Nghiên cứu tách chiết các acid mật và bán tổng hợp ursodeoxycholic acid từ mật bò

ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TP.HCM VIỆN CÔNG NGHỆ HÓA HỌC BÁO CÁO NGHIỆM THU NGHIÊN CỨU TÁCH CHIẾT ACID MẬT VÀ BÁN TỔNG HỢP URSODEOXYCHOLIC ACID TỪ MẬT BÒ TS.PHAN THANH THẢO TS.PHẠM CAO THANH TÙNG THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 07/ 2016 ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ BÁO CÁO NGHIỆM THU (Đã chỉnh sửa theo góp ý Hội đồng nghiệm thu) NGHIÊN CỨU TÁCH CHIẾT ACID MẬT VÀ BÁN TỔNG HỢP URSODEOXYCHOLIC ACID TỪ MẬT BÒ CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI (Ký tên) CƠ QUAN QUẢN LÝ (Ký tên/đóng dấu xác nhận) TS.Phan Thanh Thảo TS.Phạm Cao Thanh Tùng CƠ QUAN CHỦ TRÌ (Ký tên/đóng dấu xác nhận) THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 07/ 2016 MỤC LỤC Trang Mục lục Danh sách chữ viết tắt Danh sách bảng Danh sách hình Bảng toán 12 PHẦN MỞ ĐẦU 13 Tên đề tài/dự án: NGHIÊN CỨU TÁCH CHIẾT CÁC ACID MẬT VÀ BÁN TỔNG HỢP ACID URSODEOXYCHOLIC TỪ MẬT BÕ Chủ nhiệm đề tài/dự án: TS.Phan Thanh Thảo – TS Phạm Cao Thanh Tùng Cơ quan chủ trì: VIỆN CƠNG NGHỆ HÓA HỌC Thời gian thực hiện: 11/2013 – 11/2015 Kinh phí duyệt: 550.000.000 đồng Kinh phí cấp: 300.000.000 đồng theo TB số: 272/TBSKHCN ngày 21/11/2013 Mục tiêu Nội dung ……………………………………………… Sản phẩm đề tài/dự án …………………………………… CHƢƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU Vai trò acid mật 18 Tổng quan loại acid mật 19 2.1 Acid cholic 20 2.2 Acid chenodeoxycholic 21 2.3 Acid deoxycholic 22 2.4 Acid ursodeoxycholic 22 Bán tổng hợp số acid mật 23 3.1 Bán tổng hợp dẫn xuất acid mật 23 3.2 Bán tổng hợp chenodeoxycholic acid ursodeoxycholic 26 CHƢƠNG II: NỘI DUNG NGHIÊN CỨU A NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Phần 1: TÁCH CHIẾT ACID MẬT Nội dung 1: Khảo sát điều kiện xử lý mật bị thơ 35 Nội dung 2: Khảo sát phản ứng xà phịng hóa dung dịch 35 mật bò Nội dung 3: Khảo sát phản ứng tạo kết tủa hỗn hợp acid 37 mật – Phân tích đánh giá acid mật thơ HPLC-MS 3.1 Tách loại acid béo 38 3.2 Tạo kết tủa acid mật thô 39 Nội dung 4: Khảo sát điều kiện tách làm acid 39 deoxycholic Nội dung 5: Khảo sát điều kiện tách làm acid 41 cholic Nội dung 6: Phân tích thành phần acid mật tinh 42 phương pháp sắc ký lỏng cao áp HPLC đánh giá tính chất hóa lý sản phẩm Phần 2: TỔNG HỢP ACID URSODEOXYCHOLIC TỪ ACID CHOLIC Nội dung 7: Tổng hợp 3α,12α–dihydroxy–7 keto–cholanic 43 acid (II) từ acid cholic (I) Nội dung 8: Tổng hợp 3α,7β,12α–trihydroxy–cholanic acid (IV) từ 3α,12α–dihydroxy–7 keto–cholanic acid (II) 45 Nội dung 9: Tổng hợp 3α,7β-dihydroxy-12-ketocholanic 47 acid (V) từ 3α,7β,12α-trihydroxy cholanic acid (IV) 10 Nội dung 10: Tổng hợp ursodeoxycholic acid (VI) từ dẫn 48 xuất 3α,7β-dihydroxy-12-ketocholanic acid (V) B PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Thiết bị 49 Nguyên liệu 50 2.1 Nguyên liệu mật bò 50 2.2 Acid cholic 51 2.3 2-iodoxybenzoic acid 51 2.4 Một số hóa chất khác 53 Phƣơng pháp nghiên cứu 53 3.1 Sắc ký mỏng 53 3.2 Phương pháp HPLC-ELSD 53 3.3 Phương pháp HPLC-MS 55 3.4 Phương pháp cộng hưởng từ 55 CHƢƠNG III: KẾT QỦA VÀ THẢO LUẬN Phần 1: TÁCH CHIẾT ACID MẬT Nội dung 1: Khảo sát điều kiện xử lý mật bị thơ 57 Nội dung 2: Khảo sát phản ứng xà phịng hóa dung dịch 58 mật bò Nội dung 3: Kết tủa acid mật thơ – Phân tích đánh giá 62 thành phần acid mật thô Nội dung 4: Tách acid deoxycholic 64 Nội dung 5: Tách làm acid cholic kết tinh 65 phân đoạn Nội dung 6: Phân tích thành phần acid mật tinh phương pháp sắc ký lỏng cao áp HPLC đánh giá tính 66 chất hóa lý sản phẩm Phần 2: TỔNG HỢP ACID URSODEOXYCHOLIC TỪ ACID CHOLIC Nội dung 7: Tổng hợp 3α,12α–dihydroxy–7 keto–cholanic 69 acid (II) từ acid cholic (I) 7.1 Ảnh hưởng nhiệt độ phản ứng 69 7.2 Ảnh hưởng tỉ lệ nIBX/nCA 71 Nội dung 8: Tổng hợp 3α,7β,12α–trihydroxy–cholanic 75 acid (IV) từ 3α,12α–dihydroxy–7 keto–cholanic acid (II) 8.1 Ảnh hưởng dung môi 75 8.2 Ảnh hưởng nồng độ Na0 77 Nội dung 9: Tổng hợp 3α,7β-dihydroxy-12-ketocholanic 79 acid (V) từ 3α,7β,12α-trihydroxy cholanic acid (IV) 9.1 Ảnh hưởng nhiệt độ phản ứng 79 9.2 Ảnh hưởng tỉ lệ nIBX/n(IV) 81 10 Nội dung 10: Tổng hợp ursodeoxycholic acid (VI) từ dẫn 83 xuất 3α,7β-dihydroxy-12-ketocholanic acid (V) 10.1 Ảnh hưởng nhiệt độ phản ứng 83 10.2 Ảnh hưởng hydraxine hydrate 85 CHƢƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 88 PHỤ LỤC 90 TÀI LIỆU THAM KHẢO 116 DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT VIẾT TẮT THUẬT NGỮ TIẾNG VIẾT CA Acid Cholic DCA Acid Deoxycholic CDCA Acid Chenodeoxycholic USDA Acid Ursodeoxycholic GCA Acid Glycocholic TCA Acid Taurocholic MeOH Methanol ACN Acetonitrile DANH SÁCH BẢNG SỐ TÊN BẢNG SỐ LIỆU TRANG 1.1 Các thành phần (%) có dịch túi mật loại mật động vật 20 1.2 Thành phần acid mật có mật số loài động vật 20 mật người bảng sau 2.1 Các mức khoảng biến thiên yếu tố 37 2.2 pKa acid cholic acid deoxycholic 39 2.3 Lựa chọn hệ dung môi pha động cho sắc ký mỏng 53 3.1 Ma trận kế hoạch thực nghiệm kết thực nghiệm 59 3.2 Kết ph n tích phương sai cho mơ hình đa thức bậc 60 hai 3.3 Các điểm tối ưu dị tìm (khi cố định nh n tố) 62 3.4 Thành phần CA CA liên hợp 64 3.5 Giá trị 1H 13C sản phẩm Acid cholic môi trường 68 CDCl3 3.6 Giá trị 1H sản phẩm 3α,12α–dihydroxy–7keto–cholanic 74 acid môi trường CDCl3 3.7 Giá trị 1H sản phẩm 3α,7β,12α–trhydroxy-cholanic acid 79 môi trường CDCl3 3.8 Giá trị 1H sản phẩm 3α,7β–dihydroxy-cholanic acid (CDCl3) 87 DANH SÁCH HÌNH SỐ TÊN HÌNH ẢNH TRANG 1.1 Sơ đồ tổng hợp acid mật từ Cholesterol 18 1.2 Công thức hóa học acid mật 20 1.3 Acid cholic 21 1.4 Acid glycocholic acid taurocholic 21 1.5 Acid chendeoxycholic 21 1.6 Acid deoxycholic 22 1.7 Acid ursodeoxycholic 22 1.8 24 1.9 Sơ đồ chuyển hóa hóa học cholic acid thành ursodeoxycholic acid steroid hormone Sơ đồbán tổng hợp chenodeoxycholic acid từ cholic acid 1.10 Sơ đồ bán tổng hợp chenodeoxycholic acid từ methyl cholate 28 1.11 Sơ đồ bán tổng hợp chenodeoxycholic acid từ methyl 3a,7adiacetoxy-12-keto-5b-cholanate Sơ đồ bán tổng hợp chenodeoxycholic acid olefin thích hợp Sơ đồ bán tổng hợp ursodeoxycholic acid từ 3α-hydroxy-7keto-5β-cholanic acid Sơ đồ chuyển hóa chenodeoxycholic acid thành ursodeoxycholic acid Sơ đồ phản ứng khử Birch 3α-hydroxy-7-keto-5βcholanic acid thành ursodeoxycholic acid Sơ đồ bán tổng hợp ursodeoxycholic acid từ cholic acid 29 34 2.1 Sơ đồ tổng hợp ursodeoxy cholic acid từ methyl hyodeoxycholate Cơ chế thủy ph n mật bò 2.2 Sơ đồ khảo sát thủy ph n mật bò 36 2.3 Thiết bị phản ứng tách acid mật dung tích lớn 38 2.4 Sơ đồ khảo sát tách acid mật thô 38 2.5 Sơ đồ khảo sát ph n tích thành phần acid mật thơ 40 2.6 Sơ đồ quy trình kết tinh ph n đoạn tách acid cholic 42 2.7 Quy trình bán tổng hợp acid ursodeoxycholic từ acid cholic 43 1.12 1.13 1.14 1.15 1.16 1.17 27 30 31 31 32 33 36 44 2.14 Phản ứng tổng hợp 3α,12α–dihydroxy–7 keto–cholanic acid (II) từ acid cholic (I) phương pháp oxy hóa chọn lọc Sơ đồ tổng hợp 3α,12α–dihydroxy–7 keto–cholanic acid từ acid cholic Sơ đồ tổng hợp 3α,7β,12α–trihydroxy–cholanic acid từ 3α,12α–dihydroxy–7 keto–cholanic acid Sơ đồ tổng hợp 3α,7β–dihydroxy–12 keto–cholanic acid từ 3α,7β,12α–trihydroxy–cholanic acid Sơ đồ tổng hợp 3α,7β–dihydroxy–cholanic acid (acid ursodeoxycholic) từ 3α,7β–dihydroxy–12 keto–cholanic acid Một số thiết bị sử dụng cho nội dung nghiên cứu tách acid cholic theo pKa Tinh thể acid cholic 2.15 Phổ FTIR 2-iodobenzoic acid 2-iodoxybenzoic acid 52 2.16 Thiết bị HPLC với đầu dò Tán xạ ánh sáng (ELSD) 54 2.17 Thiết bị HPLC ghép khối phổ (HPLC-MS) 55 2.18 Phổ kế Cộng hưởng từ 56 3.1 Quy trình xử lý mật bị tươi 57 3.2 thị hiệu suất phản ứng thủy ph n theo thời gian khảo sát 58 3.3 61 3.7 Các đường đồng mức (a), (b), (c) đồ thị 3D (d), (e), (f) (3D response surface) cho biết ảnh hưởng cặp yếu tố đến hiệu suất thủy ph n mật bò; (a) (d): nhiệt độ thủy phân – nồng độ NaOH; (b) (e): thời gian – nồng độ NaOH; (c) (f): thời gian – nhiệt độ thủy ph n (a)Sắc ký đồ HPLC-MS acid mật thô; Phổ khối MS (b) Acid cholic, (c)acid glycocholic, (d) acid taurocholic Ảnh hưởng Toluene đến hàm lượng CA kết tủa theo ph n đoạn tách DCA ộ tinh thể acid cholic thể qua sắc ký đồ HPLC Phổ 1H NMR (a) 13C NMR (b) tinh thể acid cholic 3.8 Phản ứng oxy hóa chọn lọc acid cholic 69 3.9 (a) TLC theo dõi phản ứng oxy hóa acid cholic; (b) ảnh hưởng nhiệt độ phản ứng đến hiệu suất phản ứng oxy hóa acid cholic (nIBX/nCA = 1,5) (a) Sắc ký đồ HPLC sản phẩm sau phản ứng oxy hóa; (b) Phổ khối MS sản phẩm sau phản ứng oxy hóa (a) TLC theo dõi ảnh hưởng tỉ lệ nIBX/nCA đến phản ứng oxy hóa acid cholic IBX; (b) thị thể ảnh 69 2.8 2.9 2.10 2.11 2.12 2.13 3.4 3.5 3.6 3.10 3.11 10 44 46 47 48 50 52 63 65 66 67 71 72 Sắc ký đồ HPLC 3α,12α-dihydroxy-7keto-cholanic acid 105 Sắc ký đồ sản phẩm phản ứng chuyển hóa 3α,12α-dihydroxy-7keto-cholanic acid thành 3α,7β,12α-trihydroxy-cholanic acid 106 Sắc ký đồ HPLC 3α,7β,12α-trihydroxycholanic acid 107 Sắc ký đồ HPLC sản phẩm phản ứng chuyển hóa 3α,7β,12α-trihydroxycholanic acid thành 3α,7β, drihydroxy-12keto-cholanic- acid 108 Sắc ký đồ HPLC sản phẩm phản ứng chuyển hóa 3α,7β, drihydroxy-12keto-cholanicacid thành ursodeoxycholic acid 109 Sắc ký đồ HPLC sản phẩm phản ứng chuyển hóa 3α,7β, drihydroxy-12keto-cholanicacid thành ursodeoxycholic acid 110 Phổ cộng hưởng từ 1H NMR acid cholic 111 Phổ 13C NMR acid cholic 112 Phổ cộng hưởng từ 1H NMR 3α,12α-dihydroxy-7keto-cholanic acid 113 Phổ cộng hưởng từ 1H NMR 3α,7β,12α-trihydroxy-cholanic acid 114 Phổ cộng hưởng từ 1H NMR ursodeoxycholic acid 115 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] http://soimat.vn/bai-viet/thong-tin-benh/benh-thieu-acid-mat mot-trong-nhungnguyen-nhan-gay-soi-mat.html - ngày 03/10/2014 [2] Michael Bristow (29/2/ 2012), BBC News [3] C Sama et al., Effect of Ursodeoxycholic Acid on Liver Tests in Chronic Hepatitis, (1997) Clin Drug Invest 13(4), 192-198 [4] J Galsky et al., Effect of Ursodeoxycholic Acid in Acute Viral Hepatitis, (1999) J CLIN Gastroenterol 28(3) 249-253 [5] Y Kita et al., (1996) Transpl pro 28, 1701-1703 [6] Angelico M., Gandin C, Pescarmona E et al, Recombinant interferon-alpha and ursodeoxycholic acid versus interferon-alpha alone in the treatment of chronic hepatitis C : a randomised clinical trial with long-term follow-up, (1995) Amer J Gastroenterol 90, 263-269 [7] Clerici C, Distrurri E, Gentili Get al, Interferon plus ursodeoxycholic acid versus interferon in the treatment of chronic C viral hepatitis, (1997) Minerva Med 88, 219-225 [8] Fieser L., Fieser M (1967): Steroids Reinhold, New York [9] Boedecher F., Riedel 1.D (1920): Ber.53B, 1852 [10] Okasaki Y., ÜBER DIE BILDUNG DER REDUKTODEHYDROCHOLSÄURE (a-3-OXY-7,12-DIKETOCHOLANSÄURE) AUS CHOLSÄURE IM KARZINOMGEWEBE, (1941) J Biochem (Tokyo) 34, 83 [11] Mori Tanenao, BILDUNG VON DESOXYCHOLSÄURE AUS CHOLSÄURE BEI FÄULNIS DES PANKREAS, (1940) J Biochem (Tokyo) 31, 467 [12] Sneeden R.P.A., Turner R.B., Catalytic deohydrogenation of primary and secondary alcohols with platinum and oxygen: selective dehydrogenation in the steroid series, (1955) J Am Chem Soc 77, 190 [13] Kuwada S., Marimoto S., Über die partielle Oxydation des Cholsäuremethylesters (Untersuchungen über Sterine, XXVI), (1942) Bull Chem Soc Japan 17, 147 [14] Barton D.H.R., The stereochemistry of cyclohexane derivatives, (1953) J Chern Soc 1027 116 [15] Schreiber I., Eschenmoser A., Über die relative Geschwindigkeit der Chromosäureoxydation sekundärer, alicyclischer Alkohole Vorläufige Mitteilung, (1955) Helv Chim Acta 38, 1529 [16] Westheimer F.H., The mechanisms of chromic acid oxidations, (1949) Chem Rev 45,419 [17] Hofmann A F., The preparation of chenodeoxycholic acid and its glycine and taurine conjugates, (1963) Acta Chem Scand 17, 173 [18] Iida T., Momose T., Tamura T., Chang F., Goto J., Nambara T., Potential bile acid metabolites 14 Hyocholic and muricholic acid stereoisomers, (1989) J Lipid Res 30.1267 [19] Setchell K.D.R., Dumaswala R., Colombo C., Ronchi M., Hepatic bile acid metabolism during early development revealed from the analysis of human fetal gallbladder bile, (1988) J Bioi Chern 263,16637 [20] Dumaswala R., Setchell K.D.R., Zimmer-Nechemios L., Iida T., Goto J., Nambara T., Identification of alpha,4 beta,7 alpha-trihydroxy-5 beta-cholanoic acid in human bile: reflection of a new pathway in bile acid metabolism in humans, (1989) J Lipid Res 30,847 [21] Setchell KD.R., Dumaswala R.D., Iida T., Goto J., Nambara T.: Proceedings of the Bile acids Meeting, Freiburg, June 1988 [22] Iida T., Momose T., Chang F.e., Goto I., Nambara T., Potential Bile Acid Metabolites XV : Synthesis of 4β-Hydroxylated Bile Acids; Unique Bile Acids in Human Fetal Bile, (1989) Chern Pharm Bull 37, 3323 [23] Iida T., Tamura T., Matsumoto T., Chang F.e., Potential bile acid metabolites 3,12-Dihydroxy- and 12 beta-hydroxy-5 alpha-cholanoic acids, (1985) J Lipid Res 26, 874 [24] Ilida T., Momose T., Tamura T., Matsumoto T., Goto J., Nambara T., Chang F.C , Capillary gas chromatography of hydrxylated bile acid stereoisomers of the allo and normal series, (1987) J Chromatogr 389, 155 [25] Iida T., Kimatsubara, Yoda S., Goto J., Nambara T., Chang F.e., Potential bile acid metabolites 16 Synthesis of stereoisomeric 3α,6,7,12α-tetrahydroxy-5βcholanoic acids, (1990) Steroids 55, 530 117 [26] Choda 1., Tanaka N., Otsuga T., Natsuura K., Miyazaki H., Altered bile acid metabolism in liver disease: concurrent occurrence of C-1 and C-6 hydroxylated bile acid metabolites and their preferential excretion into urine, (1990) J Lipid Res 31, 249 [27] Iida T., Tamura T., Chang r.c., Goto J., Nambara T., Potential bile acid metabolites XVIII Synthesis of stereoisomeric 3,6,12 alpha-trihydroxy-5 betacholanoic acids, (1991) J Lipid Res 32,649 [28] Thistle J.L., Schoenfield L.L (1971): N J Med 284,177 [29] Kawai S (1933): Z Physiol Chem 214,71 [30] Plattner A., Heusser H., Über Steroide und Sexualhormone (97 Mitteilung) Über Beziehungen zwischen Konstitution und optischer Drehung in der CholsäureReihe, (1944) Helv Chim Acta 27, 748 [31] BorscheW (1924): Ber 57, 1620 [32] Lindsedt S., Tryding N (1954): Ark Kerni II, 137 [33] Huang-Minion, A Simple Modification of the Wolff-Kishner Reduction, (1946) J Am Chern Soc 68, 2487 [34] Huang-Minion, Reduction of Steroid Ketones and other Carbonyl Compounds by Modified Wolff Kishner Method, (1949) J Am Chern Soc 71, 3301 [35] Fieser L.F., Rajagopalan S., (1950): J Am Chem Soc 72, 5530 [36] Anderson I.G., Haslewood G.A.D., Wiggins H.S., Wootton LD.P., Preparation of chenodeoxycholic acid from cholic acid, (1952) Nature 169,621 [37] Sato Y., Ikekawa N (1959): J Org Chern 14, 1367 [38] Hofmann A F., The preparation of chenodeoxycholic acid and its glycine and taurine conjugates, (1963) Acta Chem Scand 17, 173 [39] Iida I., Chang F., Potential bile acid metabolites A new route to chenodeoxycholic acid, (1981) J Org Chern 46, 2786 [40] Miyazi S (1937): Z Physiol Chern 250,31 [41] Kanazawa T., Shimazaki A., Sato T., Hashito T (1954): Proc Japan Acad 30, 391 [42] Kanazawa T., Sato T., Shimazaki A (1958): Jap Pat 9973 118 [43] Samuelsson B., Preparation of Ursodeoxycholic Acid and 3alpha,7beta,12alpha-Trihydroxycholanic Acid Bile Acids and Steroids 94, (1960) Acta Chern Scand 14, 17 [44] Kitahara K., Sato T (1964): Jap Pat 27, 248 [45] Koichiro S., Kozno S., Masaichi S (1977): Japan Pat 77,07,950 [46] Yoshinoni S., Okamura A., Shimonura K (1977): Japan Pat.77,78,864 [47] Guillemette-Armond (1980): Ger.Pat 2950481 [48] Barucha K.R., Siemon C.A (1985): U.S.Pat 4,547,271 [49] Giordano C., Minisci F Menglin M., Perdoncin G (1984): U.S.Pat 4,486,352 [50] Bonaldi A., Molinari E (1983): U.S Pat 4,379,093 [52] Zhou W.S., Wang Z-Qi, Jiang B (1990): J Chem Soc Perkin Trans I, I [53] Igi K., et al., (2007) U.S Patent 7.208.634B2, [54] Scalia S., et al., Supercritical fluid extraction of bile acids from bovine bile raw materials, (1998) Chromatographia 48(11/12) [55] Kuhajada K., et al., Chemical and metabolic transformations of selected bile acids, (2006) Eur J Drug Metabol Pharmacokinet., [56] Phạm Hồng Hải, Ngô Kim Chi, Xử lý số liệu quy hoạch thực nghiệm nghiên cứu hóa học, NXB Khoa học tự nhiên Cơng nghệ, Hà Nội, 2007 [57] Jenkins, G.J; Hardie, L., Bile acid: toxicology and bioactivity, RSC, 2009, ISBN: 978-0-85404-846-5 [58] D Vincent Waterhous, Stephen Barnes, Donald D Muccio, Nuclear magnetic resonance spectroscopy of bile acids Development of two-dimensional NMR methods for the elucidation of proton resonance assignments for five common hydroxylated bile acids, and their parent bile acid, SP-cholanoic acid, (1985) J Lipid Res 26 1068 [59] Omkar B Ijare, B.S Somashekar, Y Jadegoud, G.A Nagana Gowda, 1H and 13C NMR Characterization and Stereochemical Assignments of Bile Acids in Aqueous Media, (2005) Lipids 40 (10) 1031 [60] Prasad S Dangate, Chetan L Salunke, Krishnacharya G Akamanchi, Regioselective oxidation of cholic acid and its 7b epimer by using o-iodoxybenzoic acid, (2011) Steroids 76 139 119