institute (1997), Guide to Pesticides Tolerances on Crops in Taiwan, pp.14-18 [36] Tomlin C D S (2009), The Pesticide Manual, pp.20-636 [37] U.S Environmental Protection Agency (1995), "Measurement of N-methyl carbamoyloximes and N-methyl Carbamates in Water by Direct Aqueous Injection HPLC with Post-column Derivatization", EPA method 531.1, pp.1-23 [38] USP XXX (2007), CD ROM [39] WHO (1986), "Carbamate Pesticides: A General Introduction", Environmental Health Criteria 64, pp.6-7 [40] WHO, Environmental Health Criteria 99, p.87 [41] WHO (2005), WHO Specifications and Evaluations for Public Health Pesticides, pp.6-17,18–34 [42] WHO (1996), Food and Agriculture Organization of the United Nations, pp.1–5