Nghiên cứu phương pháp bảo quản và bổ sung dữ liệu bộ sưu tập giống nấm họ linh chi ganodermataceae

BAN QUẢN LÝ KHU NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO TP HCM TRUNG TÂM NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO BÁO CÁO NGHIỆM THU NHIỆM VỤ KHOA HỌC - CÔNG NGHỆ NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP BẢO QUẢN VÀ BỔ SUNG DỮ LIỆU BỘ SƯU TẬP GIỐNG NẤM HỌ LINH CHI Ganodermataceae CN Mai Thị Hạnh Phúc Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 12/2019 BAN QUẢN LÝ KHU NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO TP HCM TRUNG TÂM NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO BÁO CÁO NGHIỆM THU NHIỆM VỤ KHOA HỌC - CÔNG NGHỆ NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP BẢO QUẢN VÀ BỔ SUNG DỮ LIỆU BỘ SƯU TẬP GIỐNG NẤM HỌ LINH CHI Ganodermataceae CHỦ NHIỆM NHIỆM VỤ Mai Thị Hạnh Phúc CƠ QUAN QUẢN LÝ CƠ QUAN CHỦ TRÌ Thành phớ Hờ Chí Minh, tháng 12/2019 TÓM TẮT Nhiệm vụ nghiên cứu khoa học “ Nghiên cứu phương pháp bảo quản bổ sung liệu sưu tập giống nấm họ linh chi Ganodermataceae“ thực nhằm đánh giá hiệu phương pháp bảo quản thực năm 2017, đồng thời thực thêm số phương pháp bảo quản bổ sung sở liệu sưu tập chủng nấm họ Ganodermataceae Sau trình thực nghiên cứu, kết cho thấy phương pháp bảo quản chủng giấy trữ glycerol 10% 4°C cho hiệu phục hồi tốt Phần lớn chủng trữ lúa glycerol 10% 4°C khơng cịn khả phục hồi Tất chủng trữ thạch nước cất 4°C trữ với lúa gạo nước cất 4°C khơng cịn khả phục hồi Bộ sưu tập gồm 32 chủng nấm họ Ganodermataceae sau thời gian năm lưu trữ cịn 25 chủng có khả phục hồi Các chủng sau phục hồi tiến hành đánh giá ghi nhận khả phân giải cellulose, xylan, lignin Ba phương pháp bảo quản khác gồm phương pháp trữ glycerol 10% làm lạnh sâu (-80°C), phương pháp trữ mùn cưa có glycerol 10% làm lạnh sâu (-80°C) phương pháp trữ glycerol 10% làm lạnh sâu nitơ lỏng (196°C) thực với 25 chủng nấm Đã bổ sung thêm trình tự ADN vùng ITS, LSU rDNA D1D2 hình bào tử vào sở liệu 25 chủng nấm thuộc họ Ganodermataceae vào sưu tập với tiêu chí thực gồm: (1): Tên khoa học (chi; loài; loài); (2): Tên; mã số sưu tập khác liên quan đến xuất xứ; (3) Nguồn phân lập; (4) Địa điểm phân lập; (5) Người phân lập; người định danh; (12) Điều kiện bảo quản; (13) Môi trường ni cấy (sinh trưởng) Trang i MỤC LỤC Trang Tóm tắt i Mục lục ii Danh mục chữ viết tắt iii Danh sách bảng vi Danh sách hình vii THÔNG TIN ĐỀ TÀI MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Khái quát họ nấm Linh Chi 1.2 Lịch sử phân loại hệ thống học họ nấm Linh Chi giới 1.2.1 Chi Ganoderma 1.2.1.1 Nguồn gốc, phân loại phân bố Linh Chi 1.2.1.2 Đặc điểm hình thái vị trí phân loại 1.2.1.3 Đặc tính dược lý nấm Linh Chi 1.2.2 Chi Amauroderma 11 1.2.3 Chi Humphreya 12 1.2.4 Chi Haddowia 13 1.3 Phương pháp bảo quản chủng nấm 13 1.3.1 Phương pháp cấy chuyền 13 1.3.2 Phương pháp bảo quản lớp dầu khoáng 14 1.3.3 Phương pháp làm nước môi trường bảo quản 14 1.3.4 Phương pháp bảo quản đông khô 14 1.3.5 Phương pháp bảo quản lạnh sâu 15 1.4 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 15 1.4.1 Tình hình nghiên cứu nước 15 1.4.2 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 16 Trang ii Chương NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 20 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 20 2.2 Vật liệu nghiên cứu 20 2.2.1 Vật liệu 20 2.2.2 Hóa chất thí nghiệm 20 2.2.3 Thiết bị dụng cụ dùng nghiên cứu 20 2.3 Nội dung nghiên cứu 20 2.3.1 Nội dung 1: Đánh giá hiệu phương pháp bảo quản thực năm 2017 20 2.3.1.1 Thí nghiệm 1: Đánh giá sức sống chủng nấm Linh Chi bảo quản từ năm 2017 20 2.3.1.2 Thí nghiệm 2: Đánh giá khả phân giải cellulose chủng nấm sau thời gian bảo quản từ năm 2017 21 2.3.1.3 Thí nghiệm 3: Đánh giá khả phân giải xylan chủng nấm sau thời gian bảo quản từ năm 2017 22 2.3.1.4 Thí nghiệm 4: Đánh giá khả phân giải lignin chủng nấm sau thời gian bảo quản từ năm 2017 23 2.3.2 Nội dung 2: Nghiên cứu phương pháp bảo quản chủng nấm 23 2.3.3 Nội dung 3: Bổ sung sở liệu sưu tập chủng nấm họ Linh Chi 25 2.4 Phương pháp xử lý số liệu 28 Chương KẾT QUẢ THẢO LUẬN 29 3.1 Nội dung 1: Đánh giá hiệu phương pháp bảo quản thực năm 2017 29 3.1.1 Đánh giá sức sống chủng nấm Linh Chi bảo quản từ năm 2017 29 3.1.2 Đánh giá khả phân giải cellulose chủng nấm sau thời gian bảo quản từ năm 2017 35 3.1.3 Đánh giá khả phân giải xylan chủng nấm sau thời gian bảo quản từ năm 2017 39 3.1.4 Đánh giá khả phân giải lignin chủng nấm sau thời gian bảo quản từ năm 2017 43 Trang iii 3.2 Nội dung 2: Nghiên cứu phương pháp bảo quản chủng nấm 47 3.3 Nội dung 3: Bổ sung sở liệu sưu tập chủng nấm họ Linh Chi 49 Chương KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 93 4.1 Kết luận 93 4.2 Kiến nghị 93 TÀI LIỆU THAM KHẢO 94 PHỤ LỤC 98 Trang iv DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Thuật ngữ DMSO Dimethyl sulfoxide ADN Axit deoxyribonucleic ITS Internal transcribed spacer LSU Large Subunit PDB Potato dextrose broth PDA Potato dextrose agar CMC carboxymethylcellulose PCR Polymerase chain reaction ctv tt Cộng tác viên Tiếp theo Trang v DANH SÁCH BẢNG Số Tên bảng Trang 2.1 Các phương pháp bảo quản thực năm 2017 21 2.2 Chu trình hạ nhiệt -80°C 24 2.3 Chu trình hạ nhiệt -150°C 24 2.4 Trình tự mồi vùng ITS vùng LSU-rDNA D1-D2 26 2.5 Thành phần phản ứng PCR khuếch đại vùng trình tự ITS 27 vùng trình tự LSU-rDNA D1-D2 2.6 Chu trình nhiệt phản ứng PCR khuếch đại trình tự ITS 27 2.7 Chu trình nhiệt phản ứng PCR khuếch đại trình tự LSU- 27 rDNA 3.1 Tỷ lệ phục hồi chủng bảo quản từ năm 2017 30 3.2 Tốc độ lan tơ 25 chủng bảo quản từ năm 2017 sau 31 phục hồi 3.3 Khả phân giải cellulose 25 chủng nấm sau phục hồi 35 3.4 Tốc độ lan tơ chủng bảo quản từ năm 2019 sau 48 tháng 3.5 Phân loại dựa hình thái 51 3.6 Phân loại dựa so sánh trình tự ITS LSU BLAST 61 (NCBI) 3.7 Hình ảnh bào tử 25 chủng nấm 86 Trang vi DANH SÁCH HÌNH Hình Tựa hình Trang 3.1 Hình ảnh tơ nấm 25 chủng nấm sau phục hồi 32 3.2 Sự phân giải cellulose chủng bảo quản từ năm 36 2017 sau phục hồi 3.3 Sự phân giải xylan chủng bảo quản từ năm 2017 40 sau phục hồi 3.4 Sự phân giải lignin chủng bảo quản từ năm 2017 44 sau phục hồi 3.5 Ba phương pháp bảo quản (a) chủng trữ glycerol 47 10% -80°C, (b) ống trữ mùn cưa glycerol 10% -80°C (c) ống trữ ni tơ lỏng -196°C 3.6 Kết PCR khuếch đại vùng trình tự ITS (a) LSU (b) 50 25 chủng nấm 3.7 Cây phát sinh loài chủng nấm 85 Trang vii B0319_RB Trang 142 T0300_RF Trang 143 T0300_RB Trang 144 T0317_RF Trang 145 T0317_RB Trang 146 T0414_RF Trang 147 T0414_RB Trang 148 T0117_RF Trang 149 T0117_RB Trang 150 ND01_RF Trang 151 ND01_RB Trang 152 ND02_RF Trang 153 ND02_RB Trang 154 V0110_RF Trang 155 V0110_RB Trang 156